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PLOS ONE: una subpoblación de células endoteliales circulantes expreso CD109 y se enriquece en la Sangre del cáncer Patients

2013/8/21


Extracto

Antecedentes

El endotelio no es un órgano homogéneo. la heterogeneidad de las células endoteliales se ha descrito en el nivel de la morfología celular, la función, la expresión génica, y la composición de antígeno. Como consecuencia de la genética, transcriptoma y diversidad ambiente circundante, las células endoteliales de diferentes lechos vasculares han diferenciado funciones y fenotipo. La detección de células endoteliales circulantes (CEC) por citometría de flujo es un método ampliamente utilizado en pacientes con cáncer, y su número, la viabilidad y la cinética es una herramienta prometedora para estratificar recibiendo un tratamiento anti-angiogénico paciente.

Metodología /Principales conclusiones

Actualmente CEC son identificados como positivos para la unión a un antígeno nuclear (ADN +), negativo para el marcador CD45 de leucocitos sartén, y positiva para CD31 y CD146. Siguiendo un método validado recientemente en nuestro laboratorio, se determinó la expresión de CD109 en los CEC de la sangre periférica de los pacientes con cáncer sometidos y saludables. La naturaleza de estas células endoteliales fue validado por RT-PCR para la presencia de nivel de m-RNA de CDH5 (cadherina VE) y CLDN5 (Claudin5), transcripciones específicas dos endoteliales. Antes del tratamiento, se encontraron niveles significativamente más altos de CD109 + países de Europa central y viable CD109 + CEC en pacientes con cáncer de mama y pacientes con glioblastoma en comparación con los controles sanos, y su número se redujo significativamente después del tratamiento. Se observaron niveles más altos de transcritos endoteliales específicos expresados ​​en el desarrollo de células endoteliales CLEC14a, TMEM204, ARHGEF15, GPR116, en ordenada CD109 + CECs en comparación con ordenada CD146 + CECs, lo que sugiere que estos genes pueden jugar un papel importante no sólo durante la embriogénesis, sino también en angiogénesis adulto. Curiosamente, los niveles de mRNA de TEM8 (identificado como Antrax toxina receptor1, Antrax1) se expresaron en CECs CD109 + + pero no en CD146 + CECs.

Conclusión

Tomados en conjunto nuestros resultados sugieren que CD109 representan una población rara de células endoteliales tumorales, que juegan un papel pronóstico potencialmente útil en pacientes con glioblastoma en circulación. El papel de la expresión CD109 en las células endoteliales de los vasos específicos de cáncer merece investigarse más a fondo por los estudios de expresión génica

Visto:. Mancuso P, Calleri A, G Gregato, Labanca V, Quarna J, Antoniotti P, et al . (2014) una subpoblación de células endoteliales circulantes expreso CD109 y se enriquece en la sangre de pacientes con cáncer. PLoS ONE 9 (12): e114713. doi: 10.1371 /journal.pone.0114713

Editor: Lu-Yu Gang, de la Universidad de Liverpool, Reino Unido

Recibido: 5 de Mayo, 2014; Aceptado: 13 Noviembre 2014; Publicado: 15 de diciembre 2014

Derechos de Autor © 2014 Mancuso et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan

Disponibilidad de datos:. La autores confirman que todos los datos que se basan los resultados son totalmente disponible sin restricciones. Todos los datos relevantes e información de apoyo procedentes de los archivos de citometría de flujo y estudio de la biología molecular están dentro del papel

Financiación:. Apoyado en parte por AIRC (Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro), la Fundación Umberto Veronesi, y Ministero della Salute. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito

Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia

Introducción

angiogénesis juega un papel crucial en el crecimiento del tumor y la progresión [1] - [3] y en base a la teoría de que la orientación de las células endoteliales puede ser una estrategia más eficaz que la orientación células tumorales, durante la última década muchos anti -angiogenic drogas se han introducido en la práctica clínica [4] - [8].

con el fin de evaluar los biomarcadores de la angiogénesis que pueden predecir el resultado de los tratamientos antiangiogénicos en pacientes con cáncer de circulación, muchos enfoques han sido probados en tanto los estudios preclínicos y clínicos [9] - [11] y, entre éstos la cuantificación de células endoteliales circulantes (CEC) por citometría de flujo ha encontrado una amplia aplicación [12] - [14].

CEC son células endoteliales maduras liberados de los vasos durante la rotación fisiológica endotelial o, en pacientes con cáncer, a partir de la vasculatura del tumor, en la que probablemente reflejan el daño endotelial o disfunción. Estas células se incrementan en pacientes con cáncer en comparación con los sujetos sanos, y sus modificaciones en el número y la viabilidad se ha demostrado predictivo, pronóstico, dinámico o escapar valor biomarcador [15] - [18].

El endotelio no es una órgano homogénea. la heterogeneidad de las células endoteliales se ha descrito en el nivel de la morfología celular, la función, la expresión génica, y la composición de antígenos [19]. Como consecuencia de la genética, transcriptoma y diversidad ambiente circundante, las células endoteliales de diferentes lechos vasculares han diferenciado funciones y fenotipo [20] -. [24], [35]

marcadores endoteliales Actualmente se utilizan para identificar CECs son CD34, CD31 y CD146 en combinación con CD45, para excluir los leucocitos, y un marcador de tinción nuclear (como SYTO16, Hoechst o DRAQ5) para eliminar el recuento de micropartículas endoteliales no celulares [14], [25] - [26].

el gen CD109 codifica una glicoproteína glicosil-phosphatidylinositolanchored que es un miembro de la alfa (2) de la familia macroglobulina /C3, C4, C5 de las proteínas que contiene tioéster [27]. CD109 interactúa directamente con el tipo I factor de crecimiento transformante beta (TGF-β) receptor de señalización y negativamente modula la señalización de TGF-β [28]. Se expresa en una subpoblación de células CD34 + [29], sobre las plaquetas activadas y las células T activadas [30] y en una subpoblación de células endoteliales [31]. Curiosamente, se ha informado de que CD109 es uno de 12 marcadores endoteliales sobre-expresa en las células endoteliales tumorales [23], [24]. Con el fin de obtener una comprensión más completa de la CCA fenotipo, se determinó la expresión de CD109 en células endoteliales cultivadas en países de Europa central y de la sangre periférica de pacientes con cáncer sometidos y saludables. Se utilizó un enfoque de citometría de flujo validado en nuestro laboratorio, y la naturaleza de estas células endoteliales fue validado por RT-PCR y la expresión génica.

Materiales y Métodos

Declaración de Ética

Todos los pacientes dieron su consentimiento informado por escrito antes de su inclusión en el protocolo terapéutico y para fines de investigación. Toda la investigación clínica se llevaron a cabo de acuerdo con los principios expresados ​​en la Declaración de Helsinki

Para los pacientes de cáncer de mama: El ensayo se realizó en el Instituto Europeo de Oncología, Milán, Italia y aprobado por el "IRCCS - Istituto Europeo. "Comité de ética e inscrita en la base de datos del Instituto (# 2007-006025-27)

Para los pacientes de glioblastoma.: el ensayo se realizó en el Instituto neurológico" Monzino Centro Cardiologico di Oncologia e Carlo Besta "de Milán, Italia y aprobado por la "región de Lombardía Sezione Fondazione IRCCS Istituto Neurológico Besta" Comité de ética e inscrita en la base de datos del Instituto (# 1/08).

la detección de CD109 en colonias endoteliales

Para validar por citometría de flujo la expresión de CD109 en células endoteliales, in vitro colonias endoteliales se obtuvieron a partir de sangre periférica (PB) de 10 donantes sanos (7 mujeres, 3 hombres) y 23 pacientes con cáncer como se ha descrito anteriormente [32].

resumen, las células mononucleares (MNC) se aislaron de PB usando centrifugación en gradiente de Ficoll-Paque, se resuspendieron en medio EGM2 (Lonza, Walkersville, MD) y se sembraron en colágeno I cápsulas Petri (35 mm, Biocoat, BD Labware, Bedford, MA) . Los cultivos se incubaron a 37 ° C, 5% CO2, 95% de humedad relativa durante 3-4 semanas. El medio se cambió cada 2 días durante 7 días y luego dos veces a la semana hasta que primero paso, y la cultura monitoreado para la detección de colonias endoteliales sobre la base de características morfológicas, como se describe anteriormente [32]. Después de 15-20 días, las células se separaron con tripsina /EDTA (Gibco, BRL, UK) y se tiñeron con anticuerpos monoclonales (MoAb) anti-CD31-PeCy7, CD34-APC, CD45-H7, y 7-AAD (todos de Beckman Coulter) CD146-Pe (Chemicon), VEGFR-2-PE (R & amp;. D) y CD109-Pe (Abcam) para los estudios de citometría de flujo

Clasificar de CD109 + y CD146 + células de la sangre periférica

para realizar un análisis de microarrays de genes expresados ​​en las células endoteliales positivas para CD109 (CD109 + CECs) y CCA positiva para CD146 (CD146 + CECs), se utilizó un láser de tres Afluencia clasificador de células de alta velocidad (BD) de circulación.

en resumen, en dos experimentos diferentes, se recogieron 150 ml de sangre de 8 sujetos sanos y después del aislamiento MNCs con gradiente de Ficoll, las células se agotaron de células blancas de la sangre usando el anticuerpo anti-CD45 junto con microperlas MACS magnéticas (Miltenyi Biotech) siguiendo las instrucciones del fabricante. Las células se tiñeron para SYTO16, CD45, CD31 y CD109 y en el segundo experimento para SYTO16, CD45, CD31 y CD146.

durante la clasificación procedimiento, las muestras fueron continuamente se enfrió a 4 ° C y una altura de impulso de dispersión hacia adelante y se realizaron análisis de dispersión lateral para excluir grupos de células y dobletes. Un procedimiento de clasificación de células de dos vías se realizó con a140 um boquilla con una presión de 5,5 psi, y con una tasa de eventos de 1.000-1.500 eventos por segundo, utilizando un modo de pura suerte. La puerta de la clasificación fue pintado en SYTO16 + CD45-CD31 + CD109 + células y de células CD45 + SYTO16-CD31 + CD146 +. Las muestras se recogieron en tubos de polipropileno estériles que contienen RPMI y se usaron para el análisis molecular. La pureza fue siempre superior al 95% con una recuperación de 70-80%.

RT-PCR y análisis de la expresión génica de las células CD109 + CEC ordenados y CD146 + CEC

El aislamiento de ARN de ordenada CD109 + CEC y CD146 + CECs, se llevó a cabo usando ArcturusPicoPureRNA kit de aislamiento, y el ADNc se genera a partir de la cantidad total de ARN usando el ADNc de alta capacidad kit de transcripción (Applied Biosystems) se invierten. Cuantitativa en tiempo real PCR (QRT-PCR) se llevó a cabo después de la pre-amplificación de cDNA (TaqManPreAmp Master Mix Kit) con un 7000 plataforma usando el ensayo TaqMan Gene Expression ABI Prism para CDH5 (cadherina VE), CLDN5, (Claudín 5) VWF (factor von Willebrand), CD34, VCAM-1, CLEC14a, TMEM204, ARHGEF15, GPR116, ARAP3, TEM8 (receptor de ANTRAX1) [33].

Caracterización de CD109 + y CD146 + CCA CCA fenotipo

Para caracterizar CD109 + CCA y CD146 + fenotipo CCA, se utilizó una combinación de 10 anticuerpos monoclonales (Syto 16 FITC, CD146 PE, 7-AAD, CD31 PeCy7, CD34 ECD, CD13 APC, CD90 APC-AF700, CD117 APC-AF750, CD45 y CD109 Pacific Blue Naranja Pacífico). CD90 y CD 117 fueron adquiridos por Beckman Coulter.

Sin etiqueta CD109 (Abcam) se conjugó con la naranja del Pacífico, mediante el Zenon
R Kit de tecnologías de etiquetado (Life Technologies), de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

CD34, CD90 y CD117 expresión se evaluaron en el ADN + (SYTO16 +) CD45-CD31 + CD109 + y sobre el ADN + (SYTO16 +) las células CD45-CD31 + CD146 +.

Para confirmar mediante citometría de flujo la naturaleza endotelial de CD109 + países de Europa central y CD146 + CEC, que utilizan Ulex Europeaus lectina y Ac-LDL FITC arriba haremos.

Para Ac-LDL FITC a tomar, se recogieron 5 ml de sangre de 5 pacientes con cáncer de mama diferentes, y después de las multinacionales aislamiento con Ficoll-gradiente, las células se incubaron con FITC Ac-LDL de acuerdo con las instrucciones del fabricante (10 mg /ml durante 4 horas a 37 ° C). Después de la incubación Ac-LDL, teñidas con células SYTO16, CD45, CD31 y CD109 para investigar la presencia de células AcLDL + CD109 + (entre nucleadas) las células CD31 + CD45-SYTO16 +. Se realizaron cinco experimentos diferentes.

La detección de CD109 + CD146 + países de Europa central y países de Europa central en sujetos sanos y pacientes con cáncer

Siguiendo un protocolo de citometría de flujo validado en nuestro laboratorio para la detección de la CCA (Fig. 1), [ref 14], se evaluaron el número y la viabilidad de CD109 + países de Europa central y CD146 + CEC en la sangre periférica de 50 sujetos sanos y 200 pacientes con cáncer (66 cáncer de mama metastásico y 134 pacientes con glioblastoma).
fluorescencia
menos uno de se ha informado de cada uno de fluorescencia.

brevemente, se utilizó la tinción nuclear SYTO16 para discriminar entre ADN que contiene células, plaquetas y restos celulares, y 7AAD para determinar el estado de viabilidad de las células. El panel de MoAbs usados ​​incluyeron anti-CD45 (para excluir las células hematopoyéticas), anti-CD31 (un marcador de diferenciación de células endoteliales), anti-CD34 (tal como se endoteliales y células progenitoras marcador) y anti-CD109 o anti-CD146.

Después de la incubación de 2,5 × 10
6 células totales con MoAb (4 ° C durante 20 minutos) y las células de lisis con cloruro de amonio (NH
4Cl), al menos 2 × 10
6 células totales fueron adquiridos en citómetro de flujo (FACS-Canto, BD, de 2007 a 2010 y Navios, Beckman Coulter, a partir de 2010 hasta febrero de 2013). El análisis se realizó en células positivas para SYTO16 (ADN) negativas para CD45, y positivos para CD31 y CD109 o de CD31 y CD146.

La combinación de SYTO16 y 7AAD se utilizó para evaluar la viabilidad CEC de acuerdo con van der Pol et al. [34]. Se identificaron las células necróticas como SYTO16 baja /7AAD células apoptóticas positivas, como SYTO16 baja /7AAD células negativas y viables como SYTO16 brillante /7AAD negativo.

Análisis estadístico

Las variables continuas se expresan como media ± SEM. Bidireccional prueba de la t de Student ANOVA, o de dos colas, se utilizaron en su caso. La significación estadística fue tomada en p. & lt; 0,05

Resultados

colonias endoteliales fenotipo

Periférico MNC de sangre (30 × 10
6 células chapados) generaron colonias endoteliales de 9 de 10 sujetos sanos y de 14 de 23 pacientes. Todas las colonias endoteliales fueron positivas para CD31, CD146, CD34 y VEGFR-2 y negativas para CD45.

colonias endoteliales de todos los sujetos sanos y de 10 pacientes con cáncer se evaluaron también para la expresión CD109. CD109 se expresa en las culturas 1/9 endoteliales de sujetos sanos (11%) y en 5/10 (50%) los cultivos endoteliales de pacientes con cáncer.

RT-PCR de la ordenada CD109 + CD146 + países de Europa central y países de Europa central

Doblar los cambios de genes hacia abajo o hasta reguladas se expresan comparan ADNc a partir de CD109 + CD146 + CEC al CEC como células de referencia (Fig. 2).

Doblar los cambios de genes hacia abajo o hacia arriba-regulado están expresado comparando cDNA de CD109 + de células CD146 + como las células de referencia. Para asegurar la reproducibilidad biológica, la sangre para la colección de ADNc se obtuvieron a partir de 8 donantes diferentes.

En tanto CD109 + CD146 + países de Europa central y países de Europa central se confirmó la expresión de mRNA nivel de CDH5 (cadherina VE) y CLDN5 (Claudín V), dos transcripciones específicas endoteliales, lo que sugiere que ambas células están relacionados y de la naturaleza del endotelio [23] - [24]. Se obtuvieron los mismos resultados para los niveles de mRNA de vWF, VCAM1 y CD34.

Los niveles más altos de transcripciones endoteliales específicos expresados ​​en el desarrollo de las células endoteliales [33] CLEC14a, TMEM204, ARHGEF15, GPR116, se observaron en ordenada CD109 + CEC cuando en comparación con los países de Europa central ordenados CD146 +.

Curiosamente, los niveles de mRNA de TEM8 (identificado como Antrax toxina receptor1, Antrax1) se expresaron sólo en CD109 + CEC + pero no en CD146 + CEC.

CD109 + y CD146 + CCA fenotipo

Tal como se muestra en la Fig. 3, entre las células CD31-AAD-7 + CD45 + SYTO16, hemos detectado dos población diferente de los países de Europa central, siendo uno positivo para CD109 + pero negativo para CD146, y uno positivo para CD146 pero negativo para CD109. Tanto CD146 + CD109 + países de Europa central y países de Europa central fueron negativas para CD90 y CD117, para confirmar que estas células son células diferenciadas y no es probable progenitores. CD34 fue positiva en 30% de CD146 + CECs y el 20% de CD109 + CECs, y CD13 fue positiva en 50% y 60% de CD146 + CECs y CD109 + CECs respectivamente, lo que confirma que estas células son células de la vasculatura angiogénica [44] activados.

Después de la exclusión de los desechos (a) y la selección de CD45 (B), nucleado (SYTO16 +) y células CD31 + (C), CCA fueron identificados como positivos para CD109 o CD146 (e). (D): control negativo. CD109 + CD146 + países de Europa central y CEC fueron evaluadas por citometría de flujo para la expresión de CD34, CD117, CD90 y CD13.

Tanto CD146 + CD109 + países de Europa central y países de Europa central fueron positivos para el Ulex Europeaus lectina (fig. 4 A-B1). Para excluir la contaminación células epiteliales, se tiñeron nucleadas (SYTO16 +) CD45- células para EpCAM e incluso si una subpoblación de células EpCAM + está presente, estas células son negativas para la expresión CD31 (Fig. 4 C-C1).

tinción EpCAM (4C-C1) confirmó que las células epiteliales, incluso si están presentes en el compartimiento de células CD45 + de ADN, son negativos para la expresión de CD31 presente sólo en las células endoteliales.

para examinar CD109 + CEC función, se realizó Ac-LDL efectos de adopción. Como Ac-LDL es tomado por macrófagos /monocitos, hemos utilizado estas células como "control positivo interno" para confirmar la actividad endocitosis. Como se informó en la Fig. 5, + células entre Ac-LDL tanto se detectaron CD45 + CD31 + CD14 + (monocitos) y CD45-CD31 + CD109 + (células endoteliales).

Después de dublets (A) y los residuos de exclusión (B), Ac-LDL + se detectaron las células (C). Entre estas células, se detectaron las células CD45 + CD31 + y CD45-CD31 + (D). CD45 + CD31 + también fueron positivas para CD14 (monocitos, E) y CD45-CD31 + también fueron positivas para CD109 + (células endoteliales, F). Ac-LDL + células fueron nucleados (SYTO16 +, F). C1, D1, E1 y F1 son los controles negativos.

La detección de CD109 + CEC en sujetos sanos y pacientes con cáncer

Los pacientes características se presentan en la Tabla 1.


niveles significativamente mayores de CD109 + CEC, CD146 + CEC, viable CD109 + países de Europa central y viable CD146 + CEC (p = 0,0001) fueron encontrados al inicio del estudio en pacientes con cáncer de mama y pacientes con glioblastoma en comparación con los controles sanos (Tabla 2). CD109 + CEC fueron 26 ± 20 /ml en sujetos sanos (n = 50), 62 ± 43 /ml en pacientes con cáncer de mama metastásico (n = 66, p & lt; 0,0001) y 101 ± 84 /ml en pacientes con glioblastoma (n = 134 , p & lt; 0,0001) antes del tratamiento. La fracción de apoptosis /necrosis CD109 + CEC fue de 71 ± 18% en sujetos sanos, 51 ± 18% en pacientes con cáncer de mama y 60 ± 21 en pacientes con glioblastoma.

Después del tratamiento CD109 + países de Europa central y viable CD109 + CEC fueron 52 ± 42 /ml y 15 ± 20 /ml, respectivamente, en los pacientes con cáncer de mama, y ​​64 ± 60 /ml y 35 ± 30 /ml en pacientes con glioblastoma (Tabla 3).

CD146 + CEC fueron 43 ± 23 /ml en sujetos sanos (n = 50), 103 ± 83 /ml en pacientes con cáncer de mama (n = 64, p & lt; 0,0001) y 117 ± 87 en pacientes con glioblastoma (n = 134, p & lt; 0,0001).

La fracción de apoptosis /necrosis CD146 + CEC fue de 67 ± 20% en sujetos sanos, 62 ± 20% en pacientes con cáncer de mama y 66 ± 18 /ml en pacientes con glioblastoma antes del tratamiento.

Después del tratamiento CD146 + países de Europa central y viables CD146 + CEC fueron del 96 ± 121 /ml y 41 ± 88 /ml, respectivamente, en los pacientes con cáncer de mama, y ​​78 ± 84 /ml y 23 ± 31 /ml en pacientes con glioblastoma (Tabla 3) .

Discusión

heterogeneidad celular endotelial se ha descrito en el nivel de la morfología celular, la función, la expresión génica, y la composición de antígeno. Debido a que los vasos sanguíneos se distribuyen por todo el cuerpo, las células endoteliales se exponen a una enorme variedad de microambientes de tejido, y la amplia gama de entradas de señal es suficiente para generar heterogeneidad fenotípica a través del árbol vascular [19], [21], [35] .

Detección de células endoteliales circulantes por citometría de flujo es un método ampliamente utilizado en pacientes con cáncer, y la identificación del número, la viabilidad y la cinética de las células endoteliales es una herramienta prometedora para estratificar paciente que recibe tratamiento anti-angiogénico [ ,,,0],15] - [18]

en la actualidad, los CEC se enumeran por un enfoque multiparamétrico citometría de flujo combinando CD146, CD31, CD45, un antígeno nuclear de unión (SYTO16, DAPI o HOECST) junto con una tinción celular viabilidad (. como 7-AAD o Anexina V).

CD109 es una glicoproteína de superficie celular glicosilfosfatidilinositol anclado y es uno de los 12 marcadores endoteliales sobre-expresado en las células endoteliales tumorales [23], [24].

en este trabajo, siguiendo un enfoque recientemente validado en nuestro laboratorio [14], nos lo solucionaron CD109 + países de Europa central y CD146 + países de Europa central y confirmamos por RT-PCR, tanto en la población de la expresión de mRNA nivel de CDH5 (cadherina VE) y CLDN5 (Claudin5) dos genes expresados ​​selectivamente en células endoteliales. Niveles más altos de CLEC14a, TMEM204, ARHGEF15, GPR116 expresaron en el desarrollo de las células endoteliales [33], estaban presentes en CD109 + CECs cuando se compara con CD146 + CECs, lo que sugiere que estos genes pueden jugar un papel importante no sólo en el desarrollo de las células endoteliales sino también en angiogénesis adulto.

Hemos demostrado que CD109 + CD146 + países de Europa central y países de Europa central son dos subpoblaciones diferentes de las células endoteliales, siendo estos dos antígenos no expresadas en las mismas células, mientras que CD34 (un marcador utilizado actualmente para identificar las células progenitoras) fue positivo en el 20% de los países de Europa central y CD109 + el 30% de los países de Europa central CD146 +.

se evaluaron el número, la viabilidad y la cinética de CD109 + países de Europa central y del CD146 + países de Europa central y observamos que tanto la subpoblación de células endoteliales se enriquecen en la sangre de pacientes con glioblastoma y cáncer de mama, son más viables si se compara con el valor observado en sujetos sanos, y su número disminuyó significativamente después del tratamiento.

en nuestra experiencia anterior, se informó de que en los pacientes con cáncer de mama tratadas con quimioterapia metronómica, CD146 + niveles de la CCA después de dos meses de tratamiento se asociaron con la SLP prolongada [15]. En otro ensayo clínico, en el seno pacientes con cáncer tratados con quimioterapia metronómica y bevacizumab, los niveles de la CCA de referencia también se asociaron con la SLP [36], [37] que confirma que la cuantificación de CD146 + CEC es útil para identificar a los pacientes que podrían beneficiarse de los tratamientos antiangiogénicos [ ,,,0],38].

en una serie de pacientes con glioblastoma tratados con AZD2171, un inhibidor de la tirosina quinasa del receptor de las isoformas del VEGF, Batchelor encontraron que los niveles de la CCA viables fueron mayores en los pacientes que experimentaron progresión de la enfermedad durante el tratamiento con AZD2171 en comparación con los pacientes sin la progresión en el día 112 [39].

recientemente hemos informado [40] que en los pacientes con glioblastoma tratados con bevacizumab e irinotecán o con bevacizumab solo, SLP y la SG fueron significativamente superiores en pacientes con recuentos basales de CD109 + CEC mayor de 41.1 /ml, (1stquartile), mientras que ningún factor pronóstico se asocia a CD146 + CEC.

Estos datos sugieren que la heterogeneidad de la CCA puede reflejar la complejidad del tumor vascular y que CD109 + CEC podría ser un marcador pronóstico potencialmente útil para el glioblastoma pacientes.

se ha informado de que CD109 se expresa sobre-en la vasculatura del tumor [24], y en este estudio se observó que todas las colonias endoteliales de sujetos sanos y de 10 pacientes de cáncer fueron positivos para CD31, CD146, CD34 y VEGFR-2 y negativas para CD45, CD109, mientras que era positivo en 1/9 cultivos endoteliales de sujeto sano (11%) y en 5/10 (50%) los cultivos endoteliales de pacientes con cáncer.

Además m ARN-nivel de TEM8, una glicoproteína de superficie celular del receptor identificado como Ántrax toxina 1, fueron detectables en CD109 + países de Europa central, pero no en CD146 + CEC. Se ha informado de que TEM8, está regulado en los vasos del tumor [41], [42]. En ratones Knockout TEM8 la angiogénesis fisiológica y la cicatrización de heridas se producen normalmente, pero en los ratones portadores de tumores, el crecimiento del tumor se ve afectada, lo que demuestra que TEM8 puede ser necesaria para promover la angiogénesis del tumor pero no el desarrollo normal [43].

Tomados en conjunto estos resultados sugieren que CD109 puede representar una población rara de células endoteliales tumorales, que juegan un papel pronóstico potencialmente útil en pacientes con glioblastoma en circulación. El papel de la expresión CD109 en las células endoteliales de los vasos específicos de cáncer merece investigarse más a fondo por los estudios de expresión génica.

Conclusiones

Hay una necesidad creciente en la identificación de marcadores biológicos circulantes para estratificar a los pacientes que pueden beneficio del tratamiento anti-angiogénico. En este trabajo mostramos que CD109 es un potencial marcador pronóstico útil en pacientes con glioblastoma, y ​​que su papel en la angiogénesis del cáncer necesitan ser investigados en el establecimiento de tumor diferente.

Reconocimientos

Apoyado en parte por AIRC, (Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro), la Fundación Umberto Veronesi, y el Ministero della Salute.

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