Extracto
Antecedentes
JCV es un poliomavirus ADN adaptan muy bien a los seres humanos. Aunque el ADN JCV se ha detectado en el cáncer colorrectal (CRC), la asociación entre el virus JC y el CRC sigue siendo controvertido. En China, no se ha reportado la presencia de infección por virus JC en pacientes con CCR. A continuación, se investigó la infección por virus JC y la carga de ADN viral en pacientes con CRC chinos y para determinar si el ADN JCV en la sangre periférica (PB) se puede utilizar como marcador diagnóstico de CCR-JCV relacionados.
Metodología /Principales conclusiones
Los tejidos tumorales, tejidos de tumores adyacentes no cancerosos y muestras de PB se obtuvieron de 137 pacientes con CCR. Además, 80 muestras de tejido colorrectales normales de los pacientes sin muestras de CRC y PB de 100 voluntarios sanos también se recogieron como controles. JCV ADN fue detectado por PCR anidada y transferencia de puntos basados en portaobjetos de vidrio. carga viral de ADN de muestras positivas se determinaron por cuantitativa en tiempo real PCR. Se detectó ADN JCV en el 40,9% (56/137) de los tejidos de CRC en una carga viral 49.1 a la 10.3 × 10
4 copias /g de ADN. Treinta y cuatro (24,5%) colorrectal tejidos no cancerosos (192,9 a 4,4 × 10
3 copias /g de ADN) y 25 (18,2%) muestras de PB (81,3 a 4,9 × 10
3 copias /g de ADN) de CRC pacientes fueron positivos para JCV. Los tejidos tumorales tenían niveles más altos de VJC que los tejidos no cancerosos (
P = 0,003)
o muestras de PB (
P Hotel & lt; 0,001). No se observó correlación entre la presencia de JCV y las características demográficas o médicos. La prevalencia JCV en muestras de PB se asoció significativamente con el estado JCV en muestras de tejido (
P Hotel & lt; 0,001). Once (13,8%) colorrectal tejidos normales y siete (7,0%) muestras de PB de donantes sanos fueron positivos para el virus JC.
Conclusiones /Importancia
JCV infección se presenta con frecuencia en los tejidos tumorales de colon de CRC pacientes. Aunque la asociación entre la presencia JCV en muestras de PB y el estado JCV en muestras de tejido fue identificado en este estudio, si la detección PB JCV puede servir como un marcador para el estado de JCV CRC requiere más estudio
Visto:. Mou X, Chen L, Liu F, Lin J, Diao P, Wang H, et al. (2012) La prevalencia del virus JC en pacientes chinos con cáncer colorrectal. PLoS ONE 7 (5): e35900. doi: 10.1371 /journal.pone.0035900
Editor: Herman Tse, de la Universidad de Hong Kong, Hong Kong
Recibido: noviembre 30, 2011; Aceptado: March 23, 2012; Publicado: 11-may 2012
Derechos de Autor © 2012 Mou et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio fue financiado por subvenciones del programa Nacional de Investigación básica de China de Ciencia Nacional de China y el Proyecto Principal de Tecnología Nº 2012ZX10002006-003, (programa 973) Nº 2007CB513001, y Qiu Shi Cátedra de la Universidad de Zhejiang para CX. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el virus John Cunningham (JCV) es un pequeño poliomavirus ubicuo,, no envueltos con un genoma cerrado, circular, de doble cadena de ADN que reside con frecuencia en los riñones de los individuos sanos y se excreta en la orina de una gran parte de la población adulta. infección JCV es subclínica y conduce a la latencia de por vida, pero puede ser reactivado cuando el sistema inmune se altera [1] - [3]. JCV se asocia con la enfermedad principalmente en individuos inmunocomprometidos y su replicación en células gliales podría conducir a la leucoencefalopatía multifocal progresiva (LMP), una enfermedad a menudo fatal del sistema nervioso central [4]. Al igual que otros poliomavirus, JCV codifica una versión de un antígeno T grande que puede unirse a e inactivar proteínas supresoras de tumor p53 y pRb e interferir con varias vías de señalización celular [5] - [7]. Además, secuencias de ADN genómico JCV y la expresión del antígeno T se han detectado en una amplia gama de tipos de células tumorales humanas incluyendo oligodendrocitos, astrocitomas, glioblastomas, ependimomas, y la mayoría de otros tipos de tumores cerebrales [8], lo que indica que la infección por JCV puede estar asociada con la carcinogénesis humana.
Más recientemente, JCV también se encontró en cánceres no neuronales, tales como el cáncer [9] y de pulmón gástrico [10]. infección por virus JC se informó por primera vez como un factor de riesgo potencial para el cáncer colorrectal (CCR) en una obra de Laghi et al. [11], que encontró que 96% de los tejidos de CRC fueron positivos para secuencias de ADN JCV. Posteriormente, otros estudios han sido publicados que muestran que las secuencias de JC, se encontraron en el 26% -88.9% de los tejidos de CRC, con tamaños de muestra de 18 a 105 [12] - [15]. Por el contrario, otros estudios han demostrado posteriormente que no ADN JCV detectable estaba presente en los tejidos colorrectales indica que no hay asociación entre JCV y colon neoplasia [16] - [17]. prevalencia JCV en varios conjuntos de muestras de CRC puede ser debido a diferencias en la sensibilidad de ensayo en todos los estudios, la contaminación entre las muestras, o ubicaciones geográficas de la población seleccionada. A pesar de la demostración de la presencia de los componentes virales tumorales es el primer paso para caracterizar el papel de la JCV en la carcinogénesis de CRC, pruebas adicionales, tales como la carga viral alta, es necesario apoyar un papel causal. Sin embargo, sólo dos estudios han mencionado la carga viral del virus JC en el CCR [11], [15]. Teniendo en cuenta los informes controvertidos sobre la etiología de la JCV en el CCR, parece que la asociación entre la infección por virus JC y el CRC tiene que investigarse más a fondo.
Muchos estudios han demostrado que el ADN JCV o antígenos pueden detectarse en la sangre periférica (PB) o suero. componentes virales detectados en la sangre han sido históricamente presume que se originó a partir de células de cáncer con metástasis o de restos celulares que contiene el virus arrojar desde un sitio de infección local [18]. Aunque dos estudios de casos y controles prospectivos se han realizado para determinar la asociación entre la seropositividad y el desarrollo JCV CRC [19] - [20], no ha habido ningún informe que describe la presencia de ADN JCV en la sangre de pacientes con CRC publicados hasta la fecha. En este estudio, se investigó la prevalencia del virus JC en pacientes con CRC chinos para determinar una posible relación. Además, se investigó si el ADN JCV en el PP es adecuado como marcador diagnóstico de CCR-JCV relacionados.
Métodos
Declaración de Ética
Este proyecto fue aprobado por la Ética Comité del primer hospital Afiliado de la Facultad de Medicina de la Universidad de Zhejiang, Hangzhou, china. escrito el consentimiento informado fue proporcionada por los pacientes y los controles.
Las muestras clínicas
Se obtuvieron Todas las muestras clínicas entre mayo de 2007 y octubre de 2011, de pacientes ingresados en el Primer Hospital Afiliado de la Facultad de Medicina de la Universidad de Zhejiang (Hangzhou, china). Los tejidos tumorales, tejidos no cancerosos tumorales adyacentes y muestras de PB de 137 pacientes con CCR aleatorios (media de edad de los pacientes, 62,99; rango, 27-86 años) se recogieron menos de tres meses después del diagnóstico del CCR. Se excluyeron los pacientes sometidos a cirugía para las recurrencias. tejido tumoral adyacente no canceroso se recogió de un área ~ 15 cm distal del tumor. Además, 80 tejidos colorrectales de mucosa no patológica de los pacientes sometidos a colonoscopia para la evaluación de los trastornos funcionales, tales como diarrea o estreñimiento no relacionado con el cáncer o la enfermedad inflamatoria intestinal (IBD) y 100 muestras de PB de donantes sanos en el examen físico, sin antecedentes de cáncer o diagnóstico pólipo se recogieron como controles. Las muestras de tejido se dividieron; una parte se mantuvo para el análisis histopatológico, y el otro transfiere a criotubos, congelados inmediatamente en nitrógeno líquido y se almacenó a -196 ° C para su posterior análisis. Todos los datos de la muestra se registraron en una base de datos de recogida de muestras.
Extracción de ADN
Cerca de 50 mg de cada muestra de tejido se homogeneizó en un tubo estéril de 2 ml con solución de cloruro de sodio 1 ml de 0,09% usando un homogeneizador eléctrico (PRO Scientific, Oxford, CT, EE.UU.). Para reducir al mínimo la contaminación cruzada entre muestras, la sonda se lavó en agua dulce estéril tres veces, solución de peróxido de hidrógeno 40% dos veces, 75% de etanol dos veces y se calentó en un quemador de etanol 95% durante 3 minutos entre las muestras. Cuatrocientos microlitros de cada muestra de PB se utilizó para el aislamiento de ADN. El ADN de cada muestra se extrajo usando el kit de purificación MasterPure ADN (Epicentre Biotecnologías, Madison, WI, EE.UU.) según las instrucciones del fabricante. Para confirmar la integridad del ADN extraído, PCR usando gliceraldehído fosfato deshidrogenasa (GAPDH) cebadores se llevó a cabo como se describe anteriormente [21].
Nested PCR para el genoma JCV
amplificación de PCR anidada se realizó utilizando un conjunto de cebadores para el antígeno T como se describe anteriormente [13]. En pocas palabras, el objetivo de 173 pb de JCV T-antígeno se amplificó primero mediante el uso de los cebadores JCT-1F (5 'AGT CTT TAG GGT CTT CTA-3') y JCT-1R (5'-GGT GCC AAC CTA TGG AAC AG-3 '). Primera ronda condición PCR se desnaturalizó a 95 ° C durante 10 min, seguido de 30 ciclos de desnaturalización a 95 ° C durante 15 s, hibridación a 55 ° C durante 30 s y extensión a 72 ° C durante 30 s. Nested PCR se llevó a cabo mediante el uso de 2 l de producto de primera ronda como molde, con los cebadores JCT-1F y JCT-2R (5'-TGA AGA AAC TTG TTG CCA TG-3 '). La condición de la PCR anidada se desnaturalizó a 95 ° C durante 10 min, seguido de 30 ciclos de desnaturalización a 95 ° C durante 15 s, hibridación a 60 ° C durante 30 s y extensión a 72 ° C durante 30 s. El procedimiento de PCR anidada amplificar una secuencia diana de 110 pb. Para evitar posibles PCR resultados falsos positivos, dos controles de agua se incluyeron para la primera ronda de PCR y PCR anidada. Si bien el control de los dos controles de agua produjo un falso positivo en la PCR anidada, todo el conjunto de la PCR y PCR anidada se reinició con el nuevo reactivo. Para cada muestra, 1 l de ADN se amplificó por PCR anidada. Cuatro microlitros de cada productos de amplificación se analizaron por electroforesis en gel 2% de tinción con bromuro de etidio y agarosa.
Vidrio dot a base de diapositiva secante
Los productos de PCR anidada se purificaron con el kit de purificación MinElute PCR (QIAGEN, Hilton, Alemania) y se eluyó finalmente en 10 l de tampón EB (10 mM Tris-Cl, pH 8,5). Las muestras de ADN purificados se mezclaron con un volumen de DMSO, y manchas en las superficies de las diapositivas de aminosilano (CapitalBio, Pekín, China) como tres repeticiones con un SmartArrayer spotter (CapitalBio, Pekín, China). Después de cocer durante 1 hora a 80 ° C, los portaobjetos se aclararon en 0,2% SDS durante 5 min y se limpian mediante un lavado con ddH
2O. sonda de oligonucleótidos marcada con TAMRA (JCT-sonda, 5'-GTT GGG ATC CTG TGT TTT CAT CAT C-3 ') se adquirió de Invitrogen (Shanghai, China) y se diluyó a una concentración de 10 mM. La hibridación se llevó a cabo a 45 ° C durante 2 h. Los portaobjetos se lavaron en 2 x SSC /0,2% SDS a 42 ° C durante 5 minutos, y finalmente en ddH
2O a 42 ° C durante 5 min. Los portaobjetos se secaron por centrifugación y escaneadas con un GenePix 4100 escáner (Axon, Union, EE.UU.). Las imágenes se analizaron con el software GenePix Pro 5.0 (Axon).
La cuantificación de la carga viral por PCR en tiempo real
Se utilizó un método SYBR Green-PCR en tiempo real para determinar la carga viral en muestras JCV como se describe por Chapagain [22]. Especialmente, los cebadores de RT-JCT-F (5'-AGA GTG TTG GGA TCC TGT GTT TT-3 ') y RT-JCT-R (5'-GAG AAG TGG GAT GAA GAC CTG TTT-3') se utilizaron en el PCR en tiempo real la orientación de una secuencia de gen antígeno T, la producción de un producto de 78 pb durante la reacción. JCV cuantificación de la carga viral se llevó a cabo en el sistema de detección de PCR Bio-Rad CFX96 en tiempo real utilizando 200 ng de ADN molde, 10 l de SYBR Green PCR Master Mix (Takara, Dalian, China) y 4 pmoles de cada uno de los cebadores directo e inverso. El ciclo térmico se inició con una primera etapa de desnaturalización a 95 ° C durante 30 s, seguido de 40 ciclos de 95 ° C durante 5 s y 60 ° C durante 15 s y la fluorescencia de amplificación se controlaron a 60 ° C en el extremo de cada ciclo. Una curva estándar se construyó utilizando diluciones seriadas (1,0 a 10
7 copias de ADN JCV) de JCV plásmido T-antígeno. Tres repeticiones fueron realizadas para cada muestra y se analizaron en tiempo real de datos de PCR utilizando el software gestor de Bio-Rad CFX. El número de copias promediados en las muestras se calcularon de acuerdo con la curva estándar y se representan como copias de ADN viral por microgramo de ADN genómico.
Métodos estadísticos
Las características demográficas se compararon entre los pacientes con CRC (C) y controles (pacientes no CRC (N) o de donantes sanos (H)) utilizando el
t de Student
-test para variables numéricas y la χ
2 para las variables categóricas. El sexo, la exposición al tabaco, consumo de alcohol, residencia, antecedentes familiares de CCR, el sitio del tumor y la etapa patogénica se compararon entre los pacientes de CRC-JCV-positivos y negativos utilizando el χ
2 test. estado de diferenciación se comparó entre los pacientes con CRC JCV-positivos y negativos utilizando la prueba exacta de Fisher. El modelo de regresión logística exacta, ajustado por edad, se utilizó para estimar la asociación entre la infección por virus JC y el CRC. el software estadístico R (v 2.12.0, www.r-project.org/) se utilizó para el análisis estadístico. En todos los análisis, un
P-valor
& lt; 0,05 fue considerado estadísticamente significativo
Resultados
Características demográficas de los 137 pacientes con CRC, 80 pacientes no CRC y 100 donantes sanos. están presentes en la Tabla 1. Los pacientes con CRC eran mayores que los pacientes no CRC (
P
& lt; 0,001), pero no se observó diferencia entre los pacientes de CRC y donantes sanos. antecedentes familiares de CCR fue más común entre los pacientes con CRC versos pacientes no CRC o donantes sanos, pero las diferencias no fueron estadísticamente significativas (
P = 0,491
para C vs N,
P = 0,162
para C vs H).
Todas las muestras fueron positivas para el control GAPDH, lo que indica una integridad adecuada de las muestras. Los controles negativos en ambas rondas de PCR no revelaron evidencia de contaminación de los reactivos. Usando PCR anidada, se detectó la secuencia de nucleótidos del antígeno T JCV en 40,9% (56 de 137) de los tejidos tumorales y 24,8% (34 de 137) de los tejidos de tumor adyacente de pacientes con CRC (Figura 1). Los productos de PCR fueron confirmados como secuencias JCV auténticos por el análisis conjunto de diapositivas de vidrio (Figura 1B). Encontramos ambos pares emparejados de tejido tumoral y tejido no canceroso de 17,5% (24 de 137) de los pacientes de CRC fueron positivos para ADN JCV. 23,4% (32 de 137) y 7,3% (10 de 137) de los pacientes tenían ADN JCV sólo en el tejido tumoral o tejido de tumor adyacente no canceroso, respectivamente (Figura 1C). 18,2% (25 de 137) de las muestras de PB de pacientes con CCR fueron positivos para ADN JCV. Una presencia JCV significativamente más alta se observó en los tejidos de CRC en comparación con los tejidos adyacentes no cancerosos (OR = 2,089; IC del 95%, 1,213-3,636;
P
= 0,007) y muestras de PB (OR = 3.084; 95% IC, 1,729-5,619;
P Hotel & lt; 0,001). JCV presencia en muestras de PB se asoció positivamente con el estado JCV en muestras de tejido (
P Hotel & lt; 0,001); sin embargo, no estaba relacionada con la edad del paciente, el sexo, la exposición al tabaco, consumo de alcohol, residencia, antecedentes familiares de CCR, el estadio patológico y el sitio del tumor, pero tienden a aumentar con la diferenciación de los tejidos de CRC, aunque esta tendencia no fue estadísticamente significativa (Tabla 2 ). En comparación con los tejidos de pacientes con CRC, sólo el 13,8% (11 de 80) de los tejidos colorrectales de pacientes con CRC no tenía ADN JCV detectable. En el análisis estadístico no parámetro, frecuencias JC, en pacientes con CRC y los pacientes no fueron significativamente diferentes de CRC. Desde la edad de los dos grupos fue diferente, la asociación entre la infección por virus JC y el CRC se estimó mediante análisis de regresión logística exacta, ajustada por edad. El OR de JCV riesgo de CCR asociado fue estadísticamente significativa (OR = 6,611; IC del 95%, 2,928 a 14,929;
P Hotel & lt; 0,001). Entre las muestras de PB de 100 voluntarios sanos, se encontró que sólo el 7% (7 de 100) fueron positivos para JCV ADN, que era inferior al porcentaje positivo JCV en muestras de PB de pacientes con CRC (OR = 0,339; IC del 95%, 0,118 -0,852;
P = 0,021
)
(A) El fragmento de 110 pb se amplificó a partir de ADN aislado a partir de diferentes muestras de cáncer colorrectal (superior) y los tejidos adyacentes normales tumorales (inferior) con. PCR anidada. M: DL 2000 ADN marcador (Takara); P: control positivo; N1: primera ronda de control negativo; N2: control negativo de segunda ronda. (B) Las imágenes de las matrices de productos JCV anidada-PCR. productos PCR anidada de los tejidos tumorales (izquierda) y los tejidos adyacentes tumorales normal (derecha) fueron vistos en las superficies de las diapositivas de aminosilano como tres repeticiones, se hibridaron con la sonda de oligonucleótido marcado con TAMRA y finalmente visualizados por el escáner AXON. (C) El número de muestras JCV positivos en 137 pares coincidentes de tejido tumoral, el tejido tumoral adyacente no es cancerosa y muestras de PB de pacientes con CRC.
La carga viral en muestras JCV positivos de pacientes con CRC se determinaron mediante una PCR cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR). La carga viral en los tejidos tumorales varió de 49.15 a la 1.03 × 10
4 copias /g de ADN (media ± SD, 3795.64 ± 3054,58). En realidad, el número de copias absolutas de ADN JCV en CRC tumores fueron inferiores a 1 copia por célula. Se observó baja carga viral JCV en los tejidos 34 JCV positivos, no cancerosos, tumores adyacentes (rango, 192,85-4,44 × 10
3 copias /g de ADN, con una media ± DE, 1470.09 ± 887.12) y 25 muestras de PB ( rango, 81,30 a 4.962,99 copias /g de ADN; media ± desviación estándar, 945.17 ± 1140,39). Los tejidos tumorales tenían niveles significativamente más altos de ADN JCV que los tejidos adyacentes a tumores no cancerosos y muestras de PB (Figura 2).
muestras
JCV positivos determinados por PCR anidada se analizaron mediante qRT-PCR. Las transferencias representan un promedio de número de copias (3 pocillos replicados) de ADN JCV de tejido tumoral, el tejido no canceroso y PB, respectivamente, y las barras representan las medianas calculadas.
P
-valores se calcularon utilizando el test de Wilcoxon.
Discusión
En el presente estudio, JCV se detectó en el 40,9% de los tejidos de CRC y el 24,8% de las colorrectal tejidos no cancerosos, que estaban en la posición intermedia de la tasa de antígeno T en estudios anteriores (Tabla 3). Varias razones potenciales cuenta de la falta de acuerdo entre estos estudios, incluyendo la posible contaminación durante la recogida y el proceso de la muestra durante la extracción de ADN y la amplificación por PCR. Muchos estudios no informaron ningún paso para controlar los resultados falsos positivos [11] - [12], [14]. En el presente estudio, nos evitar resultados falsos positivos como se ha mencionado en nuestro estudio anterior [21]. La sensibilidad del método es crítico, ya que una carga viral JCV bajo en el tejido colorrectal se ha documentado [15]. La inmunohistoquímica, PCR, PCR anidada y q RT-PCR han sido utilizados para la detección de JCV [11], [14] - [15], [23]. Se detectó ADN JCV en 1% y 0% de los tejidos de CRC en dos grandes estudios [16] - [17] usando un ensayo de PCR en general, que se sabe que tienen una menor sensibilidad. Nested PCR es una técnica altamente sensible para la detección JCV. Más pequeños objetivos de PCR se han encontrado para ser amplificado con más facilidad que las secuencias largas para la detección JCV [11]. Según lo descrito por Hori et al. [13], se utilizó una PCR anidada con conjuntos de primer dirigidas a un 110 pb JCV secuencia de antígeno T, que fue capaz de detectar tan poco como 1 copia de ADN JCV (datos no mostrados). Se ha planteado la hipótesis de la topología superenrollado del ADN JCV altamente homólogo podría limitar la eficiencia de amplificación PCR [11]. Sin embargo, no usamos el tratamiento de la topoisomerasa I antes de la amplificación por PCR como se describe por Laghi et al. [11], lo que puede conducir a una tasa ligeramente menor de infección por virus JC. La edad, el sexo, la región y el estilo de vida de una población seleccionada podrían contribuir a diferentes tasas de infección por virus JC (Tabla 3). La población estadounidense CRC fue seleccionado con mayor frecuencia en los estudios anteriores, en los que se encontró ADN JCV en 0% -96% de los tejidos de CRC [11], [14], [16] - [17], [24]. resultados contradictorios se han reportado por dos grupos de investigación italianos [12], [25]. Hori et al. [13] y Lin et al. [23] identificaron JCV en 26,1% y 86,4%, respectivamente, de los tejidos de CRC de las poblaciones de Asia. En nuestro estudio, se detectó ADN JCV en el 49,6% de los pacientes con CCR chinos.
Además, investigó la presencia de ADN JCV en el tejido de pacientes no-CRC. En ciertos pacientes de alto riesgo, como aquellos con pólipos o IBD, la incidencia de CCR es sustancialmente mayor. Por lo tanto, los pacientes sometidos a una colonoscopia de pólipo y la EII se excluyeron de la cohorte de control antes de la recogida de muestras. Además de la edad, no había ninguna característica de línea de base significativamente diferentes entre CRC y los pacientes no CRC. Sin embargo, el ajuste por edad no cambió la asociación entre la infección por virus JC y el CRC. La combinación con la observación de mayor prevalencia de JCV en el tejido tumoral de pacientes con CRC, proponemos que JCV se correlaciona con el CRC y puede participar en la carcinogénesis de CRC o, alternativamente, el virus infecta las células tumorales sean más fácilmente que las células no cancerosas.
En el presente estudio, no se observó correlación entre la presencia de JCV y las características demográficas o médicas tales como la edad, el género, la educación, la etapa clínica, y el sitio del tumor, que era consistente con otros estudios [13], [15] . Curiosamente, hemos encontrado que los tejidos de pacientes con CRC que recibieron quimioterapia antes de la recogida de muestras tuvieron mayor incidencia de la infección por virus JC en comparación con los pacientes sin quimioterapia, aunque la diferencia no fue significativa (Tabla 2). La asociación entre la inmunosupresión y una mayor susceptibilidad a la infección es bien reconocido. Como se ha demostrado por Selgrad et al. [26] en un estudio retrospectivo entre los receptores de trasplante hepático, pacientes inmunodeprimidos tienen una presencia significativamente mayor de JCV en comparación con los controles inmunocompetentes. Los medicamentos de quimioterapia pueden inhibir la respuesta inmune y permitir la reactivación del virus potencialmente oncogénicos. CRC pacientes con antecedentes familiares tienen una mayor prevalencia de ADN JCV T-Ag, lo que es consistente con los resultados descritos por Vilkin et al. [27]. JCV infección es generalmente una infección asintomática y por lo general se produce en la infancia y la adolescencia más tarde, después de lo cual el virus permanece latente en el riñón. Además de la condición inmunológica se ha mencionado anteriormente, los antecedentes genéticos también podría estar asociado con la susceptibilidad de infección por virus JC en el CCR.
La carga viral en muestras de tejidos podría indicar el papel de la JCV en el CCR carcinogénesis. En el presente estudio, la carga viral en muestras JCV positivos de pacientes con CRC se determinó por RT-PCR q. No se encontraron números de copias del virus JC, que es mayor en los tejidos tumorales en comparación con los tejidos adyacentes tumor no canceroso, lo cual es consistente con estudios anteriores [11], [15]. Sin embargo, el número de copias absolutas en los tejidos eran tan bajos que se encontraron sólo una pequeña parte de las células epiteliales colorrectales de infectarse con el virus JC. Este resultado apoya los efectos transitorios de JC, en la transformación celular, ya que puede ser silenciada o su genoma puede perderse durante la progresión del cáncer (transformación "hit-and-run") [28]. Una infección JCV introducir el antígeno T fácilmente podría explicar la aparición de la inestabilidad cromosómica en carcinogénesis de múltiples, como la propuesta anteriormente para la secuencia adenoma-carcinoma conocido [29].
A lo mejor de nuestro conocimiento , este estudio es el primer análisis de ADN JCV en PB de pacientes con CRC. Hemos demostrado que la infección por virus JC es común en muestras de PB de pacientes con CCR e indicamos el estado JCV en muestras de tejido. A diferencia de estudios seroepidemiológicos anteriores, nuestros resultados no pueden ser usados para predecir el riesgo de CCR, porque todas las muestras se recogieron dentro de los tres meses del diagnóstico [19] - [20]. Por otra parte, la presencia de la JCV en PB de pacientes con CCR fue mayor que en PB de donantes sanos. Estos resultados apoyan la idea de que el ADN JCV en muestras de PB podría ser un biomarcador válido para el diagnóstico CRC relacionados JCV. Sin embargo, las características clínicas de donantes sanos se registraron principalmente a través de la auto-informe que puede dar lugar a errores de clasificación. Más importante aún, JCV casi siempre permanece latente en el riñón y se puede detectar fácilmente en la orina [1] - [3]. Aunque el ADN viral en el torrente sanguíneo se considera ampliamente que se originan a partir de células desprendidas de tejido tumoral, se desconoce el origen de la JCV en muestras de PB.
En conclusión, la infección por virus JC presenta comúnmente en pacientes con CRC y podría ser una factor de riesgo para CRC. Sugerimos
in vivo
estudios moleculares, celulares y en curso para dilucidar los mecanismos de la carcinogénesis JCV para determinar si JCV es un agente causal de la CRC. Aunque hemos encontrado ADN JCV en muestras de PB podría servir como un biomarcador para el CCR-JCV relacionados, se anima a más estudios basados en la población a gran escala para evaluar esta asociación.
Reconocimientos
Los autores agradecen xiaoyi Chen, Li Yuan, Yiming Tang, y Hong Xutao por su apoyo técnico, Michael Brownstein por su lectura crítica de nuestro manuscrito.