Extracto
Antecedentes
Tejido análisis proteómico de la cabeza y el carcinoma de células escamosas del cuello (CECC) y la mucosa oral normal utilizando iTRAQ (etiquetas isobáricas para cuantificación relativa y absoluta) el etiquetado y la espectrometría de cromatografía-masa líquida, condujo a la identificación de un panel de biomarcadores incluyendo S100A7. En el proceso de pasos múltiples de la cabeza y la tumorigénesis cuello, se propone la presencia de áreas displásicas en el epitelio de estar asociado con una progresión probable que el cáncer; sin embargo no se establecen ninguna biomarcadores para predecir su potencial de transformación maligna. Este estudio tuvo como objetivo determinar la importancia clínica de S100A7 sobreexpresión en CECC.
Metodología
El análisis inmunohistoquímico de la expresión de S100A7 en el CECC (100 casos), lesiones orales (166 casos) y 100 histológicamente los tejidos normales se llevó a cabo y se correlacionó con parámetros clínico y pronóstico de la enfermedad durante 7 años para los pacientes con CECC. La sobreexpresión de la proteína S100A7 fue significativa en las lesiones orales (hiperplasia de células escamosas /displasia) y sostenido en el CECC en comparación con la mucosa oral normal (p
Trend & lt; 0,001). Se observó un aumento significativo de la S100A7 nuclear en HNSCC en comparación con las lesiones displásicas (p = 0,005) y asociado con carcinoma de células escamosas bien diferenciado (p = 0,031). En particular, la acumulación nuclear de S100A7 también surgió como un predictor independiente de supervivencia libre de enfermedad reducida (p = 0,006, hazard ratio (HR = 7,6); IC del 95% = 1.3 a 5.1) en el análisis multivariante que subraya su importancia como factor pronóstico pobre del CECC pacientes.
Conclusiones
Nuestro estudio demostró la acumulación nuclear de S100A7 puede servir como predictor de mal pronóstico en pacientes HNSCC. Además, el aumento de la acumulación nuclear de S100A7 en HNSCC, en comparación con las lesiones displásicas garantiza un estudio longitudinal a gran escala de pacientes con displasia de evaluar su potencial como un determinante de la mayor riesgo de transformación de lesiones premalignas orales
Visto.: Tripathi SC, Matta A, Kaur J, J Grigull, Chauhan SS, Thakar A, et al. (2010) Nuclear S100A7 se asocia a peor pronóstico en el cáncer de cabeza y cuello. PLoS ONE 5 (8): e11939. doi: 10.1371 /journal.pone.0011939
Editor: Torbjorn Ramqvist, Karolinska Institutet, Suecia |
Recibido: 12 Marzo, 2010; Aceptado: July 5, 2010; Publicado: 3 Agosto 2010
Derechos de Autor © 2010 Tripathi et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. SCT es un beneficiario de una beca de investigación de alto nivel de Consejo indio de Investigación médica (ICMR), Nueva Delhi, India. RR reconoce con gratitud el apoyo del Instituto de Ontario para la Investigación del Cáncer (OICR), José y el Centro de Enfermedades Sonshine Mildred cabeza y cuello y Temmy Latner /Family Foundation Dynacare, Canadá. KWMS reconoce el apoyo infraestructural de los Institutos Canadienses de Investigación en Salud (CIHR), Ontario Investigación y Desarrollo Challenge Fund y Applied Biosystems /MDS Analytical Technologies. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
Cabeza y cuello carcinoma de células escamosas (HNSCC) es el sexto cáncer más común que representa más de 500.000 casos nuevos anualmente en todo el mundo que incluye los sitios de la cavidad oral, faringe y la laringe [1]. El carcinoma de células escamosas de la cavidad oral representa dos tercios de los casos se producen en HNSCC los países en desarrollo. La mayoría de los carcinomas de células escamosas orales son precedidos por cambios visibles de la mucosa oral. La leucoplasia es la lesión oral más comúnmente encontrado en la cavidad oral. Estas lesiones leucoplasia oral muestran evidencia histológica de la hiperplasia de células escamosas o displasia. Las lesiones orales con diagnóstico histológico de la displasia se denominan como lesiones premalignas orales (OPL); en promedio, alrededor del uno por ciento de las lesiones orales se transforman en cáncer anualmente [2] - [4]. A pesar de la mejora en las estrategias de tratamiento, incluyendo la cirugía, la radioterapia (RT) y /o quimioterapia (QT), el pronóstico de los pacientes CCCA sigue siendo en gran medida insatisfactoria, debido a la recurrencia locorregional. La tasa de supervivencia a 5 años es inferior al 50%, y el pronóstico de los casos avanzados no ha mejorado mucho en los últimos tres decenios [5], [6]. En la actualidad, los factores pronósticos más importantes incluyen el grado histológico del tumor, el estadio, la profundidad de la invasión tumoral y la afectación de los ganglios linfáticos regionales en el momento del diagnóstico. Además de estos parámetros clínico, los marcadores moleculares se están intensamente buscaron y verificaron para esta malignidad. La falta de biomarcadores para la detección temprana y la evaluación de riesgos se refleja claramente en el hecho de que más del 50% de todos los pacientes HNSCC tienen enfermedad avanzada en el momento del diagnóstico [5].
En nuestro estudio reciente utilizando iTRAQ (isobárica etiqueta para la cuantificación relativa y absoluta) el etiquetado y la espectrometría de masas de cromatografía líquida /tándem multidimensional (LC-MS /MS) para examinar las expresiones de proteína diferencial entre CECC y tejidos no malignos, hemos identificado un panel de biomarcadores candidatos para este tipo de cáncer [7]. Se identificó S100A7 /psoriasina como sobreexpresa en el CECC y ha surgido entre el panel de tres con mejores resultados posibles biomarcadores para distinguir CECC de la mucosa oral normal [7]. En otro estudio independiente utilizando iTRAQ, también reportaron un aumento en la expresión de la proteína S100A7 en las lesiones orales premalignas (displasia), si bien en un solo número limitado de casos [8].
familia de proteínas S100 se compone de por lo menos 25 tipos diferentes proteínas de bajo peso molecular (9-13 kDa), que se caracterizan por la presencia de dos sitios de unión a calcio de la conformación de tipo EF-mano [9] - [12]. gen S100A7 se encuentra dentro de la "diferenciación epidérmica complejo 'en el cromosoma humano 1q21 [13] - [16]. proteína S100A7, con un peso molecular de 11,4 kDa, se encontró que se upregulated en lesiones de la piel de pacientes con psoriasis [17]. S100A7 se distribuye en el citoplasma de los queratinocitos en la epidermis humana normal y está presente en la periferia de la célula en queratinocitos terminalmente diferenciadas [18]. El aumento de expresión S100A7 se ha informado en varias neoplasias epiteliales tales como, en el carcinoma ductal in situ de mama, pulmón, vejiga, piel, de esófago y cáncer gástrico [19] - [24]. La expresión alterada de las proteínas S100A4 y S100A2 se ha asociado con el pronóstico en HNSCC [10], [25] - [28]. S100A7 sobreexpresión también se ha informado en un pequeño conjunto de HNSCC [29], [30]. Aunque el aumento de expresión de S100A7 /psoriasina se ha informado en estos estudios, los efectos de su expresión en el desarrollo del cáncer, el pronóstico de la enfermedad, y la supervivencia de los pacientes HNSCC queda por determinar por completo. En este contexto nuestro estudio asume importancia, debido a su carácter retrospectivo, el gran conjunto de pacientes que representan diferentes etapas de la CECC, y el análisis de seguimiento a largo plazo. Se analizó la expresión de S100A7 /psoriasina en HNSCC, lesiones orales (con evidencia histológica de la hiperplasia de células escamosas o displasia) y los tejidos orales no malignas mediante técnicas de inmunohistoquímica, se determinó su correlación con los parámetros clínico-patológicos, y se investigó su utilidad como marcador pronóstico para el CECC .
resultados
el análisis inmunohistoquímico de la expresión de S100A7 en las lesiones de leucoplasia oral y cánceres
Para determinar la importancia clínica de la proteína S100A7 en la tumorigénesis de cabeza y cuello, su expresión era analizado en muestras clínicas de HNSCC, lesiones leucoplasia oral con hiperplasia de células escamosas o displasia, y los tejidos histológicamente normales, usando un anticuerpo monoclonal específico por inmunohistoquímica. La figura 1A muestra la distribución de la puntuación total inmunotinción de expresión nuclear /citoplasmática S100A7 en los tejidos normales, lesiones orales leucoplasia oral con hiperplasia de células escamosas o displasia y CECC. De los 100 tejidos normales analizados, 84% no mostró detectable inmunotinción S100A7 en el núcleo /citoplasma de las células epiteliales (Figura 1B (i)). En los tejidos normales restantes (16%), se observó moderada tinción citoplasmática en las células epiteliales diferenciadas sólo en la capa suprabasal. Chi análisis de tendencias cuadrado mostró un aumento significativo en la expresión S100A7 (nuclear /citoplasmática) en los tejidos obtenidos de diferentes etapas de la tumorigénesis de cabeza y cuello (, hiperplasia de células escamosas normales, displasia y HNSCC; Tabla 1, p
tendencia & lt; 0,001) .
el eje vertical muestra la puntuación total de la inmunotinción, obtenida como se describe en la sección Métodos. (I) la expresión de S100A7 Nuclear en la hiperplasia de células escamosas (IHC rango de puntuación 0-7), la displasia (intervalo 0-7) y HNSCC (intervalo 0-7) (b) frente al citoplasma de S100A7 en normal (intervalo 0-7), de células escamosas hiperplasia (rango 0-7), displasia (rango 0-7) y el CECC (rango 0-7). (B) El análisis inmunohistoquímico de S100A7 en los tejidos de la cabeza y cuello. secciones en parafina de mucosa histológicamente normales, la hiperplasia de células escamosas o con displasia, y HNSCC se tiñeron utilizando el anticuerpo monoclonal anti-S100A7 como se describe en la sección Métodos. (I) la mucosa oral normal que no muestran la inmunotinción S100A7; (Ii) la hiperplasia de células escamosas que muestra la inmunotinción S100A7 nucleares y citoplasmáticas; (Iii) la displasia que representa la inmunotinción S100A7 nuclear y citoplasmática en las células epiteliales; (Iv) HNSCC que ilustra tanto intensa citoplásmica y tinción nuclear en las células tumorales; (V) la sección HNSCC con una displasia que muestra S100A7 inmunotinción en las células epiteliales (aumento original x 100); (Vi) HNSCC utiliza como un control negativo, que no muestra la inmunotinción S100A7 en las células tumorales; y (vii) el tejido de cáncer de mama ER-negativo que muestra S100A7 inmunotinción. Las flechas muestran nuclear y localización citoplasmática (IV, VII aumento original × 200).
lesiones leucoplasia oral (hiperplasia de células escamosas /displasia).
De la leucoplasia oral 166 lesiones analizadas, 97 casos (58,4%) mostraron un aumento significativo en la inmunotinción citoplasmática S100A7 (p & lt; 0,001, odds ratio (OR) = 7,4; IC del 95% = 3,9-13,7). Entre estos casos immunopositive 62 tejidos mostraron aumento significativo en la inmunotinción nuclear S100A7 también (p & lt; 0,001, OR = 11,3, IC 95% = 4,3 a 29,3) en comparación con los tejidos normales (Tabla 1). Estas lesiones 166 leucoplasia oral incluyen 116 hiperplasias de células escamosas; 54,3% (63/116) de los casos mostró un aumento significativo en la inmunotinción citoplasmática S100A7 (puntuación total & gt; 3, p & lt; 0,001, OR = 6,2, IC 95% = 03/02 a 11/09) en relación con los tejidos normales (Tabla 1 y Figura 1B ( ii)). Aumento significativo de la inmunotinción S100A7 nuclear también se observó en 40/116 (34,5%) casos (P & lt; 0,001, OR = 10,0; IC del 95% = 3,8-26,6). En particular, el aumento se observó localización citoplasmática de S100A7 en% displasia 68 (34 de 50 casos) (p & lt; 0,001, OR = 11,2, IC 95% = 5,0 a 24,8) en comparación con los tejidos normales (Tabla 1 y Figura 1B (iii) ). Del mismo modo, aumento progresivo de la expresión nuclear de S100A7 también se observó en 22/50 displasia (44%) (p & lt; 0,001, OR = 14,9, IC 95% = 5,1 a 43,0). Curiosamente, S100A7 sobreexpresión (citoplásmica /nuclear) se restringió a parabasales y sólo capas suprabasal. Ninguna de estas secciones de tejido mostró expresión S100A7 en la proliferación de las capas de la membrana basal. Leve inmunotinción S1007 membranosa (puntuación total & lt; 3) se observó en 3 hiperplasias de células escamosas, pero en ninguna de las displasias analizó
CECC
zwe observó un patrón similar de expresión S100A7 en.. CECC también. Sesenta siete de 100 HNSCC (67%) mostraron localización nuclear de S100A7 en las células tumorales en comparación con los tejidos normales (p & lt; 0,001, OR = 38,6, IC 95% = 14,4 a 103,9). En particular, se observó un aumento significativo en la expresión de S100A7 nuclear en HNSCC (67%) en comparación con la displasia (44%) (p = 0,005, OR = 2,7, IC 95% = 01/03 a 05/04). Además de la tinción nuclear, tinción intensa S100A7 también se observó en el citoplasma de las células tumorales en 74 de 100 HNSCC analizados (p & lt; 0,001, OR = 14,9, IC 95% = 7,4 a 29,9, la Tabla 1 y la Figura 1B (iv)) . Los parámetros clínico de CECC y su correlación con núcleo /citoplasma de expresión de S100A7 se muestran en la Tabla 1. Curiosamente, la sobreexpresión de S100A7 nuclear mostró una asociación con la diferenciación histopatológica del CECC (p = 0,031). Ninguno de los tejidos HNSCC mostraron inmunotinción membranosa S100A7. La mayoría de los tejidos HNSCC analizados en este estudio inmunohistoquímico S100A7 tenía células tumorales más del 80% en H & amp; E secciones. Sin embargo, hubo cinco casos que mostraron displásico o áreas hiperplásicas tejido adyacente al tumor y estas regiones mostraron inmunotinción similar a la observada en los casos que sólo tenían displasia o hiperplasia (Figura 1B (v). No inmunotinción se observó en secciones de tejido HNSCC utilizaron como controles negativos en el que el anticuerpo primario fue sustituido por isotipo IgG específica (Figura 1B (vi)), mientras que el control positivo (cáncer de mama ER-negativo) mostró expresión S100A7 (Figura 1B (vii)).
Evaluación de S100A7 como potencial marcador de diagnóstico para lesiones leucoplasia oral y HNSCC
características operativas del receptor (ROC) análisis se utilizó para determinar el potencial de S100A7 sobreexpresión de distinguir la hiperplasia de células escamosas, displasia y HNSCC de los tejidos orales normales. la valores de área bajo la curva (AUC) fueron 0.664, 0.691 y 0.824 para la hiperplasia de células escamosas (Figura 2a), la displasia (Figura 2b), y HNSCC (Figura 2c), respectivamente (Tabla 2). del mismo modo, el análisis ROC se utilizó para la determinación de la AUC para la tinción citoplásmica S100A7 en todos estos tres grupos y los valores de área bajo la curva (AUC) fueron 0.650, 0.746 y 0.788, respectivamente, como se muestra en la Tabla 2 y la Figura 2a-2c. El valor predictivo positivo (VPP) fueron 88,9, 81,5 y 93,1 por inmunotinción nuclear. Del mismo modo, los valores predictivos positivos de inmunotinción citoplasmática (PPV) fueron 79,8, 68,0 y 82,2 en los tres grupos (Tabla 2).
línea gruesa muestra el análisis ROC para S100A7 nuclear. La línea de puntos muestra el análisis ROC para citoplasmática S100A7. Eje Y del gráfico muestra la fracción de verdaderos positivos y el eje X muestra la fracción de falsos positivos.
Evaluación de S100A7 sobreexpresión como marcador pronóstico de CECC
La predicción estimado el poder del marcador, es decir, la fuerza de la asociación estadística de la expresión S100A7 con mal pronóstico se evaluó mediante el análisis de supervivencia de Kaplan-Meier. El análisis de supervivencia de Kaplan-Meier mostró una reducción significativa de la supervivencia libre de enfermedad (p = 0,016; mediana de supervivencia de 13 meses) en pacientes HNSCC que albergan incremento en la expresión nuclear de S100A7, en comparación con la supervivencia media libre de enfermedad de 70 meses en los pacientes que no muestran la inmunotinción S100A7 nuclear (Figura 3a). Del mismo modo, se observó disminución de la supervivencia libre de enfermedad de 14 meses en pacientes HNSCC que muestran intensa expresión citoplasmática de S100A7, en comparación con los pacientes que no mostraron un aumento citoplasmática S100A7 (supervivencia media de 70 meses, Figura 3b). El análisis de regresión Cox se llevó a cabo para determinar el potencial de pronóstico de la expresión de S100A7 (nuclear /citoplásmico) para HNSCC en comparación con los otros parámetros clínicos y patológicos - el grado histológico, tamaño del tumor y estado nodal (Tabla 3). S100A7 expresión nuclear surgió como el factor pronóstico más importante para el CECC (p = 0,006, coeficiente de riesgo (CR) = 7,6; IC del 95% = 1.3 a 5.1)
.
estimación de Kaplan-Meier de la proporción acumulada de disease- supervivencia libre: (a) la mediana del tiempo de supervivencia libre de enfermedad (DFS; sin recurrencia /metástasis) en pacientes HNSCC que muestran la inmunotinción nuclear de S100A7 fue de 13 meses, mientras que en los pacientes que no muestran /débil inmunotinción S100A7 en el núcleo DFS media fue de 70 meses ( p = 0,016); (B) En los pacientes que muestran una mayor expresión citoplásmica S100A7 la mediana DFS fue de 14 meses en comparación con CECC que mostró la inmunotinción citoplasmática leve o moderada (mediana DFS = 70 meses, p = 0,055). Positivo y Negativo valores predictivos dependientes del tiempo (PPV (t), VPN (t)) de la expresión de S100A7 nuclear. (C) PPV (t) para el tiempo hasta la recaída del cáncer de 49 pacientes con CECC S100A7
+ (línea continua) y para todos los pacientes con CECC 77 datos de supervivencia (línea discontinua); d) NPV (t) para el tiempo hasta la recaída del cáncer de 28 pacientes con CECC S100A7
-. (línea continua)
En base a los datos, el valor pronóstico adicional que S100A7 nuclear expresión proporcionado para predecir la recurrencia del cáncer (VPP) en pacientes HNSCC se mide por la relación: PPV
recaída /CECC (83 meses | S100A7) /PPV
recaída /CECC (83 meses) = 71,4 /61,0; o para excluir (NPV) recurrencia del cáncer en pacientes HNSCC era NPV
recaída /HNSCC (83 meses | S100A7) /NPV
recaída /HNSCC (83 meses) = 57,1 /39,0, como se muestra en la figura 3c y 3d, respectivamente .
Verificación de S100A7 sobreexpresión por RT-PCR y Western blot
La sobreexpresión de S100A7 en lesiones orales se verificó por RT-PCR y análisis de Western blot en las mismas muestras de tejido representativas tal como se utiliza para El análisis inmunohistoquímico. análisis de RT-PCR demostró niveles de transcritos de S100A7 en la hiperplasia de células escamosas, displasia, y HNSCC aumentó en comparación con los tejidos normales (Figura 4a). El análisis de transferencia Western mostró una sola banda intensa de 11,4 kDa, lo que confirma el aumento de la expresión en la hiperplasia de células escamosas, displasia y HNSCC, en comparación con los tejidos normales (Figura 4b).
(a) análisis de RT-PCR de S100A7 en la mucosa oral normal, hiperplasia de células escamosas, displasia y tejidos HNSCC. Para el análisis de RT-PCR y análisis de transferencia Western, se utilizó normal (n = 5), hiperplasia (n = 5), la displasia (n = 5) y HNSCC (n = 5) tejidos. Panel muestra los niveles de transcripciones S100A7 aumentó en lesiones orales hiperplasia de las células -squamous (H), la displasia (D) y HNSCC (T) en comparación con la mucosa normal oral (N) que mostró niveles basales de transcritos de S100A7. ß-actina como control para normalizar la cantidad de ARN usado para cada reacción de RT-PCR se muestra en el panel inferior. (B) análisis de transferencia de Western de S100A7 en la mucosa oral normal (N), la hiperplasia de células escamosas (H), la displasia (D) y los tejidos HNSCC. La misma cantidad de lisados de proteínas de estos tejidos se sometieron a electroforesis en 12% SDS-PAGE y se transfirió a una membrana de PVDF. La membrana se incubó con los respectivos anticuerpos primarios y secundarios tal como se describe en la sección Métodos y la señal detectada por el método de quimioluminiscencia. Panel muestra el aumento de expresión de la proteína S100A7 en lesiones orales - hiperplasia de células escamosas (H), la displasia (D) y HNSCC (T) en comparación con mucosa normal oral (N). GAPDH se utilizó como control de carga
Discusión
Los resultados más destacados de nuestro estudio son:. (I) aumento significativo en la expresión de S100A7 (citoplásmico /nuclear) en la hiperplasia de células escamosas, displasia y HNSCC en comparación con los tejidos orales normales; (Ii) la expresión S100A7 citoplasmática distingue hiperplasia de células escamosas, displasia y HNSCC de la mucosa normal con una alta especificidad y PPV; (Iii) aumento significativo en la acumulación nuclear S100A7 en HNSCC en comparación con la displasia; y (iv) potencial de S100A7 nuclear como un marcador de mal pronóstico de HNSCC. Es de destacar que los estudios sobre el análisis molecular de las lesiones de leucoplasia oral - con hiperplasia de células escamosas o displasia son muy limitadas, a menudo debido a que estos pacientes no buscan atención médica, debido a las lesiones de pequeño tamaño que no plantean ningún problema clínicas graves. El aumento de expresión S100A7 se ha informado en las lesiones displásicas [29], [30]. Sin embargo, nuestros datos sugieren S100A7 sobreexpresión tan temprano como en la hiperplasia de células escamosas, sin evidencia histológica de displasia. La aparición de la hiperplasia de células escamosas es a menudo asociada con la inflamación crónica y los enlaces moleculares entre la inflamación y pre-maligna se mantiene con intensidad. En este contexto, los estudios anteriores han informado sobre todo el papel de las proteínas S100 en la inflamación, el apoyo a nuestros hallazgos [21], [31] - [33]. S100A7 se identificó en los epitelios pre-maligno oral (displasia) por el análisis de microarrays y propuso ser un marcador de la inflamación [34]. S100A7 se ha demostrado que desempeñan un papel en la facilitación de la respuesta de células inflamatoria del huésped, en el que está implicada como un factor quimiotáctico para linfocitos y neutrófilos en enfermedad de la piel [35]. S100A7 también se ha asociado con el aumento de células inflamatorias se infiltra a través de todos los tipos de tumores de mama invasivos [24]. Además, S100A7 se ha propuesto como un gen de respuesta epidérmica a citoquinas inflamatorias [36], [37]. En el cáncer de mama (carcinoma ductal in situ), tanto la oncostatina M (OSM) y la interleucina-6 (IL-6) se han propuesto para regular la expresión y actividad de S100A7 mediante la regulación de PI3K, STAT3 y Erk señalización [38]. Estos mecanismos pueden extenderse a CECC, así, ya que la implicación de la IL-6 y PI3K señalización en CECC ha sido bien documentado por nuestro laboratorio y otros [39], [40].
Un importante reto clínico que se enfrentan los oncólogos es la falta de marcadores moleculares para identificar a los pacientes con lesiones leucoplasia oral que están en alto riesgo de transformación a la malignidad. En este contexto, el aumento significativo en la expresión de S100A7 observado en HNSCCs (67% de casos) en comparación con las lesiones leucoplasia oral con displasia (44%) es un hallazgo importante de nuestro estudio (p = 0,005, OR = 2,8, 95% CI = 01/04 a 05/07), lo que sugiere que la acumulación nuclear de S100A7 puede estar vinculado a un mayor riesgo de transformación maligna y puede servir como un marcador para identificar las lesiones de alto riesgo. Sin embargo, este hallazgo merece la confirmación en un estudio de seguimiento longitudinal de los pacientes con lesiones de leucoplasia oral, para establecer una posible relación entre la expresión de S100A7 nuclear y el riesgo de desarrollo de cáncer.
En nuestro estudio, S100A7 ha demostrado ser un factor pronóstico de supervivencia reducida de pacientes HNSCC. Sin embargo, en contraste con estos resultados, la expresión de esta proteína se asoció con una alta diferenciación. Ninguno de los especímenes pobremente diferenciados (n = 6), expresada S100A7. Este hallazgo parece ser contradictorio a primera vista. Sin embargo, vale la pena tener en cuenta que entre los casos analizados 100 HNSCC en nuestro estudio, se analizaron sólo 6 tumores mal diferenciados; en comparación se investigaron 45 tumores bien diferenciados. Por lo tanto un mayor número de tumores poco diferenciados necesita ser analizada para determinar la correlación con la expresión de S100A7 en un estudio futuro. Nuestro estudio también fue apoyada por un informe anterior que mostró asociación de la expresión S100A7 nuclear con carcinoma epidermoide bien diferenciado en comparación con los carcinomas de células escamosas moderados y pobremente diferenciados [30]. En un estudio paralelo utilizando CCCA tejidos secciones, Kesting et al., [29] mostró una correlación significativa entre el aumento de la expresión S100A7 y el estadio tumoral (I y II), así carcinomas diferenciados y los tumores no metastásicos, lo que apoya nuestros resultados. Observaciones similares se han reportado en la vejiga, de mama y cáncer de piel [18], [29], [41] - [44]. S100A7 sobreexpresión mostró asociación con el carcinoma de células escamosas bien diferenciado de la vejiga en comparación a los tumores menos diferenciados. Del mismo modo, S100A7 sobreexpresión se ha demostrado que se expresa en la, región superficial diferenciada del epitelio y su expresión se correlaciona con el grado de diferenciación de los queratinocitos [18]. expresión S100A7 es relativamente baja en lesiones proliferativas hiperplásicas normales, benignas y ductal atípica, altos en el carcinoma ductal invasivo pre-in situ (DCIS), pero reducida en los carcinomas invasivos [41] - [44]. En los tumores de la piel, que está ausente en basalioma indiferenciada y fuertemente expresada en carcinoma in situ, así como en queratoacantoma y carcinoma de células escamosas diferenciadas. Tomados en conjunto, estos hallazgos sugieren claramente el papel de S100A7 en la diferenciación del epitelio. En un intento de explicar el papel de S100A7, Zhou et al. [30] demostraron sobreexpresión de la proteína S100A7 resultó en la degradación de β-catenina por no canónica vía independiente de GSK3 en las células de cáncer oral [30]. Además, la sobreexpresión de S100A7 inhibió la proliferación celular in vitro, pero promueve la diferenciación del tumor en un modelo de xenoinjerto de cáncer oral ortotópico, apoyando a nuestros hallazgos clínicos. Por lo tanto, S100A7 sobreexpresión suprime el crecimiento tumoral y la invasión de la regulación negativa de la señalización de β-catenina. Sin embargo, el mecanismo exacto que explica este papel bifásica de expresión S100A7 en la proliferación en las primeras etapas, pero la inducción de la diferenciación en las etapas avanzadas de la cabeza y la carcinogénesis de cuello queda completamente comprendido y de nuevas investigaciones.
Curiosamente, S100A7 más de expresión ( citoplásmica /nuclear) se ha asociado con un peor pronóstico del paciente en pacientes con cáncer de mama invasivo ER-negativos [41], [45]. En particular, nuestro estudio mostró significación de la expresión S100A7 nuclear como un mal pronosticador del CECC (independiente de otros parámetros clínicos y patológicos según lo revelado por el modelo de regresión de Cox). Además, nuestro análisis predictivo en función del tiempo también reveló mal pronóstico de los pacientes que muestran una mayor expresión HNSCC S100A7 nuclear. Tomados en conjunto, estos resultados demuestran el potencial de S100A7 nuclear como un marcador predictivo de mal pronóstico de la CECC. La expresión alterada de varias proteínas S100 también se ha asociado con HNSCC [10], [25] - [28]. Recientemente, tanto S100A4 y S100A2 se han propuesto como biomarcadores de la relevancia de diagnóstico y /o pronóstico [26], [46]. familia S100 de proteínas incluyendo S100A7 se ha demostrado para formar tanto homodímeros y heterodímeros que interactúan con c
jun
proteína de unión de dominio de activación 1 (Jab1), Ran proteína de unión M (RanBPM), proteína de unión de ácidos grasos epidérmica (EFABP) , y transglutaminasa. Interacciones con RanBPM Recientemente se han demostrado para promover la migración de las células de cáncer renal [47], lo que sugiere la posibilidad de S100A7 para influir en el potencial invasivo de las células cancerosas. Utilizando electroforesis en gel 2D, S100A7 fue identificado como un marcador putativo para la metástasis SCC de pulmón de cerebro [48]. El uso de modelos in vivo para la pérdida de HNSCC de ambos S100A7 y E-FABP se ha demostrado que el resultado en la reducción de la adhesión celular y el aumento de la motilidad celular, que conduce a metástasis a distancia [49]. Por lo tanto, se especula que con una comprensión cada vez mayor del papel de S100A7 en la migración celular, invasión y proliferación de vías, S100A7 puede servir como una diana terapéutica para el tratamiento de la inflamación y el cáncer.
En conclusión, se demostró S100A7 que se expresa en lesiones orales en las primeras etapas, antes de la aparición de la displasia y en los tumores francas. Su localización subcelular, sugiere que S100A7 nuclear puede estar asociada con un mayor riesgo de transformación de las lesiones premalignas orales y recurrencia en los CECC. Además, el aumento de la acumulación nuclear de S100A7 en HNSCC, en comparación con las lesiones displásicas garantiza un estudio longitudinal a gran escala de pacientes con displasia de evaluar su potencial como un determinante de la mayor riesgo de transformación de lesiones premalignas orales y recurrencia en HNSCC.
Materiales y Métodos
los pacientes y la recolección de datos clínico-patológica, muestras de tejido
el Comité de Ética Humanos Institucional del Instituto All India de Ciencias médicas (AIIMS), Nueva Delhi, India, aprobó este estudio antes de su comienzo. Las muestras de tejido se obtuvieron por procedimientos diagnósticos o terapéuticos a partir de 166 pacientes con leucoplasia oral, lesions- clínicamente definida [con hiperplasia de células escamosas (n = 116) o con displasia (n = 50)] de asistir a la consulta externa de los Departamentos de disciplinas quirúrgicas y Otorrinolaringología , AIIMS, y de 100 pacientes sometidos a cirugía de cáncer de HNSCC curativa durante el período 2002-2007, después de obtener el consentimiento por escrito de los pacientes. Siempre que sea posible, los tejidos no malignos (n = 43) se tomaron de cada uno de un sitio distante de la HNSCC resecado quirúrgicamente. tejidos orales no malignas (n = 57) también se obtuvieron de los pacientes que acuden a la consulta externa de cirugía dental para la extracción del diente, después de obtener el consentimiento por escrito de los pacientes. Tomados en conjunto, estos 100 tejidos orales no malignas con evidencia histológica de epitelio normal constituyeron el grupo normal. Después de la escisión, los tejidos fueron inmediatamente se congelaron en nitrógeno líquido y se almacenan a -80 ° C en el tejido de Investigación del Banco hasta su utilización posterior; una parte del tejido se recogió en 10% de formalina y embebidos en parafina para análisis histopatológicos e inmunohistoquímicos. Histológicamente confirmado epitelio oral normal, hiperplasia de células escamosas, displasia, y CECC según lo revelado por H & amp; E tinción inmunohistoquímica se utilizaron para [7]. datos demográficos, clínicos, patológicos y los pacientes se registraron en un Performa pre-diseñado como se describe anteriormente [7], [50]. La información documentada incluido TNM clínico puesta en escena (tumor, nódulo, metástasis y en base a la clasificación del Centro de Cáncer le Unión Internacional TNM de los tumores malignos de 2002), el sitio de la lesión, diferenciación histopatológica, la edad, el género, y los hábitos de consumo de tabaco.
Estudio de seguimiento
Setenta y siete pacientes que se sometieron a tratamiento HNSCC período 2002-2007 fueron investigados y evaluados en la clínica de seguimiento de cáncer de cabeza y cuello a intervalos de tiempo regulares. estado de supervivencia de los pacientes con CECC fue verificado y actualizado a partir de los registros del Registro de Tumores del Hospital del Cáncer del Instituto de Rotary, AIIMS, a diciembre de 2009. Los pacientes fueron controlados HNSCC por un período máximo de 83 meses. sobrevivientes libres de enfermedad se definieron como pacientes libres de evidencia clínica y radiológica de recidiva local, regional o distante en el momento de la última visita de seguimiento [50], [51]. Loco-regional recaída /muerte se observaron en 51 de 77 (66%) pacientes monitorizados durante el seguimiento. Veintiséis pacientes que no mostraron recurrencia estaban vivos hasta el final del período de seguimiento. Sólo la supervivencia libre de enfermedad fue evaluado en el presente estudio, ya que el número de muertes debido a la progresión de la enfermedad no permitió un análisis estadístico fiable. supervivencia libre de enfermedad se expresa como el número de meses desde la fecha de la cirugía para la recidiva locorregional /muerte.
La inmunohistoquímica
secciones embebidas en parafina (5 micras) de no oral humana