Extracto
Antecedentes
transmembrana proteína asociada a lisosoma 4b-35 (LAPTM4B-35) es una miembro de la superfamilia de proteínas de mamífero 4-tetratransmembrane de expansión, que se sobreexpresa en varios tumores malignos sólidos. Sin embargo, la expresión de LAPTM4B-35 y su papel en la progresión del cáncer de próstata (CaP) es desconocida. El objetivo del presente estudio fue investigar la expresión LAPTM4B-35 en el CaP y su posible relación con variables clínico y el pronóstico.
Métodos
La inmunohistoquímica se utilizó para determinar la expresión de LAPTM4B-35 proteína en 180 tejidos con CaP en comparación con los 180 especímenes normales hiperplasia prostática benigna (HPB). Se analizó la correlación entre la expresión de la proteína LAPTM4B-35 y las características clínico-patológicas de los pacientes con CaP.
Resultados
El análisis estadístico mostró que LAPTM4B-35 expresión fue significativamente elevado en comparación con CaP los controles de la HPB. Alta LAPTM4B-35 tinción estuvo presente en el 71,11% de todos los casos con CaP. La sobreexpresión de LAPTM4B-35 se asoció significativamente con la metástasis de ganglios linfáticos, invasión de vesículas seminales, la etapa CaP, más alta puntuación de Gleason, mayor PSA preoperatorio, y la recurrencia bioquímica (BCR). El análisis de supervivencia de Kaplan-Meier mostró que la alta expresión de LAPTM4B-35 estaba relacionado con la mala supervivencia global y libre de BCR-supervivencia de los pacientes con CaP. Multivariante de Cox análisis mostró que LAPTM4B-35 fue un factor pronóstico independiente de la supervivencia y BCR-libre de la supervivencia global de los pacientes con CaP.
Conclusiones
La sobreexpresión de LAPTM4B-35 puede estar asociada con el tumor progresión y mal pronóstico en el CaP y por lo tanto pueden servir como un nuevo marcador molecular para predecir el pronóstico de los pacientes con CaP
Visto:. Zhang H, Q Wei, Liu R, S Qi, Liang P, Qi C, et Alabama. (2014) La sobreexpresión de LAPTM4B-35: A Novel marcador de mal pronóstico del cáncer de próstata. PLoS ONE 9 (3): e91069. doi: 10.1371 /journal.pone.0091069
Editor: Kaustubh Datta, Universidad de Nebraska Medical Center, Estados Unidos de América
Recibido: 25 Agosto, 2013; Aceptó 7 de febrero de 2014; Publicado: 20 Marzo 2014
Derechos de Autor © 2014 Zhang et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Nº: 81172451), el Proyecto de Lucha contra el cáncer de Tianjin Mayor (12ZCDZSY17200), y la Fundación de Ciencias de la Universidad médica de Tianjin. (NO: 2009GSI18). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
a medida que la neoplasia maligna más común en los hombres, el cáncer de próstata (CaP) es la segunda causa más común de muertes relacionadas con el tumor en los Estados Unidos [1]. Aunque el pronóstico para los pacientes con enfermedad localizada o regional es buena, para los pacientes en los Estados Unidos que desarrollan la enfermedad metastásica, la tasa de supervivencia a 5 años es de sólo el 29% [2]. Sin embargo, los mecanismos moleculares carcinogénesis y la progresión del CaP subyacentes aún no han sido plenamente explicado. Por lo tanto, los esfuerzos para identificar los marcadores moleculares más que podría ser utilizado para detectar CaP así como individualizar tanto el pronóstico y la terapia del paciente son de gran importancia clínica.
factores pronósticos convencionales, tales como la puntuación de Gleason, los niveles de PSA preoperatorios o relación de biopsias involucradas predecir el resultado del paciente en grado insuficiente para las terapias disponibles en la actualidad. Son aún más limitado en la identificación de cáncer de próstata insignificante, es decir, el cáncer que podrían ser deja sin tratar, sin acortar la esperanza de vida del paciente, pero en evitarles la morbilidad del tratamiento injustificada. Por lo tanto, los esfuerzos para encontrar nuevas vías de diagnóstico y las opciones terapéuticas se exigen con urgencia para optimizar el manejo del paciente [3] - [6]. La identificación de nuevos biomarcadores de cáncer de próstata debe ser de primera prioridad clínica, si se tiene en cuenta la heterogeneidad de los tumores de próstata problemática y las soluciones que la medicina personalizada puede proporcionar. Estos biomarcadores debe ser capaz de mejorar el diagnóstico diferencial y que indica el curso de la enfermedad CaP tan pronto y tan precisa como sea posible, por tanto, en última instancia, limita la cantidad de procedimientos médicos no esenciales [7] - [10]. biomarcadores de tejidos pueden enriquecer significativamente este enfoque, proporcionando información significativa para la gestión del CP a través de la utilización de muestras de biopsias o prostatectomías [8], [11].
Recientemente, LAPTM4B (proteína lisosomal TRANSMEM-brana 4A) , que se identificó inicialmente como un nuevo gen upregulated en el carcinoma hepatocelular humano [12], [13], se clonó con éxito por presentación diferencial de fluorescencia, la amplificación rápida de extremos de ADNc y reacción en cadena de la polimerasa-transcriptasa. Se ha demostrado que el gen LAPTM4B está mapeado en el cromosoma 8q22.1 con un ARNm que consta de 7 exones y codifica una proteína de 35-kDa, LAPTM4B-35, que es una proteína transmembrana de tipo III con cuatro regiones transmembrana putativos. Los estudios han demostrado que la actividad de LAPTM4B-35 es elevada en varios cánceres humanos. Por otra parte, la sobreexpresión de LAPTM4B-35 se asocia con un mal pronóstico y contribuye a la transformación celular, tumorigénesis y progresión metastásica en estos tipos de cáncer [14] - [18]. Sin embargo, el significado clínico patológica y la función biológica de LAPTM4B-35 en el CaP siguen sin estar claros.
Hasta la fecha, no ha habido informes publicados que evalúan la función de LAPTM4B-35 expresión en el CP. Por lo tanto, el objetivo del presente estudio fue investigar la expresión de LAPTM4B-35 en el CaP y analizar su relación con diversas características clínico-patológicas, incluyendo el resultado del paciente CaP.
Materiales y Métodos
Paciente y muestras de tejidos
escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los pacientes. Se obtuvo la aprobación del Comité de Ética Médica de la Universidad Médica de Tianjin con el propósito de la investigación (TMUhMEC2012015). Tras la aprobación por la Junta de Revisión Institucional, archivada fijado en formol, las muestras incluidas en parafina se obtuvieron de 180 pacientes con CP y 180 pacientes con hiperplasia prostática benigna (HPB), que fueron tratados quirúrgicamente en el segundo hospital de la Universidad Médica de Tianjin, Tianjin, China entre enero de 1999 y diciembre de 2010 [19] - [21]. Todas las muestras de tejido y diapositivas fueron examinados por patólogos experimentados. Ninguno de los pacientes recibió quimioterapia, inmunoterapia, radioterapia o antes de la cirugía. Las características clínico-patológicas de los pacientes, incluyendo el PSA preoperatorio, la puntuación de Gleason, estadio CaP, los ganglios linfáticos, el estado invasión angiolinfática, estado de los márgenes quirúrgicos, el estado de invasión de la vesícula seminal y el BCR se resumen en la Tabla 1.
la tinción inmunohistoquímica
se obtuvieron secciones de cuatro micrómetro en las muestras fijadas en formalina, incluidos en parafina, seguido de hematoxilina y eosina para la confirmación de la patología CaP. Tomamos las secciones inmediatamente adyacente a la hematoxilina y eosina partes para inmunohistoquímica y Deparaffinized los tejidos seleccionados en xileno y rehidratada con concentraciones de alcohol graduadas con arreglo a procedimientos estándar. Posteriormente, los cortes desparafinados se sumergieron en tampón de 0,01 mol /L de citrato (pH 6,0) y se calentó durante quince minutos en un horno de microondas. Después de la incubación secuencial con peróxido de hidrógeno al 3% y suero de cabra normal al 10% durante diez minutos individual, la actividad de peroxidasa endógena y la inmunoglobulina la unión no específica fueron bloqueados de forma consecutiva en este orden. A continuación, se adoptó la técnica de inmunoperoxidasa avidina-biotina para llevar a cabo la tinción inmunohistoquímica. Las secciones se incubaron durante una hora con el conejo primaria anticuerpo policlonal LAPTM4B-35 anticuerpo anti-humano (dilución, 1:100) (LAPTM4BN199-pAb; Abcam Co) a temperatura ambiente, se enjuagaron, y se incubaron durante 30 minutos con anticuerpo secundario biotinilado. Después las secciones se lavaron extensivamente con agua, se incubaron con un anticuerpo secundario marcado con biotina seguido de rábano picante estreptavidina conjugada con peroxidasa durante treinta minutos cada uno. La incubación con 3,3 '-diaminobenzidine tetrahydrochloride en 0,01% de H2O2 durante 10 minutos previstos desarrollo del color. A continuación, las diapositivas se counterstained con hematoxilina de Meyer durante treinta a sesenta segundos y se montaron en medio de montaje acuoso. Finalmente, inmunohistoquímica se realizó con un kit de inmunohistoquímica, siguiendo las instrucciones del fabricante. Control negativo diapositivas se tiñeron con suero de conejo.
tinción Evaluación
LAPTM4B-35 los niveles de expresión de proteínas se clasifican semicuantitativamente basan en las puntuaciones totales combinados del porcentaje de células tumorales-tinción positiva y la intensidad de tinción [21]. El porcentaje de células positivas, medida como el alcance de la inmunotinción, se puntuó como sigue: 0, menos de 5% de tinción; 1, 5% a 50%; y 3, & gt; 50% de tinción. La intensidad de la tinción se puntuó como sigue: 0, sin tinción o solamente tinción débil; 1, tinción moderada; y 2, una fuerte tinción. La puntuación intensidad de la tinción más el porcentaje de tinción positiva se utilizó para definir los niveles de expresión: 0-2, baja expresión y 3-4, la alta expresión [21]. El procedimiento de puntuación se llevó a cabo por duplicado por 2 patólogos independientes que tienen experiencia en la evaluación de inmunohistoquímica y no tenían conocimiento de la información clínico-patológico o las correspondientes diapositivas hematoxilina y eosina. La tasa de concordancia entre los dos patólogos primarios fue superior al 96%. En caso de discrepancia significativa, los portaobjetos en cuestión se vuelvan a revisar simultáneamente por los dos patólogos originales, junto con un tercer patólogo en un microscopio de múltiples cabezas, con el fin de resolver la divergencia de opiniones.
Análisis estadístico
se utilizó la prueba de chi-cuadrado para analizar las diferencias de las variables categóricas. La supervivencia global y la supervivencia libre de BCR-se calcularon de acuerdo con el método de Kaplan-Meier y evaluadas por la prueba de log-rank. Regresión de Cox (modelo de riesgo proporcional) se llevó a cabo para el análisis multivariado de predictores de pronóstico. P & lt; 0,05 se consideró significativo. El análisis estadístico se realizó utilizando el software SPSS 17.0.
Resultados
LAPTM4B-35 proteína está sobreexpresada en los tejidos con CaP
LAPTM4B-35 expresión se sobreexpresa en los casos de CaP en comparación con la HPB , y la diferencia fue estadísticamente significativa (P & lt; 0,001) (Tabla 1). Como se muestra en Figuras S1, S2, S3, S4, la expresión LAPTM4B-35 se localiza en el citoplasma de células de la próstata. De las 180 muestras examinadas con CaP, LAPTM4B-35 expresión fue baja en 52 (28,89%) de los 180 pacientes con CaP y alta en 128 (71.11%) de los 180 pacientes. expresión LAPTM4B-35 fue significativamente mayor en el escenario y la invasión de la vesícula seminal casos de CaP más altos; LAPTM4B-35 expresión también fue significativamente mayor en los pacientes con CaP con metástasis en los ganglios linfáticos, el aumento de PSA preoperatorio, mayor puntuación de Gleason y BCR. Por otra parte, no se observó una asociación significativa entre LAPTM4B-35 inmunoreactividad y la edad, la invasión angiolinfática, y el estado de los márgenes quirúrgicos. La asociación entre LAPTM4B-35 expresión y clínico-patológicas factores se muestra en la Tabla 2.
El impacto de LAPTM4B-35 expresión en la supervivencia libre de BCR-en el CaP
Para examinar si LAPTM4B- 35 nivel de expresión es un predictor significativo de tiempo BCR-libre después de la prostatectomía radical, las curvas de Kaplan-Meier se representaron entre alta o baja LAPTM4B-35 y la hora de BCR-libre. La baja expresión LAPTM4B-35 tenía significativamente más largo BCR-tiempo libre después de la prostatectomía radical en comparación con los pacientes con alta expresión LAPTM4B-35 (P & lt; 0,001; Figura S5). En el análisis univariante, la alta expresión de LAPTM4B-35, más alta puntuación de Gleason, y la invasión de vesículas seminales estaban relacionados con una mala supervivencia libre de BCR para los pacientes con CaP. El análisis multivariado mostró que la alta expresión LAPTM4B-35, la puntuación de Gleason, y la invasión de vesículas seminales fueron los factores pronósticos independientes para la supervivencia de BCR-libres. Los resultados se presentan en la Tabla 3.
El impacto de LAPTM4B-35 expresión en la supervivencia global en el CaP
Para examinar el impacto de LAPTM4B-35-expresión en la supervivencia global, nos primero realizado el análisis univariado de las variables clínico-patológicas tradicionales para el pronóstico. Las variables significativas en el análisis de supervivencia global incluyen la expresión LAPTM4B-35, etapa CaP, la puntuación de Gleason, invasión de vesículas seminales, y PSA preoperatorio. El análisis de regresión multivariante de Cox inscribirse parámetros significativos mencionados anteriormente mostró que la expresión LAPTM4B-35, etapa CaP, la puntuación de Gleason y el PSA preoperatorio fueron factores pronósticos independientes para la supervivencia global de los pacientes con CaP. Los resultados se muestran en la Tabla 4.
Discusión
En este estudio, se analizaron LAPTM4B-35 expresión mediante técnicas de inmunohistoquímica en el CaP usando 180 muestras quirúrgicas. Se analizó la asociación entre LAPTM4B-35 expresión y características clinicopathogical tradicionales en CaP. Los datos actuales muestran que la sobreexpresión LAPTM4B-35 se asoció con una baja supervivencia mediante el análisis de la supervivencia global y la supervivencia libre de BCR-. La expresión de alto LAPTM4B-35 se correlacionó significativamente con la etapa superior del CP, invasión de vesículas seminales, la metástasis de los ganglios linfáticos, el aumento de PSA preoperatorio, mayor puntuación de Gleason y BCR, pero no con la edad, estado de los márgenes quirúrgicos, y la invasión angiolinfática. Por otra parte, nuestros datos también demostraron que los pacientes con una expresión de alto LAPTM4B-35 tuvieron una supervivencia global y libre de BCR-significativamente peor supervivencia mediante el método de Kaplan-Meier y log-rank test. El análisis multivariado demostró que LAPTM4B-35 expresión era un factor pronóstico independiente de la supervivencia y BCR-libre de la supervivencia global en pacientes con CaP. A lo mejor de nuestro conocimiento, este es el primer estudio que demuestra en detalle una asociación de parámetros clínico y significado pronóstico de LAPTM4B-35 sobreexpresión en el CaP. Estos resultados sugieren que la expresión de alto LAPTM4B-35 juega un papel crítico en la progresión de CaP y se asocia significativamente con un mal pronóstico independientemente de otros factores. Esto plantea la posibilidad de que LAPTM4B-35 puede ser un parámetro de pronóstico para CaP que es tan o más fiable que los factores clinicopatológicos actualmente en uso y sugiere la posibilidad de utilizar LAPTM4B-35 en la individualización de tanto el pronóstico y la terapia del paciente. Nuestros resultados son coherentes con los informes anteriores de los papeles de LAPTM4B-35 en la progresión del tumor, incluyendo el carcinoma de la vesícula biliar, carcinoma de ovario, carcinoma hepatocelular, cáncer de mama, y colangiocarcinoma extrahepático, y apoyan una relación entre la alta expresión de la proteína LAPTM4B-35 y desfavorable comportamiento biológico en el CaP.
Sin embargo, si LAPTM4B-35 es eficaz para la aplicación clínica como sustitutos de, o además de, los parámetros de pronóstico actualmente en uso todavía no está claro, y ampliar la investigación para identificar si detección combinada de LAPTM4B-35, junto con algunas de estas otras moléculas sería valiosa para mejorar la eficacia de pronóstico. La estrecha relación entre la sobreexpresión LAPTM4B-35 y las características clinicopatológicas predijo que LAPTM4B-35 podría jugar un papel importante en la carcinogénesis y la progresión tumoral. Actualmente, se han producido algunas pistas que son capaces de ayudar a explicar sus mecanismos. De acuerdo con los datos publicados de algunos autores, la sobreexpresión de LAPTM4B-35 resultados en la activación de algunos protooncogenes, tales como c-myc, c-jun y c-fos, y la transformación maligna en algunas líneas celulares [22], [23] . Así el gen LAPTM4B podría servir como un protooncogén a través de su producto de traducción, LAPTM4B-35. Estos datos proporcionan evidencia importante para explicar el mecanismo por el cual LAPTM4B expresión contribuye a la carcinogénesis y la progresión del tumor, aunque el papel de LAPTM4B en las vías de transducción de señales en las células tumorales es ciertamente más investigación vale la pena.
Además, el papel significativo de LAPTM4B en el cáncer sugiere la posibilidad de que sea un objetivo potencial para terapias contra el cáncer. Se ha revelado que la transfección del gen LAPTM4B promovió el crecimiento independiente de anclaje y la formación de colonias de células HLE, mientras que los oligonucleótidos antisentido contra LAPTM4B inhibió la proliferación de BEL-7402, en la que se encontró LAPTM4B expresión una línea celular de carcinoma hepatocelular. Por otra parte, una alta homología con LAPTM4A indicado que LAPTM4B podría tener una función similar en la resistencia a múltiples fármacos [24], [25]. Por otra parte, el papel importante de LAPTM4B en el cáncer sugiere la posibilidad de que sea un objetivo potencial para terapias contra el cáncer. Algunos estudios anteriores indicaron que LAPTM4B puede ser un nuevo objetivo de la terapia. Todos estos resultados indican la posibilidad de hacer LAPTM4B como un objetivo potencial para la terapia de CaP. Sin duda, se necesitan más apoyos fuertes a partir de investigaciones básicas.
Nuestro estudio tiene algunas limitaciones. El tamaño de la muestra no es lo suficientemente grande. Para resolver este problema, un estudio aleatorio investigar la asociación entre LAPTM4B-35 expresión y el pronóstico debe llevarse a cabo para confirmar si LAPTM4B-35 podría ser utilizado como una novela predictor de CaP pronóstico. En resumen, este es el primer estudio que muestra una asociación entre la sobreexpresión LAPTM4B-35 y CP. Hemos demostrado que LAPTM4B-35 se sobreexpresa en una gran proporción de pacientes con CaP y alta expresión LAPTM4B-35 correlaciona con la progresión del CaP y de mal pronóstico en el CaP. Además, LAPTM4B-35 podría ser una diana atractiva para la terapia de CaP. Sin embargo, estos resultados aún no se han confirmado en estudios futuros.
Información de Apoyo
figura S1.
fotografía representativa que muestra alta expresión LAPTM4B-35 en el CaP mediante técnicas de inmunohistoquímica. Aumento original, × 200
doi:. 10.1371 /journal.pone.0091069.s001 gratis (TIF)
figura S2.
fotografía representativa que muestra una baja expresión LAPTM4B-35 en el CaP mediante técnicas de inmunohistoquímica. Aumento original, × 200
doi:. 10.1371 /journal.pone.0091069.s002 gratis (TIF)
Figura S3.
fotografía representativa que muestra una baja expresión LAPTM4B-35 en la HBP mediante técnicas de inmunohistoquímica. Aumento original, × 200
doi:. 10.1371 /journal.pone.0091069.s003 gratis (TIF)
figura S4.
fotografía representativa que muestra ninguna expresión LAPTM4B-35 en el CaP mediante técnicas de inmunohistoquímica (control negativo). Aumento original, × 200
doi:. 10.1371 /journal.pone.0091069.s004 gratis (TIF)
Figura S5. Federaciones de entre LAPTM4B-35 expresión y el tiempo de BCR-libre después de la prostatectomía radical en pacientes con CaP. Los pacientes con alta expresión LAPTM4B-35 mostraron significativamente menor supervivencia libre de BCR-que aquellos con baja expresión LAPTM4B-35 (P & lt; 0,001, prueba de log-rank)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0091069.s005
(TIF)