Extracto
no pequeñas de cáncer de pulmón no microcítico (CPNM) es la principal causa de mortalidad en todo el mundo relacionado con el cáncer y la mayoría de los casos son diagnosticados en fases avanzadas de la enfermedad. Actualmente no existe una prueba de detección rentable para el NSCLC, y el desarrollo de una prueba de este tipo es un imperativo de salud pública. Estudios recientes han sugerido que la tomografía computarizada de tórax de cribado de pacientes con alto riesgo de cáncer de pulmón puede aumentar la supervivencia de la enfermedad, sin embargo, no se ha establecido la rentabilidad de tal selección. En esta fase I /II estudio de biomarcadores hemos examinado la viabilidad de la utilización de suero miARN como biomarcadores de NSCLC mediante RT-qPCR para examinar la expresión de miRNAs en 180 sueros de 30 pacientes con CPNM tratamiento ingenuo y 20 controles sanos. Se utilizaron curvas ROC (ROC) y el área bajo la curva para identificar pares de genes miARN expresados diferencialmente que permiten distinguir NSCLC de los controles sanos. miARN candidatos seleccionados fueron validados en el suero de un adicional de 55 pacientes con CPNM y 75 controles sanos. El examen de los niveles de expresión de los genes miARN en el suero de una cohorte multi-institucional de 50 sujetos (30 pacientes con CPNM y 20 controles sanos) identificados miRNAs expresados diferencialmente. Una combinación de dos diferencialmente expresado miRNAs miR-15b y miR-27b, fue capaz de discriminar NSCLC de los controles sanos con la sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo (VPP) y valor predictivo negativo (VPN) del 100% en el conjunto de entrenamiento. Tras el último análisis adicionales en 130 sujetos (55 CPNM y 75 controles sanos), este par miARN predijo CPNM con una especificidad del 84% (IC del 95%: 0,73-0,91), sensibilidad del 100% (IC del 95%, 0,93-1,0), VAN del 100%, y el VPP del 82%. Estos datos proporcionan evidencia de que los miRNAs suero tienen el potencial de ser biomarcadores sensibles y rentables para la detección precoz del NSCLC. La prueba adicional en un estudio de biomarcadores de fase III en es necesaria para la validación de estos resultados
Visto:. Hennessey PT, Sanford T, A Choudhary, Mydlarz WW, Brown D, Adai A, et al. (2012) Suero microARN biomarcadores para la detección de células no pequeñas de cáncer de pulmón. PLoS ONE 7 (2): e32307. doi: 10.1371 /journal.pone.0032307
Editor: Neeraj Vij, Johns Hopkins School of Medicine, Estados Unidos de América
Recibido: 1 de septiembre de 2011; Aceptado: 26 Enero 2012; Publicado: 28 Febrero 2012
Derechos de Autor © 2012 Hennessey et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Esta investigación fue financiado en parte por el Instituto Nacional de Salud SBIR subvención#1R43CA141786-01 y por el Instituto Nacional de Salud de subvención#T32DC000027. Estos proveedores de fondos no tiene función alguna en el diseño del estudio, la recogida y el análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito. Esta investigación también fue financiada en parte por Asuragen, Inc. Los investigadores de Asuragen, Inc. que participaron en este estudio no fueron influenciados por la administración o partes fuera de su grupo de investigación y tenía el control exclusivo sobre el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, la decisión publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses: Dra. Elizabeth Mambo, Tiffany Sanford, Ashish Choudhary, y Alex Tamas Adai son empleados de Asuragen, Inc. David Brown era un empleado de Asuragen en el momento se llevó a cabo la investigación. Todos estos científicos llevaron a cabo la investigación publicada en esta publicación como parte de su empleo con Asuragen. No hay ningún beneficio financiero directo a los investigadores de la publicación de este manuscrito. Asuragen lleva a cabo una revisión interna independiente de los manuscritos de mantener la integridad científica y gestionar los conflictos de intereses. David Brown es actualmente empleado por miARN Therapeutics, Inc. Se llevó a cabo la investigación presentada en este artículo cuando era un empleado de Asuragen, Inc. que su participación en la investigación presentada en este manuscrito terminado después de que dejó Asuragen, Inc. La dirección y los propietarios Terapéutica de miARN tenido ningún papel en la investigación presentada en este manuscrito o ninguna influencia sobre la preparación de los manuscript.This no altera la adhesión de los autores a todos los PLoS ONE políticas sobre el intercambio de datos y materiales.
Introducción
el cáncer de pulmón es la principal causa de mortalidad en todo el mundo relacionado con el cáncer, y fue responsable de 1,38 millones de muertes en 2008 [1]. El tabaquismo es el principal factor de riesgo para el cáncer de pulmón, y se estima que el 20,8% de los adultos estadounidenses son fumadores activos [2]. De momento no hay validado, rentable prueba de detección fiable que proporciona un diagnóstico de cáncer de pulmón. El desarrollo de una prueba de este tipo es un imperativo de salud pública desde el diagnóstico y tratamiento del cáncer de pulmón en estadio precoz se asocia con una supervivencia de hasta el 92% a los 5 años [3]. Dado que el cáncer de pulmón no suele manifestarse clínicamente evidentes hasta que se alcanza una etapa avanzada, mayor que el 75% de los cánceres de pulmón son diagnosticados después de la enfermedad ya ha avanzado localmente o metastásico [4]. Debido a la ventaja de supervivencia sustancial a la detección temprana, se han realizado grandes esfuerzos para detectar cáncer de pulmón en una etapa temprana. El Proyecto de Acción Temprana del Cáncer de Pulmón (ELCAP) [5] y la prueba de detección del cáncer de pulmón Nacional (NLST) [4] son estudios prospectivos que proyectarán los fumadores de alto riesgo sin síntomas utilizando dosis bajas de tomografía computarizada (TC) y los resultados preliminares muestran que aumentó capacidad de detectar etapa temprana, lesiones potencialmente curables [3]. El NLST fue detenido a principios de noviembre de 2010, después de los datos preliminares revelaron una disminución del 20,3% en las muertes por cáncer de pulmón en el grupo de prueba CT de la prueba [4], [6]. Sin embargo, la alta tasa de falsos positivos del 96,4% que se observó en el grupo de dosis baja de TC puede obstaculizar la adopción de la TC en la detección de la población [6]. Además, las preguntas sobre el coste-efectividad del cribado basado en la TC para el cáncer de pulmón siguen sin respuesta [7], [8], [9], [10], [11]. Además, existe la preocupación de que la exposición repetida a las TC de baja dosis puede exponer a los pacientes a niveles potencialmente dañinos de la radiación que podría dar lugar a más tipos de cáncer [12]. Aunque la TC puede identificar lesiones sospechosas de cáncer de pulmón, el diagnóstico de tejido es la única manera de determinar si una lesión de pulmón es canceroso. Un meta-análisis de estudios de detección de cáncer de pulmón 7 evaluó la TC helicoidal de baja dosis como prueba de cribado para el cáncer de pulmón y encontró que 14-55% de los pacientes de alto riesgo, con ≥40 años y ≥20 paquete de historia de tabaquismo años, que tenía una lesión pulmonar sospechoso en una TC de cribado se encuentran en última instancia tener lesiones pulmonares benignos después de someterse a un procedimiento invasivo para el diagnóstico de tejidos [13]. Esta alta tasa de procedimientos invasivos para la enfermedad benigna de relieve la necesidad de modalidades de detección adicionales que pueden reducir potencialmente el número de pacientes que se someten a procedimientos invasivos innecesariamente.
Además de los grandes ensayos que investigaron la eficacia del cribado de pulmón CT cáncer, numerosos grupos están investigando activamente la posibilidad de biomarcadores basados en la sangre para el cáncer de pulmón no microcítico (CPNM) [14]. biomarcadores circulantes son atractivos para la detección del cáncer, ya que son pruebas de sangre que son mínimamente invasiva, relativamente de bajo costo y fácilmente repetible. microRNAs (miRNAs) en suero son candidatos atractivos para ser utilizados como biomarcadores de cáncer. Serum miARN puede ser fiable aislado a partir de suero y se han demostrado ser muy estable, incluso en condiciones muy duras, tales como múltiples ciclos de congelación-descongelación y los cambios en el pH [15]. prometedores estudios recientes sugieren que los miRNAs de plasma podría ser un paso útil en el proceso de detección del cáncer de pulmón, y para decidir qué pacientes a la pantalla aún más por tomografía computarizada [16], [17], [18]. En un esfuerzo para desarrollar ensayos de biomarcadores no invasivos que se puede utilizar para la detección precoz de cáncer de pulmón, se evaluó la expresión de los genes miARN extraído de suero obtenido de pre-tratamiento de pacientes con NSCLC y sujetos sanos libres de cáncer, para identificar biomarcadores basados en miARN que son capaces de distinguir entre estos grupos.
Métodos
Muestra Colección
las muestras utilizadas en este estudio fueron recogidos en la Universidad de Rochester Medical Center por el Dr. Stephen Ahrendt como parte de un estudio de cribado de cáncer de pulmón y en el hospital Johns Hopkins como parte de un protocolo de detección del cáncer de cabeza y cuello. La información clínica también se recogió para cada paciente en el momento de recogida de sangre. escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los pacientes antes de la inscripción en los estudios, y los estudios fueron aprobados por la Universidad de Rochester Medical Center Sujetos de Investigación Junta de Revisión y el Consejo de la Universidad Johns Hopkins Hospital de Revisión Institucional, respectivamente. La sangre de pacientes con NSCLC y donantes sanos se recogió en tubos de suero de plástico BD Vacutainer® Plus y se transforma en suero. Para todos los pacientes de cáncer, se recogió sangre en el momento del diagnóstico, pero antes de la resección o el tratamiento de tumores. El suero se almacenó inmediatamente a -80 ° C hasta el momento de uso. Una vez completado el proceso de recolección, todos los registros fueron desidentificados para proteger la confidencialidad del paciente. Cohortes fueron recopilados retrospectivamente a partir de estas grandes colecciones de muestras de suero en un esfuerzo para compilar edad y sexo cohortes emparejaron con la historia similares de fumar y con tumores en fase inicial para pacientes con cáncer (Tabla 1). Los pacientes se definen por tener un historial de fumar si tenían un historial de fumar constantemente durante al menos un año. A dos colas se utilizó la prueba exacta de Fisher para determinar las asociaciones entre todas las muestras de suero se mantienen en el banco de tejidos de la División Hospital Johns Hopkins de cáncer de cabeza y de Investigación del cuello, utilizando una aplicación de base de datos web proporcionada por el Departamento de Investigación de Oncología del Hospital Johns Hopkins Sistemas de Tecnología de la información (RITS) (https://www.rits.onc.jhmi.edu/). Las muestras fueron enviadas a Asuragen, Inc., Austin TX para el aislamiento de ARN y la evaluación del análisis de miARN y datos.
Extracción de ARN sérico
Suero ARN (0,5 ml) se extrajo por la farmacogenómica Grupo de Servicios Asuragen usando el Kit mirVana PARIS (Ambion, Austin, TX), de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Después de la extracción orgánica, la fase acuosa se cargó en las columnas proporcionadas en el kit. RNA se lavó y se extrajo según las instrucciones del fabricante. RNA se cuantificó utilizando el NanoDrop 1000 (NanoDrop, Wilmington, DE) y se almacenó a -80ºC. ARN rendimientos obtenidos eran típicamente 300-500 ng /ml de suero.
miARN cuantificación por RT-qPCR
Se utilizó ensayos TaqMan RT-qPCR (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) para examinar el expresión de ARN 181 miRNAs en suero de 50 sujetos, (30 pacientes con NSCLC, y 20 sujetos sanos, libres de cáncer). Todos los reactivos, cebadores y la sonda fueron adquiridos de Applied Biosystems. La transcripción inversa (RT) se realizó en 10 reacciones UL, cada uno conteniendo 1 x RT tampón (Invitrogen, Carlsbad, CA), 250 uM de cada dNTP (GE Healthcare, Piscataway, NJ), 2 imprimación uL TaqMan RT (Applied Biosystems, Carlsbad, CA), 4 unidades de inhibidor de RNasa (Promega, Madison, WI), 10 unidades de MMLV-RT (Invitrogen, Carlsbad, CA), y aproximadamente 1 ng de ARN por reacción. La mezcla de reacción se incubó a 16 ° C durante 30 min, 42 ° C durante 1 hora y 85 ° C durante 5 min. qPCR reacciones se realizaron con el 384 pocillos ABI Prism 7900 Sequence Detection System HT (Applied Biosystems, Carlsbad, CA). Para la detección de los genes miARN, se realizó una reacción de RT y qPCR por muestra, mientras que para los ensayos de miRNA verificación posterior cribado, dos reacciones de RT seguido cada uno por qPCR se realizaron para cada una de las 130 muestras utilizadas para la validación. Cada qPCR se realizó en reacciones de 15 uL que contienen 1 × Platinum Taq tampón (Invitrogen, Carlsbad, CA), mM MgCl 5
2 (Invitrogen), 250 uM dNTPs, 2 uL TaqMan microRNA mezcla de cebadores ensayo /sonda (Applied Biosystems, Carlsbad, CA), 1 × ROX, (0,5 unidades de Taq Platinum (Invitrogen, Carlsbad, CA), y 2 l de ADNc a partir de la reacción de RT.
Análisis de datos
para identificar biomarcadores candidatos para distinguir NSCLC de controles sanos, se calculó primero la matriz de valores de Ct para cada muestra, restando el valor del número de ciclo umbral (Ct) para un miARN del valor Ct de otro miARN en la misma muestra. el enfoque de la matriz? Ct de considerar el conjunto de todos los pares expresados diferencialmente miARN aunque computacionalmente onerosa, pero tiene la ventaja de evitar la necesidad de invocar normalizadores explícita. para los 181 miRNAs analizados por muestra, cada vector muestra arrojó 16290 elementos (), en lo sucesivo denominadas "diffpairs" miARN. [19 ], [20] a continuación, calculamos los valores de p desiguales t-test de varianza y las AUC para la curva ROC para cada uno de los diffpairs. El punto de corte para cada Ct se seleccionó para maximizar la suma de sensibilidad y especificidad. Candidatos pares miARN para la verificación en otro conjunto de muestras se seleccionaron adicionalmente sobre la base de una sensibilidad y una especificidad de al menos 80% cada uno. Estos criterios produjeron un total de 140 diffpairs candidato miARN (Figura S1). El punto de corte utilizado para cada diffpair miARN en el conjunto de entrenamiento se aplicó en el conjunto de datos de validación.
Resultados
sueros
A fin de identificar diferencialmente expresado miARN en el CPNM, que inicialmente se revisaron a partir de pacientes con CPNM 16 y 20 donantes sanos para la expresión de 328 genes miARN utilizando RT-qPCR. Para evitar la detección falsa, lo primero que eliminamos todos los miRNAs que no se habían detectado después de 40 ciclos de PCR cuantitativa en todas las muestras, dejando sólo 181 miRNAs. En consecuencia, hemos limitado la selección posterior de los sueros de 30 pacientes con CPNM y 20 sujetos sanos a sólo los 181 miRNAs que fueron expresadas en o por debajo de 40 ciclos. Los pacientes fueron agrupados por edad, sexo y antecedentes de tabaquismo. prueba exacta de Fisher se utilizan para analizar los grupos A dos colas. La única asociación estadísticamente significativa fue entre el cáncer y el tabaquismo (p = 0,015). Se hicieron intentos de equilibrar la representación de los carcinomas de células escamosas y adenocarcinomas. La mayoría de las muestras del conjunto de entrenamiento (66,7%) fueron adenocarcinoma, mientras que 33,3% eran carcinoma de células escamosas. Las características demográficas de los 30 pacientes con CPNM y 20 pacientes sanos sin antecedentes de cáncer se muestran en la Figura 1 y en la Tabla 1. A pesar de que el rango de edad fue de 20-75 años en los controles sanos, sólo un donante estaba por debajo de 35 años de edad.
a partir del análisis por pares de datos miARN expresados diferencialmente se ha descrito anteriormente, los datos del conjunto de entrenamiento de 181 miRNAs produjeron 16290 pares de diferencias, de los cuales 140 candidatos miARN pares distinguido con CPNM de los controles sanos con una sensibilidad y especificidad de al menos 80% cada uno (véase la figura S1). Varios pares de genes miARN que implican miRNAs-106a, miR-15b, miR-27b, MIR-142-3p, miR-26b, miR-182,#126, let7g, let-7i y miR-30e-5p exhibió un valor predictivo negativo ( VAN) y un valor predictivo positivo (VPP) del 100% (Tabla 1), lo que indica estos miRNAs como biomarcadores candidatos putativos para el diagnóstico del cáncer de pulmón. Los pares de genes miARN 140 candidatos representaban un total de 26 miRNAs únicas. En consecuencia, RT-qPCR de los 26 miRNAs se realizó sobre RNA suero de un adicional de 55 pacientes de NSCLC (60% de la fase I, 24% Etapa II, 12% Etapa III y 4% en estadio IV), y de 75 libre de cáncer, sano controles. Las características demográficas de los 55 pacientes con CPNM y 75 pacientes sanos sin antecedentes de cáncer se muestran en la Figura 1 y en la Tabla 1. prueba exacta de Fisher de dos colas utilizadas para analizar los grupos. La única asociación estadísticamente significativa fue entre el cáncer y el tabaquismo (p = 0,005). Expresión diferencial de los candidatos de biomarcadores miARN pares del conjunto de entrenamiento (Figura S1) fue examinado en la prueba utilizando el mismo punto de corte como se aplicó en el conjunto de entrenamiento. Los resultados dio 5 biomarcadores candidatos con una sensibilidad y una especificidad de al menos 75% (Tabla 2). Todos los pares de genes miARN 5 candidatos mostrados en la Tabla 2 fueron significativamente expresados diferencialmente entre NSCLC y controles sanos, como se indica por los valores de p & lt; 0,001. La expresión diferencial de los genes miARN par miR-15b /miR-27b se muestra en la Figura 2, tanto para el conjunto de entrenamiento y el equipo de prueba. La distribución de este par miARN se extendió sobre una gama más amplia (& gt; 4 Cts) en los controles sanos, mientras que la distribución en las muestras de NSCLC era más estrecha con una gama de ~ 2 Cts. El área bajo la curva (AUC) de la característica operativa del receptor parcela (ROC) (Fig. 3) para este par miARN fue de 0,98 para los datos de prueba, con una sensibilidad y especificidad del 100% en el conjunto de entrenamiento (Figura S1) y una sensibilidad del 100% (IC del 95%, 0,93-1,0) y una especificidad del 84% (IC del 95%: 0,73-0,91) en la prueba (Tabla 2 y Figura 2). La segunda clasificación de miARN par involucrado miR-15a y miR-27b, con una sensibilidad del 87% y una especificidad del 93% en el conjunto de entrenamiento, mientras que su sensibilidad y especificidad en el conjunto de prueba fue de 94% y 75% respectivamente (Tabla 2). Varios de los pares de genes miARN en el conjunto de entrenamiento tuvieron un rendimiento subóptimo en la prueba ni con la sensibilidad y /o especificidad inferior al 75%. La parte superior candidato miARN par (miR-15b y 27b) NSCLC distinguido de los controles sanos con un VPN del 100% y un VPP del 82% en el conjunto de prueba (Tabla 2). Estos resultados muestran el potencial de miARN a base de suero como biomarcadores para el cribado de cáncer de pulmón.
valores de expresión diferencial se calcula como la diferencia de los valores de Ct para los dos miRNAs. El umbral indicado por la línea horizontal se seleccionó para maximizar la suma de sensibilidad y especificidad como se describe en el análisis de datos. La sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo (VPP) y valor predictivo negativo (VPN) obtuvieron utilizando la expresión diferencial de los 2 miARN muestra como mesas para el conjunto de entrenamiento (a la derecha) y el equipo de prueba (a la izquierda).
Discusión
En esta fase exploratoria I /II estudio de biomarcadores (como se indica por la Red de Investigación de Detección temprana (EDRN) (http: //EDRN. nci.nih.gov)) que exhibió suero de pacientes sin historia de cáncer, y los pacientes con NSCLC en un esfuerzo por identificar miRNAs que se pueden utilizar como biomarcadores para la detección del cáncer de pulmón en estadio temprano. Se identificaron un par miARN miR-15b /miR-27b que era capaz de distinguir entre el suero de pacientes con CPNM y controles sanos libres de cáncer, y con un alto grado de sensibilidad. Nuestros resultados apoyan los hallazgos de estudios recientes que han demostrado que los perfiles de miRNAs circulantes puede ser útil en la detección de NSCLC, [16], [17] Sin embargo, nuestro estudio incluyó sustancialmente más pacientes (180 en total) que cualquiera de estos estudios previos. Un inconveniente de estos biomarcadores es la baja especificidad de 84% en el conjunto de prueba. La relativamente alta tasa de falsos positivos de estas pruebas podría ser considerado inaceptable para el cribado de la población general. Sin embargo, en una población de fumadores de alto riesgo para el cáncer de pulmón, la detección innecesaria sería mitigado por la capacidad de esta prueba, con su valor predictivo negativo del 100%, para poder excluir a un gran número de pacientes a partir de pasar a más modalidades de detección costosos, como la TC de tórax helicoidal. Aunque estos datos son convincentes, se necesitan más pruebas en una gran cohorte prospectivo como un biomarcador estudio de fase III para evaluar la utilidad clínica de estos marcadores miARN como una prueba de la primera frecuencia de líneas para el NSCLC.
Los marcadores identificados miRNAs en este estudio han sido previamente implicado en tumores malignos humanos. miR-15a y miR-15b han demostrado ser no reguladas en el cáncer de pulmón humano [21]. Tanto el miR-15a y miR-15b se han demostrado tener un valor diagnóstico y pronóstico en la leucemia linfocítica crónica [22], [23]. Se encontró miR-27b que se redujeron reguladas en tejidos de cáncer de pulmón en comparación con el tejido pulmonar no cancerosa [24]. Además, los niveles de expresión de miR-27b se han correlacionado con la invasividad del cáncer de mama [25] y con la regulación de la angiogénesis [26]. Un estudio participaron un total de 86 CPNM y 57 controles reveló recientemente un panel de cuatro miARN en plasma que incluye el miR-126 que distingue NSCLC de los controles sanos con una sensibilidad y especificidad del 73% y 96%, respectivamente [27]. El uso de sangre entera, Keller y compañeros de trabajo [28] demostraron que el miR-126 y miR-98 estaban entre los mejores miRNAs que permiten distinguir NSCLC de los controles sanos. miR-126 es altamente expresado en el tejido pulmonar y está implicado en la regulación de la adhesión celular vascular 1 molécula (VCAM-I) [29]. La expresión aberrante de miR-126 se ha implicado en la patogénesis de NSCLC [30], [31]. En este estudio, varios pares en los que interviene el miR-126 se encontraban entre los varios candidatos identificados en el conjunto de entrenamiento (Figura S1), sin embargo tras el último análisis de 130 muestras adicionales, todos los pares de candidatos miARN-126 mostraron sensibilidad superior al 75% y la especificidad fue inferior al 75%. Otros estudios recientes realizados por Foss y compañeros de trabajo [17] demostraron suero MIR-MIR-1254 y 574-5p fueron expresados diferencialmente entre NSCLC (n = 33) y controles sanos (n = 42). Es importante tener en cuenta que varios factores afectan el resultado de estudios de miARN en biofluidos, incluyendo variaciones en el tipo de muestra, por ejemplo, sangre entera, plasma o suero, números de muestra, el diseño del estudio, la recogida de muestras, el aislamiento de ARN, las características del paciente, número de miARN examinó y las tecnologías utilizadas en miARN perfiles, por ejemplo, secuenciación Solexa, RT-qPCR o microarrays tecnologías. Además, es necesaria una estandarización de los métodos de aislamiento, la normalización y los métodos de análisis de datos con el fin de demostrar una clara utilidad clínica de estos marcadores putativos.
A pesar de que estos datos son prometedores, el equipo de prueba incluyó un número relativamente pequeño de muestras . En última instancia, estos biomarcadores miARN requieren una validación adicional de cohortes prospectivos más grandes, tales como un estudio de biomarcadores de fase III con el fin de validar estos resultados. La incorporación de marcadores miARN basados en la sangre en los estudios de la TC helicoidal puede ayudar a explorar la utilidad de miRNAs en el cribado de cáncer de pulmón. Aunque se trata de una fase exploratoria I /II de prueba, se seleccionaron los pacientes principalmente de clínicas quirúrgicas, y se ponderan hacia la enfermedad en estadio precoz (60% en estadio I, 24% en estadio II, 12% en estadio III y IV Etapa 4%). Este sesgo hacia la enfermedad en estadio temprano apoya la investigación de estos marcadores en un ensayo de fase III o IV destinado a definir el rendimiento de estos marcadores de forma prospectiva en la detección de las primeras etapas.
La reciente difusión de la utilidad del cribado helicoidal pecho escáneres CT para la reducción de la mortalidad por cáncer de pulmón por el juicio NLST hace especial hincapié en la identificación de individuos de alto riesgo que podrían beneficiarse de cribado. pruebas basadas en suero adyuvante puede llevar a cabo de una manera altamente rentable en comparación con las imágenes, y puede ser útil para identificar las poblaciones de alto riesgo que pueden beneficiarse de la TC de tórax, o para ser utilizados en combinación con imágenes para identificar los cánceres de pulmón tempranos.
Hay una gran necesidad de mejorar la detección del cáncer de pulmón, dado el gran número de personas afectadas cada año y la alta tasa de mortalidad de la enfermedad cuando se diagnostica en sus etapas posteriores. Actualmente hay numerosos ensayos clínicos que se llevan a cabo para probar la eficacia de nuevas terapias para el NSCLC, sin embargo, la mayoría de estos son ensayos de fase II y recientemente una serie de ensayos de fase III han faltado a sus puntos finales primarios [32] Hasta la fecha, la mejora de la detección para proporcionar la detección temprana es la vía más prometedora para reducir la mortalidad de NSCLC. Nuestro estudio refuerza aún más el argumento de que el suero miARN tienen el potencial de ser utilizado como una prueba de diagnóstico eficaz y no invasivo costo para el NSCLC, y potencialmente podría ser utilizado como una primera trama de línea para ayudar a estratificar los pacientes de riesgo para más, más caro o invasivo cribado regímenes.
Apoyo a la Información
Figura S1.
expresión diferencial de los genes miARN en sueros de pacientes NSCLC (cáncer) y controles sanos (normales) en conjunto de entrenamiento. Diff, la expresión diferencial entre los dos miRNAs, calculado como la diferencia entre los valores de Ct de los dos miRNAs indicados. Canales de pago, valor predictivo positivo; VAN, valor predictivo negativo; SENS, la sensibilidad; y SPEC, especificidad. El valor de corte utilizado para lograr la especificidad y la sensibilidad indicada está indicado para cada par de diferencias miARN
doi:. 10.1371 /journal.pone.0032307.s001 gratis (XLS)
Reconocimientos
Agradecemos a Ana Ward y los Dres. Gary Latham, Bernard Andrus, y Rolland Carlson por sus comentarios críticos y ayuda en la preparación de este manuscrito.