Crónica enfermedad > Cáncer > artículos del cáncer > PLOS ONE: Identificación y Evaluación de plasma microARNs para la detección temprana de cáncer colorrectal Cancer
PLOS ONE: Identificación y Evaluación de plasma microARNs para la detección temprana de cáncer colorrectal Cancer

2015/10/2


Extracto

Antecedentes

El cáncer colorrectal (CCR) es uno de los cánceres más comúnmente diagnosticados. microRNAs (miRNAs) que circulan se han sugerido como marcadores potencialmente prometedores para la detección precoz del CCR. El objetivo fue identificar y evaluar un panel de miRNAs que podrían ser adecuados para la detección precoz del CCR.

Métodos

MiRNAs fueron perfilados por TaqMan MicroARN matriz y se seleccionan para la expresión diferencial en 5 grupos de muestras de plasma de los pacientes con CCR (N = 50) y 5 piscinas de controles libres de neoplasia (N = 50). miRNAs adicionales fueron seleccionados a partir de una revisión de la literatura. candidatos identificados fueron evaluados en muestras de validación independientes con respecto a la discriminación de pacientes con CRC (N = 80) o pacientes con adenoma avanzado (N = 50) y controles libres de neoplasia (N = 194). El rendimiento diagnóstico del panel de miRNAs se evaluó mediante regresión logística múltiple, utilizando el análisis de arranque para corregir el exceso de optimismo.

Resultados

cinco miRNAs identificados que se expresó diferencialmente de microARN TaqMan Array (MIR -29a, -106b, -133a, -342-3p, -532-3p), y siete miRNAs reportados para ser expresadas diferencialmente en la literatura (miR-18a, -20, -21, -92a, -143, -145 , -181b) fueron seleccionados para su validación. Nueve de los doce (miRNAs miR-18a, -20, -21, -29a, -92a, -106b, -133a, -143, -145) se encontró que se expresa de forma diferencial en pacientes con CRC y controles en las muestras de validación. El área de optimismo con corrección bajo la curva fue 0,745 (95% intervalo de confianza: 0,708-0,846). Ninguno de los seleccionados miRNAs mostró expresión diferencial significativa entre los pacientes con adenoma avanzado y controles libres de neoplasia.

Conclusión

El panel de miRNAs identificado podría ser de uso potencial en el desarrollo de un multi-marcador prueba basada en la sangre para la detección precoz del CCR. Impacto: El estudio pone de manifiesto el alto potencial de miRNAs de plasma para la mejora de las ofertas actuales de cribado de CCR no invasiva

Visto:. Luo X, de la C, Burwinkel B, H Brenner (2013) Identificación y Evaluación de Los microARN plasma para la detección precoz del cáncer colorrectal. PLoS ONE 8 (5): e62880. doi: 10.1371 /journal.pone.0062880

Editor: Antonio Moschetta, Universidad de Bari & amp; Consorzio Mario Negri Sud, Italia |
Recibido: Diciembre 22, 2012; Aceptado: March 26, 2013; Publicado: 14 de mayo de 2013

Derechos de Autor © 2013 Luo et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan

Financiación:. Los autores no tienen el apoyo o la financiación para reportar

Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia

Introducción

con más de 1,2 millones de nuevos casos y 608,700 muertes por cada año, el cáncer colorrectal (CCR) es el tercer cáncer más comúnmente diagnosticado en los hombres y la segunda en las mujeres, y la cuarta causa más común de muerte por cáncer en todo el mundo [1]. Debido a su desarrollo típicamente muy lenta durante muchos años, las perspectivas para la detección temprana son mucho mejores que para muchas otras formas de cáncer. Se ha estimado que más del 95% de los casos de CCR se beneficiaría de la cirugía curativa si el diagnóstico se hizo en una etapa temprana de pólipos o premaligna [2], [3]. Un número de procedimientos de detección temprana se han desarrollado y están aplicando cada vez más, incluidos los exámenes endoscópicos, y taburete de pruebas de sangre. pruebas basadas en la sangre parecen ser particularmente atractivo, ya que son mínimamente invasivas y pueden recibir altos niveles de adherencia cuando se aplica como prueba de detección primaria en el cribado basado en la población. Un gran número de marcadores sanguíneos se han propuesto y evaluado, incluyendo proteínas, citológicos, ARNm, y marcadores de ADN [4], [5], pero el rendimiento diagnóstico ha sido en su mayoría insuficientes para su aplicación como una herramienta primaria de cribado poblacional. Por otra parte, la mayoría de los estudios se basaron en pequeñas muestras de conveniencia desde el ámbito clínico y los resultados más prometedores de los estudios pequeños a menudo no han sido replicados en validaciones posteriores de mayor escala.

Los microARN (miARN) son 18~22 nucleótidos ARN no codificantes que post-transcriptionally regular la expresión génica y controlar diversos mecanismos celulares [6]. Cada vez hay más pruebas de que miRNAs son ampliamente desregulado en el cáncer y pueden tener una aplicación potencial para el diagnóstico de cáncer, el pronóstico y el tratamiento [7]. Además, el reciente desarrollo de microarrays miARN ha realizado estudios de perfiles grandes en pacientes con cáncer posibles.

La estabilidad de miRNAs libres de células en los fluidos corporales permite circulando miRNAs ser potenciales biomarcadores para el diagnóstico no invasivo de cáncer y otras enfermedades [8 ]. Varios estudios recientes han encontrado algunos miRNAs circulantes, como miR-29a, miR-92a y miR-221, que se expresan diferencialmente en los pacientes con CCR y por lo tanto sean de uso potencial como biomarcadores no invasivos para la detección de CCR [9] - [11 ].

el objetivo de este estudio fue identificar y evaluar un panel de plasma miRNAs que podrían servir como biomarcadores para la detección precoz del CCR.

Materiales y Métodos

Población de estudio

los casos con CCR esporádico Diseño del estudio y fueron reclutados antes de iniciar el tratamiento en la Clínica Universitaria de Heidelberg, en el contexto de la DACHS + estudio, que es un estudio satélite para DACHS, un estudio de casos y controles en curso llevado a cabo en la región del Rin-Neckar de Alemania [12], [13].

los pacientes con adenomas y controles libres de las neoplasias colorrectales colorrectal avanzado fueron seleccionados al azar de los participantes de la colonoscopia de cribado reclutados en el estudio BLITZ, un curso estudio diseñado para evaluar nuevos marcadores prometedores para la detección temprana del CRC y anteriormente se describe en detalle en otra parte [14] - [16]. En resumen, los pacientes fueron reclutados, y se tomaron muestras de sangre en las oficinas gastroenterólogos 'en una visita preparatoria, por lo general alrededor de una semana antes de la colonoscopia de cribado.

Tanto el DACHS + y el estudio BLITZ fueron aprobados por los comités de ética de la Facultad de Medicina de la Universidad de Heidelberg y de las Juntas médicas de Baden-Württemberg y Renania-Palatinado. . Consentimiento informado por escrito se obtuvo de cada participante

Nuestra investigación incluyó dos fases principales, una fase de identificación del marcador y un marcador de fase de validación: Read
En la fase de identificación marcador, prometiendo miRNAs fueron seleccionadas por TaqMan matriz de microARN en muestras de plasma agrupados de 50 pacientes con CCR y 50 controles libres de neoplasia, utilizando cinco grupos de diez muestras de plasma de pacientes con CRC cada uno, y cinco grupos de muestras de plasma de diez controles libres de neoplasia cada uno. Además, siete miRNAs describen que se expresó diferencialmente en los casos y controles en las publicaciones anteriores CRC fueron identificados a partir de una revisión sistemática de la literatura (miR-18a, -20, -21, -92a, -143, -145, -181b) [17 ].

en la fase de validación marcador, la expresión de los miRNAs identificados fue evaluada en muestras independientes de (i) 80 casos de CCR y 144 controles libres de las neoplasias colorrectales y (ii) 50 pacientes con adenomas avanzados y 50 controles libre de las neoplasias colorrectales.

Procedimientos de laboratorio

(i) preparación de la muestra y la extracción de RNA.

Las muestras de sangre se recogieron en tubos de EDTA. Las muestras de sangre de pacientes con cáncer fueron tomadas antes de la cirugía o cualquier otro tratamiento y muestras de sangre de los participantes que se sometieron a una colonoscopia de cribado se tomaron antes de la colonoscopia. Las muestras de sangre se centrifugaron a 2123g durante 10 min a 4 ° C y el sobrenadante se transfirieron a tubos nuevos. Las muestras de plasma se almacenaron a -80 ° C hasta su uso. El ARN total que contiene pequeños ARN fue extraído de 200 l (muestras utilizadas en la fase de identificación) o 115 l (muestras utilizadas en la fase de validación) plasma usando una combinación de reactivo Trizol LS (Invitrogen, Carlsbad, California, EE.UU.) y miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Alemania), así como 5 fmol /l cel-miR-39 como control preparación externa como se describe anteriormente [18]. Las muestras se eluyeron en un volumen final de 30 microlitros.

(ii) Perfiles de microARN de las muestras de plasma.

Perfilado se realizó utilizando TaqMan MicroARN Array (Applied Biosystems, Foster City, California, EE.UU.) que permite la cuantificación de 667 microRNAs humanos. (Tabla S1) Megaplex reacción de transcripción inversa y reacción de pre-amplificación fueron realizadas por G-tormenta GS2 Thermal Cycler (G-Storm, Reino Unido). reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR) se realizó utilizando 7900HT sistema de PCR en tiempo real rápido (Applied Biosystems). El ciclo umbral (Ct) se define como el número de ciclos requeridos para la señal fluorescente a cruzar el umbral de QRT-PCR. Los valores en bruto de Ct se calculan utilizando la versión 2.2 del software SDS aplicación de configuración automática de línea de base y un umbral de 0,1 se estableció. Sólo miRNAs cuyo valor Ct era igual o inferior a 33 en, al menos, ya sea el caso, o el grupo de control se tuvieron en cuenta para su posterior análisis de los datos. La normalización de datos se llevó a cabo según lo descrito por Kroh et al. [19].

(iii) la verificación en tiempo real PCR cuantitativa.

miRNAs seleccionados se midieron utilizando TaqMan ensayos microARN (Applied Biosystems) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Triplicados de QRT-PCR de cada muestra se realizaron utilizando LightCycler 480 en tiempo real sistema de PCR (Roche Applied Science, Alemania). Ct se calcula restando los valores de Ct de los controles internos de los valores de Ct de los miRNAs de interés, y la media de los valores de Ct se compararon entre los casos y controles. múltiplex ensayos se realizaron con piscinas predefinidos de RT-cebadores (Tabla S2). La eficiencia de ensayo de cada miARN se determinó mediante la construcción de una curva estándar utilizando una serie de diluciones de ARN total. Todos los ensayos mostraron buena linealidad (R
2 & gt; 0,96) entre los valores de Ct y el registro de la cantidad de partida de ARN total de cada dilución (datos no mostrados): perfil
Análisis estadísticos

los niveles de expresión de miARN se compararon entre los pacientes con CRC y controles libres de neoplasia y entre los pacientes con adenoma avanzado y controles libres de neoplasia utilizando la Wilcoxon-Mann-Whitney (en adelante: la prueba de Wilcoxon). La comparación de los niveles de expresión de los genes miARN entre pacientes con CRC y controles libres de neoplasia en la fase de identificación marcador se realizó utilizando la versión exacta de la prueba de Wilcoxon. Todas las pruebas fueron dos lados valores y P de 0,05 o menos fueron considerados estadísticamente significativos.

La regresión logística múltiple se utilizó para evaluar el uso conjunto del panel de miRNAs identificados en la predicción de la CRC en la fase de validación marcador . (ROC) curvas características de funcionamiento del receptor se construyeron y áreas bajo la curva ROC (AUC) se calcularon tanto de no ajustado (aparente) y ajustada ( "optimismo con corrección") estima para evaluar la discriminación del modelo de predicción entre los pacientes con y sin CCR. The.632 + método de arranque (con repeticiones 1000) se utilizó para ajustar para sobreajuste del error de clasificación aparente y sobreestimación de las AUC por las estimaciones no ajustadas [20], [21]. intervalos de confianza del 95% (IC) para los cálculos ajustados y no ajustados se obtuvieron mediante análisis de arranque ordinarias (con repeticiones 1000).

La correlación de los niveles plasmáticos de miARN expresión a través de los 324 participantes de la fase de validación se evaluó mediante Spearman los coeficientes de correlación.

SAS versión 9.2 (SAS Institute Inc., Cary, Carolina del Norte, EE.UU.) se utilizó para realizar pruebas de Wilcoxon y la versión 2.15.0 se utilizó R (R Fundación para la Computación de estadística, Viena, Austria) para llevar a cabo todos los demás análisis. Se emplearon los R-paquetes "Daim" y "arranque" para llevar a cabo análisis de arranque [22], [23].

Resultados

Población de estudio

Un total de 424 se incluyeron individuos (130 pacientes con CRC, 50 pacientes adenoma avanzado y 244 controles libres de neoplasia) en el estudio. Las características demográficas de la población estudiada y la distribución de las fases del tumor se resumen de la fase de identificación marcador y marcador de la fase de validación en la Tabla 1.

Identificación de los expresados ​​diferencialmente miRNAs en CRC pacientes y controles Neoplasia libres
los análisis, fueron encontrados
en microarrays cinco miRNAs para ser estadísticamente significativa sobre-expresado en el plasma de pacientes con CCR en comparación con los controles libres de neoplasia (miR-29a: p = 0,016, miR-106b: p = 0,008, MIR -133a: p = 0,032, miR-342-3p: p = 0,008, miR-532-3p: p = 0,016, prueba de Wilcoxon exacta)

Evaluación de los controles internos para la PCR cuantitativa en tiempo real
.
en nuestros datos de microarrays se observó ninguna diferencia significativa en términos de los valores de Ct de miR-188-5p (p = 0,83, prueba de Wilcoxon) y miR-16 (p = 0,40, prueba de Wilcoxon) entre el CRC y neoplasia libre controles. RNU6B y miR-16 han sido los miARN endógenos de control más utilizados para QRT-PCR en los estudios miARN [8]. Por lo tanto, los llamados tres miRNAs fueron considerados como controles internos para la cuantificación de los genes miARN. Sin embargo, los niveles de expresión de RNU6B y miR-188-5p en el plasma eran demasiado baja para ser cuantificada por TaqMan MicroARN ensayo (media de los valores de Ct eran mayores que 35). Por lo tanto, el miR-16 fue seleccionado como el control interno, ya que mostró una alta abundancia y una menor variabilidad en la expresión. No se observó ninguna diferencia significativa en términos de valores de Ct de miR-16 (p = 0,40, prueba de Wilcoxon) entre el CRC y muestras libres de neoplasia.

Validación en una muestra independiente de CRC pacientes y controles Neoplasia libres

Para confirmar los cinco miRNAs (miR-29a, -106b, -133a, -342-3p, -532-3p) identificados en el análisis de microarrays y otros siete miRNAs (miR-18a, -20, -21 , -92a, -143, -145, -181b), que anteriormente se presentaban para ser expresadas diferencialmente en el CCR (excepto el miR-92a, que eran todos de estudios basados ​​en muestras de tejido) [17], QRT-PCR se realizó para analizar la expresión de los miRNAs seleccionados en nuestro conjunto de validación (224 muestras de plasma en total de 80 pacientes con CRC y 144 controles libres de neoplasia).

(i) la expresión de miRNAs.

Nueve miRNAs ( miR-18a, -20, -21, -29a, -92a, -106b, -133a, -143, -145) mostró una expresión más alta en el plasma de pacientes con CRC que en los controles libres de neoplasia (miR-18a: p & lt; 0,0001, miR-20a: p = 0,001, miR-21: p & lt; 0,0001, miR-29a: p = 0,001, miR-92a: p = 0,004, miR-106b: p = 0,028, miR-133a: p = 0,0002, miR-143 & lt; 0,0001, miR-145: p = 0,0004, prueba de Wilcoxon). Sin miARN fue encontrado para ser regulados a la baja. Los correspondientes niveles de expresión en el plasma de pacientes con CRC y controles libres de neoplasia (normalizado a miR-16) se muestran en la Figura 1.

Los diagramas de caja con la observación más pequeña, menor cuartil, la mediana, el cuartil superior y más grande de observación son mostrado. Los bigotes se extienden a las observaciones que no son más de 1,5 veces la longitud de la caja (rango intercuartil) lejos de la caja. observaciones más extremos se consideran valores atípicos. Los valores de p se basan en pruebas de Wilcoxon.

(ii) Relación entre miRNAs y características clínico-patológicas de los pacientes con CCR.

Se examinó la asociación entre los niveles de expresión de los genes miARN y algunas de las características clínico-patológicas. nivel de expresión de miR-181b fue mayor en los pacientes con metástasis en los ganglios linfáticos que en pacientes sin metástasis en los ganglios linfáticos (p = 0,024, prueba de Wilcoxon). Ninguno de los miRNAs mostró ninguna asociación con el sitio del tumor o el estadio del tumor. Del mismo modo, no se observaron asociaciones con la edad, ni en casos ni en los controles libres de neoplasia (datos no mostrados).

Para evaluar si los niveles de expresión de los miRNAs investigados están asociados con el desarrollo de la CRC, los pacientes eran estratificado por etapas AJCC. En general, los niveles de expresión fueron muy similares en los cánceres en etapa temprana y tardía. MiR-18a, 20a, 21, 29a, 133a, 143 y 145 se comprobó que estaban sobreexpresados ​​en el plasma de pacientes con CCR en estadios tempranos en comparación con los controles libres de neoplasia. MiR-18a, -20, -21, -92a, -133a, -143, -145 y -181b mostró mayores niveles de expresión en el plasma de pacientes con CCR en las etapas finales de los años en comparación con los controles libres de neoplasia. MiR-181b mostró una expresión más alta en el plasma de pacientes en estadio CRC finales de los años que los pacientes de CRC etapa temprana (Tabla 2).

(iii) El análisis multivariado.

Con el panel de 12 miRNAs (miR-18a, -20, -21, -29a, -92a, -106b, -133a, -143, -145, -181b, -342-3p, -532-3p), la República de China los análisis se obtuvo un ajustado AUC de 0,803 (IC del 95%: 0,774 a 0,888) y un ajustado, es decir, el optimismo con corrección, el AUC de 0,745 (IC del 95%: 0,708 a 0,846). Las curvas ROC se muestran en la Figura 2. Para cada miARN, las curvas ROC se representan en la figura S1.

Ajuste por exceso de optimismo hecho por the.632 + método de arranque. Abreviaturas:. AUC, área bajo curva ROC

La expresión de miRNAs en Advanced Adenoma pacientes y controles Neoplasia libres

adenomas colorrectales avanzados representan una etapa precursora de la CRC. Para evaluar el uso potencial de la detección temprana, incluso de los adenomas avanzados, los identificados 12 miRNAs se determinaron mediante qRT-PCR en muestras de plasma de 100 participantes en el estudio (50 con adenoma avanzado y 50 controles libres de neoplasia). No se observaron diferencias estadísticamente significativas en los niveles de expresión de los genes miARN en el plasma de pacientes con adenoma avanzado y controles libres de neoplasia.

Las correlaciones de niveles de expresión de miRNAs plasma

Entre los participantes de la fase de validación, fuerte No se observaron correlaciones entre los niveles de expresión de miR-18a y miR-20a (r = 0,800, p & lt; 0,001), que son a la vez codificado en el grupo de miR-17-92; miR-143 y miR-145 (r = 0,762, p & lt; 0,001), que son a la vez codificada en el grupo de miR-143/145; y miR-29a y miR-106b (r = 0,694, p & lt; 0,001), dos miRNAs estrechamente que residen en el cromosoma 7q. Los niveles de expresión de miRNAs algunos otros que no están yuxtapuestas en el genoma también están altamente correlacionados. Por otro lado, el miR-92a, que también está codificado en el grupo de miR-17-92 no fue altamente correlacionado con el miR-18a o miR-20a (r = 0,340 y 0,251, respectivamente) (Tabla S3).

discusión

en este estudio, se compararon los niveles de expresión de miRNAs en doce muestras de plasma de pacientes con CRC y controles libres de neoplasia. Para nuestro conocimiento, este es el primer informe sobre circula miARN para la detección CRC utilizando TaqMan Array MicroARN miARN perfiles. Cinco miRNAs (miR-29a, -106b, -133a, -342-3p, -532-3p) fueron identificados a partir del análisis de microarrays y siete fueron seleccionados de la literatura (miR-18a, -20, -21, -92a, -143, -145, -181b) para una mayor investigación [17]. En nuestro estudio de validación, se encontró que los niveles de expresión de miR-18a, -20, -21, -29a, -92a, -106b, -133a, -143, -145 y ser significativamente mayor en pacientes con CRC que en neoplasm- controles libres. ROC análisis de los miRNAs identificados ajustados por el exceso de optimismo por arranque produjo una AUC de 0,745 (IC del 95%: 0,708-0,846). Este resultado se compara favorablemente con los resultados de otras pruebas de sangre para la detección de CRC [5].

características de diagnóstico de miRNAs circulantes de CCR fueron evaluados previamente en dos estudios recientes. Ng et al. 0.89 reportado sensibilidad y especificidad de 0,70 en un determinado punto de corte de miR-92a, y una AUC de 0,885 (IC del 95%: desde 0,83 hasta 0,94) basado en 90 pacientes con CRC (estadio TNM I /II /III /IV: 6 /34/23/27) y 50 controles [10]. Huang et al. reportado 0,830 0,847 sensibilidad y especificidad, y una AUC de 0,883 (IC del 95%: 0,830 hasta 0,937) obtenido en un análisis multivariado, incluyendo el miR-29a y miR-92a basado en 100 pacientes con CCR (estadio TNM I /II /III /IV : 27/25/38/10) y 59 controles [9]. Por lo tanto, ambos estudios encontraron estimaciones AUC mayor que los obtenidos en el presente estudio. Estos estudios no se habían ajustado por el exceso de optimismo. Mientras que el intervalo de confianza del 95% (0,774 hasta 0,888) de las AUC no ajustada en nuestro estudio abarcó las AUC reportados por Ng et al. y Huang et al., ajuste por exceso de optimismo atenúa la AUC de aproximadamente 6 unidades porcentuales. Sin embargo, nuestra estimación no ajustada AUC fue ligeramente inferior a los reportados anteriores, a pesar del mayor número de miRNAs incluidos. Los factores que podrían explicar en parte estas diferencias incluyen la distribución etapa de la CRC y el azar. El porcentaje de pacientes con CRC en fase inicial (AJCC fase I y II) fue mayor en nuestro estudio (59%) que en los estudios se informó anteriormente (44% y 52%, respectivamente) y, probablemente, más cerca de la etapa de distribución esperada en un marco de cribado [5]. Sin embargo, no se observó ninguna diferencia importante de los niveles de expresión según la etapa en nuestro estudio.

adenomas colorrectales representan una etapa precursora del adenocarcinoma. Un estudio previo había informado de que la expresión diferencial de plasma de miR-29a y miR-92a también podría discriminar a los pacientes con adenoma avanzado de controles libres de neoplasia a pesar de que la discriminación fue menos pronunciado que para los pacientes con CRC [9]. En nuestro estudio, se encontró que ninguno de los miRNAs investigados significativamente expresadas diferencialmente en los pacientes con adenoma avanzado en comparación con los controles libres de neoplasia. Estos resultados sugieren que los miRNAs investigados pueden no ser útiles para el diagnóstico de adenomas avanzados. Sin embargo, la falta de diferencias significativas también puede ser debido a un poder limitado para detectar diferencias moderadas con el tamaño de la muestra de nuestra subestudio comparando portadores de adenomas avanzados y los sujetos sin neoplasia dada la falta observada de la expresión diferencial de miRNAs individuales, un modelo multivariado para la predicción de los adenomas avanzados no se aplicó.

a pesar de la expresión diferencial de plasma de miR-18a, -20, -21, -106b, -133a, -143, -145 y -181b en pacientes con CCR fue examinado en algunos estudios basados ​​muestra de tejido [24] - [27], esto es, a nuestro entender, el primer estudio informa sobre la expresión de estos miRNAs en muestras de plasma de un gran número de pacientes con CCR y controles libres de neoplasia. diferencias estadísticamente significativas en la expresión de todos los analizados, excepto miRNAs miR-181b, miR-342-3p y no se observaron miR-532-3p. Curiosamente, nuestros datos muestran que los niveles de expresión de miR-133a -143, -145 y fueron significativamente-expresan sobre en el plasma de pacientes con CCR en comparación con los controles libres de neoplasia, lo que parece contradecir los datos que muestran consistentemente menor expresión de estos tres estudios miRNAs en el cáncer en la muestra de tejido a base [28] - [34]. Otros estudios con un mayor número de pacientes y mediciones simultáneas de los genes miARN expresión en el plasma y el tejido puede estar justificada para aclarar esta cuestión.

Un problema común en la investigación relativa a los miRNAs que circula es que no hay consenso control interno ha sido establecida. Se evaluó el miR-16, miR-188-5p y RNU6B, y debido a la expresión coherente, estable y de alta en todas las muestras de plasma, miR-16 fue seleccionado como control interno en las pruebas basadas muestra de plasma, pero validaciones empíricas más todavía necesaria para un consenso sobre los controles internos sólidos y precisos.

los nueve miRNAs encontró que sobre-expresan en el plasma de pacientes con CCR en nuestro estudio también se han investigado con respecto a las otras enfermedades en investigaciones anteriores [9] , [10], [33], [35] - [48]. (Tabla 3) Por ejemplo, plasma miR-21 se ha encontrado que se sobre-expresa en una amplia variedad de tumores malignos incluyendo carcinoma hepatocelular, cáncer de próstata, y cáncer gástrico [35], [36], [42], [46] - [49]. Estas similitudes en el patrón de expresión de miR-21 en diferentes tipos de cáncer suggestes que podría funcionar miR-21 como un oncogén. investigaciones funcionales mostraron que los genes supresores de miR-21 dianas tumorales tales como fosfatasa y tensina homólogo (PTEN) e inversamente regula su expresión [50]. PTEN está clasificado como el segundo gen supresor de tumores más comúnmente mutado después de p53. Puede ser inactivado por mutación con pérdida de heterocigosidad, la metilación del promotor, la interferencia miARN y algunos otros mecanismos en un número de cánceres, incluyendo el cerebro, la próstata, cáncer de útero [51]. Expresión diferencial de algunos miRNAs en varios tipos de cáncer admite sugerencias de que por lo general se deben combinar con miRNAs adicionales cuando se utiliza para la detección de cánceres específicos.

Hay algunas limitaciones que deben tenerse en cuenta a la hora de interpretar el resultados de este estudio. En primer lugar, el tamaño de la muestra es aún pequeño, sobre todo en la fase de selección de marcadores. En segundo lugar, una gran cantidad de abundancia miRNAs 'en el plasma son demasiado bajo para ser cuantificado con precisión por QRT-PCR, por lo tanto, no podían considerarse algunos marcadores potenciales pertinentes. En tercer lugar, queda por determinar en qué medida los niveles de expresión modificada de miRNAs se encuentran entre los pacientes con CRC en este estudio son CRC específico.

Conclusiones

Plasma miRNAs parece ser biomarcadores potencialmente útiles para la detección precoz y el diagnóstico de CCR. Aunque la investigación sobre perfiles de miARN a base de plasma se encuentra todavía en fase muy temprana en comparación con la investigación sobre el tejido a base de perfiles de miARN, que podría tener el potencial para contribuir al desarrollo de nuevos enfoques de, la Convención de cribado basado arterial no invasiva. Sin embargo, el rendimiento diagnóstico del panel de miRNAs identificado aún no podría ser suficiente para competir con el rendimiento de algunas otras pruebas no invasivas, en particular las pruebas inmunoquímicas sangre oculta en heces [52]. La investigación adicional en una prueba basada en la sangre multi-marcador, que puede incluir el panel de miRNAs identificados en este estudio podría ser un enfoque prometedor para mejorar el repertorio para la detección del cáncer no invasivo.

Apoyo a la Información
Figura S1 .
se realizaron curvas utilizando 12 microARN miR-seleccionados (18a, -20, -21, -29a, -92a, -106b, -133a, -143, -145, -181b, -342-3p y miR 532-3p) para la discriminación de 80 pacientes con cáncer colorrectal y 144 controles libres de neoplasia. Abreviaturas: FPR, tasa de falsos positivos. TPR, la verdadera tasa positiva. . AUC, área bajo curva ROC
doi: 10.1371 /journal.pone.0062880.s001 gratis (DOC)
Tabla S1.
667 microARN humanos probados utilizando TaqMan Arrays MicroARN
doi:. 10.1371 /journal.pone.0062880.s002 gratis (DOC) sobre Table S2. piscinas
RT-primers utilizados para multiplex PCR en tiempo real cuantitativa
doi: 10.1371. /journal.pone.0062880.s003 gratis (DOC) sobre Table S3.
Spearman coeficientes de correlación de los niveles de expresión entre los microARN 324 participantes de la validación (p & lt; 0,001, si no anotada)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0062880.s004 gratis (DOC)

Enfermedades de sentido común

Enfermedad del corazón | Enfermedades artículos | Enfermedad pulmonar | las preguntas más frecuentes de salud | Salud mental | Diabetes | El sentido común de la Salud | Enfermedades comunes | senior Health | Primeros auxilios
Derechos de autor © Crónica enfermedad[www.enfermedad.cc]