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PLOS ONE: Supera AUY922 Efectivamente MET y Axl mediada por resistencia a EGFR-TKI en el cáncer de pulmón Cells

2015/8/7


Extracto

La activación de las señales de bypass, como MET y AXL, se ha identificado como un posible mecanismo de la resistencia a EGFR-TKI. Debido a que varias oncoproteínas dependen de HSP90 para la maduración y estabilidad, se investigaron los efectos de AUY922, un no-geldanamicina inhibidor de HSP90 clase recién desarrollado, en células de cáncer de pulmón con MET y la resistencia mediada por AXL. Establecimos líneas celulares resistentes con HCC827 células que albergan un exón 19-mutación por deleción en el
EGFR
genes a través de la exposición a largo plazo a concentraciones crecientes de gefitinib y erlotinib (HCC827 /GR y HCC827 /ER, respectivamente). resistencia HCC827 /GR fue mediada por la activación de Met, mientras que la activación de AXL provocó la resistencia de las células /ER HCC827. tratamiento AUY922 suprime eficazmente la proliferación y la muerte celular inducida en ambas líneas celulares resistentes. En consecuencia, la regulación a la baja de EGFR, MET, y Axl dio lugar a una disminución de la activación de Akt. Los efectos inhibidores de AUY922 de cada receptor se confirmaron en células LK2 de genes transfectados. AUY922 también controlada efectivamente el crecimiento tumoral en modelos de xenoinjertos de ratón que contienen HCC827 /GR y células /ER HCC827. Además, AUY922 reduce la invasión y la migración por ambos tipos de células resistentes. Nuestros resultados del estudio muestran que AUY922 es una opción terapéutica prometedora para la resistencia mediada por AXL MET y para EGFR-TKI en el cáncer de pulmón

Visto:. Choi YJ, Kim SY, KS Así, Baek IJ, Kim WS , Choi SH, et al. (2015) AUY922 Efectivamente Supera MET y Resistencia AXL mediada por EGFR-TKI en células de cáncer de pulmón. PLoS ONE 10 (3): e0119832. doi: 10.1371 /journal.pone.0119832

Editor Académico: Javier S. Castresana, Universidad de Navarra, ESPAÑA

Recibido: 26 Agosto, 2014; Aceptado 16 de enero de 2015; Publicado: 17 Marzo, el año 2015

Este es un artículo de acceso abierto, libre de todos los derechos de autor, y puede ser reproducido libremente, distribuir, transmitir, modificar, construir, o de otra forma utilizado por cualquier persona para cualquier propósito legal. El trabajo está disponible bajo la licencia Creative Commons CC0 dominio público dedicación

Disponibilidad de datos:. Todos los datos relevantes se encuentran dentro del apoyo de sus archivos de información en papel y

Financiación: J. K. Rho se ha concedido una subvención de la Fundación Nacional de Investigación de Corea (NRF, 2013R1A1A2005112) y S. H. Choi había sido galardonado con una beca del Instituto Asan de Ciencias de la Vida (2014-597). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito

Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia

Introducción

factor de crecimiento epidérmico receptor tirosina quinasa (TKI EGFR) es uno de los agentes de la orientación de mayor éxito para tratar el cáncer. Sin embargo, el desarrollo de resistencia, a pesar de buenas respuestas iniciales, en pacientes con cáncer de pulmón EGFR mutante es inevitable [1,2]. A pesar de que casi la mitad de toda la resistencia TKI es causada por una mutación T790M secundaria [3,4], la activación de las señales de bypass como MET o AXL también podría contribuir a la adquisición de resistencia [5,6].

la amplificación del gen MET causa HCC827 células que albergan la mutación EGFR sensibilizante se vuelvan resistentes a gefitinib través de la activación ErbB3 dependiente de la vía phosphoinositide 3-kinase /Akt (PI3K) [5]. Los estudios iniciales indicaron que aproximadamente el 20% de los pacientes con resistencia adquirida a EGFR-TKI mostró
MET
amplificación de genes con o sin T790M [5,7], mientras que un estudio reciente de la frecuencia de los mecanismos de resistencia reveló que
MET
amplificación desarrollado en aproximadamente el 5% de los pacientes después de la resistencia [8]. Los tratamientos de combinación con inhibidores de EGFR y MET podrían anular la activación de señales descendentes, superando de esta manera la resistencia adquirida a los inhibidores de EGFR [5,9]. Varios inhibidores de la tirosina quinasa de MET y MET-bloqueo de los anticuerpos monoclonales, incluyendo SU11274, ARQ197 y onartuzumab, están en ensayos clínicos [10].

Recientemente, tres grupos de estudio independientes informaron que AXL, que se incluye en el TAM ( Tyro-Axl-Mer) receptor tirosina quinasa (RTK), podría ser una causa de la resistencia a EGFR-TKI en modelos preclínicos [6]. Aunque aproximadamente el 20% de los pacientes demostró AXL sobre-expresión después de desarrollar resistencia en ese estudio, la proporción exacta entre los pacientes con resistencia adquirida y los tratamientos que podrían ser usados ​​para superar los efectos de la orientación AXL en entornos clínicos no se habían determinado [11] .

proteína de choque térmico 90 (HSP90) juega un papel crítico en el mantenimiento de la homeostasis de proteínas celulares al afectar la maduración y estabilidad de proteínas [12]. Debido a que varias oncoproteínas dependen de su funcionamiento adecuado, HSP90 ha sido reconocida como una atractiva diana terapéutica [13]. Los ensayos clínicos dirigidos EGFR mutante, incluyendo el mutante T790M con inhibidores de HSP90, están en curso. Algunos estudios preclínicos han reportado resultados prometedores [14-16]. Sin embargo, no hay datos suficientes sobre cómo MET o mediada por AXL resistencia a EGFR-TKI en el cáncer de pulmón podría ser superada mediante la inhibición de HSP90. En nuestro estudio, se investiga la eficacia de AUY922, un no-geldanamicina inhibidor de HSP90 clase de MET y líneas celulares y modelos animales resistentes AXL mediada.

Materiales y Métodos

Cultivo celular y reactivos

HCC827 células se obtuvieron de la American Type Culture Collection (Rockville, MD). líneas celulares Gefitinib- y erlotinib resistente (HCC827 /GR y HCC827 /ER, respectivamente) fueron establecidos como parte de un estudio previo [17]. Las células se cultivaron en medio RPMI 1640 (Invitrogen, Carlsbad, CA) que contenía suero bovino fetal al 10% (FBS), 100 U /ml de penicilina, y 100 mg /ml de estreptomicina (Invitrogen) a 37 ° C en una atmósfera de 5% de CO
2. AUY922 se adquirió de Selleck Químicos (Houston, TX).

Ensayos de viabilidad celular

La viabilidad celular se evaluó mediante el ensayo MTT. Brevemente, se recogieron las células en la fase de crecimiento logarítmico, se sembró en placas de 96 pocillos y cultivadas durante la noche. Las células se expusieron a varias dosis de AUY922 en medio que contiene 1% de FBS. Después de 72 horas, se realizó el ensayo de MTT como se describe por Carmichael et al. [18]. Para validar los efectos anticancerígenos de AUY922, las células se trataron con las dosis indicadas de AUY922 durante 72 horas y las células unidas se tiñeron con una solución de azul de tripano al 0,2% que contiene 50% de metanol. La viabilidad celular se determinó utilizando un contador de células automático ADAM-MC (NanoEnTek, Seúl, Corea) en accordiance con las instrucciones del fabricante. Los resultados son representativos de al menos tres experimentos independientes, y las barras de error indican la desviación estándar (SD).

Western blot

Para el Western Blot, las proteínas se separaron en geles de poliacrilamida-SDS y electrotransfirieron a membranas Immobilon-P (Millipore, Bedford, MA). Se obtuvieron anticuerpos específicos para p-EGFR (Tyr1173), EGFR, AXL, MET, Akt, p-Erk, Erk, Myc, y β-actina de Santa Cruz de Biotecnología (Santa Cruz, CA), y los anticuerpos para p-MET ( Tyr1234 /1235), p-AXL (Tyr702), p-Akt, PARP y caspasa-3were obtenido de Señalización celular Tecnología (Beverly, MA). Las proteínas se detectaron utilizando un kit de aumento de quimioluminiscencia Western Blot (Amersham Biosciences, NJ) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

La transfección transitoria

pcDNA3 /EGFR (WT) y pcDNA3 /EGFR (delE746- A750) fueron proporcionados por el Dr. TY Kim (Colegio de Medicina de la Universidad Nacional de Seúl, Seúl, Corea del Sur). pCMV6-Entrada /MET se adquirió de OriGene (Rockville, MD). pcDNA3.1 /AXL (WT) fue construido como parte de un estudio anterior [6]. Las transfecciones se realizaron utilizando Lipofectamine 2000 (Invitrogen) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

análisis del ciclo celular

Las células fueron sembradas en placas de 6 pocillos y se trataron durante los tiempos indicados con 1 mol /L AUY922. Ambos se recogieron las células adherentes y flotantes para su análisis. Las células se fijaron en etanol al 70% enfriado con hielo durante 1 hora y se incubaron en 50 mg /ml de RNasa A y 25 mg /ml de yoduro de propidio (PI) durante 30 minutos a 37 ° C. El análisis cuantitativo de la distribución del ciclo celular se realizó mediante citometría de flujo FASCalibur (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ).


En vivo
estudio

Mujer inmunodeficiencia combinada severa (SCID ) ratones (18-20 g; 5 semanas de edad; 5 ratones /grupo) fueron adquiridos de Charles River Laboratories. Todos los procedimientos experimentales se llevaron a cabo siguiendo un protocolo aprobado por el Comité de Cuidado y Uso de Animales institucional del Instituto Asan de Ciencias de la Vida (2013-01-066). Los tumores se pueden desarrollar mediante la implantación de células (1 × 10
6 HCC827 células /GR o 5 × 10
6 células HCC827 /ER) en Matrigel (BD Biosciences) y posteriormente en los flancos de ratones. El tratamiento con el control del vehículo comenzó cuando los tumores alcanzaron un volumen de 50 a 100 mm
3 (20 mg /kg AUY922 través de la inyección intra-peritoneal; 5 días /semana). El tratamiento se detuvo en el día indicado, y los ratones recibieron exámenes de seguimiento para documentar la recurrencia del tumor. Para medir el tamaño del tumor, la longitud (
L
) y anchura (
W
) de cada tumor se midió usando calibres, y el volumen tumoral (TV) se calculó como TV = (
L
×
W

2) /2. La tinción inmunohistoquímica se realizó usando un anticuerpo primario específico (Ki-67; DakoCytomation, Los Angeles, CA), el kit de tinción de EnVision Plus (DakoCytomation), y el terminal deoxynucleotidyl fin de etiquetado dUTP nick transferasa mediada APO-Direct kit de ensayo (TUNEL) (Millipore) según las indicaciones de las instrucciones del proveedor. El análisis cuantitativo de cada sección teñida se realizó contando todas las células inmunopositivas en 5 campos seleccionados arbitrariamente (× 400 aumentos).
ensayos
Invasión y migración

Todos los ensayos de migración celular y la invasión se realizaron según un método descrito previamente [19]. Los resultados son representativos de al menos tres experimentos independientes, y las barras de error indican desviaciones estándar.

Resultados

AUY922 efectivamente inhibe la proliferación de células gefitinib /erlotinib resistente

El gefitinib /sublíneas erlotinib-resistentes derivados de la línea celular parental HCC827, sensibles se establecieron como parte de un estudio previo [17]. Las células se trataron con AUY922 de una manera dependiente de la dosis para determinar si se inhibe el crecimiento celular en las células gefitinib /erlotinib-resistente. Como se muestra en la Fig. 1, las dos líneas celulares resistentes demostraron resistencia cruzada a gefitinib o erlotinib, respectivamente, y también eran resistentes a afatinib. Sin embargo, el tratamiento AUY922 suprime eficazmente la proliferación de la línea parental y las dos líneas celulares resistentes (Fig. 1D). Se observaron los efectos inhibidores del crecimiento de AUY922 incluso cuando la concentración de fármaco era baja (Fig. 2A).

Las células se trataron con las dosis indicadas de gefitinib, erlotinib, afatinib, o AUY922 durante 72 horas en medio que contenía 1% de FBS. La viabilidad celular se determinó usando el ensayo de MTT.

A, Las células se trataron con las dosis indicadas de AUY922 durante 72 horas en medio que contiene 1% de FBS. Se adjuntan las células se tiñeron con solución de azul de tripano (arriba). También se muestra la viabilidad celular basado en el recuento de células (parte inferior). Las barras representan la media ± desviación estándar de tres pozos. B, Las células tratadas con AUY922, similar al panel A. Después de 48 horas, se recogieron las células y moléculas de señalización relacionadas con EGFR se evaluó mediante Western Blot. C, las células fueron tratadas con LK2 EGFR de tipo salvaje que contiene el vector, del E746-E750, MET, o AXL y las dosis indicadas de AUY922 durante 12 horas.

Hemos demostrado anteriormente que la resistencia de HCC827 /GR y las células HCC827 /ER está mediada por la activación de MET o AXL, respectivamente [6,17]. Informes anteriores han indicado también que un gran número de proteínas cliente de HSP90 tiene un papel crucial en la progresión del cáncer, y que la inhibición de HSP90 degrada proteínas cliente [13,20,21]. Por lo tanto, se investigó si AUY922 afecta a la estabilidad del MET o AXL. Se encontró que la inhibición de HSP90 por AUY922 a conducir a la degradación significativa de EGFR, MET, y Axl en una dosis (Fig. 2B) y de manera dependiente del tiempo (S1 Fig.). En consonancia con esto, el tratamiento AUY922 también disminuyó el nivel de proteínas inducidas artificialmente en las células LK2 que fueron transfectadas con los genes, como
EGFR gratis (WT),
EGFR gratis (E746-E750 Del),
MET
, y
AXL gratis (Fig. 2C).

Muchos inhibidores de HSP90 induce la detención del ciclo celular y la apoptosis en varias células del cáncer [22-26]. Para confirmar aún más los efectos de AUY922, se examinaron los cambios del ciclo celular en las células PI-teñidas utilizando el análisis FACS. Como se muestra en la Fig. 3A, el tratamiento AUY922 aumentó el número de células en G2 /M fase y inducida sub-G1 (es decir, muerte celular) después de 48 horas. De acuerdo con estos resultados, PARP dependiente del tiempo y la caspasa-3 escisión también se observó (Fig. 3C). Estos datos indicaron que los efectos antitumorales de AUY922 en células parentales y resistentes pueden ser el resultado de la inducción de la detención del ciclo celular y la muerte celular.

A y B, las células se trataron con 0,1 mol /L AUY922 para 24-72 horas. Para analizar la distribución del ciclo celular, las células recogidas se analizaron por citometría de flujo. C, los lisados ​​celulares se analizaron mediante transferencia Western. Los anticuerpos indicados se utilizaron para evaluar la muerte celular por apoptosis.

AUY922 vence la resistencia adquirida a gefitinib /erlotinib en modelos de xenoinjertos

HCC827GRand HCC827 /xenoinjertos de tumores ER se establecieron en ratones SCID a una mayor evaluar la eficacia antitumoral de AUY922. La tasa de crecimiento del tumor de HCC827 células /ER fue menor que la de las células HCC827 /GR. tratamiento AUY922 dio como resultado la inhibición sustancial del crecimiento tanto en las células (Fig. 4A). suprimido el crecimiento del tumor se mantuvo en HCC827 xenoinjertos /ER a través de 2 semanas después de la interrupción del tratamiento, mientras que los tumores en el HCC827 /GR xenoinjerto lentamente volvió a crecer tras la retirada del fármaco. Análisis inmunohistoquímico de tejidos tumorales revelaron que la proliferación de células había disminuido y se indujo la apoptosis en los tumores por tratamiento AUY922 (Fig. 4B-C).

A, los ratones SCID con HCC827 establecido /GR y de células tumorales HCC827 /ER xenoinjertos fueron tratados con AUY922. El tamaño del tumor se midió en los días indicados, y se calculó el volumen del tumor. Las flechas significan último día de tratamiento de drogas (flecha roja, HCC827 /GR; flecha de color púrpura, HCC827 /ER). Las barras representan el volumen medio del tumor ± SD. B y C, la tinción inmunohistoquímica para Ki-67 y TUNEL seguido por análisis cuantitativo de la proliferación y la apoptosis en (B) Ki-67
+ células y (C) TUNEL
+ células.
p * Hotel & lt; 0,01 y
** p & lt
; 0,001 en comparación con el control.

AUY922 disminuye la movilidad celular

La inducción de AXL o MET se asocia con aumento de la movilidad celular en el cáncer [6,10,27-29]. Por ello, investigó los cambios en la movilidad celular, tanto en las células de los padres y gefitinib /erlotinib-resistente. Como era de esperar, las capacidades migratorias y invasoras en ambos tipos de células resistentes aumentaron drásticamente en comparación con células parentales (Fig. 5). AUY922 tratamiento dio lugar a la reducción de las capacidades migratorias e invasivas, tanto en células resistentes y parentales.

Las células fueron sembradas en cualquiera de colágeno o filtros de policarbonato recubierto con Matrigel para determinar sus potenciales migratorias e invasivas, respectivamente. Las células se incubaron en cámaras de Boyden modificadas con o sin las dosis indicadas de AUY922 durante 24 horas, y las células que penetró el filtro se tiñeron y se contaron usando un microscopio de luz. Las barras representan la media ± desviación estándar de tres pozos.
p * Hotel & lt; 0,01 y
** p & lt
; 0,001 en comparación con las células HCC827.

Discusión

Desde variantes mutantes EGFR T790M, entre ellos, se muestran en primer lugar que se asocia con proteínas chaperonas HSP90 [16], múltiples líneas similares de pruebas se han acumulado. T790M células que expresan que son resistentes incluso a irreversible de EGFR-TKI son sensibles a la inhibición de HSP90. la inhibición de HSP90 conduce a la regresión de EGFR
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impulsada adenocarcinoma de pulmón murino, independientemente de la presencia de T790M [15]. Bao et al. también han informado de que la orientación HSP90 con CUDC-305, un inhibidor de HSP90, puede superar erlotinib-resistencia en el cáncer de pulmón de células no pequeñas [30]. Además, 17-DMAG reduce el crecimiento de células de cáncer de pulmón con EGFR mutante, independientemente de la presencia de una mutación T790M en ratones modelos de xenoinjerto [14]. En la actualidad, más de una docena de los inhibidores de HSP90 están inscritos en los ensayos clínicos, algunos de los cuales están investigando la resistencia T790M mediada por EGFR-TKI [20].

Varios estudios anteriores han revelado que el MET es una proteína Hsp90 cliente y es sujeto a la degradación a la inhibición de HSP90. SNX-2112, un nuevo inhibidor de molécula pequeña de HSP90, reduce EGF diafonía y la activación del receptor c-Met a través de la degradación de c-Met en células de cáncer de pulmón [31]. Ueno et al. han demostrado que AUY922 es eficaz contra la mayoría de las líneas celulares de cáncer, a pesar de las alteraciones moleculares conocidos. Se encontró que el tratamiento AUY922 para inducir el agotamiento significativo de proteínas cliente, tales como EGFR, MET, y Akt, lo que aumenta la apoptosis [32]. Aunque estos estudios han demostrado la capacidad de los inhibidores de HSP90 para regular a la baja MET, no evaluaron la resistencia mediada por MET de EGFR-TKI en el cáncer de pulmón. De acuerdo con ello, Koizumi et al. primero demostrado la eficacia de los inhibidores de HSP90 para superar la resistencia provocada por MET de señalización [33]. En ese estudio, HGF-gen transfectado células Ma-1 con EGFR
L858R
(Ma-1 /HGF) no respondieron a erlotinib, mientras que 17-DMAG inhibe la proliferación celular y la apoptosis inducida por la disminución de la expresión de EGFR y MET, incluso bajo estímulos HGF. modelos clínicamente relevantes adicionales fueron estudiados por Xu et al. [34]. Estos autores generaron ratones transgénicos que expresan modelos mutante del19-T790M o L858R-EGFR T790M (cada uno con MET concurrente sobre-expresión). EGFR combinación y la inhibición se reunió con WZ4002 (una tercera generación de EGFR-TKI) y crizotinib demostraron un control muy eficaz en estos modelos de cáncer, pero ninguno de estos fármacos solos podrían inducir una respuesta de supresión. Estos autores encontraron además que los efectos de la 17-DMAG son comparables a crizotinib cuando se combina con WZ4002, lo que sugiere que la inhibición MET es posible a través de HSP90. Además, se observó un efecto similar en otro modelo de ratón que lleva gefitinib resistente amplificado Met-HCC827 xenoinjertos. Estos resultados son casi de acuerdo con nuestros resultados actuales en un modelo HCC827 /GR. Sin embargo, nuestros resultados actuales representan mejor un entorno clínico, porque nuestras células HCC827 /GR fueron establecidos por la exposición continua de drogas a largo plazo.

En comparación con el trato de economía, hay pocos datos sobre cómo AXL depende de HSP90 para la estabilidad. Recientemente, Krishnamoorthy et al. informó de que 17-AAG induce la regulación por disminución de endógeno o ectópica expresó la proteína AXL en líneas celulares de cáncer de tiroides y en las células HeLa en un tiempo y manera dependiente de la dosis, lo que lleva a la inhibición de la señalización mediada por AXL y la actividad biológica [35 ]. Para nuestro conocimiento, nuestro estudio es el primero en demostrar que la inhibición de HSP90 por AUY922 puede superar la resistencia mediada por AXL en líneas celulares de cáncer de pulmón y modelos animales. Tomados en conjunto, por lo tanto, la evidencia indica que, debido a la inhibición de HSP90 puede superar la resistencia adquirida a EGFR-TKI causada por las tres principales mecanismos de resistencia (T790M, MET, y AXL), la inhibición de HSP90 podría ser una opción prometedora para el tratamiento de la resistencia a EGFR-TKI.

en los estudios presentes, hemos demostrado que AUY922 suprimió completamente el crecimiento del tumor tanto en las células. Sin embargo, tanto las células resistentes mostraron los diferentes patrones en la tasa de crecimiento y la regeneración después de la interrupción del tratamiento. HCC827 células /GR crecen más rápido que las células HCC827 /ER bajo la condición de libre de drogas y mostraron recrecimiento tras la retirada del fármaco. La tasa de crecimiento de las células /ER HCC827 fue más lento que las células HCC827 /GR
in vitro gratis (S2 Fig.). Aunque varios factores pueden afectar el crecimiento del tumor en modelos de xenoinjerto, las diferencias de la tasa de crecimiento pueden influir en el crecimiento del tumor. En realidad, las células HCC827 /ER tenían EGFR inferior, así como la actividad de Akt que las células HCC827 /GR en nivel basal (datos no mostrados). No hubo diferencias en la apoptosis, necrosis, detención del ciclo celular (G2 /M detención, S3 Fig.) Y la proliferación entre estos dos tumores. Por lo tanto, la diferente respuesta a la retirada del fármaco sigue siendo poco clara.

metástasis depende de varios procesos, tales como el desprendimiento de las células tumorales desde el tumor primario, la migración, invasión del estroma y los vasos sanguíneos circundantes, y la supervivencia y la proliferación en sitios distantes. factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) es el ligando sólo se conoce de la MET y se reconoce como un factor derivado de fibroblastos que promueve el desprendimiento de las células epiteliales y estimula la invasión [36,37]. MET afecta a la migración celular, el crecimiento en la embriogénesis, y controla el crecimiento y la metástasis en células de cáncer [38]. En consecuencia, Wu et al. han demostrado que LY2801653 (un inhibidor de MET) inhibe significativamente el crecimiento del tumor primario y la metástasis a los ganglios linfáticos y la pared torácica en modelos ortotópico H441 [39]. AXL también está asociada con la invasión de células tumorales y la metástasis y promueve el crecimiento tumoral en diversos tipos de cáncer. expresión AXL ectópico forzado induce las características altamente invasivos visto en células de cáncer de mama MCF7 de fenotipos débilmente invasivas iniciales, mientras que el uso de tratamiento shRNA para inducir AXL caída disminuye las capacidades invasivas y migratorias de las células cancerosas altamente invasivos [29]. Además, AXL es necesaria para que las células de cáncer de mama MDA-MB-231 a la metástasis a los pulmones en modelos ortotópico [27]. En nuestros análisis actuales, AUY922 reduce significativamente las capacidades invasivas y migratorias de las células tumorales con MET o activación de AXL. Otras investigaciones sobre el papel de HSP90 se necesitan inhibidores de la metástasis del cáncer.

En resumen, AUY922 ejerce un control efectivo sobre los fenotipos malignos que son impulsados ​​por MET y AXL, incluyendo resistencia a los medicamentos, en el cáncer de pulmón.

Apoyo a la Información
S1 Fig. Las células se trataron con 0,1 mol /L AUY922 de una manera dependiente del tiempo. Los experimentos se realizaron
como se describe en la Fig. 2A y B.
doi: 10.1371 /journal.pone.0119832.s001 gratis (TIF)
S2 Fig. Las células (5 x 10
3) se sembraron en placas de 24 pocillos con medio terminados que contienen 10% de SFB El número de células
se determinaron con un contador automático de células ADAM-MC
doi:.. 10.1371 /registro diario. pone.0119832.s002 gratis (TIF)
S3 Fig. Los tejidos tumorales de cada grupo se homogeneizaron para la preparación de lisado y se analizaron por Western blot para G2 evaluado /M detención
. Ciclina B1, los anticuerpos p21 y cdc2 se adquirieron de Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA), y p-cdc2 ( Tyr15) se obtuvo de Señalización celular Tecnología (Beverly, MA)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0119832.s003 gratis (TIF)

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