Extracto
Objetivo
esofágico carcinoma de células escamosas (CECA) es una de las lesiones malignas fatales más comunes del tracto digestivo. Su pronóstico es malo debido principalmente a la falta de marcadores fiables para la detección precoz y la predicción de pronóstico. Aquí nos proponemos identificar las moléculas que participan en la carcinogénesis CECA y los que como marcadores potenciales para el pronóstico y como nuevas dianas terapéuticas moleculares.
Métodos
Se realizó el perfil de expresión de genes en todo el genoma análisis de 10 primaria ESCCs y sus tejidos normales adyacentes por microarrays de ADNc que representan 47.000 transcritos y variantes. Los genes candidatos fueron luego validados por semi cuantitativa PCR con transcripción inversa (RT-PCR), microarrays de tejidos (TMA) e inmunohistoquímica tinción (IHC).
Resultados
El uso de una línea de corte arbitrario de la señal relación de ≥1.5 o ≤-1,5 log, observamos 549 genes regulados y 766 genes regulados en ESCCs en comparación con los tejidos normales del esófago. Las funciones de 302 genes expresados diferencialmente se asociaron con el metabolismo celular, la adhesión celular y la respuesta inmune. Varios genes candidatos desregulado incluyendo cuatro sobreexpresado (CTTN, DMRT2, MCM10 y SCYA26) y dos underexpressed (HMGCS2 y SORBS2) fueron verificados posteriormente, que se puede servir como biomarcadores para la CECA. Por otra parte, se observó sobreexpresión de cortactin (CTTN) en 126/198 (63,6%) de los casos CECA y se asoció significativamente con metástasis en los ganglios linfáticos (P = 0,000), el estadio patológico (p = 0,000) y la supervivencia de los pobres (P & lt; 0,001) de pacientes CECA. Por otra parte, una correlación significativa entre la sobreexpresión CTTN más corto y la tasa de supervivencia específica de la enfermedad se encuentra en diferentes subgrupos de pacientes estratificados por la CECA el estadio patológico (P & lt; 0,05).
Conclusión
Nuestros datos proporcionan información valiosa para el establecimiento de moléculas como candidatos para los objetivos de pronóstico y /o como terapéuticos
Visto:. Lu P, J Qiao, Él W, J Wang, Jia y, Sun y, et al. (2014) en todo el genoma del perfil de expresión de genes análisis Identificar CTTN como marcador pronóstico potencial en el cáncer de esófago. PLoS ONE 9 (2): e88918. doi: 10.1371 /journal.pone.0088918
Editor: Ju-Seog Lee, Universidad de Texas MD Anderson Cancer Center, Estados Unidos de América
Recibido: 22 Agosto, 2013; Aceptado 16 de enero de 2014; Publicado: 14 Febrero 2014
Derechos de Autor © 2014 Lu et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por becas de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81150010, 81272227 y 81372583). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el carcinoma de células escamosas de esófago (CECA) es el tipo predominante de cáncer de esófago (CE) a nivel internacional, lo que representa más del 90% de todos los casos de la CE [1]. ESCC es una de las formas más comunes de cáncer y se asocia con un mal pronóstico [2]. A pesar de los avances en las técnicas de diagnóstico y terapias multimodales, la CECA sigue siendo un cáncer mortal con unas tasas de supervivencia a 5 años con un promedio de 15% en muchos países [3]. El mal pronóstico es el resultado del carácter biológico agresivo del tumor, una falta de técnicas de diagnóstico fiables para la detección en fase inicial y en ausencia de tratamiento individualizado eficaz [4]. La disminución de la tasa de mortalidad requeriría el diagnóstico precoz y el tratamiento para los pacientes. Sin embargo, los biomarcadores actuales que se utilizan para identificar a los pacientes CECA en una etapa temprana y seleccionar modalidades de tratamiento para pacientes individuales todavía carecen de la suficiente sensibilidad y especificidad [5]. Hasta ahora, la técnica molecular ha sido considerada como un método ideal para el diagnóstico precoz y la predicción pronóstica en CECA. Por lo tanto, es de gran valor clínico para buscar nuevos indicadores de diagnóstico y terapéuticos de predicción de pronóstico basados en el mecanismo molecular de la carcinogénesis esofágica subyacente.
Para entender la base molecular y seleccionar a los candidatos para el desarrollo de nuevos antitumoral drogas y marcadores tumorales, es necesario analizar los cambios globales de la expresión génica entre los tejidos tumorales CECA y tejidos no tumorales. Para este propósito, la tecnología de microarrays de ADNc, una poderosa herramienta para grandes estudios de expresión génica escala que basado en la hibridación, se utilizó para analizar los cambios en la expresión de miles de genes simultáneamente [6]. Varios estudios han investigado los microarrays de perfiles de expresión génica en los tejidos CECA y líneas celulares [7], [8]. Sin embargo, la información útil derivados de dichos estudios era limitada.
Con el objetivo de identificar nuevos genes relacionados con el cáncer de esófago más que podrían ser posibles objetivos moleculares para el diagnóstico, el tratamiento y /o prevención de la CECA, se compararon los genes los perfiles de expresión entre los tejidos tumorales y epitelio normal emparejado de 10 especímenes CECA utilizando el genoma humano U133 Plus 2.0 de Affymetrix GeneChip que consta de 47.000 transcripciones. El presente estudio ha identificado una serie de genes expresados diferencialmente entre ellos los relacionados con la adhesión celular, el metabolismo celular y la respuesta inmune. En particular, una proteína de unión a actina de filamento y un objetivo quinasa, cortactin (CTTN o EMS1), se encontró que uno de los genes sobreexpresados más significativos en CECA. En este sentido, informó que la sobreexpresión de CTTN tiene valor pronóstico independiente y también podría servir como una diana terapéutica para la CECA.
Materiales y Métodos
Ética Declaración
muestras de tejido CECA utilizado en este estudio fueron aprobados por los Comités de ética de la opinión de la investigación en seres humanos en la Universidad de Zhengzhou. Consentimientos informados por escrito por el trabajo humano original que producen se obtuvieron las muestras de tejido.
Las muestras clínicas CECA
tejidos primarios CECA y tejidos adyacentes normales del esófago tomadas epiteliales (5 cm de distancia del borde del tumor) se recogieron en el momento de la resección quirúrgica del hospital Popular en Linzhou (Henan, china). Todos los tejidos tumorales fueron confirmados histopatológicamente como CECA. Los pacientes eran todos sin tratamiento previo (es decir, no la radioterapia o la quimioterapia). El consentimiento informado se obtuvo de todos los pacientes. Las muestras después de la resección quirúrgica se almacenaron a -80 ° C inmediatamente hasta el momento de la extracción de RNA. Las diez muestras de tumores seleccionados para los análisis cDNA microarray se derivaron de los tejidos tumorales diseccionadas que comprendían más de 80% de las células tumorales sin necrosis. mucosas normales adyacentes apareadas se utilizaron como referencia. Un total de 231 ESCCs fijado en formol e incluidos en parafina y sus correspondientes muestras de tejidos epiteliales normales del esófago también fueron amablemente proporcionados por el Hospital Popular de Linzhou. Toda la información clínica se obtuvo de los registros médicos.
Líneas Celulares
Cinco líneas celulares japoneses CECA (KYSE140, KYSE410, KYSE180, KYSE30 y KYSE510) se obtuvieron de DSMZ (Braunschweig, Alemania), la Centro de recursos alemana de material biológico [9]. línea celular de la CECA chino HKESC1, EC18 y EC109 fueron amablemente proporcionados por el profesor Srivastava (Departamento de Patología de la Universidad de Hong Kong, Hong Kong, China) [10]. Todas estas líneas celulares CECA se cultivaron en RPMI 1640 con suplemento de 10% de suero bovino fetal. Las células fueron incubadas a 37 ° C en una cámara humidificada que contiene 5% de CO
2.
RNA, extracción, amplificación y etiquetado
Las muestras de tejido fueron molidas en polvo en nitrógeno líquido, y reactivo TRIzol se agregó tan pronto como llegó a la conclusión de vaporización de nitrógeno. ARN total fue aislado posteriormente de acuerdo con las instrucciones del fabricante. La concentración de ARN se midió utilizando un espectrofotómetro NanoDrop (ND-1000; Labtech International, Francia) y la pureza se evaluó por el A260 /A280 y relaciones A230 /A260. se utilizó para evaluar la calidad del ARN después del aislamiento y, posteriormente, después de marcaje con biotina y fragmentación; Un Bioanalyzer Agilent (Agilent Technologies, Santa Clara, CA modelo 2100). Para esto, 100 ng de ARN de cada muestra se amplificó para obtener cRNA y se marcó utilizando Affymetrix GeneChip ensayos eucariota de etiquetado 2 ciclo para el análisis de expresión (Affymetrix; 900494) de acuerdo con las instrucciones del fabricante en http://www.affymetrix.com/products /reagents/specific/cdna2.affx.
La hibridación de microarrays
Affymetrix HG U133 Plus 2,0 microarrays de oligonucleótidos se hibridaron previamente en una solución de hibridación que contiene 1 mol /l de NaCl, 20 mmol /l de EDTA, 100 mmol /L 2- (N-morfolino) etanosulfónico, y 0,01% de Tween 20 durante 10 minutos a 45 ° C y 60 revoluciones por minuto. a continuación, se separó la solución de prehibridación y se reemplazó con 200 ml de solución de hibridación que contiene 0,05 mg /mL fragmentado cRNA, y se hibridaron las matrices durante 16 horas a 45 ° C y 60 revoluciones por minuto. Las matrices fueron posteriormente lavadas (Affymetrix modelo de estación de fluidos 400), y se escanean y se visualizaron utilizando un escáner de Gene Array (Hewlett-Packard).
Análisis de microarrays
La calidad del tumor normal o agrupados las muestras han sido verificadas por el mapa de calor con el agrupamiento (Figura S1). Se utilizó Affymetrix U133 Plus 2.0 genoma humano GeneChip (Affymetrix), que cubre 47.000 transcritos y variantes, para identificar los genes expresados diferencialmente entre los tejidos tumorales y tejidos normales CECA. Microarray reacción se realizó de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Probe conjunto intensidades se calcularon utilizando la (, Affymetrix MAS v5.0) de software Microarray Analysis Suite y se normalizaron frente a 100 genes de limpieza a una intensidad media de 2.000 en los archivos de máscara de U133 Plus 2.0 antes de su posterior análisis estadístico. Los valores normalizados de expresión se compararon entre las muestras CECA y sus tejidos normales emparejados. Se calcularon las diferencias de cambio de tapa para identificar hasta reguladas y reguladas por los genes. Transcripciones con una diferencia de más de 1,5 veces en el nivel de expresión se definieron como diferencialmente expresado. Específicamente diseñado herramientas en línea, incluyendo FatiGO [11], ontología de genes [12] proporcionada por el Consorcio GO, y la base de datos del Centro de Análisis de NetAffx [13], se utilizaron para clasificar el papel funcional de los genes expresados diferencialmente identificados. cDNA microarray datos se han presentado a la Expresión Génica Omnibus (GEO, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/) bajo el número de GSE33810.
Semicuantitativo PCR con transcripción inversa (RT PCR)
para examinar la fiabilidad de los datos de microarrays, se utilizó el análisis de RT-PCR para confirmar los datos de análisis de microarrays para los cuatro genes seleccionados hasta reguladas (CTTN, DMRT2, MCM10 y SCYA26) y dos abajo genes regulados (HMGCS2 y SORBS2) como se describe anteriormente [14]. Un total de 2 g alícuota de cada muestra de ARNm se transcribe de forma inversa a ADNc de cadena sencilla usando un kit Advantage RT para PCR (Clontech) y el ADNc se sometió a PCR durante 30 ciclos de amplificación. RT-PCR experimentos se llevaron a cabo con los siguientes conjuntos de cebadores sintetizados específicos para los seleccionados seis genes o con cebadores específicos de GAPDH como control interno: Cortactin (CTTN o EMS1) -fr: 5'-TGAGTGTGT GTTCTTCCCCAAG-3 ', cortactin (CTTN o EMS1) RR: 5'-CACGTGACCTTCTGGA AAGACA-3′;DMRT-Fr:5′-GCGTGGTGTCCTGCCTGAAG-3′,DMRT-Rr:5′-GCCCCTTCTTGTCCTCGGTG-3′;MCM10-Fr:5′-GCAAAAATCCCCTGTAGAGA-3′, MCM10-Rr:5′-CCCCACAATTTGACCTCTAG-3′;SCYA26-Fr:5′-CACCTTGGAACTGCCACACG-3′,SCYA26-Rr:5′-TGGGTACAGACTTTCTTGCC-3′;HMGCS2-Fr:5′-CTGGGATGGTCGTTATGCCA-3′,HMGCS2-Rr:5′-TCGTCAAGGGTGAAGGGTCG-3′;SORBS2-Fr:5′-ACGTAGAGAAACTCACACCT-3′,SORBS2-Rr:5′-TCCTATCACTAGAATAGCTG-3′;GAPDH-Fr:5′-CATGAGAAGTATGACAACAGCCT-3′,GAPDH-Rr:5′-AGTCCTTCCACGATACCAAAGT-3′.
Tissue Microarrays (TMA) e inmunohistoquímica (IHC)
microarrays de tejidos (TMA) se construyeron con 231 pares de muestras tumorales primarias CECA y emparejado epitelio normal del esófago como se describe anteriormente [15], [16]. Las muestras variaron de CECA Ι patológica de grado a grado III etapa de pacientes en el grupo de edad de 40-80 años. método de complejo de estreptavidina-biotina-peroxidasa estándar se utilizó para la tinción IHC. Brevemente, TMA secciones se desparafinaron, se rehidrataron y se bloquearon por el suero de cabra normal al 10% a temperatura ambiente durante 30 minutos. Las secciones fueron incubadas con anti-cortactin (CTTN) de anticuerpos (Abcam, Cambridge, Reino Unido) a una dilución de 1:300 durante la noche a 4 ° C. Después se lavó con TBS, los portaobjetos se incubaron con biotina de cabra anti-inmunoglobulina de conejo a una concentración de 1:100 durante 30 min a 37 ° C. Tres investigadores independientes evaluaron semicuantitativamente CTTN positividad sin conocimiento previo de los datos clínico-patológicas. Expresión positiva de CTTN en tejidos normales y malignos CECA era principalmente un patrón citoplasma. Debido a que la intensidad de la tinción CTTN dentro de cada núcleo de tejido era principalmente homogénea, la intensidad de la tinción CTTN se evaluó semicuantitativamente utilizando los siguientes criterios: fuerte positivo (marcado como 2+), tinción de color marrón oscuro en & gt; 50% de escamosas de esófago normal o maligno Las células que oscurecen por completo citoplasma; débilmente positivo (1+), cualquier menor grado de coloración marrón apreciable en el citoplasma de la célula; ausente (marcado como 0), no hay tinción apreciable en las células escamosas de esófago normales o malignas. Se clasificaron fuerte expresión positiva como CTTN sobreexpresión (+), la expresión positiva y ausente débil como CTTN sin sobreexpresión (-). Los casos fueron aceptados como fuertemente positivos sólo si los revisores ellos definen independientemente como tal.
Análisis estadístico
El análisis estadístico se realizó con el programa SPSS versión estándar 13.0 (SPSS Inc). La asociación entre la expresión CTTN en los tejidos tumorales y las características clínico-patológicas tales como la edad, el género, la diferenciación de las células del tumor, los ganglios linfáticos y la metástasis estadio patológico se analizó mediante la prueba de chi-cuadrado. la supervivencia (DSS) curvas específicas de enfermedad se calcularon a partir de la fecha de diagnóstico de la fecha de muerte relacionada con la CECA o de la última fecha de seguimiento. Las curvas de supervivencia se evaluaron mediante el método de Kaplan-Meier y las diferencias en los tiempos de supervivencia se compararon mediante la prueba de log-rank. riesgos relativos de muerte relacionada con el cáncer asociado con el estado de la expresión CTTN y las variables clínico-patológicas, como la edad, el sexo, la diferenciación de las células del tumor y los ganglios linfáticos metástasis fueron estimados por análisis univariado. El análisis multivariante de Cox se realizó en todas las variables que fueron detectados a ser significativo en el nivel univariado. Las diferencias se consideraron significativas cuando el valor de p fue inferior a 0,05.
Resultados
Identificación de genes expresados diferencialmente entre los tejidos CECA y esofágica normal adyacente epitelios
Perfiles de expresión génica de los tumores agrupados (a partir de 10 ESCCs) y sus contrapartes normales agrupados se obtuvieron mediante el análisis de microarrays de Affymetrix U133 usando genoma humano, más 2,0 arrays que cubren 47.000 transcritos y variantes. Un total de 25.206 conjuntos de sondas (transcripciones) estaban presentes en los tejidos CECA en relación con sus controles normales. Se encontró que 1315 genes mostraron niveles de expresión diferencial. Entre estos genes, 549 genes regulados (41,7%, el cuadro S1) y 766 genes regulados hacia abajo (el 58,3%, el cuadro S2) se detectaron en los tejidos tumorales en comparación con el perfil de expresión de los epitelios normal del esófago, utilizando una línea de corte arbitrario de log ratio señal de ≥1.5 o ≤-1,5. Los roles funcionales de 715 de estos genes (340 regulados hasta 375 y el regulado) son conocidos. La función de 302 genes expresados diferencialmente (de 715, 42,24%) en los tejidos tumorales fueron asociados con el metabolismo celular (148 genes, Tabla S3), la adhesión celular (90 genes, Tabla S4), y la respuesta inmune (64 genes, el cuadro S5 ).
Validación de los genes seleccionados mediante PCR semicuantitativa (RT-PCR)
Para verificar los datos de microarrays, los niveles de expresión de genes seleccionados al azar 6 (4 genes regulados y 2 abajo genes regulados) fueron examinados por RT-PCR utilizando las mismas muestras de ARN que se utilizaron para el análisis de microarrays. Los patrones de expresión de genes seleccionados al azar 6 en los tejidos tumorales detectado por RT-PCR, excepto SORBS2, eran totalmente consistentes con los de los resultados de microarrays de ADNc (Figura 1A).
(A) Semicuantitativo PCR con transcripción inversa ( se aplicó RT-PCR) para comparar el estado de expresión de CTTN, DMRT2, MCM10, SCYA26, HMGCS2 y SORBS2 entre los 8 pares de muestras tumorales primarias CECA y emparejado epitelio esofágico normal. GAPDH se utilizó como control interno. (B) Representante de expresión CTNN en un par de CECA (derecha) y el tejido normal adyacente (izquierda) detectada por inmunotinción con anticuerpo anti-CTNN (marrón). El portaobjetos se contraste con hematoxilina (Aumento original: × 100 superior, inferior × 200).
Evaluación de CTTN como marcador pronóstico para la CECA
Para evaluar la posibilidad de candidato sobreexpresa genes como marcadores biológicos para la CECA, que llevan a cabo la tinción inmunohistoquímica con el anticuerpo para CTTN en microarrays de tejidos que contienen 231 pares de tejidos tumorales CECA y sus epitelio esofágico normales adyacentes. resultados informativos IHC se obtuvieron de 198 CECA casos. Las muestras no informativos incluyeron muestras perdidas, inapropiadamente las muestras teñidas y muestras con muy pocas células; por ejemplo, no se utilizaron como datos válidos. Hemos observado la expresión diferencial citoplasma de CTTN entre los tumores primarios CECA y sus tejidos normales emparejados (Figura 1B). El porcentaje de CTTN sobreexpresión en tejidos tumorales informativos CECA era hasta 63,6% (126/198), que fue significativamente mayor que en el epitelio esofágico normal (26,8%, 53/198,
P
& lt; 0,001, prueba de Wilcoxon, la Figura 1B y Tabla 1). De los 198 casos examinados informativos, se detectó la correlación entre el estado de la expresión CTTN y las características clínico-patológicas de ESCCs. Los resultados mostraron que la sobreexpresión CTTN se asoció significativamente con metástasis en los ganglios linfáticos (P = 0,000) y el estadio patológico (p = 0,000). No se detectó ninguna diferencia significativa en la edad (P = 1,000), el sexo (p = 0,883) y la diferenciación de células tumorales (P = 0,619, Tabla 2). Kaplan-Meier análisis de supervivencia mostró que los pacientes con CTTN (+) tumores (n = 126) tienen significativamente peor tasa de supervivencia que aquellos con CTTN (-) tumores (n = 72) (P & lt; 0,001, log-rank: 19.517, Figura 2A ). Mientras tanto, el análisis de supervivencia de Kaplan-Meier también mostró que los pacientes con avanzado estadio patológico (IIB + III; n = 85) tienen significativamente peor tasa de supervivencia que aquellos con estadio patológico temprano (I + II A; n = 113) (p = 0,000, registro -rank: 19.390, la Figura 2B). Además, se analizó el valor pronóstico de la expresión CTTN en pacientes CECA con diferentes estadios patológicos. Los pacientes con CTTN sobreexpresión tenían significativamente menor tasa de supervivencia específica de la enfermedad que aquellos sin CTTN sobreexpresión tanto de I + IIA subgrupo (n = 113, p = 0,001, Figura 3A) y IIB + subgrupo III (n = 85, p = 0,027, figura 3B), lo que indica que CTTN podría ser un valioso marcador pronóstico para la CECA. Además, se utilizó el análisis univariante para evaluar las asociaciones entre el pronóstico y varios factores, incluyendo la edad, el sexo, la diferenciación de células tumorales, los ganglios linfáticos de metástasis y el estado de los tumores CTTN CECA. El resultado mostró que la metástasis de ganglios linfáticos (P = 0,000), la diferenciación de las células tumorales (p = 0,001) y la sobreexpresión de CTTN en los tumores (P = 0.000) fueron importantes factores pronósticos negativos para pacientes CECA (Tabla 3). Entre esos parámetros, el análisis multivariado mediante el modelo de riesgos proporcionales de Cox reveló que la sobreexpresión de CTTN en tumores CECA (P = 0,001), LN metástasis (p = 0,003) y la diferenciación de las células tumorales (p = 0,000) fueron factores pronósticos independientes para la CECA, respectivamente (Tabla 3). En conjunto, nuestros resultados muestran que la sobreexpresión de CTTN en tumores CECA independientemente, indica un mal pronóstico para los pacientes con CECA.
(A) parcelas de Kaplan-Meier para la supervivencia específica de la enfermedad (DSS) de pacientes CECA con ( n = 126, línea verde) o sin (n = 72, línea azul) CTNN sobreexpresión. (B) gráficos de Kaplan-Meier para la tasa de DSS pacientes CECA con el estadio patológico I + II (n = 113, línea azul) o IIB + III (n = 85, línea verde).
Discusión
el carcinoma de células escamosas de esófago (CECA) es un cáncer muy agresivo, siendo la cuarta causa principal de muerte por cáncer en china [17]. Debido a la falta de técnicas de diagnóstico fiables y síntomas específicos para la detección temprana etapa, la mayoría de los pacientes han localmente avanzado de cáncer diseminado al momento del diagnóstico cuando se tragan con dificultad o se sienten incómodos. Varios marcadores tumorales, tales como el antígeno carcinoembrionario (CEA), antígeno de carcinoma de células escamosas (SCC) y citoqueratina 19-fragmento (CYFRA 21-1), se utilizan en el diagnóstico clínico, así como en de seguimiento de los pacientes. EGFR se expresa en 33,3% de los carcinomas de células escamosas de esófago (ESCCs), Lapatinib puede tener un efecto terapéutico significativo contra EGFR que expresan ESCC inhibiendo el crecimiento de células CECA y aumentando Herceptin- y ADCC mediada por Cetuximab [18]. De hecho, no hemos descubierto ningún marcador tumoral útil para la detección de la CECA en una etapa temprana y terapias moleculares dirigidas eficaces. Una mejor comprensión de mecanismo molecular implicado en la aparición y el desarrollo de la CECA puede conducir a un tratamiento más eficaz para pacientes CECA y encontrar marcadores eficaces para la detección temprana y una mejor selección de modalidades de tratamiento adyuvante para pacientes CECA apropiados. . Determing diferencias en la expresión de genes entre tejidos tumorales y normales CECA es esencial para comprender mejor este mecanismo molecular
El análisis de los perfiles de expresión mediante microarrays de cDNA es ahora ampliamente utilizado en diversas células del cáncer [19] - [21] . Una característica novedosa del presente estudio es que se utilizó un microarray que contiene un número muy grande de sondas para determinar la expresión diferencial de genes entre tejidos CECA y emparejado epitelio esofágico normal gama de expresión. El resultado mostró que 1315 genes fueron expresados diferencialmente en CECA. Entre estos genes, 549 fueron reguladas y 766 se redujeron reguladas. De 715 genes expresados diferencialmente con función conocida, 42,24% se asocia con el metabolismo celular, la adhesión celular y la respuesta inmune. En concordancia con los informes anteriores, hemos identificado los genes, como Fascin (SNL), EGFR y ECRG4, eran conocidos por ser la expresión diferencial en los tejidos normales emparejados CECA y el epitelio esofágico [18], [22] - [24]. Además, también descubrimos varios genes relacionados con la CECA que no han sido reportados previamente. Algunos de los genes expresados diferencialmente pueden ser útiles como marcadores de diagnóstico, marcadores de pronóstico o nuevas dianas terapéuticas. En este estudio, se seleccionaron un gen CTTN arriba regulada y examinamos su proteína que codifica (Cortactin) Estado de la expresión mediante análisis de microarrays de tejidos. Cortactin ha sido descrito como un andamio de proteínas actina asociado, que se une y activa el complejo de proteínas relacionadas con la actina 2/3, y se ha convertido en un elemento central que conecta las vías de señalización con citoesqueleto reestructuración [25], [26]. Remodelación del citoesqueleto de actina tiene efectos sobre la migración celular, la motilidad y la adherencia, así como en la invasión tumoral y la metástasis [27]. La sobreexpresión de cortactin se asocia con una mayor invasividad de las células de carcinoma hepatocelular [28].
Cortactin se sobreexpresa en muchos tipos de cánceres humanos, incluyendo la cabeza y el cuello carcinomas escamosos y colorrectal, gástrico, hepatocelular, cáncer de mama y de ovario [ ,,,0],26], [29]. Informes anteriores demostraron que una correlación significativa entre la sobreexpresión CTTN y de mal pronóstico en el osteosarcoma [30]. En este estudio, se evaluó el estado de la expresión de cortactin mediante el uso de análisis de alto rendimiento TMA. Nuestro estudio ha mostrado el valor potencial de CTTN en la predicción de la supervivencia del paciente en subgrupos con el estadio patológico temprano o avanzado, lo que sugiere que la sobreexpresión de CTTN se puede utilizar como un factor independiente de predicción de pronóstico de la CECA. Sin embargo, necesita más trabajo para llevar a cabo para evaluar más a fondo el gen CTTN para aplicaciones clínicas de los pacientes EscC.
En resumen, nuestro análisis de microarrays de ADNc detectada diferenciales perfiles de expresión génica entre los tejidos CECA y el epitelio normal del esófago, lo que suponía valiosa información para su posterior estudio de las bases moleculares que subyace en el proceso tumoral de cáncer de esófago. Una mejor comprensión de los perfiles de expresión génica de la CECA puede conducir a una gestión más eficaz de la CECA por indicadores pronósticos precisos y efectiva terapia personalizada.
Apoyo a la Información
Figura S1.
doi: 10.1371 /journal.pone.0088918.s001 gratis (TIF)
Tabla S1. genes regualted-Up gratis (≥1.5 veces) en diez casos de carcinoma esofágico de células escamosas
doi:. 10.1371 /journal.pone.0088918.s002 gratis (DOC) sobre Table S2.
genes (≥1.5 veces) hacia abajo reguladas en diez casos de carcinoma esofágico de células escamosas
doi:. 10.1371 /journal.pone.0088918.s003 gratis (DOC) sobre Table S3. List de 148 genes asociados con el metabolismo celular
doi:. 10.1371 /journal.pone.0088918.s004 gratis (DOC) sobre Table S4. List de 90 genes asociados con la adhesión celular
doi:. 10.1371 /journal.pone.0088918.s005 gratis (DOC) sobre Table S5. List de 64 genes relacionados con la respuesta inmune
doi:. 10.1371 /journal.pone.0088918.s006 gratis (DOC)