Extracto
Antecedentes
El cáncer de colon siempre ha sido diagnosticado en una etapa tardía, que se asocia con un mal pronóstico. El utilizada actualmente marcadores tumorales séricos de CEA y CA 19-9 mostrar una baja sensibilidad y especificidad y pueden no tener valor diagnóstico en el cáncer de colon en estadio temprano. Por lo tanto, existe una necesidad urgente de identificar nuevos biomarcadores séricos para su uso en la detección precoz del cáncer de colon.
Métodos
En este estudio, la expresión de DC-SIGN y DC-SIGNR en suero se detectó mediante ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA). DC-SIGN y DC-expresión SIGNR se detectó en tejidos de cáncer mediante técnicas de inmunohistoquímica (IHC).
Resultados
El nivel de SDC-SIGN fue menor en los pacientes que en los controles sanos, mientras que el nivel de SDC-SIGNR en los pacientes fue mayor que en los controles sanos. Tanto SDC-SIGN y SDC-SIGNR tenían significados de diagnóstico para pacientes con cáncer y el diagnóstico combinado de estos dos marcadores fue superior a los dos solos. Por otra parte, hubo diferencias significativas entre ambos SDC-SIGN y SDC-SIGNR en fase I /II los pacientes y los controles sanos. Por otra parte, el nivel de alta SDC-SIGN fue acompañada con el tiempo de supervivencia de largo. Además, DC-SIGNR fue negativo en los focos de cáncer y coincide tejidos de colon normales, pero fue débilmente positiva entre los focos de cáncer. tinción de DC-SIGN era débil en tejidos de colon normales de la misma, fuerte en el estroma del tumor y el margen invasivo de tejidos de cáncer de colon, y una correlación negativa con el nivel SDC-SIGN en el suero del mismo paciente. Curiosamente, el porcentaje de supervivencia de los pacientes con un DC-SIGN significa densidad de & gt;. 0,001219 (intervalo de confianza del 95% superior de tejidos de colon normales emparejados) fue superior al de todos los demás pacientes
Conclusión
DC-SIGN y DC-SIGNR son marcadores moleculares basados en sangre que potencialmente se pueden utilizar para el diagnóstico de pacientes en etapa temprana. Por otra parte, la expresión de DC-SIGN en los tejidos y suero de cáncer puede afectar el tiempo de supervivencia para los pacientes con cáncer de colon
Visto:. Jiang Y, Zhang C, K Chen, Chen Z, Z Sun, Zhang Z, et al . (2014) El significado clínico de DC-SIGN y DC-SIGNR, que son marcadores novedosos Expresados en cáncer de colon humano. PLoS ONE 9 (12): e114748. doi: 10.1371 /journal.pone.0114748
Editor: Xin-Yuan Guan, la Universidad de Hong Kong, China
Recibido: 23 de julio de 2014; Aceptado: 13 Noviembre 2014; Publicado: December 12, 2014
Derechos de Autor © 2014 Jiang et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. La autores confirman que todos los datos que se basan los resultados son totalmente disponible sin restricciones. Todos los datos relevantes se encuentran dentro del apoyo de sus archivos de información en papel y
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por los proyectos chinos Fundación Nacional de Ciencias (81372669, 31270867), el Programa Estatal Clave de China en Investigación Básica (2012CB822103), la ciencia y Tecnología Proyecto de Planificación de la provincia de Liao Ning, china (2012225020), y el Proyecto del Ministerio de Salud de china (W2012RQ23). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
Hubo un estimado de 3,45 millones de nuevos casos de cáncer (excluyendo el cáncer de piel no melanoma) y 1,75 millones de muertes por cáncer en Europa en 2012 [1], lo que resulta en la segunda más alta tasas de incidencia y mortalidad en todo el mundo. El cáncer colorrectal (CCR) es el cáncer gastrointestinal más común en todo el mundo, con la incidencia de cáncer de colon en aumento en la mayoría de los países durante los últimos 20 [2] años. El cáncer de colon a menudo se diagnostica en una etapa avanzada, lo que lleva a un mal pronóstico [3] - [6]. Como los procedimientos clínicos actuales utilizados para el diagnóstico de enfermedades son invasivos, desagradable, e inconveniente, el desarrollo de los análisis de sangre sencillos que se pueden utilizar para la detección precoz sería beneficioso para en última instancia, el control y la prevención de CRC [3], [5] - [6] . marcadores tumorales séricos, tales como el antígeno carcinoembrionario (CEA) y el antígeno de hidratos de carbono 199 (CA19-9), mejoran en gran medida del diagnóstico. Sin embargo, su aplicación se limita a la vigilancia después de la cirugía, y no son adecuados para la detección precoz del cáncer de colon, ya que su sensibilidad y especificidad son muy bajos [7] - [9]. Por lo tanto, hay una necesidad de nuevos marcadores tumorales de colon temprana.
Recientemente, se ha hecho evidente que las lectinas de tipo C juegan un papel importante en el pronóstico del tumor. Caligaris-Cappio y sus colegas han informado de que la expresión de CD23 y CD23 en plasma fue más propensos a tener importancia diagnóstica y pronóstica en células B de leucemia linfocítica crónica (LLC-B) [10] - [11]. Ferroni y sus colegas encontraron que para los pacientes con CCR prequirúrgicos, los niveles séricos de sE-selectina se correlacionaron con el pronóstico en general y, potencialmente, podrían guiar el tratamiento [12]. Por otra parte, ya se ha informado de que LSECtin (hígado y los ganglios linfáticos de células endoteliales sinusoidales lectina tipo C) jugó un papel importante en la metástasis hepática y carcinoma colorrectal puede ser un objetivo nuevo y prometedor para la intervención en la formación de metástasis [13]. Es importante destacar que, el dendrítica-célula específica ICAM-3 agarrando nonintegrin (DC-SIGN) la interacción dependiente de células inmaduras dendríticas (DC) con algunas células de carcinoma colorrectal pueden suprimir maduración funcional DC, induciendo el fracaso del huésped para iniciar una potente respuesta antitumoral [ ,,,0],14] - [15].
Las lectinas de tipo C unidos a la membrana, DC-SIGN y su homólogo de CC-SIGNR (proteína relacionada con el DC-SIGN, también conocido como L-SIGN, CD209L) se encuentran en 19p13.3 cromosoma humano y pertenecen a una subfamilia en el grupo de genes de lectina junto con el CD23 y LSECtin anteriormente mencionado [16] - [17]. DC-SIGN presenta en la superficie de DCs maduras en el ganglio linfático así como las DC derivadas de monocitos y intersticiales inmaduras en la placenta, mucosa cervical, el útero y de colon [18] - [20]. Por el contrario, DC-SIGNR se encuentra en las células endoteliales en la placenta, el hígado y los ganglios linfáticos [21]. Aunque DC-SIGNR es 77% idéntica a DC-SIGN de acuerdo con la secuencia de aminoácidos [22], no se ha informado de la relación entre el cáncer de colon y DC-SIGNR. Sin embargo, nuestro equipo informó previamente que el nivel de expresión de DC-SIGNR en el suero fue baja en el linfoma no Hodgkin (LNH) y puede tener un uso potencial en el entorno clínico [23].
En el presente estudio, identificamos solubles DC-SIGN (SDC-SIGN) y DC-SIGNR (SDC-SIGNR) en el suero de pacientes con cáncer de colon. SDC-SIGN y SDC-SIGNR mostraron un potencial significativo como nuevos marcadores para el diagnóstico de cáncer de colon en pacientes en etapa temprana. Por otra parte, el nivel de SDC-SIGN puede tener significados pronósticos para los pacientes con cáncer. Además, se detectó la expresión de DC-SIGN y DC-SIGNR en tejidos de cáncer de colon, y el nivel de expresión de DC-SIGN en tejidos de cáncer se puede utilizar como un indicador de pronóstico de la enfermedad.
Materiales y Métodos
Reactivos y anticuerpos
DC-SIGN humana recombinante de proteínas de fusión de IgG-Fc (rhDC-SIGN-Fc), DC-SIGNR IgG-Fc (rhDC-SIGNR-Fc) y anti-DC- SIGNR ratón anticuerpo monoclonal (anticuerpo de detección) fueron adquiridos de I + amp; D Systems (Minneapolis, MN, USA). DC-SIGN monoclonal anti-humana (anticuerpo de captura) producido en ratón se adquirió de Sigma-Aldrich, INC, EE.UU.. Un anticuerpo policlonal de conejo a DC-SIGN (anticuerpo de detección) y un anticuerpo monoclonal DC-SIGNR (anticuerpo de captura) se adquirieron de Abcam, INC, Hong Kong, China. Otro anticuerpo monoclonal de conejo a DC-SIGNR se adquirió de Epitomics, Hong Kong, China. Peroxidasa de rábano picante (HRP) conjugado anticuerpos de cabra-anti-conejo y anti-ratón, suero de cabra reactivo de bloqueo y tetrahidrocloruro de 3,3'-diaminobencidina (DAB) se obtuvieron de ZSGB-BIO (Beijing, China), y 3,3 ', 5,5'-tetrametilbencidina (TMB) se adquirió de Tiangen Biotech Co., LTD, Beijing, china.
las muestras clínicas
se obtuvo el consentimiento informado verbal por los participantes o el siguiente de los pacientes fallecidos para sus registros clínicos que se utilizaron en este estudio. Y los pacientes o los familiares también dieron su consentimiento oral para el uso de sus muestras de tejidos y suero en este estudio. Estas muestras fallecidos fueron obtenidos en forma anónima. Registramos el consentimiento participantes por la lista de sus nombres, y los pacientes o el siguiente de los pacientes fallecidos de acuerdo con ella. Mientras tanto, el comité de ética de investigación de la Universidad Médica de Dalian aprobó este procedimiento de consentimiento. Los protocolos y procedimientos fueron aprobados por el comité de ética de investigación de la Universidad Médica de Dalian y se basaron en la política y el mecanismo de guía, y el consentimiento informado se obtuvo de todos los participantes. Las muestras de suero se obtuvieron de 182 pacientes que habían sido diagnosticados con cáncer de colon en los exámenes patológicos, ya sea durante operaciones quirúrgicas o colonoscopia, durante el período 2011-2013 en la Primera o la Segunda Hospital Afiliado de la Universidad Médica de Dalian y se almacenaron a -80 ° C hasta que se analizaron. Ninguno de los pacientes estaban directamente relacionadas. El grupo de pacientes consistió en 101 hombres y 81 mujeres, con edades comprendidas entre 23 y 86 años (media: 61). El estadio de la enfermedad de los pacientes se confirmó de acuerdo con un criterio de estadificación del cáncer de la 7ª edición de clasificación del Comité Conjunto sobre el Cáncer (AJCC) [24]. Detalles de los pacientes fueron el sexo, la edad, el estadio, la diferenciación del tumor, y el suero CEA, CA 19-9 y el tiempo de supervivencia se muestran en la Tabla S1 y S2 tabla. El grupo de control estaba compuesto por 101 voluntarios sanos donantes de sangre (45 machos y 56 hembras). Ellos fueron escogidos de los exámenes rutinarios de salud en base a los siguientes criterios de selección: todos los indicadores físicos estaban en el rango normal y los voluntarios estaban libres de cáncer, hepatitis o infección, entre otros. Sus edades oscilaban entre 21 y 62 años.
Además, 98 muestras de tejido de cáncer de colon en parafina fijados con formol (49 de los cuales eran de los pacientes con cáncer de colon que habían muerto después de la operación dentro de los últimos once años ), 4 ganglios linfáticos y 30 emparejados tejidos normales del colon de pacientes entre 2002 y 2013 se obtuvieron del primer hospital Afiliado de la Universidad médica de Dalian. los ganglios linfáticos normales se utilizaron como controles positivos o negativos, y combinar los tejidos normales del colon se utilizó como grupo de control. Los datos clínicos de estos pacientes de cáncer de colon se muestran en la Tabla S3 y S4 Tabla.
SDC-SIGN y SDC-SIGNR en suero humano se detectaron mediante sándwich ELISA estándar
El noventa y seis pocillos microplacas se recubrieron con 100 l de anticuerpo de captura a una concentración final de 1 mg /ml en Na
2CO
3 tampón (pH 9,6), y la placa se cubrió con un plástico adhesivo y se incubaron durante la noche a 4 ° C y posteriormente se lavó tres veces con una solución tamponada con fosfato (PBS) que contiene 0,05% de Tween-20 (PBST, PH 7,4). A continuación, los pocillos se bloquearon mediante la adición de 200 l de tampón de bloqueo (5% sin grasa de leche seca /PBS) por pocillo e incubando a 37 ° C durante 90 min. Después de que las placas habían sido lavados, se añadieron 100 l de estándares rhDC-SIGN-Fc o rhDC-SIGNR-Fc diluidas (concentraciones específicas se muestran en la S1 Figura) a los pocillos por duplicado junto con muestras de suero de pacientes e individuos sanos, y las placas se incubaron a 37 ° C durante 90 min. Cien microlitros de PBS se utilizó como control negativo. Posteriormente, las placas se lavaron tres veces con PBST, y 100 l de un anticuerpo de detección diluido a una concentración de 1 mg /ml se añadió, seguido de incubación a 37 ° C durante 90 min. Después del lavado, se añadieron 100 l de un anticuerpo de cabra anti-conejo conjugado con peroxidasa de rábano picante, y las placas se incubaron durante 60 min a 37 ° C, seguido de lavado tres veces. Finalmente, se añadieron 100 l de TMB (3,3 ', 5,5'-tetrametilbenzidina) a cada pocillo, seguido de una incubación a 37 ° C durante 30 min. La reacción se detuvo mediante la adición de 2 mol /L H
2SO
4, y el valor de densidad óptica (DO) se midió a 450 nm. ajuste de la curva estándar se realizó utilizando CurveExpert 1,3 de diluciones en serie, con el rhDC-SIGN-Fc o concentración rhDC-SIGNR-Fc en el eje Y vs el valor de DO en el eje X. La ecuación y los datos se muestran en la Figura S1 A y S1 B, R
2 = 0,9987 y R
2 = 0.9971. Los niveles SDC-SIGN y SDC-SIGNR en pacientes (y los controles sanos) se leen de la curva estándar y se muestran en la Tabla S1 y S2 tabla. Para analizar el valor diagnóstico del SDC-SIGN y SDC-SIGNR, las curvas ROC de SDC-SIGN y SDC-SIGNR se extrajeron utilizando GraphPad Prism 5.
La inmunohistoquímica (IHC) (detección DC-SIGN como un ejemplo )
Antes de ser deparaffinized en xileno y rehidratada en una serie de etanol, las secciones de los bloques incluidos en parafina, se incubaron a 60 ° C durante 30 minutos. La actividad peroxidasa endógena se inactivó mediante la incubación durante 10 minutos en peróxido de hidrógeno al 3%. La recuperación del antígeno se llevó a cabo en el microondas durante 15 minutos en una solución 0,01 M tamponada con citrato, pH 6,0. Los tejidos se lavaron con PBS antes de la incubación con suero de cabra para el bloqueo. Las secciones se incubaron con un anticuerpo de conejo anti-DC-SIGN pAb durante la noche a 4 ° C (01:50). El día siguiente, después de ser lavado con PBS, las secciones se incubaron con anti-inmunoglobulina de conejo marcado con peroxidasa de rábano picante (1:100) y después se lavaron de nuevo. Por último, las secciones fueron desarrolladas utilizando DAB para la detección y luego se contraste con hematoxilina antes de la observación al microscopio óptico. Morfometría: inmunotinción DC-SIGN en el cáncer de colon se evaluó mediante (IOD suma) /Área usando el sistema de software de análisis de imagen Imagen Pro Plus. IOD (densidad óptica integrada) suma representa el contenido de proteína de DC-SIGN en el área de interés (AOI), mientras que el área es igual al área de AOI. (IOD suma) /área es sinónimo de "densidad media de". En pocas palabras, las imágenes fueron capturadas a 200 aumentos de 3 AOI /caja, los cuales fueron seleccionados sobre la base de las zonas con máxima tinción DC-SIGN. Tras la captura de imágenes, DC-SIGN-tinción áreas positivos fueron seleccionados de acuerdo a la imagen de histograma basado en (H: 0-29; S: 0-255; I: 0-230) dentro de la AOI, y se determinó el valor "IOD suma" . Además, el AOI se analizó sobre la base de otro parámetro (H: 0-255; S: 0-255; I: 0-230), y el valor "zona" estaba decidido. Los valores medios de densidad se muestran en la Tabla S3 y S4 Tabla. Esta cuantificación se correlacionó positivamente con la expresión de DC-SIGN en el tejido.
El análisis estadístico
Todos los datos se expresan como la media ± desviación estándar. Se determinó la significación estadística entre más de dos grupos usando la prueba no paramétrica de Kruskal-Wallis. La correlación de los valores de CC-SIGNR con parámetros clínicos DC-SIGN y fue probado por la prueba de rangos de Spearman coeficiente de correlación no paramétrico. En todas las pruebas, se consideraron significativos valores de dos caras P por debajo de 0,05. Todos los análisis estadísticos y las cifras se realizaron utilizando GraphPad Prism5 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA).
Resultados
Los niveles y valores de diagnóstico de SDC-SIGN y SDC-SIGNR en pacientes con cáncer de colon
de acuerdo con nuestro informe anterior, LSECtin soluble en suero se detectó a nivel significativamente mayor en los pacientes con cáncer de colon en comparación con los controles sanos [13], mientras que el nivel de SDC-DIGNR en la NHL fue inferior a la en los controles normales [23]. Por lo tanto, se analizaron los niveles de SDC-SIGN y SDC-SIGNR por ELISA. El nivel SDC-SIGN en el suero de pacientes con cáncer de colon (1.282 ± 0.838 g /ml) fue significativamente menor que en los controles sanos (2.687 ± 1.178 g /ml), P & lt; 0,05 (Fig. 1A). El nivel SDC-SIGNR fue 594.90 ± 595.54 ng /ml en pacientes con cáncer de colon y 98.44 ± 60.26 ng /ml en los controles sanos. En contraste con el nivel de SDC-SIGN, el nivel de SDC-SIGNR en pacientes de cáncer de colon fue mayor que en los controles sanos, P & lt; 0,05 (Fig. 1B). DC-SIGN y DC-SIGNR, como las lectinas de tipo C, había dos proteínas relacionadas, y los niveles de ellos pueden ser correlacionados. Así se analizó la correlación entre SDC-SIGN y SDC-SIGNR del mismo paciente. Curiosamente, el nivel de SDC-SIGN se correlacionó significativamente con la de SDC-SIGNR (r = 0,8173, P & lt; 0,0001) (Figura 1C).
A-B:. No hubo significación estadística en el SDC nivel SIGN y SDC-SIGNR entre controles sanos y pacientes con cáncer de colon, P & lt; 0,001. El nivel SDC-SIGN (A) fue menor en los pacientes con cáncer de colon que los controles sanos; Sin embargo, el nivel SDC-SIGNR (B) fue mayor en los pacientes con cáncer de colon que los controles sanos. C: El nivel de SDC-SIGN en suero se correlacionó significativamente con la de SDC-SIGNR en el mismo paciente, P & lt; 0,001, r = 0,8137. D-E: De acuerdo con el análisis de índice de Youden, las concentraciones de corte para SDC-SIGN y SDC-SIGNR están a menos de 2.226 g /ml y más de 227,2 ng /ml, respectivamente, y la correspondiente Sensibilidad y especificidad del SDC -SIGN y SDC-SIGNR son 87,56%, 55,56% y 61,90%, 97,50%, respectivamente. Además, el área bajo la curva (AUC) para SDC-SIGN es 0,7538, mientras que el AUC del SDC-SIGNR es 0.8031. F-G: El ABC de la CEA y CA 19-9 en pacientes fueron 0,7477 y 0,6126, respectivamente. Sobre la base de los niveles decisivos clínicos (0-5 ug /l para CEA, 0-27 U /ml para el CA 19-9), se obtuvieron los valores de corte de CEA y CA 19-9. Y la correspondiente sensibilidad y especificidad de CEA y CA19-9 fueron 29,22 y 92,38, 14,67 y 94,55, respectivamente. H: El diagnóstico combinado de estos dos marcadores, SDC-SIGN y SDC-SIGNR, se analizó a través de la regresión logística binaria y curva ROC. El ABC de la SDC-SIGN /SDC-SIGNR fue 0,9885, la especificidad y sensibilidad fueron 94,8% y 98,7%, respectivamente.
Para evaluar el valor diagnóstico del SDC-SIGN y los niveles séricos SDC-SIGNR en pacientes con cáncer, se generaron curvas ROC para estos pacientes utilizando GraphPad Prism5. Basado en un análisis del índice Youden, la sensibilidad y especificidad para la mejor concentración de diagnóstico del SDC-SIGN (SDC-SIGN & lt; 2,226 g /ml), que se puede diferenciar el cáncer de colon de individuos libres de tumor, fueron 87.56% y 55.56% , respectivamente (Fig. 1D). Por otra parte, la concentración óptima de SDC-SIGNR era más de 227.7 ng /ml, y la correspondiente sensibilidad y especificidad fueron del 61,90% y 97,50%, respectivamente (Fig. 1E). El AUC (área bajo la curva) de la SDC-SIGN y SDC-SIGNR en pacientes fue de 0,7538 y 0,8031, respectivamente. Además, el diagnóstico de cáncer de colon con tanto SDC-SIGN y SDC-SIGNR fue altamente significativa (P & lt; 0,0001). Mientras tanto, CEA y CA19-9 son muy importantes marcadores tumorales de observación utilizados para el diagnóstico clínico y la determinación de la eficacia terapéutica en el cáncer de colon. También se generaron las curvas ROC de CEA y CA 19-9. De acuerdo con el nivel decisiva clínica (0-5 ug /l para CEA, 0-27 U /ml para el CA 19-9), tenemos la sensibilidad y especificidad para CEA y CA 19-9 (Fig. 1F-1G). En comparación con las AUC del SDC-SIGN (0,7538), SDC-SIGNR (0,8031), y CEA (0,7477), CA 19-9 (0,6126) en los pacientes fue menor. Lo que es más, la sensibilidad del SDC-SIGN y SDC-SIGNR fue 87.56 y 61.90 respectivamente, lo que es mucho más alta que la de CEA (29,22) y CA 19-9 (14.67). Además, cuando se combinaron estos dos marcadores para el diagnóstico de pacientes con cáncer, la especificidad y la sensibilidad fueron 94,8% y 98,7%, respectivamente, y la AUC de DC-SIGN /DC-SIGNR fue 0,9885 (Fig. 1H).
el SDC-SIGN y niveles SDC-SIGNR en pacientes con cáncer de colon no se correlacionaron significativamente con los niveles de CEA o CA19-9, el grado de diferenciación de las células tumorales, el género o la edad
Para determinar si los niveles de SDC SIGN y SDC-SIGNR son diferentes a la de CEA y CA 19-9, se analizó la correlación entre los niveles de SDC-SIGN o SDC-SIGNR en pacientes con cáncer de colon con CEA y CA 19-9, respectivamente. Los resultados mostraron que el nivel de SDC-SIGN muestra ninguna correlación significativa con la de cualquiera de CEA (29,271 ± 83,517 mg /l, n = 171, r = -0,04) o CA19-9 (92.886 ± 256.547 U /ml, n = 163, r = 0,103) ni hubo correlación significativa entre los niveles de SDC-SIGNR y CEA (r = -0,204; p & gt; 0,05) o CA 19-9 (r = -0.004; p & gt; 0,05) (S2A-S2D Figura) . Esto puede indicar que estos nuevos marcadores pueden funcionar como marcadores séricos independientes
A continuación, se analizó la correlación entre los niveles de SDC-SIGN o SDC-SIGNR y los siguientes datos clínicos:. Sexo y edad. Los niveles SDC-SIGN y SDC-SIGNR en pacientes con cáncer de colon no mostró correlación significativa con la edad (r = 0,019 yr = 0,029, S2E-S2F la figura), y no hubo diferencias significativas en función del sexo de los pacientes (P & gt; 0,05, S2G-S2H figura). Esto también indica que estos son indicadores bioquímicos independientes para el cáncer de colon.
Además, el grado de diferenciación de las células tumorales está relacionado con la velocidad de crecimiento del tumor, el grado de malignidad, la sensibilidad al tratamiento y el pronóstico global . Las muestras se dividieron en los siguientes cinco grupos basados en el grado de diferenciación de las células tumorales en los resultados patológicos: bien diferenciados, moderadamente diferenciados, pobremente diferenciado, bien a moderadamente diferenciados y moderadamente a pobremente diferenciado. No hubo diferencia significativa entre los dos grupos (Figura S2I-S2J), lo que implicaba que los niveles de SDC-SIGN y SDC-SIGNR no se correlacionan con el grado de diferenciación de las células de cáncer de colon.
El valor del SDC-SIGN y SDC-SIGNR en el diagnóstico precoz de la fase I /II de cáncer de colon pacientes
de acuerdo con un informe reciente, la regeneración de la proteína 4 (REG4), un miembro de la lectina de tipo C derivadas de islotes superfamilia, puede ser un buen marcador de suero para el diagnóstico precoz del cáncer gástrico [25]. Por lo tanto, se analizaron los valores de diagnóstico de SDC-SIGN y SDC-SIGNR en fase I /II de cáncer de colon. Es importante destacar que, se encontró que los niveles de SDC-SIGN y SDC-SIGNR en estadio I /II eran pacientes con cáncer de 1,452 ± 0,867 mg /ml y 505,5 ± 645,1 ng /ml, respectivamente. Estos niveles fueron significativamente diferentes a los de los controles sanos, P & lt; 0,05 (Fig. 2A-2B). En contraste con el nivel más alto de SDC-SIGNR en pacientes con cáncer de colon estadio principios relativos a los controles sanos, el nivel de SDC-SIGN en el cáncer de colon fue menor que en las personas sin cáncer
A-B:. Tanto niveles SDC-SIGN y SDC-SIGNR de pacientes con cáncer temprano de colon. Los pacientes en estadio I /II fueron significativamente diferentes de las personas sanas, P & lt; 0,01. SDC-SIGN es menor que en el control sano, mientras SDC-SIGNR es mayor. C-D: En el estadio I /II de los pacientes, SDC-SIGN y SDC-SIGNR tenía un valor diagnóstico significativo (P & lt; 0,01). Las concentraciones de corte de DC-SIGN y DC-SIGNR eran menos de 2,211 g /ml y más de 189,3 ng /ml, respectivamente. El correspondiente sensibilidad y especificidad de las dos moléculas eran 81,33% y 55,56%, 48,65% y 92,50%, respectivamente. E-F: El ABC de la CEA y CA 19-9 en el cáncer precoz fueron 0.6904 y 0.6917. A nivel decisivo clínico anterior, la sensibilidad de tanto CEA (18,64) y CA19-9 (10,00) eran muy bajos, mientras que, la especificidad de tanto CEA (92,33) y CA19-9 (94,55) fue alta. G: La comparación entre las curvas ROC de cuatro marcadores, DC-SIGN, DC-SIGNR, CEA y CA19-9. No hubo diferencias significativas entre los valores de AUC de SDC-SIGN y tanto SDC-SIGNR y CA 19-9. De acuerdo con los valores de corte para SDC-SIGN y SDC-SIGNR obtenido de la República de China curvas, CEA y CA 19-9 desde el nivel decisiva clínico, la sensibilidad (valores de diagnóstico) de ambos SDC-SIGN (81%) y SDC SIGNR (49%) fueron más altos que el CEA (19%) y CA 19-9 (10%).
a continuación, las curvas ROC de SDC-SIGN y SDC-SIGNR se generaron para evaluar su diagnóstico valores en pacientes con cáncer de colon en estadio temprano (Fig. 2C-2D). Al igual que en el cáncer de colon en todas las etapas, los valores de diagnóstico de SDC-SIGN y SDC-SIGNR fueron significativamente eficaz en el diagnóstico de la etapa I del cáncer de colon /II (P & lt; 0,01). Por otra parte, las concentraciones óptimas de SDC-SIGN y SDC-SIGNR eran menos de 2.211 g /ml y más de 189,3 ng /ml, respectivamente. Además, también se analizó los valores de diagnóstico de CEA y CA19-9 en el diagnóstico de pacientes con cáncer de estadio temprano (Fig. 2E-2F), el AUC, la sensibilidad y especificidad de estos cuatro marcadores se mostró en la Fig. 2G. La sensibilidad del SDC-SIGN fueron mayores más que otros marcadores (P & lt; 0,05), y el AUC del SDC-SIGN fue significativamente diferente de la de CA 19-9 y SDC-SIGNR (P & lt; 0,05). Para la proporción de la expresión anormal de estos cuatro marcadores en pacientes con cáncer de colon en estadio temprano, SDC-SIGN (81,3%) y SDC-SIGNR (40,5%) fueron mayores que para CEA (21,3%) o CA 19-9 (4,5%) ( Tabla 1). En general, los niveles de SDC-SIGN y SDC-SIGNR tienen potencial diagnóstico precoz en pacientes con cáncer de colon.
Los valores de pronóstico de SDC-SIGN y SDC-SIGNR en pacientes con cáncer de colon
con el fin de averiguar si los niveles de expresión de SDC-SIGN y SDC-SIGNR en suero se correlacionó con la supervivencia de los pacientes, se generaron las curvas de supervivencia de SDC-SIGN y SDC-SIGNR a través de pruebas de log-rank. De acuerdo con el análisis anterior del índice de Youden, tenemos los valores de corte de SDC-SIGN (2,226 g /ml) y SDC-SIGNR (227,7 ng /ml) que diferencian a los pacientes con cáncer de los individuos libres de tumor. Sorprendentemente, el tiempo de supervivencia fue significativamente mayor en los pacientes con niveles más altos de SDC-SIGN en comparación con los pacientes con niveles más bajos de SDC-SIGN (P & lt; 0,05, la figura 3A.). Sin embargo, no hubo diferencias significativas entre los pacientes con altos niveles de expresión de SDC-SIGNR y aquellos con bajos niveles de SDC-SIGNR (P & gt;. 0.05, la figura 3B).
Los valores de corte de estos los marcadores fueron obtenidos a partir del análisis anterior del índice de Youden. A: No hubo diferencias significativas en el tiempo de supervivencia entre los pacientes (el nivel de SDC-SIGN & gt; 2,226 g /ml) y los otros pacientes (el nivel de SDC-SIGN & gt; 2,226 g /ml) (P & lt; 0,05). B: el tiempo de supervivencia de los pacientes (SDC-SIGNR & lt; 227.7) no fue significativamente diferente a la de los otros pacientes (SDC-SIGNR & gt; 227,7) (P & gt; 0,05) guía empresas
IHC para DC. expresión -SIGN y DC-SIGNR en tejidos de cáncer de colon y en emparejado mucosa colónica normal de los pacientes de cáncer de colon
Se determinó el nivel de expresión tanto de DC-SIGN y DC-SIGNR en el suero. Por otra parte, se ha informado de que las células dendríticas inmaduras DC-SIGN + están presentes dentro de los tejidos de cáncer colorrectal primario [14], [26]. Nuestro equipo previamente descubrió que la CC-SIGNR se expresa tanto en tejidos de cáncer y el suero de los pacientes con LNH [23]. Por lo tanto, especuló que DC-SIGN y DC-SIGNR pueden ser expresados en tejidos de cáncer de colon. IHC para DC-SIGN y DC-SIGNR se realizó con 98 tejidos de cáncer de colon para DC-SIGN y 20 tejidos de cáncer de CC-SIGNR, con la intensidad de la tinción determinado por un patólogo que desconocía la información clínica relevante. tinción de DC-SIGN en la mucosa colónica normal correspondiente era débil (Fig. 4E y 4F), mientras que se observó una tinción intensa DC-SIGN en el estroma del tumor y los márgenes invasivos de tejidos de cáncer de colon (Fig. 4A y 4B). Los controles negativos se muestran en la Fig. 4C y 4D. tinción de DC-SIGN en los ganglios linfáticos, que se utiliza como control positivo, se muestra en la Fig. 4G y 4H.
Las áreas en las cajas negras de A, C, E, G, I y A, C, E, G, I se ampliaron a continuación. A-B: expresión DC-SIGN se detectó en la frontera interior, parte central y periférica de carcinoma de colon. C-D: control en blanco secciones de cáncer de colon humanas primarias (sin anti-DC-SIGN PAB). E-F: la expresión de DC-SIGN en la mucosa colónica normal correspondiente. G-H: expresión de DC-SIGN se detectó principalmente en el seno linfoide humana. I-J: control en blanco secciones de ganglio linfático humano (sin anti-DC-SIGN PAB); A-B: expresión DC-SIGNR se detectó débilmente en el margen invasivo de tumor. C-D: control en blanco primarias secciones cáncer de colon humano. E-F: expresión DC-SIGN fue negativo en la mucosa colónica normal correspondiente, mientras que el G y H fueron controles positivos en el ganglio linfático humano. I-J: secciones de ganglio linfático humano de control en blanco. Ampliación: 100 × en A, C, E, A, C, E, G, I; 200 × en G, I; 400 × en B, D, F, H, J, B, D, F, H, J.
Los resultados de la tinción de CC-SIGNR (Fig. 4A-J) mostraron que las DC -SIGNR fue negativa en los tejidos del colon emparejados (Fig. 4E y 4F) y en el estroma del tumor y era sólo débilmente positiva entre los focos de cáncer de colon (Fig. 4A y 4B). Por lo tanto, la expresión de DC-SIGNR en los tejidos de cáncer de colon no se analizó adicionalmente.
análisis de imágenes semi-cuantitativa de la expresión DC-SIGN en los tejidos y el análisis de su correlación con el SDC-SIGN y CEA en suero del mismo paciente
a medida que la expresión de DC-SIGN era evidente dentro de los tejidos de cáncer de colon, analizamos la inmunotinción DC-SIGN en ambos tejidos de cáncer de colon y los tejidos normales emparejados por análisis de imágenes semi-cuantitativa. Información general para los 49 pacientes fallecidos y 49 pacientes vivos se muestran en la Tabla 2. La densidad media en los tejidos del colon emparejados era 0,0009391 0,0007490 ±, y el nivel de confianza del 95% superior de la media (valor de corte) era 0,001219. La densidad media en tejidos de cáncer de colon (0,01009 ± 0.02380) fue mayor que en los tejidos emparejados (P & lt; 0,01, la figura 5A.)
A:. No hubo significación estadística en IHC para la expresión de DC-SIGN entre dos puntos cáncer de los tejidos y los tejidos de colon normales de la misma, P & lt; 0,001. la expresión de DC-SIGN en pacientes con cáncer de colon fue mayor que en los tejidos normales del colon; B: La correlación entre la intensidad de la tinción de DC-SIGN en el tejido de cáncer de colon y el nivel SDC-SIGN en el suero del mismo paciente. La densidad media (eje Y) se correlacionó negativamente con el SDC-SIGN (eje X), r = -0.4643, P & lt; 0,01; C: La correlación entre la densidad media de DC-SIGN en el cáncer de colon y CEA en suero. No se observó correlación significativa entre la densidad media (eje Y) y CEA (eje X), con un coeficiente de correlación de Spearman de -0,036, P & gt;. 0,05
A partir de los resultados anteriores, se encontró que el alto nivel de expresión de DC-SIGN en el tejido de cáncer de colon se invirtió en el suero, lo que muestra un bajo nivel de SDC-SIGN. Hemos recogido 30 muestras de suero de pacientes con cáncer de colon preoperatorios y analizó la correlación entre la intensidad de la tinción de DC-SIGN en el tejido de cáncer de colon y el nivel de SDC-SIGN en el suero del mismo paciente. Como se muestra en la Fig. 5B, la expresión de DC-SIGN en el tejido de cáncer de colon tenía una correlación negativa significativa con el nivel SDC-SIGN en suero (r = -0.4643, P & lt; 0,01).
Como se informó DC-SIGN para mostrar un alto Le afinidad por el CEA en glicanos [14] - [15], también se analizó la correlación entre la expresión de DC-SIGN en el tejido de cáncer de colon y el nivel de CEA en suero del mismo paciente. Los resultados no mostraron correlación significativa (r = -0,036; p & gt;. 0.05, figura 5C)
correlación entre la expresión aberrante DC-SIGN en tejidos de cáncer de colon y la supervivencia del paciente
La interacción específica. entre Le glicanos y DC-SIGN [15], la nueva función de DC-SIGN en establecer el contacto inicial entre los DC y células T en reposo [27] (Nonaka et al., 2008) - [28], y la infiltración de los países en desarrollo