Extracto
Relacionado con antígeno-Fos 2 (FRA-2 /FOSL2) pertenece a la familia de factores de transcripción AP-1. Aunque FOSL2 ha demostrado estar involucrados en diversos procesos fisiológicos y patológicos, se sabe muy poco sobre las vías de señalización que regulan la expresión FOSL2 y los mecanismos de la función FOSL2. Aquí, mostramos que la expresión FOSL2 está regulado por TGF-β1 y que FOSL2 se requiere para la migración inducida por TGF-β1. Demostramos que FOSL2 interactúa con Smad3
in vitro
y
in vivo
y así hasta regula las respuestas de señalización de TGF-beta 1-inducida. Mecánicamente, FOSL2 promueve P300 unión a Smad3 y la acetilación de Smad3 por P300. Además, nos muestran que la expresión de FOSL2 se correlaciona con la expresión Smad3 activada en las muestras de cáncer no microcítico de pulmón de células clínica (NSCLC). En resumen, el presente estudio indica que FOSL2 facilita la migración inducida por TGF-β1 por la interacción con Smad3 en CPNM y sugiere FOSL2 como una posible diana terapéutica para el NSCLC
Visto:. Wang J, D Sun, Wang Y, Ren F, Pang S, Wang D, et al. (2014) FOSL2 regula positivamente la señalización de TGF-β1 en células no pequeñas de cáncer de pulmón. PLoS ONE 9 (11): e112150. doi: 10.1371 /journal.pone.0112150
Editor: Jeremy J W. Chen, Instituto de Ciencias Biomédicas, Taiwán
Recibido: 4 de Junio, 2014; Aceptado: October 13, 2014; Publicado: 6 Noviembre 2014
Derechos de Autor © 2014 Wang et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. La autores confirman que todos los datos que se basan los resultados son totalmente disponible sin restricciones. Todos los datos relevantes se encuentran dentro del papel
Financiación: Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81172818; 81172215).. La fuente de financiación no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
La vía de TGF-β controla diversos procesos biológicos, incluyendo la proliferación celular, la diferenciación, la apoptosis y la migración [1]. Después de la activación de complejos de receptores quinasa serina-treonina de tipo I heteromérica tipo II y tras la unión del ligando TGF-β, la señalización intracelular se inicia mediante la fosforilación del receptor de proteínas Smad activadas (R-Smads) [2]. factores de la transcripción de la vía de TGF-β, fosforilados Smad2 /3 forma un complejo con Smad4 y luego se transloca al núcleo para regular la transcripción de TGF-ß genes diana vía [3]. Las respuestas celulares a la señalización de TGF-β están influenciados además por la interacción de las proteínas Smad con cofactores (coactivadores o correpresores) para modular la actividad transcripcional [4].
antígeno relacionado con Fos
2 (FRA-2 /FOSL2) pertenece a la familia del factor de transcripción AP-1, que incluye las diversas isoformas de Fos y Jun [5]. Las diversas proteínas Fos desempeñan un papel clave en el desarrollo distintas, fisiológicos y procesos patológicos [6], pero estos papeles individuales y los mecanismos implicados todavía no están claras. FOSL2 ejerce una función específica en el desarrollo óseo [7] y parece tener funciones fisiológicas y patológicas selectivos en diversos procesos, incluyendo la regulación fotoperiódico [8], el cáncer [9], y fibrosis [10]. Varios estudios anteriores han indicado que FOSL2 juega un papel clave en la regulación de TGF-β. Por ejemplo, FOSL2 se sobreexpresa en la esclerosis sistémica (SSc) y actúa como una novela mediador aguas abajo de la citoquina profibrotic TGF-β [11]. En fibroblastos cardíacos, FOSL2 como un regulador transcripcional puede inducir TGF-β expresión [10]. Por otra parte, es necesario que FOSL2 expresiones lisil inducida por TGF-β-oxidasa como 4 (LOXL4) en la regulación de la síntesis de matriz extracelular (ECM) y la remodelación [12]. Sin embargo, se desconoce si FOSL2 regula TGF-β en la carcinogénesis.
En el presente estudio se inició para examinar el papel de FOSL2 en la migración inducida por TGF-β. La expresión de FOSL2 se incrementó tras el tratamiento de TGF-β y se requiere para la migración de TGF-β1 inducida. FOSL2 También se ha demostrado que se unen a Smad3 para modular las respuestas de señalización inducida por TGF-β.
Materiales y Métodos
Ética Declaración
información y muestras de los pacientes se obtuvieron con el informado por escrito consentimiento. Cada paciente en este estudio dieron su consentimiento informado por escrito para publicar estos detalles del caso. La investigación fue aprobado por el comité de ética del Hospital de Cáncer de la Universidad Médica de Harbin.
Líneas celular, cultivo celular y transfección
El pulmón A549 línea celular de adenocarcinoma humano y la línea celular de riñón embrionario humano 293T se comprado de la American Type Culture Collection (ATCC) y se mantuvo en DMEM suplementado con 10% de suero bovino fetal (FBS) (Invitrogen) que contiene 100 unidades /ml de penicilina y 100 unidades /ml de estreptomicina (Sigma) a 37 ° C con 5% de CO
2. Para la inducción de EMT, las células A549 se cultivaron en 10% de FBS durante 24 horas y luego se mantuvieron durante 72 horas en medio libre de suero en presencia de 2 ng /ml de TGF-β1 (R & amp; D Systems). Las células A549 se transfectaron usando X-tremeGENE (Roche Applied Science), y las células HEK293T fueron transfectadas utilizando Lipofectamine 2000 (Invitrogen) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Un pequeño ARN de interferencia (siRNA) focalización FOSL2 humano se transfectó en las células durante 24 horas utilizando Lipofectamine RNAiMAX Reactivo (Invitrogen).
Plásmidos y anticuerpos etiquetados
-Myc
Smad3, FOSL2 bandera de etiquetado, y p300 HA-etiquetados se construyeron por subclonación estándar. De longitud completa Smad3 se subclonó en marco con el vector pGEX4T-1 para obtener proteínas de fusión GST. El plásmido reportero 3TP-lux se obtuvo del Dr. Joan Massague de Sloan-Kettering Institute, Nueva York, NY. Los anticuerpos se adquirieron de la siguiente manera: anti-FOSL2, anti-FLAG, anti-Myc, anti-HA, y anti-GAPDH de Sigma; anti-p300, anti-Smad3, y anti-GST de Santa Cruz; anti-acetilada-lisina de Señalización Celular Tecnología; anti-p-Smad3 de Abcam; Alexa Fluor 488 burro IgG anti-ratón y Alexa Fluor 546 burro IgG anti-conejo de Invitrogen. siRNAs para FOSL2 y el control negativo se obtuvieron de Dharmacon.
inmunoprecipitación y Western Blotting Análisis
A las 24 horas después de la transfección, lisados de células se recogieron usando tampón de lisis (Tris 50 mM, pH 8,0, NaCl 150 mM, EDTA 5 mM, NaF 50 mM, y 0,1% NP-40) y se incubaron con proteína A o perlas de Sepharose G y los anticuerpos adecuados para 2 horas a 4 ° C. Después de extensos lavados, las proteínas inmunoprecipitadas se hirvieron en tampón de muestra de proteína durante 5 min y luego se separaron por SDS-PAGE, se transfirieron a membranas de PVDF (Millipore), y se detectaron por análisis Western Blot.
GST pull-down Ensayo
GST y proteínas de fusión GST-Smad3 se expresaron en células BL21 y se purificaron según las instrucciones del fabricante (GE Healthcare vida Ciencias). construcciones FOSL2 marcado con FLAG se expresaron en células HEK 293T. de proteínas de células enteras lisados se recogieron después de 48 horas usando tampón de lisis celular, precleared usando glutatión Sepharose bolas, y luego se incubaron con cualquiera de GST-Smad3 o GST de control durante 2 horas a 4 ° C. Las perlas se lavaron cinco veces con tampón de GST-unión, se eluyó en 40 l de 2 x tampón de muestra de SDS, y luego detectadas por inmunotransferencia.
Transcripción reportero de ensayo
Las células fueron tratadas con o sin 2 ng /ml de TGF-β1 a las 20 horas después de la transfección. Después las células se recogieron y se analizaron con el sistema reportero de ensayo Dual Luciferase (Promega). Todos los ensayos se realizaron por triplicado, y todos los valores se normalizaron en contra de la eficacia de transfección
Renilla
actividades de luciferasa.
Real-time RT-PCR (QRT-PCR)
Total ARN se obtuvieron usando el reactivo TRIzol (Invitrogen). La transcripción inversa de ARN se realizó utilizando el sistema de ImProm-II de transcripción inversa (Promega) según las instrucciones del fabricante. transcriptasa inversa cuantitativa (QRT)-PCR se realizó utilizando un ABI PRISM 7500 secuencia sistema de detección (Applied Biosystems) con cebadores específicos del gen de p21 y PAI-1.
inmunofluorescencia
células A549 fueron cultivaron en una placa de 6 pocillos y se trataron con TGF-β1 (2 ng /ml). Las células fueron fijadas con paraformaldehído al 4%, se permeabilizaron con 0,1% Triton X-100, y se incubaron con anticuerpos primarios contra FOSL2 o Smad3 para 1 h a 37 ° C. Las células fueron incubadas con Alexa Fluor 488 o Alexa Fluor 546 anticuerpos durante 30 minutos a 37 ° C. Las imágenes fluorescentes fueron capturados utilizando un microscopio láser confocal de barrido-.
La inmunohistoquímica
Las muestras de tejido fueron incluidos en parafina. Las secciones se deparaffinised en xileno y se rehidrataron en un gradiente de etanol. Después de la recuperación de antígeno, las secciones se trataron con 3% de H
2O
2 de 10 min, seguido por 5% de albúmina de suero bovino (BSA) durante 30 min. Las secciones fueron incubadas con anticuerpos primarios. La visualización de la unión del anticuerpo se realizó mediante tinción con DAB. Los núcleos se tiñeron con hematoxilina. Los resultados de inmunotinción fueron evaluados de forma independiente por dos patólogos.
Los pacientes
especímenes de cáncer de pulmón (n = 57) se obtuvieron de pacientes con NSCLC en el Hospital de Cáncer de la Universidad Médica de Harbin desde 2009 hasta 2012. Los tejidos se almacenaron a -80 ° C hasta su uso. Todas las muestras eran de pacientes que no habían sido sometidos a radioterapia o quimioterapia preoperatoria. La puesta en escena patológica de los 57 tumores se realizó de acuerdo con el tumor-nódulo-metástasis (TNM) sistema de estadificación.
Migración Celular Ensayo
Migración ensayos se realizaron con 8 micras filtros (BD Biosciences ). Cada pocillo se cargó con aproximadamente 1 × 10
5 células. Después de la incubación durante 16 h, las células que pasan a través del filtro en los pocillos inferiores se fijaron en formalina y se tiñeron con violeta cristal. Se contaron las células en 10 campos seleccionados al azar (200 ×) de cada pocillo.
Análisis estadísticos
Todos los análisis estadísticos se realizaron utilizando el software SPSS17.0. Otros análisis estadísticos se realizaron utilizando una prueba t de Student. El análisis de supervivencia de Kaplan-Meier para evaluar la supervivencia global se realizó mediante la prueba de log-rank. Los datos se muestran como la media ± SD de 3 ensayos independientes. Una diferencia estadísticamente significativa se considera cuando
P
. & Lt; 0,05
Resultados
FOSL2 se requiere para el TGF-β1 inducida por la migración
Para empezar a explorar la posibilidad de que la expresión FOSL2 está regulado por TGF-β1, se trataron células A549 con TGF-β1 durante un transcurso de tiempo que abarca de 24 h a 72 h y se realizó un análisis de transferencia Western. Los resultados mostraron que los niveles de FOSL2 aumentaron sustancialmente en respuesta al tratamiento de TGF-β1 en esta línea celular (Figura 1A). Los máximos niveles de expresión a las 72 h FOSL2 fueron aproximadamente 4 veces mayores que las del nivel basal de control (Figura 1A). A continuación, hemos probado si FOSL2 participa en la migración de TGF-β1 inducida. Para explorar esta posibilidad, derribaron la expresión FOSL2 en las células A549, y un análisis de transferencia Western indicó que los niveles de FOSL2 se redujo significativamente en comparación con las células control (Figura 1B). A continuación, se analizó el efecto regulador de FOSL2 sobre la capacidad migratoria de las células A549 utilizando un ensayo de migración Transwell. tratamiento TGF-β1 promueve dramáticamente la migración de células A549, mientras que derribando FOSL2 abolió la migración celular en presencia de TGF-β1 (Figura 1C). Además, también examinamos los cambios morfológicos de las células A549 después de la exposición a TGF-β1. En ausencia de TGF-β1, las células mantienen un patrón clásico de adoquines morfología epitelial y crecimiento, pero las células adoptan una morfología más similar a fibroblastos y redujeron su contacto célula-célula después de la estimulación de TGF-β1; sin embargo, este efecto fue inhibido por FOSL2 agotamiento (Figura 1D).
células A549 (A) se incubaron con TGF-β1 (2 ng /ml) durante los tiempos indicados, y se recogieron las células para la transferencia de western análisis. GAPDH se utilizó como control de carga. niveles (B) FOSL2 fueron examinados por Western Blot en FOSL2-siRNA y células siCONTROL A549. GAPDH se determinó también como control de carga. (C) la migración celular se midió usando ensayos Transwell en siCONTROL y células A549 siFOSL2 con o sin TGF-β1 tratamiento (2 ng /ml). Se fotografiaron las células que migran a la superficie inferior de los filtros Transwell (arriba) y se contaron (parte inferior). (D) células A549 y siCONTROL siFOSL2 se incubaron con o sin 2 ng /ml de TGF-β1 de 72 h. La microscopía de contraste de fases muestra los cambios morfológicos celulares.
FOSL2 interactúa con Smad3
Debido a Smad2 /3 proteínas son los efectores de la transcripción de la señalización de TGF-β1, se examinó si la inhibición de la la migración inducida por TGF-β1 por el agotamiento FOSL2 estaba mediada por la interacción con estos Smads. Para probar si hay una interacción entre FOSL2 y Smad3 in vivo, se utilizó lisados celulares de células 293T transfectadas con plásmidos de expresión para la Bandera de etiquetado FOSL2 y Myc-etiquetados Smad3 y encontramos que FOSL2 podría ser co-precipita con Smad3 (Figura 2A) , mientras que no se observó una interacción entre FOSL2 y Smad2 (datos no mostrados). Esto nos permitió determinar si endógena FOSL2 y Smad3 también interactúan. Como se muestra en la Figura 2B, FOSL2 endógena asociada con Smad3 en las células A549, y la interacción era notablemente evidente en presencia de TGF-β1. Por otra parte, FOSL2 colocalizaban con Smad3 en presencia de TGF-β1 (Figura 2C). Para determinar si FOSL2 interactúa directamente con Smad3, hemos realizado ensayos de GST pull-down. cantidades equivalentes de GST-Smad3 o proteína GST sola se incubaron con FOSL2 Bandera de etiquetado. FOSL2 directamente interactuó con Smad3, pero no hay interacción de Smad3 fue evidente con la proteína GST (Figura 2D).
(A) FOSL2 interactúa con Smad3 in vivo. FLAG-FOSL2 y Myc-Smad3 se co-transfectaron en células HEK293T. se recogieron los lisados celulares, e IP se realizó con un anticuerpo anti-Myc. FOSL2 y Smad3 se detectaron a partir de los inmunoprecipitados por Western Blot con los anticuerpos indicados. (B) La asociación entre endógeno FOSL2 y Smad3 en células A549 con TGF-β1 (2 ng /ml) de tratamiento. La inmunoprecipitación se realizó utilizando un anticuerpo anti-IgG o el anticuerpo anti-Smad3. (C) colocalización subcelular de FOSL2 y Smad3 en las células A549 en presencia de TGF-β1 (2 ng /ml). Los núcleos se tiñeron con DAPI. (D) Las cantidades equivalentes de GST-Smad3 o GST solo se incubaron con lisados celulares de células HEK 293T que sobreexpresan Bandera-FOSL2; 10% de la entrada se ha ejecutado en el gel como control. El GST-Smad3 se detectó por tinción de los geles con azul de Coomassie.
FOSL2 modula la respuesta de señalización de TGF-beta 1 inducida por
A continuación se investigó el efecto de la expresión de TGF-FOSL2 β1- transcripcional respuestas dependientes mediante el reportero 3TP-Lux. Co-expresión de FOSL2 resultó poco a poco en una regulación de la actividad de reportero inducida por Smad3 (Figura 3A). Por el contrario, la actividad del indicador se redujo en las células A549 transfectadas con FOSL2 siRNA (siFOSL2) en relación con las células de control transfectadas con revueltos siRNA (Figura 3B), confirmando que FOSL2 endógena regula la actividad de Smad3.
(A) HEK 293T las células fueron transfectadas con el reportero p3TP-Lux plásmido que alberga Smad3 en ausencia y presencia de FOSL2, como se indica. Las células se recogieron a 36 h después de la transfección y se ensayaron para actividad de luciferasa. Los datos son las medias ± S. D. (B) Las células A549 se transfectaron con siFOSL2 y control revueltos siRNA. Después de 24 h, las células fueron transfectadas con p3TP-Lux y Smad3, como acusado. La actividad de luciferasa se ensayó después de otros 24 h. Los datos son medias ± S. D. células (C) A549 transfectadas con siFOSL2 y control revueltos siRNA se estimularon con 2 ng /ml de TGF-β1 por 4 h. mRNAs totales se analizaron mediante qRT-PCR usando cebadores específicos para p21 y PAI-1. Los datos son medias ± S. D. células (D) A549 transfectadas con siFOSL2 y control revueltos siRNA se estimularon con 2 ng /ml de TGF-β1 de 4 h y después se recogieron para producir lisados de células. Los niveles de expresión de las proteínas indicadas se examinaron mediante transferencia Western con los anticuerpos apropiados, como se indica.
A continuación, se evaluó el efecto de FOSL2 caída en la expresión endógena de TGF-β1 /Smad3 genes diana. En las células A549, el tratamiento de TGF-β1 induce la rápida expresión de p21 y PAI-1 mRNAs, y desmontables de FOSL2 atenuó significativamente estos efectos (Figura 3C). p21 Consistentemente, inducida por el TGF-β1 y PAI-1 de expresión a nivel de proteínas se inhibió en las células A549 siguientes FOSL2 agotamiento (Figura 3D).
FOSL2 promueve la unión a Smad3 y la acetilación de Smad3 por P300
es bien sabido que la CBP /p300 coopera con el Smad complejo para regular TGF-β de la transcripción del gen diana, lo que estabiliza la actividad transcripcional de la Smad complejo y por lo tanto aumenta la duración de la señalización de TGF-β. Para explorar más a fondo el mecanismo de la regulación de FOSL2 en la señalización de TGF-β, se examinó si FOSL2 afecta a la formación de TGF-β1 inducida del complejo /p300 Smad3. La interacción entre Smad3 y p300 fue inducida por la estimulación de TGF-β1, y esta interacción se aumentó profundamente por la expresión ectópica de FOSL2 (Figura 4A). Por el contrario, la interacción Smad3 y p300 fue atenuada por la caída de FOSL2 (Figura 4B). Debido Smad3 acetilación por p300 regula positivamente su actividad transcripcional, de este modo, examinamos si FOSL2 está involucrado en este proceso. Para probar esta posibilidad, 293T células se transfectaron con Myc-Smad3 solo o junto con p300 o FOSL2. Como se muestra en la Figura 4C, p300 inducen la acetilación de Smad3, y FOSL2 sobreexpresión mejoraron significativamente este acetilación. Por otra parte, el agotamiento FOSL2 endógena suprimido la acetilación de Smad3 por p300 en células A549 (Figura 4D).
(A) células HEK293T se cotransfectaron con plásmidos de expresión de HA-p300 y FLAG-FOSL2, junto con Myc-Smad3 , como se indica, con o sin TGF-β1 con el tratamiento (2 ng /ml). p300 con destino a Smad3 se inmunoprecipitó con un anticuerpo anti-Myc y detectada por transferencia de western con un anticuerpo anti-HA. (B) células A549 se transfectaron con siFOSL2. Después de 24 h, se trataron las células, como se indica, con el tratamiento con TGF-β1 (2 ng /ml). células HEK293T (C) se transfectaron transitoriamente con los plásmidos indicados. Las células se incubaron en presencia de TSA (5 M) durante 20 h. Los lisados celulares se inmunoprecipitaron (IP) con un anticuerpo anti-Myc, y acetilados Smad3 (Ac-Smad3) se detectó mediante transferencia western con un anticuerpo anti-lisina acetilada. (D) células A549 se transfectaron transitoriamente con los plásmidos indicados. Se realizaron los experimentos tal como se describe en la Fig. 4C.
Correlación de FOSL2 y expresión Smad3 activa en los tumores de NSCLC
Para investigar más a fondo la relación clínica entre FOSL2 y la señalización de TGF-β1, la expresión de FOSL2 y p-Smad3 en 57 muestras de NSCLC fueron examinados por métodos inmunohistoquímicos, y se evaluaron las correlaciones de las proteínas. De 57 casos, 35 eran estadio patológico I, y 22 estaban en pStage III. De los 35 casos en pStage I, 31 (88,6%) mostraron una menor expresión de las proteínas FOSL2 y p-Smad3; Sin embargo, 18 de los 22 casos (81,8%) en pStage III mostró una mayor expresión de las dos proteínas (Figura 5A). Además, la expresión FOSL2 se correlacionó positivamente con la tinción de p-Smad3 (P & lt; 0,001) (Figura 5B). Las curvas de supervivencia de Kaplan-Meier mostró que los pacientes con FOSL2 mayor expresión se encontraban en una notablemente mayor riesgo de muerte prematura que aquellos con menor expresión FOSL2 (P = 0,0059) (Figura 5C). Por lo tanto, estos resultados indican que la expresión FOSL2 en el tejido de cáncer de pulmón se correlaciona con la recaída postoperatoria y la supervivencia de pacientes con cáncer de pulmón.
(A) El análisis inmunohistoquímico de FOSL2 y p-Smad3 en 57 muestras de NSCLC. (B) la expresión FOSL2 se correlaciona positivamente con la expresión de p-Smad3 en muestras de NSCLC. puntuación semicuantitativo se realizó (prueba de correlación de Pearson; r = 0,858, p & lt; 0,001). Tenga en cuenta que algunos de los puntos en los gráficos representan más de un espécimen (algunas partituras se superponen). Las curvas de supervivencia (C) de Kaplan-Meier para los pacientes con CPNM con FOSL2 mayor o menor expresión. La diferencia en la supervivencia postoperatoria entre los pacientes con CPNM con FOSL2 expresión más alta y con FOSL2 menor expresión era en gran medida significativa (
P = 0,0059
mediante la prueba de log-rank).
Discusión
Nuestros resultados demuestran que FOSL2 regulación es necesaria para la migración inducida por TGF-β1. La inhibición de la expresión FOSL2 impidió la migración de TGF-β1 inducida y los cambios morfológicos asociados. En conjunto, estos resultados sugieren que FOSL2 es un componente importante de una red de regulación de la migración inducida por TGF-β1.
Smad3 es un transductor de señal clave en el TGF-β1 inducida por vías de señalización [13]. En un esfuerzo para aclarar aún más la relación entre FOSL2 y Smad3, identificamos FOSL2 como un co-factor para Smad3. Cómo FOSL2 funciona en células no se ha caracterizado hasta la fecha [14]. Primer lugar, validado las interacciones físicas de FOSL2 con Smad3. En el núcleo, oligómeros Smad reclutan a los co-activadores de la transcripción p300 /CBP [15] - [17], que son proteínas estructuralmente relacionadas con la histona acetiltransferasa actividad (HAT). La acetilación es una modificación post-traduccional de las proteínas, con histonas siendo el ejemplo más conocido [18]. Smad3 es un objetivo directo de los co-transcripcional activadores p300 /CBP, y esto acetilación es estimulada por TGF-β [19]. Sin embargo, no está claro si hay otras proteínas que facilitan este proceso. En este informe, se demuestra que promueve FOSL2 P300 unión a Smad3 y Smad3 acetilación por P300, lo que sugiere que FOSL2 desempeña un papel positivo en la regulación de la señalización de TGF-β.
La metástasis es un proceso altamente complejo que implica la fuga de las células tumorales del tumor primario en masa, la migración y la invasión a través de membranas basales y los tejidos conectivos, la entrada en el vascular o el sistema linfático, la supervivencia en la circulación, la extravasación en diferentes sitios de órganos (incluyendo unión a las células endoteliales y diapaedesis a través del endotelio), y proliferación para formar una metástasis a distancia [20] - [22]. Los resultados previos han demostrado que la sobreexpresión FOSL2 conduce a un aumento del potencial invasivo de las células de cáncer de mama, pero el mecanismo no se ha elucidado hasta el momento [23]. Dado que el TGF-β1 puede utilizar diversos programas de promoción de la metástasis del cáncer a través de sus efectos en el microambiente tumoral, propiedades invasivas mejoradas, y la inhibición de la función celular inmune, nuestros resultados también revelan que FOSL2 puede aumentar el potencial invasivo a través de la vía de TGF-β. Además, nuestros resultados clínicos de una correlación entre FOSL2 y expresión Smad3 activa en los tumores de NSCLC confirman esta conclusión. Estos resultados ponen de relieve la contribución de FOSL2 a la génesis tumoral no microcítico de pulmón de células y plantean la posibilidad de inhibir FOSL2 en la terapia de NSCLC.
En resumen, nos proporcionan la primera evidencia de que FOSL2 facilita la migración de TGF-β1 inducida en el CPNM células por interacción con Smad3 y por lo tanto promueve la unión a P300 Smad3 y Smad3 acetilación por P300, acontecimientos que pueden contribuir al desarrollo de NSCLC y sugerir FOSL2 como una posible diana terapéutica en el CPNM.
Reconocimientos
Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81172818; 81172215).