Extracto
biotinidasa fue identificado en secretoma análisis de líneas celulares de cáncer de tiroides utilizando la proteómica. El objetivo del presente estudio fue analizar la expresión de biotinidasa en tejidos de cáncer de tiroides y muestras de aspiración con aguja fina (FNA) para evaluar su potencial diagnóstico y pronóstico en el cáncer de tiroides. El análisis inmunohistoquímico de biotinidasa se llevó a cabo en 129 cáncer papilar de tiroides (PTC, 34 tejidos tiroideos benignos y 43 muestras FNA y se correlaciona con el pronóstico de los pacientes. expresión general de biotinidasa se redujo en los PTC en comparación con nódulos benignos (p = 0,001). Comparación de la agresiva y no agresiva PTC mostró disminución en la expresión general de biotinidasa en el primero (p = 0,001). la pérdida de expresión global de biotinidasa se asoció con una baja supervivencia libre de enfermedad (p = 0,019, la relación de peligros (HR) = 3,1). se examinó el efecto de compartimentación subcelular de biotinidasa nuclear y citoplasmática en la supervivencia del paciente Disminución de la expresión nuclear de biotinidasa se observó en PTC en comparación con tejidos benignos (p & lt; 0,001).. Tras la estratificación dentro de PTC, la expresión nuclear se redujo en agresivo en comparación con los tumores no agresivos (p & lt; 0,001). El análisis de supervivencia de Kaplan-Meier mostró asociación significativa de la pérdida de expresión de biotinidasa nuclear con la supervivencia libre de enfermedad reducida (p = 0,014, HR = 5,4). expresión de biotinidasa citoplasmática se redujo en los cánceres de tiroides agresivos en comparación con los tumores no agresivos (p = 0,002, odds ratio (OR) = 0,29) que era evidente por su asociación significativa con el estadio T avanzada (p = 0,003, OR = 0,28), metástasis ganglionar (p & lt; 0,001, OR = 0,16), el estadio TNM avanzada (p & lt; 0,001, OR = 0,21) y la extensión extratiroidea (p = 0,001, OR = 0,23). Sin embargo, en el análisis multivariante extensión extratiroidea surgió como el factor pronóstico más importante para los carcinomas de tiroides agresivos (p = 0,015, HR = 12,8). En conclusión, la pérdida de la expresión global de biotinidasa es un nuevo marcador de la agresividad del cáncer de tiroides
Visto:. Así AK-C, J Kaur, Kak I, J Assi, MacMillan C, Ralhan R, et al. (2012) biotinidasa es un marcador para la novela papilar de tiroides Cáncer de agresividad. PLoS ONE 7 (7): e40956. doi: 10.1371 /journal.pone.0040956
Editor: Kapil Mehta, Universidad de Texas MD Anderson Cancer Center, Estados Unidos de América
Recibido: 26 Marzo, 2012; Aceptado: 15 de Junio de 2012; Publicado: 23 de julio 2012
Derechos de Autor © 2012 Así et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. La financiera apoyo de esta labor desde el Monte Sinaí Fundación de Toronto, Da Vinci Gala para recaudar fondos, Alex Shnaider y Simona Presidente de cáncer de tiroides, la Temmy Latner /Fundación Dynacare, y el Departamento hospital Mount Sinai de Medicina Fondo de Investigación se agradece. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de tiroides es el tumor maligno más frecuente endocrino y da cuenta de & gt; 90% de los cánceres de las glándulas endocrinas, con una incidencia anual estimada de 122,803 casos en todo el mundo [1]. La mayoría de los cánceres de tiroides tienen un pronóstico excelente; tanto los cánceres de tiroides papilar y folicular tienen alrededor de 85% a 90% las tasas de curación, si se detecta a tiempo y se trata adecuadamente. Sin embargo, un pequeño porcentaje es, de hecho agresivo y puede desarrollar metástasis a distancia que conduce a una mayor mortalidad [2]. En vista del aumento más rápido en la incidencia de cáncer de tiroides que cualquier otro tumor sólido (alrededor de 3 por cada 100.000 personas al año), el cáncer de tiroides anaplásico y otras variantes agresivas plantean un gran desafío para los oncólogos [3]. Anaplásicos cuentas cáncer de tiroides para menos del 2% de todos los cánceres de tiroides, sin embargo, hace que hasta el 50% de las muertes por este tipo de cáncer cada año; El 90% de los pacientes con cáncer de tiroides anaplásico mueren dentro de los 6 meses del diagnóstico (la tasa de supervivencia media es de 4 meses) [3], [4]. cáncer de tiroides anaplásico y variantes agresivas de cáncer de tiroides papilar, folicular y los cánceres de tiroides metastásico tienen un alto riesgo de recurrencia, la supervivencia libre de enfermedad más corta y la muerte dentro de 5 a 10 años [3]. Además, cáncer de tiroides anaplásico es muy resistente a la terapia convencional del cáncer. En consecuencia, el cáncer de tiroides anaplásico y variantes agresivas son la fuente de morbilidad y mortalidad significativa en una enfermedad que de otra manera se jacta de un pronóstico excelente. La clave para reducir la amplia brecha entre el pronóstico de variantes agresivas y no agresivas es detectar el factor (s) instigar que son responsables de la conducta agresiva. Actualmente, hay una falta de marcadores moleculares para predecir la agresividad del cáncer de tiroides
En la actualidad, la aspiración con aguja fina (FNA) es la técnica de pre-operatorio más comúnmente utilizado para el diagnóstico de los nódulos tiroideos & gt;. 1 cm de tamaño. Sin embargo, incluso el uso de la PAAF guiada por ultrasonido es a menudo plagada de resultados de la biopsia no concluyentes (10-20% de todos los casos) [5]. Estos pacientes se someten a tiroidectomía posterior, un procedimiento invasivo que es a menudo innecesario, ya que la mayoría de las lesiones sospechosas son benignos (& gt; 80%) [6]. Además, los casos recurrentes requieren un tratamiento adicional en forma de una cirugía o ablación con yodo radiactivo que compromete aún más su calidad de vida. Es el momento oportuno para la identificación temprana de los casos agresivos a (s) de detección de biomarcadores y la categorización de los pacientes de alto riesgo. Por lo tanto, existe una necesidad urgente de que la identificación de biomarcadores que se puede utilizar como un complemento de la FNA para distinguir los nódulos tiroideos benignos de los tumores malignos (especialmente para un diagnóstico más preciso de los casos indeterminados) y ayudar a la discriminación de los cánceres de tiroides agresivos de sus contrapartes no agresivos después de la cirugía para definir mejor el manejo del paciente
.
En la búsqueda de nuevos biomarcadores de cáncer de este tipo de cáncer, analizamos la secretoma de líneas celulares de cáncer de tiroides para identificar proteínas secretadas cáncer relevantes que pueden servir como biomarcadores potenciales [7] . Una de las proteínas candidatos identificados en nuestro estudio fue de biotinidasa, una enzima que cataliza la hidrólisis de biocitina, el producto de la degradación de la carboxilasa de biotina-dependiente, a la biotina y lisina. La deficiencia de biotina puede conducir a la disminución de la actividad de la sintetasa holocarboxilasa, una enzima que media en la unión de la biotina a histonas [8], un componente crucial de los eventos epigenéticos que regulan las estructuras de la cromatina y la función del gen. Se observó una baja nivel de biotinidasa en agresiva anaplásico línea celular derivada (CAL-62) en comparación con la línea celular de cáncer de tiroides papilar no agresiva derivada (TPC-1). La relevancia clínica se sugirió mediante la demostración de niveles reducidos de biotinidasa en agresivas de cáncer de tiroides pacientes sueros, en comparación con los no agresivos y benignos pacientes sueros por transferencia de western [7]. En el estudio actual, nuestro objetivo principal fue determinar la importancia clínica de biotinidasa como marcador para distinguir los tumores tiroideos malignos y benignos, así como para estratificar PTC agresivo y no agresivo que podría servir como una herramienta potencial para la mejora de la gestión de este tipo de cáncer .
Materiales y Métodos
Características clinicopatológicas de los pacientes y muestras de tejido
Este estudio fue aprobado por el Consejo de Ética de Investigación del hospital Monte Sinaí, Toronto, Ontario, Canadá. bloques de parafina de tejido fijados con formol Archivado desde el Hospital Mount Sinai Banco de Tumores se recuperaron, revisado por el patólogo (CM), y se cortaron para proporcionar secciones de 5 micras de espesor para la tinción inmunohistoquímica. Los diagnósticos se derivan de los análisis histopatológicos y el examen clínico. casos benignos incluyen bocio multinodular, nódulos hiperplásicos y adenomas foliculares, mientras que todos los tumores no agresivos y agresivas aquí examinados estaban bien diferenciados carcinomas papilares de tiroides, que incluía las siguientes variantes: clásico, folicular, oncocítico esclerosante difusa, y de células altas. características que definen la agresividad del tumor eran clasificación TNM en estadio IV, metástasis a distancia, invasión perineural, y la recurrencia de la enfermedad o la persistencia. consideración adicional fue dado a los siguientes factores de riesgo potencial de agresividad entre ellos: TNM en estadio III, la invasión vascular, la extensión extratiroidea, metástasis de ganglios linfáticos, y papilar tipo de variante cáncer de tiroides no clásica (sobre todo la presencia de tres o más de estos factores en el casos examinados)
sobre la base de estos criterios, las 163 muestras de tejidos examinados en este estudio fueron clasificados como benignos 34 (edad media: 51 años, rango:. 16 a 76 años), no agresivo (mediana de edad 81 : 44 años, rango: 23 a 71 años), y el 48 agresiva (edad media: 52 años, rango:. 21 a 86 años) los tumores
bloques de celdas incluidas en parafina fijadas con formalina de aspiración con aguja fina preparados a partir de 43 pacientes se obtuvieron de manera similar desde el Monte Sinai hospital Banco de Tumores y cada muestra de diagnóstico se confirmó mediante examen histológico de la pieza de tiroidectomía respectivos (CM). En consecuencia, las FNA muestras se clasificaron como 23, 13 no agresivo, y 7 casos benignos agresivos.
El seguimiento de los pacientes los datos fueron recuperados de la base de datos clínicos para correlacionar la expresión de la proteína en los tumores con el resultado clínico para la evaluación de la importancia pronóstica de biotinidasa. Los pacientes fueron seguidos durante un período máximo de 19,5 años.
Análisis inmunohistoquímico de biotinidasa expresión en carcinomas y tiroides FNA muestras
Las láminas fueron immunostained como se describe anteriormente [9], utilizando α-biotinidasa K-17 anticuerpo policlonal de conejo (Santa Cruz Biotechnology; 1:100 dilución) generado contra un mapeo de péptidos a una región interna de la biotinidasa humana. La recuperación de antígeno se llevó a cabo con tampón Tris-EDTA (base Tris 10 mM y EDTA 1 mM con 0,05% de Tween 20, pH 9,0) en un microondas durante 20 min. En las secciones de tejido de control negativo, el anticuerpo primario fue sustituido por IgG de ratón no inmune específico de isotipo. Las secciones fueron evaluados mediante un examen microscópico de luz. Las imágenes fueron capturadas utilizando el integrador de sistemas Visiopharm (Horsholm, Dinamarca).
Evaluación de la tinción inmunohistoquímica
tinción immunopositive se evaluó en cinco áreas de las secciones de tejido como se describe [9]. Las secciones se puntuaron como positivos si las células epiteliales mostraron immunopositivity en el citoplasma y /o núcleo cuando es observado por dos evaluadores que desconocían el resultado clínico. Estas secciones se puntuaron como sigue: 0, & lt; 10% de células; 1, 10 a 30% de células; 2, 30-50% de las células; 3, 50-70% de las células; y 4, & gt; 70% de células mostraron inmunorreactividad. Las secciones también se anotó semi-cuantitativamente sobre la base de la intensidad de la siguiente manera: 0, ninguno; 1, leve; 2, moderado; y 3, intenso. Por último, una puntuación total (que va de 0 a 7) se obtuvo mediante la adición de las puntuaciones de positividad porcentaje y la intensidad para cada uno de la tiroides benigna y las secciones de tejido tumoral maligno. Los datos inmunohistoquímicos fueron sometidos a análisis estadístico.
Estudio de Seguimiento
De los casos de cáncer de tiroides 129, estaban disponibles para 116 (90%) pacientes los datos de seguimiento, mientras que 13 pacientes ( 10%) se perdieron durante el seguimiento. pacientes con cáncer de tiroides fueron controlados durante un período máximo de 19,5 años (rango 2-234 meses, con una media de 43 meses y la mediana de 29 meses). Se observó recurrencia con o sin metástasis en 19 de 116 (16,4%) pacientes monitorizados durante el seguimiento. Noventa y siete pacientes que no mostraron recurrencia estaban vivos hasta el final del período de seguimiento. La supervivencia libre de enfermedad se expresa como el número de meses desde la fecha de la cirugía hasta la recurrencia o hasta que el último sea posible el seguimiento en caso de pacientes que están libres de la enfermedad.
embebidos en parafina secciones de los nódulos tiroideos benignos y tumores malignos se tiñeron utilizando el anticuerpo policlonal anti-biotinidasa como se describe en la sección Métodos: a) la sección de tejido benigno que muestra la inmunotinción de biotinidasa nuclear y en general; b) papilar que ilustra la reducción de la sección del cáncer de tiroides no agresivo en la tinción nuclear y el aumento de la inmunotinción de biotinidasa citoplasmática en las células tumorales; c) la sección del cáncer de tiroides papilar que muestra agresiva reduce general (nuclear y citoplasmática) inmunotinción de biotinidasa; d) la sección del cáncer de tiroides utilizado como control negativo, que no muestran inmunoreactividad en las células (a-d, aumento original x 400).
Análisis estadístico
Los datos inmunohistoquímicos fueron sometidos a análisis estadístico utilizando el software 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL) SPSS. Se utilizaron gráficos de dispersión para determinar la distribución de la expresión de biotinidasa citoplasmática, nuclear y en general en los cánceres tiroideos benignos, no agresivos y agresivos. La sensibilidad y especificidad fueron calculados y cuantificados usando análisis de las características de funcionamiento del receptor (ROC). Sobre la base de la sensibilidad y especificidad óptima según lo revelado por el análisis ROC, puntos de corte se generaron para la expresión de proteínas de biotinidasa. Para la expresión general de biotinidasa, un valor de corte de ≥3.6 se definió como la inmunorreactividad positiva para el análisis estadístico. Un valor de corte de ≥2 y ≥4 se definió como criterio positivo para nuclear individual y immunopositivity biotinidasa citoplasmática, respectivamente, para el examen estadístico detallado. Las relaciones entre la expresión de biotinidasa y parámetros clínico se sometieron a pruebas de chi-cuadrado y la prueba exacta de Fischer. Dos lados valores de p se calcularon y p & lt; 0,05 se consideraron significativos. Significado pronóstico de la expresión general, nuclear y citoplasmática de biotinidasa se evaluó mediante análisis de regresión de supervivencia de Kaplan-Meier y multivariante de Cox-Riesgo Proporcional.
Los diagramas de dispersión que muestran distribución de las puntuaciones de inmunotinción totales determinados por IHC de secciones de tejido de benigna (n = 34), no agresivo (n = 81) y agresivo (n = 48) tejidos de cáncer de tiroides. El eje vertical da la puntuación total de inmunohistoquímica, como se describe en los métodos. a) Se observó una menor acumulación nuclear de biotinidasa en los cánceres de tiroides agresivos y no agresivos analizados. Diagrama de dispersión que muestra la reducción de biotinidasa nuclear inmunotinción con el aumento de la agresividad del tumor; b) Aumento de la acumulación citoplasmática de biotinidasa se observó en el cáncer de tiroides analizado con reducción en la expresión en agresivo en comparación con no agresivo PTC; c) Diagrama de dispersión mostró una reducción global de biotinidasa inmunotinción con el aumento de la agresividad del tumor.
El eje vertical de cada curva indica la sensibilidad y el eje horizontal indica la 1-especificidad. La sensibilidad, la especificidad y los valores de AUC se resumen en las Tablas 2a y 2b.
Resultados
Análisis inmunohistoquímico de biotinidasa Expresión en tejidos tiroideos
De los 34 benigna tejidos analizados, 33 tejidos (97,1%) mostraron en general, así como la acumulación nuclear de la proteína de biotinidasa (Tabla 1, Figura 1a). expresión citoplásmica de biotinidasa se observó en 9 (26,5%) tejidos benignos (Tabla 1). Entre los tejidos de la tiroides malignos, 39/129 (30,2%) demostraron la pérdida de expresión de biotinidasa general (tanto en el núcleo como en el citoplasma). Al estratificar en compartimentos subcelulares nucleares y citoplasmáticos, 84/129 casos (65,1%) mostraron una pérdida de biotinidasa nuclear y 87/129 (67,4%) mostraron una mayor expresión citoplasmática en las células tumorales (Tabla 1, Figura 1b). En particular, la pérdida de general, así como de biotinidasa nuclear y aumento de la expresión de biotinidasa citoplasmática fue significativa en los tumores malignos en comparación con los nódulos benignos (p = 0,001, P & lt; 0,001, p & lt; 0,001, respectivamente, Tabla 1). En el cáncer de tiroides agresivo, hubo una reducción significativa en la expresión general de biotinidasa (p = 0,001) en ambos nucleares (P & lt; 0,001) (p = 0,002) y los niveles citoplasmáticos en comparación con los tumores de tiroides no agresivos (Tabla 1, Figuras 1c y 2 ). Sin inmunotinción se observó en las secciones de tejidos utilizados como controles negativos, donde el anticuerpo primario fue sustituido por isotipo IgG específica (Figura 1d).
FNA especímenes de benigna (panel A), no agresivo cáncer papilar de tiroides (panel b ), y el cáncer de tiroides (panel C) papilares casos agresivos Inmunomarcamos con 1:100 K-17 anticuerpo policlonal de conejo α-biotinidasa. FNA muestra utilizada como control negativo no muestra ninguna inmunorreactividad en las células (Panel D). Las microfotografías muestran una pronunciada disminución de la expresión de biotinidasa nuclear en los casos más agresivos de cáncer de tiroides y se presentan a 400 × ampliación original.
reducción de la expresión general de biotinidasa correlacionada con la agresividad del tumor
La reducción de la expresión general de biotinidasa correlacionó significativamente con la etapa avanzada T (p = 0,001, OR = 4,29), metástasis ganglionar (p & lt; 0,001, OR = 6,96), etapa III + IV tumores (p = 0,001, OR = 4,65), y la extensión extratiroidea ( p & lt; 0,001, OR = 5,27). Por otra parte, la pérdida de biotinidasa citoplasmática y nuclear de forma individual también mostró una asociación significativa con el estadio T avanzada (p = 0,003, p & lt; 0,001, respectivamente), metástasis ganglionar (p & lt; 0,001, p & lt; 0,001, respectivamente), en estadio III + IV tumores (p & lt; 0,001 , p = 0,002, respectivamente), y la extensión extratiroidea (p = 0,001, p = 0,003, respectivamente; Tabla 1). Estos hallazgos sugieren que la pérdida de biotinidasa tanto citoplásmica (p = 0,002, Tabla 1) y nuclear (p & lt; 0,001, Tabla 1) nivel está asociado con fenotipo agresivo de cáncer de tiroides. La asociación de reducción de biotinidasa nuclear y citoplasmática de estos parámetros clínicos proporciona una credibilidad adicional a la pérdida de biotinidasa general que correlaciona significativamente con la agresividad del tumor (p = 0,001, Tabla 1).
Enfermedad curvas de supervivencia libre que muestra la expresión de biotinidasa en (a) núcleo [mediana de supervivencia libre de enfermedad a 116 meses]; (B) citoplasma [mediana de supervivencia libre de enfermedad a 111 meses]; (C) y total (núcleo y el citoplasma) [mediana de supervivencia libre de enfermedad a 109 meses]. curvas de supervivencia libre de enfermedad que muestran (d) de extensión extratiroidea [mediana de supervivencia libre de enfermedad a los 36 meses], y (e) el estado ganglionar [mediana de supervivencia libre de enfermedad a los 54 meses].
Potencial de se utilizó biotinidasa como un biomarcador para el funcionamiento de cáncer de tiroides
receptor análisis de la curva característica para determinar el potencial de expresión de biotinidasa como un biomarcador para distinguir los nódulos benignos y tumores malignos (tabla 2). La pérdida de la general y nuclear, así como aumento de la expresión citoplasmática de biotinidasa distinguen tejidos benignos de los tumores malignos con valores de AUC de 0,816, 0,972 y 0,662, respectivamente (Figura 3, Tabla 2). Al estratificar de cáncer en los tumores agresivos y no agresivos, reducida en general, se observó la expresión nuclear y citoplasmática de biotinidasa en los cánceres de tiroides agresivos con los valores de AUC de 0,715, 0,696 y 0,347, respectivamente. (Figura 3, Tabla 2).
Detección de biotinidasa Expresión en aspirados con aguja fina de los pacientes con cáncer de tiroides Las muestras
Se analizó la expresión de biotinidasa en 23 benignos y 20 malignos de tiroides FNA muestras (Figura 4). Se observó patrón similar de expresión en secciones FNA como se observa en las muestras de tejido tiroideo resecado quirúrgicamente. se observó una reducción significativa en la expresión general de biotinidasa al comparar secciones FNA benignos (23/23, 100%) a las secciones malignas (13/20, 65%) (p = 0,002). Todas las secciones benignos FNA mostraron expresión nuclear (23/23, 100%) de la proteína de biotinidasa en comparación con secciones de cáncer de tiroides (13/20, 65%; p = 0,002). expresión citoplásmica de biotinidasa se observó en 6/23 (26,1%) casos benignos en comparación con 2/20 (10%) en los casos de cáncer de la tiroides (p = 0,25, OR = 0,315, 95% C.I. = 0,056 a 1,78). Tras la comparación de los cánceres agresivos y no agresivos de la tiroides, la expresión de biotinidasa global reducida en la antigua (5/7, 71,4%) en comparación con el segundo (2/13, 15,4%, p = 0,022). Por otra parte, se observó reducción significativa expresión nuclear en agresiva (5/7), el 71,4% de los casos de cáncer de tiroides en comparación con los casos no agresivos (2/13, 15,4%, p = 0,022, OR = 0,073, IC del 95% = 0.008- 0,674). Del mismo modo, se observó reducción de la expresión citoplásmica de biotinidasa en los casos de cáncer de tiroides agresivo (7/7, 100%) en comparación con los casos no agresivos (11/13, 84,6%, p = 0,521).
general Pérdida de biotinidasa como predictor de progresión de la enfermedad y pronóstico
se utilizaron los datos de seguimiento de pacientes con cáncer de tiroides 116 para un máximo de 19,5 años para evaluar la importancia pronóstica de la biotinidasa para predecir la recurrencia en estos pacientes después de la finalización de la primaria tratamiento. El análisis de supervivencia de Kaplan-Meier mostró una reducción significativamente la supervivencia libre de enfermedad en pacientes con disminución de la expresión de biotinidasa en el núcleo (p = 0,014, HR = 5,4; IC del 95% = 1,2-24,1; la mediana de supervivencia de 116 meses, la figura 5a), el citoplasma (p = 0,022, HR = 2,8; IC del 95% = 1.1 a 7.2; la supervivencia media de 111 meses, la figura 5b) y global (p = 0,019, HR = 3,1; IC del 95% = 1.2 a 7.8; la supervivencia media de 109 meses, Figura 5c). El análisis de supervivencia de Kaplan-Meier mostró una reducción significativamente la supervivencia libre de enfermedad en pacientes con extensión extratiroidea (p & lt; 0,001, HR = 9,0, 95% C.I. = 3,1-26,4); la supervivencia media de 36 meses, la figura 5d), y el estado ganglionar (p & lt; 0,001, HR = 12,2, 95% C.I. = 2,8-53,8; la mediana de supervivencia de 54 meses, la figura 5e). El análisis de regresión de Cox (multivariante) se llevó a cabo para determinar el potencial pronóstico de biotinidasa nuclear y citoplasmática, individual o conjuntamente, para los pacientes con cáncer de tiroides en comparación con la edad, el género, t-puesta en escena, el estado ganglionar, etapa general, el tipo histológico, la histología grado y extensión extratiroidea (Tabla 3). extratiroidea extensión y estado ganglionar surgieron más significativo que biotinidasa como marcadores de mal pronóstico (p = 0,015, HR = 4,1; IC del 95% = 01.03 a 12.08, y p = 0,035, HR = 5,6; IC del 95% = 1,1-27,8 respectivamente) .
Discusión
Hay una necesidad no satisfecha para identificar nuevo marcador biológico (s) que no sólo puede ayudar a distinguir entre tumores benignos de la tiroides malignos, pero también tienen la capacidad de discriminar entre agresivo y no agresivo los cánceres de tiroides. Los resultados de nuestro estudio sugieren que satisface estos criterios tanto de biotinidasa. Además, nuestro estudio demuestra los niveles de biotinidasa están disminuidos en los carcinomas de tiroides agresivos y sugiere su potencial para servir como un marcador para la agresividad del tumor. Este nuevo uso de biotinidasa subraya su potencial de servir como una herramienta para identificar los cánceres de tiroides agresivos en las primeras etapas de la terapia más centrado. Recientemente Kang
et al
[10] observado niveles bajos de biotinidasa en el plasma de pacientes con cáncer de mama mediante el análisis del proteoma y sugirió biotinidasa como un potencial biomarcador serológico para el diagnóstico de cáncer de mama. En otro estudio, Huang
et al
[11] identificado un perfil de expresión de genes que consta de 11 genes que podrían predecir la pelvis metástasis de los ganglios linfáticos en el carcinoma de cuello uterino utilizando microarrays de oligonucleótidos. Curiosamente, uno de los genes en su panel fue biotinidasa, las reguladas en la pelvis metástasis en ganglios linfáticos, similar a nuestros resultados en el cáncer de tiroides. Estos estudios apoyan nuestros hallazgos de que biotinidasa se reduce significativamente en el cáncer de tiroides agresivo. La evidencia corroborativa de fenotipos agresivas de cáncer de tiroides que no sean elude además a un posible papel que podría desempeñar la biotinidasa en el mecanismo general de la agresividad del cáncer.
FNA es una herramienta esencial para la gestión de los nódulos tiroideos y la PAAF de todos nódulos tiroideos & gt; 1 cm se ha recomendado [12], [13]. FNA ofrece una alternativa más segura a tiroidectomía como herramienta de diagnóstico, ya que sólo el 5% de los nódulos tiroideos son malignos [14]. Expresión de biotinidasa general y nuclear en FNA muestras benignas y su pérdida en casos malignos, específicamente en los cánceres de tiroides agresivos, se corresponde con el patrón observado en tejidos de cáncer de tiroides. Por lo tanto biotinidasa puede tener aplicabilidad como un marcador de diagnóstico potencial para FNA muestras con diagnóstico concluyente y potencialmente puede reducir resecciones tiroideas innecesarios. Esto podría disminuir significativamente la morbilidad asociada a la cirugía injustificada y proporcionar un enfoque más sistemático para el reconocimiento y manejo de los pacientes de alto riesgo. Sin embargo, estos resultados requieren validación en una cohorte mayor de pacientes para delinear su potencial como un complemento de la citológico o histológico. La importancia funcional de biotinidasa en el desarrollo y /o progresión del cáncer siguen siendo desconocidos. Sin embargo, los resultados de nuestro estudio indican disminución en los niveles de biotinidasa en los carcinomas de tiroides agresivos.
Clásicamente edad, sexo, estadio tumoral, la extensión extratiroidea (diseminación fuera de la cápsula tiroidea), el estado ganglionar, el tipo histológico, grado histológico todo tener importancia pronóstica y se observaron para ser asociado con la expresión de biotinidasa en nuestro estudio. Para determinar la significación de pronóstico independiente para biotinidasa, todos estos marcadores convencionales de mal pronóstico para el cáncer de tiroides se incorporaron en un modelo multivariado y se evaluó la importancia adicional de biotinidasa. Sin embargo, en la extensión del análisis multivariante y extratiroidea estado ganglionar surgido más significativo que biotinidasa como marcadores de mal pronóstico (p = 0,015, HR = 4,1; IC del 95% = 01.03 a 12.08, y p = 0,035, HR = 5,6; IC del 95% = 1,1 a 27,8, respectivamente). Dada la asociación de biotinidasa con marcadores convencionales de mal pronóstico, biotinidasa no tienen importancia pronóstica independiente en este estudio de cohorte. Sin embargo, nuestros resultados son de importancia, en vista de los estudios limitados sobre biotinidasa en los cánceres humanos; importante estos pocos informes corroboran y apoyan nuestras observaciones.
La biotinidasa papel juega en la agresividad del cáncer quedan por esclarecer. Una hipótesis probable se centraría en el papel de la biotina como un co-factor para un gran número de enzimas responsables de la estructura de la cromatina y la estabilidad. escinde biotinidasa biocitina con lo que la biotina libre disponible. La pérdida de esta enzima podría ser la fuente de un estado de deficiencia de biotina, que a su vez afectaría biotinilación histona en remodelación de la cromatina. Se sabe que la biotinilación de K12 en la histona H4 es importante para la reparación de estructuras de ADN y heterocromatina, así como la represión de genes y transposones para mantener la estabilidad genómica y reducir el riesgo de cáncer en células humanas y
Drosophila melanogaster
[8] . Se podría especular que la deficiencia de biotina puede conducir a alteraciones epigenéticas críticos en el cáncer de atribuir un fenotipo agresivo a la misma en el proceso. Si la pérdida de biotinidasa juega un papel funcional o está asociado con la agresividad del cáncer aún no se ha abordado en futuros estudios. Sin embargo, nuestros resultados son útiles y serán aplicables para el uso clínico solo o en combinación con otros biomarcadores (s) en el diagnóstico y /o pronóstico de los cánceres de tiroides agresivos.
BRAF (V600E) se considera un marcador de pronóstico negativo en PTC y que podría haber sido un factor pronóstico de confusión en nuestro análisis. Una de las limitaciones de nuestro estudio es la falta de disponibilidad de datos de mutación BRAF (V600E) en nuestra cohorte de pacientes con cáncer de tiroides. La mayoría de los PTC son iniciados por eventos genéticas que involucran la mutación de BRAF o RAS y translocaciones producen RET /PTC oncogenes [15]. BRAFV600E mutación se encuentra en aproximadamente el 40% de los PTC y en los cánceres de tiroides más de 50% pobremente diferenciados [16], [17]. La activación constitutiva de BRAF causada por la mutación BRAF (V600E) conduce a la activación de la RET /vía RAS /BRAF /MAPK de transducción de señales y juega un papel importante en la proliferación celular mediante la regulación de la ciclina D y p27 [18]. Esta mutación se asocia también con una disminución de la expresión de ARNm para el cotransportador de yoduro de sodio y el receptor de TSH, los marcadores de diferenciación de la tiroides [19]. mutación BRAF se asocia con la progresión de PTC para los carcinomas de tiroides pobremente diferenciados debido al aumento de la sensibilidad a la transición inducida por TGF epitelial-mesenquimal (EMT) [20], y con el factor de crecimiento endotelial vascular sobreexpresión (VEGF) y asociado un mayor riesgo de metástasis, recurrencia y la enfermedad más corta supervivencia libre [21], [22]. Un alto porcentaje de BRAF alelos (V600E) define un subtipo molecular PTC y predice una enfermedad resultados más pobres [23], [24] y el análisis de mutaciones de BRAF por pirosecuenciación recientemente se ha demostrado ser útil para refinar la estratificación del riesgo de pacientes con CPT [ ,,,0],25]. Sin embargo, también se reportan resultados contradictorios no explicadas en la literatura. Un estudio reciente mostró BRAF (V600E) es común en pacientes finlandeses con bajo riesgo de PTC, pero no predice la recurrencia después de largo plazo de seguimiento del tratamiento inicial con la tiroidectomía total y la ablación de restos de yodo radioactivo [26]. En otro estudio reciente con 4585 pacientes consecutivos a los que se encontró que tienen nódulos tiroideos malignos o indeterminados por ecografía, análisis de BRAF (V600E) de mutaciones mediante tres ensayos moleculares independientes en muestras de citología FNA no mostró ninguna correlación significativa con la multifocalidad, la extensión extratiroidea, y la linfa nodo metástasis [27]. La exploración de la relación entre la reducción de biotinidasa, BRAF (V600E) mutación y agresivas de cáncer de tiroides, así como con el pronóstico de la enfermedad en cohortes independientes más grandes de este tipo de cáncer constituirá el objeto de futuros estudios. Sin embargo, esto no menoscaba la relevancia de nuestro estudio, que es el primero en poner de relieve el vínculo entre la biotinidasa y el cáncer de tiroides y de las pocas que ilustran y refuerzan la evidencia creciente que implican a la biotinidasa como un factor en la agresividad del cáncer. El trabajo adicional en esta área podría arrojar luz crucial sobre el mecanismo de la agresividad del cáncer de tiroides, así como ayudar al descubrimiento del nuevo mecanismo (s) que pueden dar cuenta de la posibilidad de biotinidasa para determinar la agresividad del cáncer de tiroides. Este valioso conocimiento puede dar un impulso significativo a la investigación actual en el campo al proporcionar nuevas vías para el trabajo futuro.