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PLOS ONE: El Aumento del tumor con educación y macrófagos de malignidad del cáncer de páncreas humano es impedido por zoledrónico Acid


Extracto

macrófagos cosechadas de la cavidad peritoneal de ratones desnudos con tumores pancreáticos humanos subcutáneos como hemos definido anteriormente " educada tumorales-macrófagos ( "EDU) y los macrófagos recogidos de ratones sin tumores como" ingenuo-macrófagos "(naïve), y demostraron que la EDU-macrófagos promueven el crecimiento del tumor y la metástasis. En este estudio, educación y Naïve-macrófagos se compararon por su capacidad para mejorar la malignidad del cáncer pancreático en el nivel celular in vitro e in vivo. También se determinó la eficacia inhibidora de ácido zoledrónico (ZA) sobre la metástasis mejorada-Edu-macrófagos. células de cáncer de páncreas humano XPA1 en Gelfoam co-cultivadas con EDU-macrófagos proliferaron en mayor medida en comparación con células cultivadas con XPA1 Naïve-macrófagos (
P
= 0,014). células XPA1 expuesto a medio condicionado recogido de aumentado significativamente cultura Edu proliferación (
P
= 0,016) y tenían más capacidad de estimulación de migración (
P
& lt; 0,001) en comparación con las células cancerosas cultivadas tratadas con el medio condicionado de Naive. El índice mitótico de las células XPA1, expresando GFP en el núcleo y RFP en el citoplasma, aumentó significativamente in vivo en presencia de la Educación en comparación con no tratados previamente-macrófagos (
P
= 0,001). El ácido zoledrónico (ZA) mató a los dos Edu y Naïve in vitro. Edu promueve el crecimiento tumoral y la metástasis en un modelo ortotópico de ratón de la línea celular de cáncer pancreático humano XPA1. ZA redujo el crecimiento del tumor primario (
P
= 0,006) e impidió la metástasis (
P
= 0,025), promovida por Edu-macrófagos. Estos resultados indican que ZA inhibe el crecimiento tumoral primaria mejorada y la metástasis de cáncer de páncreas humano inducida por EDU-macrófagos

Visto:. Hiroshima Y, Maawy A, Hassanein MK, Menen R, Momiyama M, Murakami T, et al . Aumento (2014) El educada y macrófagos tumor de malignidad del cáncer de páncreas humano es impedido por ácido zoledrónico. PLoS ONE 9 (8): e103382. doi: 10.1371 /journal.pone.0103382

Editor: Keping Xie, la Universidad de Texas MD Anderson Cancer Center, Estados Unidos de América

Recibido: 17 de mayo de 2014; Aceptado: 1 de julio de 2014; Publicado: 12 Agosto 2014

Derechos de Autor © 2014 Hiroshima y col. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan

Disponibilidad de datos:. La autores confirman que todos los datos que se basan los resultados son totalmente disponible sin restricciones. Todos los datos relevantes se encuentran dentro del apoyo de sus archivos de información en papel y

Financiación:. Este estudio fue apoyado en parte por el Instituto Nacional del Cáncer de subvención CA132971 y Números JSP KAKENHI Grant 26.830.081 a Y.H., a 26.462.070 POR EJEMPLO y 24592009 a K. T. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito

Conflicto de intereses:. Yukihiko Hiroshima, Shinji Miwa, Mako Yamamoto, Shuya Yano son filiales de AntiCancer Inc. Mohamed K. Hassanein, Rhiana Menen, Masashi Momiyama, Fuminari Uehara y Takashi Chishima eran ex afiliados de AntiCancer Inc. Robert M. Hoffman es un afiliado no asalariado de AntiCancer Inc. AntiCancer Inc. comercializa modelos animales de cáncer. No hay otros intereses en competencia. No hay patentes, productos en desarrollo o los productos comercializados para declarar. Esto no altera la adhesión de los autores a todas las políticas de PLoS ONE sobre los datos y compartir materiales, como se detalla en línea en la guía para los autores.

Introducción

El microambiente tumoral (TME) desempeña un papel importante en determinar el comportamiento del tumor. Hemos demostrado previamente que las células estromales son necesarios para que se produzca la metástasis [1]. Otra indicación de la función de la TME para influir en el comportamiento del tumor es la implantación ortotópica en modelos de ratón de tejido tumoral intacta, incluyendo todo el estroma tumoral, que se traduce en una tasa de metástasis mucho más alta en comparación con la inyección ortotópico de células de cáncer solo, donde la metástasis es raro [2], [3].

macrófagos asociados a tumores se ha demostrado que se correlaciona con mal pronóstico en varios estudios [4], [5]. Los macrófagos pueden promover la progresión del tumor por la inflamación crónica, remodelación de la matriz, la promoción de la invasión de células tumorales, intravasación, la angiogénesis, y la siembra en sitios distantes [6]. la adhesión celular vascular molécula-1 (VCAM-1) promueve la metástasis de pulmón en el cáncer de mama por la inmovilización de células de cáncer de pulmón a los macrófagos asociados a metástasis [7], [8].

Nuestro laboratorio el crecimiento del tumor primario y metastásico en comparación anteriormente después de la adición de cualquiera de tumor ingenuo-macrófagos (naïve) o macrófagos expuestos previamente al cáncer de páncreas en un modelo de ratón, que se denominan educada tumorales-macrófagos (EDU) [8].

Nuestros resultados sugieren anteriores macrófagos que los tumores de influencia y los tumores influyen en los macrófagos, y que edu-macrófagos promueven la progresión tumoral [8].

en el presente estudio, educación y Naïve-macrófagos se compararon por su capacidad para promover la malignidad en el nivel celular in vitro e in vivo. La eficacia del ácido zoledrónico (ZA) para inhibir También se determinó-macrófago-Edu mayor malignidad.

Materiales y Métodos

de línea y de cultivo celular condiciones

El pancreático humano XPA1 línea celular de cáncer se utilizó en este estudio, que fue una especie de regalo del doctor Anirban Maitra de la Universidad Johns Hopkins [6] - [16]. La línea celular XPA1 fue transformado para expresar establemente GFP en el núcleo y RFP en el citoplasma [9], [17], [18]. Las células se mantuvieron en medio RPMI 1640 suplementado con 10% de suero bovino fetal (FBS) y glutamina 2 mM (Gibco-BRL, Life Technologies Inc., Grand Island, NY). Todos los medios se suplementaron con penicilina y estreptomicina (Gibco-BRL). Las células se cultivaron a 37 ° C con 5% de CO
2 [19].

Animales

/ratones SCID NOD y ratones desnudos atímicos (
nu /nu
), se utilizaron 4-6 semanas, (AntiCancer Inc., San Diego, CA). nude C57 /ratones transgénicos B6-GFP (AntiCancer, Inc., San Diego, CA). que expresa la proteína verde fluorescente (GFP) bajo el control del promotor de citomegalovirus y pollo β-actina potenciador también se utilizaron [20] - [23]. Los ratones se mantuvieron en una instalación aislada en virtud de filtración HEPA. Los ratones se alimentaron con dieta para roedores de laboratorio tratada en autoclave. Todos los procedimientos quirúrgicos y de formación de imágenes se llevaron a cabo con los animales anestesiados por inyección intramuscular de 0,02 ml de una solución de 50% de ketamina, xilazina 38%, y 12% de maleato de acepromazina. Se llevaron a cabo todos los estudios en animales con un Comité de Cuidado de Animales y el empleo AntiCancer Institucional (IACUC) de protocolo aprobado específicamente para este estudio y de acuerdo con los principios y procedimientos descritos en el Instituto Nacional de Salud de Guía para el Cuidado y Uso de Animales con el número de Aseguramiento A3873-1.

células tumorales la implantación subcutánea
p>
6 en 100 l de suero libre de los medios de comunicación) se inyectaron por vía subcutánea, a los 30 minutos de la vendimia, sobre los flancos de ratones desnudos transgénicos C57 /B6-GFP o no transgénicos
nu /nu
ratones de entre 4 y 6 semanas de edad. Se permitió tumores subcutáneos crecer durante 2-4 semanas hasta que lo suficientemente grande como para experimentos adicionales o posterior implantación ortotópico.

imágenes en tiempo real de las interacciones entre los macrófagos y las células de cáncer de acogida en ratones vivos

después de que los ratones fueron anestesiados como se describió anteriormente, una incisión en forma de arco se hace en la piel abdominal, y luego el tejido conectivo subcutáneo se separó para liberar el colgajo de piel sin dañar la arteria y la vena craneal epigástrico [24]. La piel-flap se extendió y se fija en un soporte plano. células XPA1-GFP-RFP (1 × 10
6 en 100 l de medio) se roció sobre la superficie de la piel-flap de los ratones (Fig. 1A) [25]. Veinticuatro horas más tarde, la superficie interior de la piel-flap se observó directamente con el microscopio confocal FV1000 (Olympus, Tokio, Japón) con excitación de láseres semiconductores en 473 nm para GFP y 559 nm para la excitación RFP. Las imágenes de fluorescencia se obtuvieron utilizando la 20 × /1,0 XLUMPLFLN objetivo [26]. Se contó el número de células cancerosas fagocitados y mitóticas, y el número medio se calculó a partir de cinco campos visuales en 20 × magnificación.

(A) Esquema de la formación de imágenes de las interacciones entre los macrófagos huésped y las células de cáncer en ratones vivos. GFP ratones desnudos con tumores subcutáneos de dos colores XPA1 eran la fuente de la edu-macrófagos. ratones desnudos GFP sin tumores fueron la fuente de Naïve y macrófagos. Una piel-flap se extendió y se fija en un soporte plano. células XPA1-GFP-RFP (1 × 10
6 en 100 l de medio) fueron rociados sobre la superficie de la piel con solapa de los ratones. Veinticuatro horas más tarde, la superficie interior de la piel-flap se observó directamente con el microscopio confocal FV1000 (Olympus). Barras de escala: 10 mm. GFP se observaron macrófagos huésped y células de cáncer de XPA1 de dos colores en ratones Naïve y macrófagos (B) y de los ratones Edu-macrófagos (C). se detectaron células de cáncer fagocitados (puntas de flecha blanca) y las células cancerosas mitóticas (puntas de flecha amarillo) en ambos grupos. Los valores medios de las células de cáncer fagocitadas y mitóticas se calcularon a partir de cuatro campos con un objetivo de 20 × magnificación (D y E). Mitosis aumentó significativamente en células de cáncer en ratones con EDU-macrófagos en comparación con las células de cáncer en ratones con Naïve-macrófagos (
P
= 0,001). Más fagocitosis de las células cancerosas tiende a ser detectado en ratones con Naïve-macrófagos, (
P
= 0,061). Las barras de escala: 20 micras.

macrófagos cosecha

/Ratones transgénicos B6 desnuda C57-GFP con los tumores subcutáneos de dos colores XPA1-GFP-RFP fueron la fuente de edu-macrófagos . ratones desnudos transgénicos C57 /B6-GFP sin tumores fueron la fuente de Naïve-macrófagos. Después de que los ratones fueron anestesiados como se describió anteriormente, se inyectaron 6 ml de RPMI en el espacio intraperitoneal de cada ratón utilizando una jeringa de 10 ml y los ratones se agitaron suavemente durante 5 minutos. A continuación, la jeringa se vuelve a insertar y todo medio RPMI se retiró y se colocó en una placa de Petri de plástico. Las placas se incubaron a continuación a 37 ° C durante 4 horas. a continuación, el medio RPMI se retiró y cada placa se lavó 10-15 veces con 10 ml de PBS, o hasta que todas las células rojas de la sangre, fibroblastos, y otros residuos celulares se eliminaron. Las placas se visualizaron bajo un microscopio de fluorescencia IX71 (Olympus, Tokio, Japón) con el fin de confirmar la presencia de macrófagos que expresan GFP. Los macrófagos se rasparon de la placa de Petri, utilizando una espátula de goma, se recogió con un lavado de 10 ml de PBS, y se centrifugaron a 850 rpm durante 10 minutos. a continuación, PBS se retiró y los macrófagos se volvieron a suspender en RPMI.

Ensayo de proliferación usando la cultura 3D

Naïve- o edu-macrófagos fueron co-cultivadas con células de cáncer de XPA1-GFP-RFP de dos colores, pero fueron separados unos de otros por Gelfoam (Pharmacia & amp; Upjohn Company, MI, EE.UU.) (Fig 2A.). Cuarenta y ocho horas más tarde, se obtuvieron imágenes de la superficie a 200 micras de profundidad, cada 1 m, con el microscopio confocal FV1000. Las imágenes fueron apilados a lo largo del eje Z, y el número medio de células de cáncer se calculó a partir de tres campos visuales a 20 × magnificación.

(A) Un esquema del sistema de co-cultivo separado utilizando Gelfoam. Naïve- o edu-macrófagos fueron co-cultivadas con células de cáncer de XPA1 GFP-RFP de dos colores, pero estaban separados unos de otros por Gelfoam. Cuarenta y ocho horas más tarde, se obtuvieron imágenes de la superficie a 200 micras de profundidad, cada 1 m, y se apilan a lo largo del eje Z. (B) Imagen de pila Z Representante utilizando un objetivo de aumento de 20 x. (C) Se calculó el número medio de células cancerosas de tres campos de imágenes Z-stack con el objetivo de aumento de 20 x. El número de células de cáncer tratados con EDU-macrófagos aumentó en comparación con el número de células de cáncer tratados con Naïve-macrófagos (
P
= 0,014). (D) ensayo de proliferación MTS. El medio condicionado se recogió de cada tipo de los macrófagos cultivados en medio RPMI sin suero durante 72 h. El medio de cultivo de las células de cáncer se eliminó de los pocillos y se añadió el medio condicionado. el número de células viables cáncer se indican con el ensayo de MTS en diversos puntos temporales. El gráfico de líneas que indica la tasa de proliferación relativa de cada grupo. La tasa de proliferación de células de cáncer de Edu-macrófagos en la condición tratada medio fue significativamente mayor que el control o Naïve-macrófagos acondicionado medio tratados con células cancerosas. Los diamantes negros: ingenuo; cuadrado blanco: Edu, triángulo blanco: grupo de control. *
P Hotel & lt; 0,05, **
P Hotel & lt; 0,01 (vs. grupo control). Se midieron (E) áreas heridas durante 72 horas después de rascarse la monocapa de células de cáncer y el tratamiento con el medio condicionado de cada tipo de macrófagos. (F) Edu-macrófago-acondicionado células tratadas con medio-cubrieron un área de la herida significativamente mayor que otros grupos en cada punto de tiempo. Los gráficos son parcelas de áreas heridas de cada grupo de medida con ImageJ de tres áreas al azar en 3 días. Se presentan los datos de tres experimentos repetidos como media ± desviación estándar (n = 5). *
P Hotel & lt; 0,05, **
P
. & Lt; 0,01 (vs. grupo control) guía empresas
MTS Ensayo de proliferación

XPA1 células GFP-RFP en la fase de crecimiento exponencial se trataron con tripsina para producir una suspensión de células y se sembraron en placas de 96 pocillos (1 x 10
4 células /pocillo) por triplicado. El medio condicionado se recogió de cada tipo de macrófagos cultivados en medio RPMI 1640 con 10% de FBS durante 72 h. El medio de cultivo se retiró de los pocillos con células XPAI-GFP-RFP, y se añadió el medio acondicionado después se dejó que las células se adhirieran durante 24 h. Después las placas se incubaron a 37 ° C en 5% de CO
2, el ensayo de MTS se llevó a cabo en varios puntos de tiempo (0-72 h) utilizando el ensayo de valoración de la célula 96 (Promega, Madison, WI, EE.UU.) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

cicatrización de heridas ensayo

las células se cultivaron en placas de 24 pocillos en 500 l de medio por pocillo hasta que se alcanzó la confluencia. Una herida se hizo por el rascado de las células con una punta de pipeta 10 l en PBS, seguido de sustitución con medio condicionado que se recogió de cada tipo de los macrófagos se cultivaron en RPMI 1640 con 10% de FBS durante 72 h. El grupo control recibió el mismo volumen de medio de cultivo fresco sin suero. La monocapa herido fue photomicrographed con el microscopio de fluorescencia IX71 en diferentes puntos de tiempo (0 a 72 h) después de que se raye. La migración celular se evaluó mediante la medición de tamaño de los claros en varios campos utilizando la imagen J (Instituto Nacional de Salud Mental, Bethesda, MD).

Ensayo de citotoxicidad

Naïve- o edu-macrófagos fueron sembradas en 6 -Bueno placas (2 × 10
5 células /pocillo). Se añadió ácido zoledrónico (ZA) (Novartis Pharmaceuticals Corporation, NJ, EE.UU.) a cada pocillo después se dejó que las células se adhirieran durante 24 h. Las concentraciones finales de ZA fueron los siguientes: 0, 10, 50 y 100 mM. Después de 48 h, el medio que contiene ZA-fue removido y reemplazado con medio de crecimiento durante 24 h. Después de cada pocillo se lavó 5 veces con 3 ml de PBS, el número de macrófagos que expresan GFP se contó con el microscopio de fluorescencia IX71. El número de macrófagos media se calculó a partir de cinco campos visuales al aumento de 10x. Todas las mediciones se llevaron a cabo por triplicado.

tumor ortotópico implantación

Una pequeña incisión transversal de 6 a 10 mm se hizo en el flanco izquierdo del ratón a través de la piel y el peritoneo. La cola del páncreas se expuso a través de esta incisión y un único fragmento de tumor (3-mm
3) de un XPA1 de dos colores tumor subcutáneo se suturó a la cola del páncreas usando suturas quirúrgicas 8-0 de nylon (Ethilon; Ethicon Inc., Nueva Jersey, EE.UU.). Al finalizar, la cola del páncreas se devolvió al abdomen y la incisión se cerró en una capa de nylon 6-0 usando suturas quirúrgicas (Ethilon) [2], [27] - [29].

tratamiento ZA de la XPA1 ortotópico modelo de ratón desnudo

los ratones desnudos fueron implantados con células de forma ortotópica XPA1-GFP-RFP como se ha descrito anteriormente. Los ratones fueron tratados en los siguientes grupos: (1) solución salina (vehículo /control), (2) los macrófagos Naïve- (3) edu-macrófagos, (4) EDU-macrófagos + ZA. Los macrófagos (1 × 10
6 células en 200 l de PBS) se inyectaron ip semanal como se describe anteriormente [8]. ZA se inyectó por vía subcutánea diariamente desde el día 21 después de la implantación del tumor durante 4 semanas. Cada brazo de tratamiento involucrado 8 ratones portadores de tumores. No se observaron efectos significativos en el peso corporal, la morbilidad o toxicidad grave en cualquier grupo de tratamiento. Los animales fueron sometidos a laparotomía a las 7 semanas, y tanto los tumores primarios y metástasis fueron imágenes utilizando el Sistema de OV100 aumento variable de Pequeños Animales de imagen (Olympus, Tokio, Japón) [24] y se pesan y se recogieron para su análisis.

Procesamiento de datos y análisis estadístico

SPSS 18.0 (SPSS, Inc) se utilizó para todos los análisis estadísticos. Se utilizó la prueba t de Student para comparar las variables continuas entre los dos grupos. El análisis de modelos de varianza se utilizó para comparar varios grupos. Un valor de p de 0,05 fue considerado estadísticamente significativo para todas las comparaciones.

Resultados y Discusión

Edu-macrófagos estimulan la mitosis de las células del cáncer in vivo

de dos colores XPA1-GFP células -RFP (1 × 10
6) se roció sobre la superficie de una piel-flap ratón. Veinticuatro horas más tarde, la superficie interior de la piel-flap se observó directamente con el microscopio confocal FV1000 (Olympus) (Fig. 1A). macrófagos anfitrionas que expresan GFP y las células cancerosas XPA1 de dos colores se observaron en los ratones no tratados con macrófagos (fig. 1B) y los ratones Edu-macrófagos (Fig. 1C). mitosis de las células del cáncer fue significativamente mayor en las células de cáncer en ratones Edu-macrófagos en comparación con las células de cáncer en ratones y macrófagos (Naïve
P
= 0,001) (Fig. 1E). La fagocitosis de las células cancerosas tiende a ser mayor en los ratones Naïve y macrófagos en comparación con ratones Edu-macrófagos (
P
= 0,061) (Fig. 1D).

EDU-macrófagos estimular la proliferación de las células cancerosas
in vitro

Naïve- o Edu-macrófagos se cultivaron con células de cáncer XPA1 de dos colores separados unos de otros por Gelfoam (Fig. 2A). Cuarenta y ocho horas más tarde, las imágenes de microscopía confocal se obtuvieron desde la superficie hasta 200 micras de profundidad cada 1 micras y se apilan a lo largo del eje Z (Fig. 2B). -Macrófagos tratados EDU-células cancerosas proliferado en mayor medida en comparación con las células cancerosas tratadas Naïve-macrófagos (
P
= 0,014) (Fig. 2C). El medio condicionado de EDU-macrófagos estimuló la proliferación de las células cancerosas en comparación con las células control no tratadas de cáncer (24 h;
P
= 0,001, 48 h;
P
= 0.003, 72 h;
P
= 0,012, respectivamente). En contraste, no hubo diferencia significativa entre medio condicionado de Naïve-macrófagos y medio fresco sobre la proliferación de las células XPA1 (Fig. 2D).

Edu-macrófagos acondicionado tratados con células de cáncer de medio cubierto una significativamente mayor área de la herida que las células de control no tratados en cada punto de tiempo (24 h;
P = 0,008
, 48 h;
P = 0,002
, 72 h;
P Hotel & lt; 0,001 , respectivamente) (Fig. 2E y 2F).

ZA inhibe la progresión del tumor pancreático XPA1 inducida por los macrófagos-Edu

EDU-macrófagos promueven el crecimiento del tumor primario en comparación con el control y macrófagos Naïve- (control ;
P = 0,026
, ingenuo;
P
= 0,03). Edu-macrófagos también promovieron la metástasis en comparación con el control y Naïve-macrófagos (control;
P = 0,012
, ingenuo;
P = 0,015
) (figura 3C-E.). ZA se ha demostrado que los macrófagos matar y prevenir la metástasis [30], [31]. El número de tanto Naïve- y EDU-macrófagos se redujo significativamente por ZA en cada dosis in vitro (Fig. 3A y 3B). En un modelo ortotópico de ratón de cáncer de páncreas, ZA suprimió significativamente Edu-macrófagos, estimula el crecimiento del tumor, evitando la metástasis en comparación con los ratones tratados con sólo EDU-macrófagos (tumor primario;
P
= 0,006, metástasis;
P
= 0,025) (Fig. 3C-E).

(A) imágenes de fluorescencia representativos de edu-macrófagos después del tratamiento ZA. Barras de escala: 10 m. gráficos (B) Bar del número de Naïve- o edu-macrófagos después del tratamiento ZA in vitro. Los números de ambos Naïve- y EDU-macrófagos tratados con ZA se redujeron significativamente en cada dosis. ZA mató a los dos Naïve y Edu en una forma dependiente de la dosis. **
P Hotel & lt; 0,01 (vs. grupo control). (C) de formación de imágenes intravital de ratones portadores de tumores XPA1-RFP a la terminación del experimento. Barras de escala: 10 mm. (D) El peso del tumor primario de los ratones tratados y macrófagos-Edu se aumentó significativamente en comparación con el control o el control Naïve-macrófago-ratones tratados (:
P = 0,026
; Naïve:
P =
0,03, respectivamente). El peso del tumor primario de los ratones Edu-macrófagos tratados +-ZA disminuyó significativamente comparado con los ratones de macrófagos tratados Edu (
P
= 0,006). *
P Hotel & lt; 0,05, **
P Hotel & lt; 0,01. (E) El peso metástasis de los ratones tratados y macrófagos-Edu se aumentó significativamente en comparación a controlar o-macrófagos tratados con ratones no tratados (control;
P = 0,012
, ingenuo;
P = 0,015
, respectivamente). No se detectó metástasis en los ratones tratados con ZA Edu +. Hubo una diferencia significativa entre Edu y ratones tratados con ZA Edu + (
P
= 0,025). *
P
. & Lt; 0,05

En nuestro estudio anterior, que expresa GFP GFP macrófagos de ratones desnudos transgénica con un tumor pancreático humano BxPC3-RFP subcutánea se utilizaron como fuente de edu-macrófagos y en comparación con los no tratados con los macrófagos de la GFP ratones desnudos transgénico sin tumores. Cuando la Edu- o no tratados con macrófagos fueron entonces implantados en ratones desnudos con BxPC-3-RFP creciendo de forma ortotópica, los edu-macrófagos estimulados crecimiento tumoral y la metástasis en un grado mayor que Naïve-macrófagos [8].

en otro estudio anterior, las células mononucleares de sangre periférica humanos se expusieron a medio condicionado de 3 BxPC-células humanas del cáncer pancreático, en niveles normales o elevados de glucosa. Las células de cáncer pancreático educado a los macrófagos a ser más invasivo in vitro, que fue aún mayor por la hiperglucemia [32].

En otro estudio anterior, ZA reduce la invasividad inducida por macrófagos de las células de cáncer de mama. ZA afectada macrófagos, pero no las células del cáncer [33].

Otro estudio anterior mostró que tanto los macrófagos peritoneales y dando de tumor asociados rápidamente tomaron ZA in vivo, lo que sugiere además macrófagos son un objetivo de la eficacia anti-tumor de ZA [34].

en otro estudio anterior, ZA causado directamente la apoptosis en células de carcinoma de páncreas y se inhibe su capacidad de invasión y además de hacer que las células de cáncer de páncreas más vulnerables a los ataques de las células T [35].

El presente estudio se utilizaron técnicas de imagen subcelulares que hemos desarrollado anteriormente [36] para proporcionar imágenes directas de que Edu-macrófagos han reducido la capacidad de fagocitosis y pueden simular directamente la mitosis de las células cancerosas, como se visualiza en tiempo real. A diferencia de estudios anteriores, la evaluación de la eficacia de ZA, el presente informe se utilizó un modelo de ratón ortotópico metastásico para demostrar el efecto de ZA en la estimulación por Edu-macrófagos en la metástasis, así como en el tumor primario. En el presente estudio, los macrófagos fueron aisladas de la cavidad peritoneal de ratones portadores de tumores o de control, lejos del tumor y se administran sistémicamente. Los resultados indicaron que los tumores tenían distante efecto en los macrófagos y viceversa y que ZA sistémicamente podría inhibir tales efectos.

ZA reduce Edu-estimuló el crecimiento del tumor primario y la metástasis a los valores de control aproximadamente sugieren el principal efecto ZA estaba en el edu-macrófagos, aunque un efecto inhibidor directo relativamente menor en el tumor en sí por ZA no se pueden descartar a cabo como se describe en un estudio anterior [35]. ZA se ha informado anteriormente a tener una mayor eficacia que los macrófagos matando a otros bifosfonatos y por lo tanto fue elegido para el presente estudio [37].

El presente estudio indica que la edu-macrófagos promueven la malignidad. Esto fue demostrado por el efecto estimulador de EDU-macrófagos en mitosis de las células del cáncer y la posterior proliferación, así como en la metástasis. Como dijimos anteriormente [8], los tumores pueden afectar a los macrófagos, que a su vez puede afectar a los tumores. La progresión tumoral inducida por Edu-macrófagos fue inhibida por ZA, que inhibe el crecimiento tumoral primaria mejorada-Edu-macrófagos e impidió la metástasis. Los mecanismos por los cuales EDU-macrófagos estimulan la proliferación de las células del cáncer y la progresión serán objeto de un estudio en el futuro.

Reconocimientos

La dedicación. Este trabajo está dedicado a la memoria de A. R. Moossa, M. D.

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