Extracto
basada en el cribado citológico
para el cáncer cervical invasivo (CCI) carece de sensibilidad y especificidad para discriminar entre neoplasia intraepitelial cervical (CIN) que tienden a persistir o el progreso de los casos probables de resolver. genoma de los enfoques se han utilizado para identificar las marcas de metilación de ADN de una NIC persistencia o progresión. Sin embargo, las asociaciones entre las marcas de metilación de ADN y CIN o CPI siguen siendo débiles e inconsistentes. Entre 2008-2009, se realizó un estudio de casos y controles de base hospitalaria entre 213 mujeres con CIN Tanzania 1/2/3 o ICC. Se recogieron datos cuestionario, biopsias, sangre periférica, raspaduras de cuello uterino, el virus del papiloma humano (VPH) y el VIH-1 el estado de infección. Evaluamos
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estado de metilación por pirosecuenciación bisulfito. regresión logística multinomial se utilizó para estimar la odds ratio (OR) y los intervalos de confianza (IC 95%) para las asociaciones entre los
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estado de metilación y CIN o ICC. Después de ajustar por edad, gravidez, uso de anticonceptivos hormonales y la infección por el VPH, un aumento del 5% en
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metilación del ADN se asoció con un mayor riesgo de ICC (OR = 1,6; IC del 95%: 1,2-2,1). la infección por VPH se asoció con un mayor riesgo de CIN1-3 (OR = 15,7; IC 95% 5,7-48,6) e ICC (OR = 29,5; IC del 95%: 6,3 a 38,4). La infección por VPH de alto riesgo se correlacionó con media
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regiones diferencialmente metilado (DMR) metilación (r = 0,34 p & lt; 0,0001), mientras que la correlación con la infección por VPH de bajo riesgo fue más débil (r = 0,16 p = 0,047) . Aunque los límites de tamaño de muestra pequeños inferencia, estos datos apoyan que
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estado de metilación tiene potencial como diana molecular para su inclusión en la detección de CIN para mejorar la predicción de la progresión.
Declaración de Impacto
se presenta la primera evidencia de que la metilación aberrante del
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DMR es un cofactor importante en el desarrollo del carcinoma cervical invasivo (CCI), especialmente entre las mujeres infectadas con VPH de alto riesgo. Nuestros resultados muestran que un incremento de cinco por ciento en la metilación del ADN de
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se asocia con una 1,6 veces del riesgo aumento ICC. Sugiriendo
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estado de metilación puede ser útil como un marcador molecular para la detección de CIN para mejorar la previsión de los casos de probabilidad de progresar
Visto:. Nye MD, Hoyo C, Huang Z, Vidal AC, Wang F, Overcash F, et al. (2013) Las asociaciones entre la metilación del
paternalmente Expresado Genes 3 gratis (
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), neoplasia intraepitelial cervical y cáncer cervical invasivo. PLoS ONE 8 (2): e56325. doi: 10.1371 /journal.pone.0056325
Editor: Lorenzo Chiariotti, Università di Napoli Federico II, Italia |
Recibido: 5 Septiembre, 2012; Aceptó 8 de enero de 2013; Publicado: 13 Febrero 2013
Derechos de Autor © 2013 Nye et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por becas K01104517, Duke CFAR P30 AI 064518, R01CA142983, R01CA142983S1 y R25CA057726. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que ningún interés en competencia existe
Introducción
Aproximadamente medio millón de mujeres en todo el mundo son diagnosticadas con cáncer cervical cada año y un poco más de la mitad de estas mujeres mueren de la enfermedad; 80% se diagnostican en entornos con pocos recursos [1]. cribado basado en la citología y el tratamiento agresivo de las lesiones precancerosas son las estrategias más utilizadas para la prevención del cáncer cervical invasivo (CCI) en todo el mundo. Virus del papiloma humano (VPH), el agente etiológico conocido para el ICC, se ha utilizado para estratificar más casos de CIN de las mujeres con citología normal, con alta sensibilidad [2], pero baja especificidad. En general, aproximadamente el 4-10% de las mujeres con citología normal son el ADN del VPH positivo, y por lo tanto la sensibilidad y especificidad para la determinación del virus permanece subóptimo, lo que resulta en un número no despreciable de las mujeres con resultados positivos falsos, lo que requiere un seguimiento a su coste tanto para el sistema de salud y el paciente. la sensibilidad y la especificidad subóptima también se ha demostrado que disminuye la adherencia a las visitas de seguimiento recomendadas [3]. El uso de cofactores asociados previamente con CIN o ICC, tales como la edad, la paridad, el tabaquismo, la infección por Chlamydia trachomatis, y el uso de anticonceptivos hormonales a largo plazo no ha dado ideas adicionales para discriminar entre casos CIN1 que tienden a persistir o pasar de dichas probabilidad de remitir . Por lo tanto, la identificación de las características moleculares específicas que pueden mejorar la predicción de los cuales los casos de CIN son propensos a desarrollar ICC sigue siendo una prioridad.
Los mecanismos epigenéticos de la regulación génica, incluyendo la metilación del ADN, tienen un papel importante en la coordinación de los cambios de expresión génica en respuesta a la infección viral [4]. También se proponen cambios epigenéticos como una fuerza impulsora en el proceso carcinogénico que puede estar involucrado en la trayectoria de las infecciones por VPH progresan de CIN a la CPI [5] [6], [7]. Sin embargo, la identidad de un objetivo específico, epigenética (s) es aún desconocido.
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es un gen impreso expresado por vía paterna en el cromosoma 19q13.43 que codifica una proteína supresora tumoral con la función que desempeña un papel en la facilitación de p53 /c-
myc
mediada por apoptosis.
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está regulada por la metilación del ADN específico de alelo para que únicamente la madre derivados alelo es normalmente metilado. La hipermetilación en el
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reguladora diferencialmente metilado región (DMR) conduce a una disminución de la
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transcripción, que a su vez se presume para inhibir la función pro-apoptótica de este gen [8], [9]. metilación aberrante en este DMR se ha asociado con niveles más bajos de
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expresión de este gen supresor tumoral como se ha observado en otros cánceres ginecológicos, incluyendo como los cánceres de ovario y endometrio [10] [11] [12]. Además,
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hipermetilación DMR y el silenciamiento transcripcional También se ha demostrado que se producen en los gliomas [13] [14]. Estos resultados juntos sugieren que la proteína de dedos de cinc PEG3 puede funcionar como un gen supresor de tumor en el cáncer, y puede ser particularmente relevante para los cánceres que afectan el tracto reproductivo femenino. Por lo tanto, hemos tratado de determinar si y cómo los cambios de metilación en el regulador
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DMR están asociados con la infección por VPH, CIN y la CPI.
Métodos
Los participantes del estudio
entre noviembre de 2008 y marzo de 2009, los participantes elegibles para el estudio fueron reclutados de la clínica de Salud reproductiva (RHC) en KCMC, una clínica de prevención del cáncer de cuello financiado por la Organización Mundial de la Salud. Métodos para la identificación de los participantes y la inscripción se han descrito anteriormente [15]. En pocas palabras, los criterios de inclusión fueron mujeres mayores de 18 años o mayores de esa edad sin historia previa de una prueba de Papanicolaou anormal. Algunos de los participantes eran pacientes con lesiones sospechosas de la CPI se refiere KCMC para una biopsia dirigida abierto y colposcópica. De las 250 mujeres inscritas, dos se negaron a participar dando como resultado una tasa de respuesta del 99%. De los 248 restantes hubo 14 en los que no fue posible determinar los diagnósticos de cáncer y 21 sin resultados VPH. La población final del estudio comprendió 213 mujeres con cuestionario, CIN /ICC, estado de VIH-1, y datos de genotipo VPH. Por lo tanto, los casos fueron mujeres con cualquier grado de /2/3 o CPI, y los controles fueron mujeres sin CIN1 CIN o ICC según la evaluación durante una visita de selección basados en la citología.
Declaración de Ética
Escrito el consentimiento informado se obtuvo de cada participante en el estudio antes de la inscripción. Investigación Consejos de Ética en el Kilimanjaro Christian Medical Centre (KCMC), la Universidad de Carolina del Norte en Chapel Hill y la Universidad de Duke aprobó este estudio.
Recolección de Datos
Los cuestionarios.
A entrenados enfermera-entrevistador obtuvo el consentimiento informado y se administró un cuestionario estandarizado de 40 minutos en persona. Características sociodemográficas recogidas fueron: edad, estado civil, tipo de matrimonio (la poligamia frente a la monogamia), la tribu, el nivel de instrucción, el tabaquismo, el consumo de alcohol, historia reproductiva (por ejemplo, la paridad y la gravidez menarquia), la historia sexual (por ejemplo, número de por vida parejas sexuales, la edad de la primera relación sexual), y medicamentos y suplemento uso.
especímenes.
Dos exudado cérvico-vaginal se obtuvieron de cada participante. Uno se preparó en un portaobjetos de vidrio para la evaluación citológica para CIN y el diagnóstico de la CPI, los datos también se utilizan como resultado de este estudio. La segunda muestra fue obtenida mediante un citocepillo y se enjuagó en Preserv-Cit ™ medios de comunicación (Hologic, Inc. Malborough, MA). Un tercio de la muestra se reservó para análisis de HPV y se almacenó a 4 ° C, y los dos tercios restantes se centrifugaron para sedimentar las células, que se almacenaron como alícuotas a -80 ° C. ADN extraído de estas células se utilizó más tarde para el análisis de metilación del ADN. Las muestras de biopsia se recogieron sólo cuando esté clínicamente indicado. Se llevó a cabo del cribado rutinario mediante inspección visual con ácido acético (VIA). Si hubo hallazgos positivos por VIA o el examen directo, el paciente fue triaged y tratado en consecuencia. Los pacientes con resultados negativos fueron dadas las citas de seguimiento dentro de dos semanas para proporcionar resultados
Comprobación de los resultados del estudio:.. CIN y el carcinoma
El patólogo en KCMC (BS) procesados y leen el Papanicolaou frotis y las muestras de biopsia uso de las reglas según las directrices de ASCCP según corresponda (http://www.asccp.org/). Un ginecólogo (BV) también revisó las historias clínicas mensuales para el VIH-1 y los resultados de pruebas cito-patológica para clasificar los casos utilizando el sistema de clasificación de Bethesda. Los resultados fueron codificados en base a los hallazgos de patología y registros médicos. Ellos se codificaron como 1) no hay evidencia de anomalías citológicas, 2) la displasia leve, incluidos LSIL y CIN1, 3) displasia moderada incluyendo 4) cáncer de HSIL y CIN2-3, o que era carcinoma de células escamosas principalmente con la excepción de tres adeno-escamosas carcinomas del cuello uterino. Ninguno de los especímenes fueron clasificados como células atípicas de significado incierto (ASCUS). Los resultados estaban disponibles a través de los registros clínicos del paciente, y el patólogo ellos entraron en la base de datos. Los registros fueron luego compilados y segura compartidos con la Universidad de Duke.
genotipado del VPH.
ThinPrep® especímenes y muestras de biopsia homogeneizada se enviaron al Centro de Cáncer de Hawai. Se extrajo el ADN y se amplificó por PCR la orientación de una región de 450 pb dentro del gen L1 de HPV usando los cebadores PGMY09 /PGMY11 [16]. El gen de β-globina humana se usó como un control interno para la exactitud de la muestra. Hemos sido capaces de obtener el análisis del ADN viral para todas las muestras de pacientes. especímenes VPH-positivos fueron genotipo utilizando el Linear Array ® HPV (Roche Molecular Systems Inc., Branchburg, NJ, EE.UU.).
Comprobación del VIH-1 el estado de infección.
escudo
plasma y buffy se aislaron por centrifugación de las muestras de sangre periférica recogidas en tubos vacutainer que contienen EDTA a partir de los pacientes. Dos pruebas rápidas del VIH-1 se utilizaron para analizar las muestras de plasma de la condición de VIH-1 (Capillus VIH-1 /VIH-2, Trinity Biotech PLC, Bray, País de Wicklow, Irlanda y determinar el VIH-1/2, Abbott Laboratories, Abbott park, IL). La práctica clínica estándar de Western blot se utiliza para muestras que dieron positivo (kit de transferencia de Western Genetic Systems VIH-1; Bio-Rad, Hercules, CA)..
Análisis PEG3 metilación
Genómica se preparó ADN a partir de células aisladas de las raspaduras de cuello uterino o de muestras de biopsia usando reactivos de protocolo PureGene (Qiagen; Valencia, CA) y se trató con bisulfito de sodio usando el kit de la metilación del ADN Zymo Easy-96 (Zymo Research, Irvine, CA). tratamiento con bisulfito modifica el ADN mediante la conversión de las citosinas no metiladas a uracilos, y deja sin cambios citosinas metiladas. Pirosecuenciación se realizó usando un Qiagen Pyromark Q96 MD Pyrosequencer.
El DMR analizada se encuentra dentro de la
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región promotora en el cromosoma 19q13.43. Se utilizó el ensayo de pirosecuenciación para
PEG3
como se describe anteriormente [12] con la excepción de que se utilizó una temperatura de recocido 63 ° C para la reacción de PCR. genómica coordenadas de la región amplificada por PCR son: chr19 57,351,945-57,352,096 (UCSC Genome Browser, GRCh37 /hg19). El rendimiento del ensayo se evaluó mediante mezclas definidas de bisulfito no metilado y no metilado modificado ADN genómico (es decir, 0%, 25%, 50%, 75% 100% metilado; Controles Epitect bisulfito; Qiagen).
Estadística los análisis
las fracciones medias de metilación del ADN en los GC individuales fueron analizados y comparados entre los controles, las mujeres sin CIN 1/2/3 o ICC (n = 147) y los tres grupos de casos (CIN 1 [n = 21], CIN2 /3 [n = 17], y la CPI [n = 48]) utilizando pruebas F. Se aplicaron análisis de componentes principales (PCA) para determinar si una sola media representa la fracción metilación en los dinucleótidos CG en la región DMR. La metilación de las CG estaba suficientemente correlacionada permitiendo así un único medio para ser utilizado. Se utilizaron pruebas F para determinar si la metilación del ADN en los GC individuales dentro de
PEG3
DMR difería significativamente por la infección con alto riesgo (AR) versus bajo riesgo (LR) del VPH y otros genotipos de VPH. Clasificación de alto riesgo y los genotipos de bajo riesgo se basó en pruebas moleculares de VPH aprobadas por la FDA (CDC). genotipos de VPH de recursos humanos incluyen el VPH 16,18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59,59 y LR VPH incluyen el VPH 6, 11, 26, 66, 68, 70, 73 y, 82 como se describe anteriormente [15]. Las mujeres que dieron positivo por al menos un genotipo de VPH basada en riesgo oncogénico se clasificaron como HR-HPV, LR-HPV u otro VPH.
Para estimar la odds ratio (OR) y los intervalos de confianza del 95% (IC) para la asociación entre CIN /ICC y cambios en la metilación del DMR, se utilizaron modelos de regresión logística múltiple polinómicas. Todos los modelos incluyen la metilación usando incrementos del 5% con los ajustes realizados para el VPH-infección, historia embarazo, estado VIH-1, y el uso de anticonceptivos hormonales. metilación aberrante se definió como & lt; 25
ª o & gt; 75
º cuartiles, ya que tanto la hipermetilación y la hipometilación de este locus puede conducir a la desregulación de los
PEG3
expresión y conducir a la pérdida de impresión [ ,,,0],11] [12] [17]. Se utilizó el análisis de chi-cuadrado para comprobar posibles factores de confusión con el estado de la NIC y el cáncer. Todos los análisis estadísticos se realizaron en SAS 9.1 (SAS Institute, Cary, NC).
Resultados
características de los estudios de población
grupos de casos y controles difirieron significativamente según la edad, la infección por VPH y gravidez (Tabla 1). La edad media de los controles fue de 40,3 años (DE = 9,9). Entre los grupos de casos la edad media aumentó con la severidad de la lesión (35,7 años, SD = 12.2 para CIN 1; 44,7 años, SD = 9.8 para CIN2 /3 y 55,2 años, DE = 12,3 por CPI; p & lt; 0,001). La prevalencia de la infección por VPH también aumentó con la severidad de la lesión, ya que el 67% de CIN 1, 88% CIN2 /3 y el 89% de la CPI tenido la infección por VPH detectable (valor de p & lt; 0,0001). Gravidez fue alta, con un 94% de los controles y el 86% de las mujeres con CIN 1 de informes que alguna vez habían estado embarazadas en comparación con el 100% de las mujeres con CIN2 /3 o ICC. uso de anticonceptivos orales a largo plazo fue similar en CIN 1 y controla el 76% y 68%, respectivamente, pero fue significativamente menor entre los grados más altos de CIN (59%) e ICC (40%).
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ensayo de pirosecuenciación validación
primera validó el rendimiento del ensayo de pirosecuenciación por quintuplicado usando ADN completamente metilado y no metilados en proporciones definidas. En cada aumento en la cantidad de entrada de ADN metilado, también hubo un aumento en la cantidad de metilación medida (Pearson rho = 0. 953; p = 0,004). La desviación estándar media entre estas medidas repetidas fue de 1,59% (rango, 0,34% a 3,47%). Estos resultados indican que este ensayo tiene la capacidad de detectar de manera reproducible diferencias en los valores de metilación (Figura 1).
Se prepararon mezclas definidas (eje x) de los ADN metilados y no metilados y se analizaron por quintuplicado por pirosecuenciación (y- eje). Los resultados mostrados representan la media; barras de error indican desviaciones estándar. El Pearson rho es 0,953 con un valor de p de 0,004.
Asociación entre el estado de infección por VPH y la metilación del ADN en
fracciones de metilación PEG3
DMR
Hemos examinado de 10 sitios CpG en el
PEG3
DMR en relación con el genotipo de VPH. Como se muestra en la Tabla 2, entre las mujeres infectadas con al menos un genotipo de VPH-AR, se encontró una correlación moderada entre la metilación de los 10 sitios CpG en el
PEG3
DMR y la infección por el VPH (r = 0,34, p valor & lt; 0,0001; rango = 0,32 a la 0,41). genotipos de VPH-LR tuvieron una correlación débil con sizably
PEG3
metilación (r = 0,061, valor p = 0,552). La infección con otros genotipos de VPH no se correlacionó con las fracciones de metilación en el
PEG3
DMR.
PEG3 metilación
DMR (coeficiente de correlación = 0,0163 p = 0,876 significa) , CIN y CPI
la Tabla 3 resume los odds ratios (OR) y el IC del 95% para la asociación entre el
PEG3 metilación
DMR y CIN y el ICC estado, ajustado por edad, uso de anticonceptivos hormonales y cualquier infección por VIH-1. Hemos encontrado poca o ninguna asociación entre la media
PEG3
estado de metilación y CIN 1/2/3, (OR = 1,03; IC del 95% (0,79 a 1,33); valor de p = 0,80). Sin embargo, un aumento del 5% en los niveles de metilación en el
PEG3
DMR se asoció con un aumento de casi el doble en el riesgo de ICC (OR = 1,6; IC 95% 1,2-2,1; p-valor = 0,0003 ). Como era de esperar, la infección con cualquier genotipo HPV también se asoció con un mayor riesgo de CIN1-3 (OR = 15,7 IC del 95% (5,1-48,6)) e ICC (OR = 29,5, IC 95% (6,3-38,4)).
Discusión
Nuestros principales conclusiones de este estudio de casos y controles de las mujeres de Tanzania son que después de ajustar por la infección por VPH, la edad, el uso de anticonceptivos orales, y el VIH-1 de estado, un aumento del 5% en la metilación del ADN en el
PEG3
DMR se asoció con un aumento de 1,6 veces en el riesgo de la CPI. También se encontró que
PEG3
hipermetilación DMR se correlacionó con la infección por VPH; una correlación que fue más fuerte para alto riesgo en comparación con la infección por VPH de bajo riesgo. Como era de esperar, la infección por VPH se asoció con un mayor riesgo de CIN 1/2/3 y CPI. Se presenta la primera evidencia en apoyo de la hipótesis de que la metilación aberrante del
PEG3
DMR es un cofactor importante en el desarrollo de ICC, especialmente entre las mujeres infectadas con VPH HR
.
Nuestro los datos sugieren que el aumento del grado de la lesión de CIN a CPI se correlaciona con la infección por VPH y
PEG3
hipermetilación DMR y es consistente con la represión de ADN metilación mediada por
PEG3
como se encuentra en los estudios anteriores. La hipermetilación de varios genes (es decir,
MGMT
,
FHIT
,
GSTP1
, y
MHL1
) en sudies de control de casos de la CPI ha informado [18] [19] [20]. Estudios previos han reportado cambios en la metilación del ADN y la condición de VPH en cabeza y cuello escamoso cáncer de células [21]. Estos hallazgos apoyan la idea de que la presencia de genes aberrantemente metilados se podría utilizar como un ensayo de cribado relativamente sensibles y específicos para detectar CIN y ICC. Estos estudios previos no investigaron
PEG3
. A nuestro entender este es el primer estudio realizado con una población humana que investigó la relación entre el
PEG3
estado de DMR y la infección por el VPH y cómo esto juega un papel en la NIC y el ICC. Aunque la causa y el efecto no se pueden establecer en este estudio de casos y controles, nuestros hallazgos sugieren que los
PEG3 metilación
DMR es un posible mecanismo por el cual la susceptibilidad a la progresión de la ICC se puede producir, y por lo tanto puede ser un marcador útil para identificar CIN casos probables para el progreso.
Los mecanismos por los que
PEG3
metilación del ADN aumenta el riesgo de ICC no están claros. Sin embargo, hay evidencia que sugiere que
PEG3
juega un papel biológico importante en p53 /c-myc apoptosis mediada, que implican a
PEG3
como un gen cuya función puede ser en parte para prevenir la carcinogénesis [8 ] [9]. La vía de la apoptosis mediada por p53 tiene dos resultados posibles: inducción de a) la detención del crecimiento o b) la muerte celular; Peg3 se ha demostrado que desempeñan un papel aguas abajo de p53 apoptosis de activación a través de su interacción con Bax. Peg3 interactúa con Bax, que resulta en apoptosis [8]. Estos informes anteriores, junto con nuestros hallazgos, apoyan la hipótesis de que
PEG3
funciona como un supresor de tumores importante en la carcinogénesis.
La asociación encontrada aquí es consistente con los hallazgos de
in vitro
y
in vivo
estudios que muestran que el
PEG3
promotor es hypermethylated con la consiguiente represión transcripcional en los cánceres de ovario y endometrio [12] [11]. En el cuello uterino, ovario y líneas celulares de cáncer de endometrio
PEG3
se silencia lo que sugiere que durante la carcinogénesis, la hipermetilación puede ser seleccionado para el fin de inhibir la función pro-apoptótica de PEG3. Nuestro estudio de casos y controles muestran una asociación entre la hipermetilación de
PEG3
e ICC, pero no CIN, lo que sugiere que estas alteraciones de metilación se llevan a cabo durante la transformación en lugar de en las lesiones precancerosas. Por otra parte, la atenuación del riesgo puede deberse a la combinación de bajo grado CIN compone en gran parte de las lesiones con una regresión, con casos de CIN de alto grado, la mayoría de los cuales tienen el potencial de progresar y convertirse en ICC. Curiosamente, la correlación de la infección por VPH, un agente etiológico de la CPI, y
PEG3
hipermetilación es consistente con un proceso de múltiples pasos que comienza con mecanismos epigenéticos y la infección por VPH.
La principal limitación de este estudio es el pequeño tamaño de la muestra para examinar
PEG3 metilación
DMR en relación con CIN de grado específico, después de considerar el efecto de la infección por VPH. Es posible que nuestra incapacidad para encontrar asociaciones entre
PEG3
metilación y CIN fue debido a la combinación de CIN (en los que la mayoría o mujeres tienden a retroceder) y CIN2 y CIN3 (en los que una proporción menor persiste o progreso ) [22]. Sin embargo, tuvimos un poder estadístico adecuado para evaluar
PEG3
y el riesgo de ICC. Otra limitación es el diseño de casos y controles, lo que limita nuestra capacidad de inferir
PEG3
metilación como un factor importante en la progresión. Sin embargo, la identificación de marcas de metilación asociados a las diferencias de casos y controles es un paso necesario para permitir el examen de este marcador en los estudios longitudinales en curso por varios grupos [23].
A pesar de estas limitaciones, se encontró hipermetilación del
PEG3
DMR aumentó el riesgo de ICC después de ajustar por factores de confusión conocidos. También se encontró una fuerte correlación entre el genotipo del VPH y la metilación del ADN en el
PEG3
DMR. metilación de citosina es una modificación estable en muestras de tejidos humanos, y por lo tanto
PEG3
estado DMR metilación podría potencialmente ser utilizado como un marcador para identificar CIN probabilidad de progresar a ICC. Se requieren estudios más amplios en una más diversa población de estudio para replicar estos hallazgos.