Extracto

Aplicaciones


PIK3CA
gen que codifica una subunidad catalítica de la fosfatidilinositol-3-quinasa (PI3K) se muta y /o amplifica en diversos neoplasia, incluyendo el cáncer de pulmón. Aquí se investigó
PIK3CA
alteraciones génicas, la expresión de los componentes básicos de vía PI3K, y evaluado su importancia clínica en el cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC).

Materiales y métodos

oncogénicos mutaciones /reordenamientos en
PIK3CA
,
EGFR
,
KRAS
,
HER2
,
BRAF, AKT1 Opiniones y
ALK
genes fueron detectados en los tumores de 1117 pacientes con NSCLC.
PIK3CA
número de copias del gen fue examinado por fluorescencia
In situ
hibridación y la expresión de p110 de PI3K de la subunidad alfa (p110α PI3K), p-Akt, mTOR, PTEN se determinó por inmunohistoquímica en
PIK3CA
casos mutantes y 108 pacientes sin
PIK3CA
mutación.

resultados


PIK3CA
mutación se encontró en el 3,9% de carcinoma de células escamosas y el 2,7% de adenocarcinoma. Entre 34
PIK3CA
casos mutantes, 17 tumores albergado concurrentes
EGFR
mutaciones y 4 tenían
KRAS
mutaciones.
PIK3CA
mutación se asoció significativamente con alta expresión de p110α PI3K (
p Hotel & lt; 0,0001), p-Akt (
p = 0,024
) y mTOR (
p = 0,001
), pero no se correlacionó con
PIK3CA
amplificación (
p = 0,463
). Los pacientes con un solo
PIK3CA mutación
tuvieron una supervivencia general más corta que aquellos con
PIK3CA CD -
EGFR /KRAS
co-mutación o de tipo salvaje
PIK3CA gratis (
p
= 0,004). Una supervivencia significativamente peor también se encontró en los pacientes con
PIK3CA
mutaciones que aquellos sin
PIK3CA
mutaciones en el
EGFR /KRAS de tipo salvaje
subgrupo (
p
= 0,043)

Conclusiones


PIK3CA mutaciones
coexisten frecuentemente con
EGFR /KRAS
mutaciones. El mal pronóstico de los pacientes con un solo
PIK3CA
mutación en NSCLC y el valor pronóstico de
PIK3CA
mutación en
EGFR /KRAS de tipo salvaje
subgrupos sugieren que el estado de la mutación distinta de
PIK3CA
gen debe determinarse para las estrategias terapéuticas individuales en NSCLC

Visto:. Wang L, Hu H, Pan Y, R Wang, Li Y, Shen L, et al. (2014)
Las mutaciones PIK3CA
coexisten frecuentemente con
EGFR /KRAS
Las mutaciones en células no pequeñas de cáncer de pulmón y sugerir un mal pronóstico en
EGFR /KRAS
Wildtype Subgrupo. PLoS ONE 9 (2): e88291. doi: 10.1371 /journal.pone.0088291

Editor: Giuseppe Viglietto, UNIVERSIDAD Magna Grecia, Italia |
Recibido: 25 Julio, 2013; Aceptado: 6 Enero 2014; Publicado: 12 de febrero 2014

Derechos de Autor © 2014 Wang et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan

Financiación:. Este estudio fue apoyado por becas de tecla de programa de construcción del Proyecto Nacional "985" (Grant No. 985III-YFX0102), la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (subvenciones Nº 81172218 y 81101761), la Comisión de Ciencia y Tecnología de la municipalidad de Shanghai (Programa de Shanghai Asunto Científico Jefe; la subvención No. 12XD1402000), la Fundación de la Administración de Salud de Shanghai (subvención Nº 20.114.206), y una subvención del Centro de Desarrollo de Shanghai hospital (Grant No. SHDC12012308). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito

Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia

Introducción

ha sido bien establecido que la fosfatidilinositol-3-quinasa vía (PI3K) está relacionada con la carcinogénesis en una variedad de cánceres humanos [1], [2], [3]. Tras la activación, PI3K inicia acontecimientos que conducen a la fosforilación de Akt, que afecta a las proteínas de señalización corriente abajo adicionales implicados en el crecimiento celular, el metabolismo, la proliferación, la supervivencia, la motilidad y la invasión [4], [5], [6]. actividad PI3K dependiente de frecuencia elevada debido a la mutación de la proteína
PIK3CA
, un gen que codifica la subunidad catalítica de PI3K p110α (PI3K p110α), y la ausencia de la fosfatasa y tensina homólogo (PTEN), un supresor de tumor con un papel importante en la regulación de la vía antiapoptótico y la supervivencia PI3K [7], [8]. Además, el aumento del número de copias de
PIK3CA
También se demostró que se asocia con un aumento de
PIK3CA
transcripción, expresión de la proteína p110α y PI3-quinasa actividad [9].

Las aberraciones en los componentes de la vía de señalización de PI3K se han reportado en muchos tumores sólidos, incluyendo cáncer de pulmón [2], [4], [7], [9]. Las mutaciones múltiples de
PIK3CA
que se producen con regularidad y en regiones altamente conservadas de la gen conducen a sustituciones de aminoácidos en el dominio de unión helicoidal codificado por el exón 9 y en la subunidad catalítica de p110α codificados por el exón 20, que resultan en la regulación positiva de la señalización vía PI3K [10]. En el cáncer de pulmón, copiar ganancias número de
PIK3CA
resultaron ser exclusivo de
PIK3CA
mutación, lo que implica que ambas alteraciones pueden tener un potencial oncogénico para promover la carcinogénesis en el pulmón [11]. La proteína PTEN regula negativamente la vía PI3K [12] y la pérdida de expresión de la proteína PTEN se ha relacionado con una mala supervivencia en pacientes con cáncer de lengua, y con más avanzado del tumor en el esófago y el cáncer de células escamosas orales, respectivamente [13], [14] . Por otra parte, Akt y mTOR se encuentran aguas abajo de PI3K y aumento de la fosforilación de mTOR se observa con frecuencia junto con Akt activada en el CPNM y la desregulación de mTOR contribuye a la progresión del cáncer de pulmón [15], [16].

En nuestro estudio anterior, se informó de que el 90% de 52 muestras de adenocarcinoma de pulmón de Asia oriental no fumadores albergaban mutaciones del conductor en un solo
EGFR
,
KRAS
,
HER2
y
ALK
genes [17]. La frecuencia de
EGFR
,
KRAS
,
HER2
mutaciones y
EML4-ALK sobre Fusion fueron 75,3%, 2%, 5,9% y 5% , por separado, en el reciente análisis de muestras de adenocarcinoma de pulmón de 202 pacientes chinos que nunca ha fumado [18]. Sin embargo, no más de 40% de los casos de NSCLC que incluye carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma y carcinoma de células grandes histología albergaran tales alteraciones [18]. Ahora es evidente que incluso dentro de un subtipo histológico claramente identificables, los cambios moleculares distintas pueden estar asociados con un espectro de características clínicas y también se correlacionan con el resultado y respuesta de la enfermedad al tratamiento [19]. Como resultado de ello, será necesario aclarar alteración molecular diferente para el tratamiento individual
.
Hasta la fecha, hay pocos estudios que constituyen una imagen completa de la expresión de los componentes en la vía PI3K,
PIK3CA
alteración del gen, y su correlación con NSCLC [20], [21]. En el presente estudio se analizaron
PIK3CA
mutación genética,
PIK3CA
amplificación, así como la expresión de PI3K p110α, p-Akt, mTOR y PTEN que se encuentran en la vía PI3K en un consecutiva colección de muestras de tumores de NSCLC. Esta comprensión detallada de las alteraciones de la vía PI3K en NSCLC podría permitir una delimitación más precisa de las poblaciones diana candidatas, lo que facilita el diseño de ensayos clínicos y validación de biomarcadores predictivos.

Materiales y Métodos

Pacientes y muestras

Entre octubre de 2007 diciembre de 2012, que forma consecutiva procuramos muestras de tumores primarios de pacientes con CPNM que fueron sometidos a resección pulmonar en el Departamento de Cirugía Torácica de la Universidad Fudan de Shanghai Centro del cáncer. Los sujetos elegibles para este estudio tenían que cumplir los siguientes requisitos: adenocarcinoma de pulmón confirmado patológicamente o carcinoma de células escamosas de pulmón, conteniendo cada muestra de tejido suficiente para el análisis de mutaciones completas y sin tratamiento neoadyuvante. Los pacientes fueron seguidos cada 3 meses durante los 2 primeros años, y luego cada dos años a partir de entonces. Un pecho con contraste de tomografía computarizada (TC) se tomó cada 3 meses durante los primeros 2 años y luego cada 6 meses a partir de entonces. Si se sospechaba recurrencia ya sea a través de síntomas que presentan recién oa través de pruebas programadas, se realizó la tomografía por emisión de positrones integrada /CT (PET /CT). PET /CT también se tuvo en pacientes sin síntomas o hallazgos anormales en las pruebas programadas 1 año después de la resección quirúrgica. El diagnóstico final de recurrencia fue confirmado por el examen histopatológico de las muestras obtenidas de la cirugía o biopsia. Si era imposible diagnosticar la recurrencia histopatológicamente, tumor maligno recurrente ya no se sospecha en base al periodo de seguimiento clínico y radiológico de al menos 12 meses sin evidencia de malignidad activa. Esta investigación fue aprobado por la Junta de Revisión Institucional del Centro de Cáncer de la Universidad de Fudan de Shanghai. escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los pacientes.

mutacional
análisis
El tejido congelado de las muestras de tumor se disecó macroscópicamente a Trizol (Invitrogen, Life Technologies, Carlsbad, CA), seguido de la extracción de RNA total usando protocolo estándar. muestras de ARN total fueron transcritas de forma inversa en ADNc.
PIK3CA
exón 9 incluye los codones 542 y 545 y
PIK3CA
exón 20 incluye el codón 1047, en donde se producen la mayoría de las mutaciones [22]. Así se realizaron búsquedas de mutaciones en
PIK3CA
exones 9 y 20.
EGFR gratis (exones 18-21),
HER2
(exones 18-21),
KRAS gratis (exones 2-3),
BRAF
(exones 11-15) y
AKT1 gratis (exones 2-3) también fueron amplificados por PCR usando ADNc. Los productos amplificados se analizaron por secuenciación de didesoxinucleótidos directa. Para identificar
EML4 CD -
ALK
fusiones, se utilizaron múltiples cebadores 50 junto con una imprimación 30 fija la localización de
ALK
exón 20 para detectar todos conocido
EML4
variantes de fusión como se describe anteriormente [17]. Los cebadores usados ​​para detectar fusiones entre
ALK
y
KIF5B
o
TFG
eran como se informó anteriormente [23], [24].
ALK sobre Fish también se utilizó para confirmar la exactitud de la PCR. Todos los casos mutados se confirmaron dos veces con reacciones de PCR independientes. Los nuevos datos no se ha generado en nuestro estudio.

Expresión de los componentes principales de vía PI3K

Selección de tejido tumoral y evaluación immunohistochemial fueron realizadas por dos patólogos (Yuan Lei L y S). Las muestras quirúrgicas fueron fijadas en 10% de formalina y embebidos en parafina; secciones de 4 micras de tumores de pulmón se prepararon y se deparaffinized, y la recuperación de antígenos se realizó en el microondas. La actividad peroxidasa endógena fue bloqueada con 0,3% H
2O
2. Tras el bloqueo con suero normal, las secciones se incubaron durante 120 minutos con anticuerpos monoclonales contra p110α PI3K (dilución 1:400, clon: C73F8; Cell Signaling Technology), PTEN (dilución 1:50, clon: 138G6; Cell Signaling Technology), p -Akt (dilución 1:50, clon: Ser473; Cell Signaling Technology) y mTOR (dilución 1:50, clon: 7C10; Cell Signaling Technology). Los portaobjetos se lavaron en PBS y se detectó con peroxidasa de rábano picante /kit conjugado anti-conejo de ratón real Detección Envision (gen Tech), seguido de contratinción con hematoxilina.

De acuerdo con sistema de puntuación que se ha reportado previamente en la literatura [ ,,,0],25], [26], Nuestra puntuación de tinción PI3K p110α se llevó a cabo de la siguiente manera: La puntuación de 0 si no se encontraron células tumorales positivas; 1 si las células tumorales positivas fueron & lt; 10%; y 2 si las células tumorales fueron positivas & gt; 10%. Los tejidos con puntuaciones de 0 ó 1 se consideraron baja expresión; aquellos con puntuaciones de 2 fueron considerados de alta expresión. La inmunorreactividad de p-Akt, mTOR y PTEN se evaluó semicuantitativamente basado en intensidad de la tinción y la proporción, tal como se describe anteriormente [27]. intensidad de la tinción se puntuó como: ausente (0); débil (1); moderado (2), o una fuerte tinción (3). La tinción se puntuó como proporción: ninguno (0); menos de un tercio (1); 1/3 a 2/3 (2), o más de 2/3 de las células tumorales (3). La puntuación total se calcula como la suma de la puntuación de la intensidad y la puntuación de porcentaje, dando una puntuación entre 0 y 6. Una valoración global de 0-2 fue considerado como una expresión baja, mientras que los demás resultados fueron considerados como alta expresión análisis estadístico. La tinción inmunohistoquímica se evaluó de forma independiente por dos patólogos (Yuan Lei L y S). En los casos de diferentes puntuaciones generales tomadas de un mismo tumor, la puntuación media se consideró la puntuación global final.

Evaluación de
PIK3CA
amplificación del gen

La hibridación fluorescente in situ ( FISH) para el ensayo de
PIK3CA
se llevó a cabo mediante el uso de
PIK3CA
sonda que hibrida con la banda 3q26.32 con Texas Red (rojo) y centromere3 (CEN3) con FITC (verde) (Abbott Molecular , Abbott Park, IL) siguiendo procedimientos rutinarios. Los análisis de FISH fue interpretado por dos evaluadores experimentados (Lei W y P) Yunjian cegados a los datos clínicos. Se evaluaron al menos 100 núcleos por paciente. Las muestras de tejido con un
relación PIK3CA
/CEN3 de 1,0 fueron clasificados como normales y aquellos con un
relación PIK3CA
/CEN3 entre 1,0 y 2,0 se clasificaron como
PIK3CA
ganancias . Un
se consideró relación PIK3CA
/CEN3 de más de 2,0 amplificado. Un mínimo de 50 células con tanto centromérica y
PIK3CA
señales de genes se anotó para dar datos concluyentes.

El análisis estadístico

La diferencia en las proporciones se analizó por
X
2
o la prueba exacta de Fisher. la supervivencia (RFS) Duración libre de recurrencia se definió como el momento de la cirugía hasta la recurrencia o el último contacto. La supervivencia global (OS) se define como el momento de la cirugía a la muerte o el último contacto. Evento se afirmó como la recurrencia o muerte desde la cirugía. se censuraron los pacientes vivos y que no muestran recurrencia en el último seguimiento. distribuciones de SSR y la SG se calcula utilizando el método de Kaplan-Meier. Se utilizó la prueba de log-rank para determinar las diferencias de supervivencia entre los grupos. Análisis de regresión de los datos de supervivencia, con base en el modelo de riesgos proporcionales de Cox, se llevó a cabo en SSR y la SG. Un procedimiento de selección por pasos hacia adelante se llevó a cabo con un
P-valor umbral
de 0,05 para su inclusión en el análisis multivariante. La significancia estadística cuando el
P-valor
WAS & lt; 0,05. Todos los datos fueron analizados utilizando el paquete estadístico para el 16,0 Ciencias Sociales Software Version (SPSS Inc., Chicago, IL).

Resultados


PIK3CA
estado de mutación del gen en NSCLC

Un total de 1.117 pacientes con CPNM incluyendo 646 hombres y 471 mujeres fueron elegibles para el análisis de mutaciones en este estudio. Tal como se presenta en la Tabla 1, Figura 1 y Figura S1 S1 en el archivo. 3,0% (34/1117) de los pacientes albergaban mutaciones en
PIK3CA
, que representan el 2,7% (22/807) de los adenocarcinomas de pulmón, y el 3,9% (12/310) de los carcinomas de células escamosas. No se observó correlación significativa entre el
PIK3CA
mutaciones y los factores clínico-patológicos tales como el género, la edad, tipos patológicos, antecedentes de tabaquismo, la diferenciación del tumor o de la etapa (Tabla 1).
dominios funcionales
Las cajas representan (la la unión de p85 de dominio, dominio de unión a Ras, dominio C2, dominio helicoidal, y el dominio quinasa). Frecuencia y diferentes tipos de mutaciones detectadas dentro de cada región se indican a continuación y por encima de la caja.

Las mutaciones en el exón 9 que codifica para el dominio helicoidal (E545K, E545Q, E545G, E545A, Q546R, E542K, T536I) se encontraron en 21 pacientes. Exón 20 mutaciones que codifican para el dominio quinasa (H1047R, H1047L, M1043L, G1007R, Y1021C) se encontraron en 13 pacientes. Las mutaciones más frecuentes fueron E545K y H1047R que ocurre en 16 (47,1%, 16/34) de los 34 pacientes con
PIK3CA
mutaciones (Figura 1, Tabla 2). Según los datos clinicopatológica identificado, el análisis de la frecuencia de mutaciones en el helicoidal vs. dominio quinasa se llevó a cabo. Hubo una tendencia de que más de dominio helicoidal
se observaron mutaciones PIK3CA
en pacientes con metástasis en los ganglios linfáticos por etapas II~III, pero la diferencia no alcanzó significación estadística (Tabla S1 en el archivo S1).



PIK3CA
mutaciones suelen coexistir con
EGFR /KRAS
mutaciones en NSCLC

Para explorar la coexistencia de
PIK3CA
y otras mutaciones de oncogenes en cáncer de pulmón de células no pequeñas, las pruebas de
EGFR
,
KRAS
,
HER2
,
BRAF
,
AKT1
mutaciones genéticas y
ALK
reordenamiento fue también dispuestos.
EGFR
y
KRAS
mutaciones genéticas se encontraron en 536 (48,0%, 536/1117) y 67 (6,0%, 67/1117) de 1117 pacientes. Las tasas de incidencia de
HER2
,
BRAF
,
AKT1
mutaciones y
ALK
reordenamiento fueron 20 (1,8%, 20/1117), 11 ( 1%, 11/1117), 2 (0,2%, 2/1117) y 33 (3,0%, 33/1117), respectivamente. Todos los
ALK
variantes de fusión fueron identificados
EML4-ALK
. Otras variantes de fusión tales como
KIF5B-ALK
y
TFG-ALK
no se encontraron en nuestro estudio. Los datos completos de
ALK
reordenación se muestran en la Tabla S1 S2 en Archivo. No se encontró correlación entre el
PIK3CA
mutaciones y otras alteraciones de los genes ni en el pulmón carcinoma de células escamosas, ni en grupos de adenocarcinoma (Tabla S3-S4 en S1 archivo).

Entre 34
PIK3CA
casos mutantes, veintiuno (61,8%, 21/34) albergaba mutaciones oncogénicas concurrentes - 17 (81,0%, 17/21)
EGFR
mutaciones y 4 (19,0%, 4/21)
KRAS
mutaciones (Figura 2), que representan el 3,2% (17/536) de los
EGFR
-mutant casos y el 6,0% (4/67) de la
KRAS
-mutant casos. La coexistencia de
PIK3CA
con
BFAF
,
HER2
,
AKT1
mutaciones genéticas o
ALK
no se encontró reordenamiento. Este
PIK3CA CD -
EGFR /KRAS
co-mutación fue más frecuente en los no fumadores que en los fumadores actuales o anteriores (
p = 0,039
), y en el adenocarcinoma que en El carcinoma de células escamosas (
p Hotel & lt; 0,0001). También hubo una tendencia hacia una relación de co-mutación mayor en las mujeres (
p = 0,067
) y en pacientes de no más de 60 (
p = 0,168
) (Tabla S5 en Archivo S1 ).

subtipo histopatológico específico también fue analizado en 807 adenocarcinoma de pulmón y no se encontró diferencia significativa en el subtipo entre los pacientes con y sin
PIK3CA mutación
(
p
= 0,082, Tabla S6 en S1 archivo). En 34
PIK3CA
casos mutantes, no hubo correlación significativa en el subtipo histopatológico entre los pacientes con
PIK3CA
-
EGFR /KRAS
mutaciones y los que solamente con
PIK3CA
mutaciones, tampoco. (
p = 0,121
, Tabla S7 en S1 Archivo).

Expresión inmunohistoquímica de PI3K p110α, p-AKT, mTOR, PTEN y sus correlaciones

Para evaluar la actividad de la vía PI3K /AKT tanto en
PIK3CA
mutante y
PIK3CA
grupos de tipo salvaje, que forma consecutiva seleccionan una serie más pequeña de
PIK3CA
pacientes con NSCLC primario de tipo salvaje, resecado quirúrgicamente entre julio 2008 y junio de 2009 con características clínicas y patológicas similares a partir de 1117 pacientes examinados anteriormente. 108
se recogieron PIK3CA
pacientes de tipo salvaje. Se determinó p110α PI3K, p-Akt, mTOR y los niveles de proteína PTEN en 34
PIK3CA
casos mutantes y 108
PIK3CA
casos de tipo salvaje mediante técnicas de inmunohistoquímica (IHC). inmunotinción representante de cada proteína se ilustra en la Figura S1 S2 en Archivo. Para
PIK3CA
grupo mutante, se detectó una elevada expresión citoplasmática de p110α PI3K en 27 (79,4%, 27/34), los tumores, mientras que la alta expresión de p-Akt (sobre todo en citoplasmática) y mTOR (en citoplasmática) era detectado en 18 (52,9%, 18/34) y 25 (73,5%, 25/34), los tumores, respectivamente. Bajo la expresión de PTEN (pérdida PTEN) en el citoplasma y el núcleo se observó en 8 (23,5%, 8/34) de tumores. Para
PIK3CA
grupo de tipo salvaje, la alta expresión de PI3K p110α, p-Akt, mTOR se encontraron en 42 (38,9%, 42/108), 34 (31,5%, 34/108) y 44 (40,7% , 44/108), los tumores, respectivamente. Bajo la expresión de PTEN se observó en 30 (27,8%, 30/108) tumores. Como se muestra en la Tabla S8-S9 en File S1, en cualquiera de los dos grupos, la asociación entre cada par de PI3K p110α, p-Akt, mTOR proteínas fueron estadísticamente significativas. Sin embargo, no se encontraron correlaciones significativas entre PTEN y otras proteínas. En
PIK3CA
grupo mutante, la expresión de alto PI3K p110α se asoció a la fase II a IV de la enfermedad. (
p = 0,043
) (Tabla S8 en S1 de archivos) y en
PIK3CA
grupo de tipo silvestre más alta expresión de p-Akt se encontró en los pacientes de mayor edad (
p =
0,037) (Tabla S9 en el archivo S1). Ninguno de otras características clínico mostró una relación significativa con la expresión de PI3K p110α, p-Akt, mTOR o PTEN.

Análisis de
PIK3CA
amplificación del gen

Para examinar la alteraciones del número de copias de
PIK3CA
, el mismo panel de 142 muestras de tumores de NSCLC congelados se analizó mediante hibridación fluorescente in sitio, incluyendo 34 tumores con mutación en el
PIK3CA
y 108 casos sin
PIK3CA
mutación.
PIK3CA
amplificación se detectó en 5
PIK3CA
muestras mutantes (14,7%, 5/34) que era más frecuente en el pulmón carcinoma de células escamosas (4/12 de células escamosas de pulmón carcinoma vs. 1 /12 para los adenocarcinomas de pulmón,
p = 0,042
). Sin embargo, en
PIK3CA
grupo de tipo salvaje,
PIK3CA
amplificación se detectó en 22 (20,4%, 20/108) y los tumores se asoció significativamente con el sexo masculino (22/90 vs 0 /18,
p = 0,021
), fumador actual /anterior (22/78 versus 0/30,
p
= 0,001) y el carcinoma de células escamosas de tipo patológico (19/52 vs 3 /56,
p Hotel & lt; 0,0001). (Tabla S10 y S2 en la Figura S1 Archivo)

Asociación entre los
PIK3CA mutación
,
PIK3CA
amplificación y la expresión de PI3K p110α, p-AKT, mTOR, PTEN

Se determinó, además, si
PIK3CA
alteraciones se asociaron con la actividad de la vía PI3K. Hemos observado que
PIK3CA
mutación se asoció significativamente con alta expresión de p110α PI3K (
p Hotel & lt; 0,0001), p-Akt (
p = 0,024
) y mTOR (
p
= 0,001) (Tabla 3). Sin embargo, no se encontraron correlaciones entre los
PIK3CA
mutación y expresión de PTEN (
p = 0,626
) (Tabla 3). Además,
PIK3CA
amplificación no fue correlacionada con la expresión de PI3K p110α, p-AKT, mTOR, PTEN ni en
PIK3CA
mutante ni salvaje grupo de tipos (Tabla S10 en S1 Archivo). También comparamos
PIK3CA
amplificación con
PIK3CA
estado de la mutación y se encontró que había cinco casos que albergan
PIK3CA
amplificación en combinación con
PIK3CA
mutaciones. No se encontró relación evidente entre
PIK3CA
mutación y amplificación (
p = 0,463
) (Tabla 3) guía empresas
Los resultados de supervivencia de acuerdo con
PIK3CA
mutación genética y la amplificación de estado

detectamos aún más el valor pronóstico de
PIK3CA
mutación genética y la amplificación en el mismo panel de 142 casos. Para aclarar si las terapias influido sobre la supervivencia (SG) y la supervivencia libre de recurrencia (SLR), que compararon el sistema operativo y RFS entre los pacientes con y sin quimioterapia adyuvante, no encontrando diferencias significativas entre los dos grupos ni en OS ni RFS (Figura S3A- S3B en S1 File). Para identificar si los pacientes con
PIK3CA /EGFR
compañeros de mutaciones podrían beneficiarse de
EGFR
inhibidor de tirosina quinasa, que también investigó el tratamiento adyuvante de 34
PIK3CA
casos mutantes. De estos, 2 pacientes, con L858R y 746-eliminación por separado, fueron tratados con gefitinib después de la operación. Se obtuvo una respuesta parcial en ambos de los dos pacientes

La supervivencia (OS) para la cohorte entera fue de 12,0 meses, con una mediana de seguimiento de 12,2 meses. No hubo diferencia significativa en la mediana de la SG entre los
PIK3CA
grupo mutante y
PIK3CA
grupo de tipo salvaje (
p = 0,442
; Figura 3A). Sin embargo, cuando
PIK3CA
pacientes mutantes fueron sub-clasificados por única
PIK3CA
mutación o
PIK3CA CD -
EGFR /KRAS
co-mutación, la supervivencia de pacientes con un solo
PIK3CA
mutación fue más corta que los pacientes con
PIK3CA CD -
EGFR /KRAS
co-mutación o
PIK3CA
grupo de tipo salvaje (
p = 0,004
; Figura 3B)

curvas de supervivencia global de los pacientes:. con o sin
PIK3CA mutación
(A); con la única
PIK3CA mutación
, coexistencia de
PIK3CA
y otra mutación genética, y los de
PIK3CA
grupo de tipo salvaje (B); con o sin
PIK3CA
mutación en
EGFR /KRAS
grupo de tipo salvaje (C); con
PIK3CA
mutación en el exón 9 o el exón 20 (D).

Ha sido bien caracterizado que
EGFR
mutación se asocia generalmente con un pronóstico relativamente bueno mientras que
KRAS
mutación se demostró que se asocia con un mal resultado, dejando a un subgrupo de pronóstico indeterminada para los
EGFR con KRAS de tipo salvaje /
pacientes. Por lo tanto, hemos investigado aún más el papel pronóstico de
PIK3CA
mutaciones en
EGFR /KRAS de tipo salvaje
pacientes con CPNM. Hemos encontrado una supervivencia significativamente peor en los pacientes con
PIK3CA
mutaciones (
p = 0,043
; Figura 3C). Además, después de
PIK3CA
pacientes mutantes se asignaron a E9 (
PIK3CA
mutación en el exón 9) y E20 (
PIK3CA
mutación en el exón 20) del grupo, se encontró una tendencia que los pacientes en el grupo E20 sobrevivió más tiempo que los del grupo E9 (
p = 0,080
; Figura 3D)

La supervivencia libre de recurrencia mediana (RFS) fue de 15,5 meses en los pacientes con
PIK3CA
mutación y 23,3 meses en los pacientes sin
PIK3CA
mutaciones (
p = 0,138
, Figura 4A). Al igual que la mediana de SG, los pacientes con un solo
PIK3CA
mutación tenían un RFS más cortos que los pacientes con
PIK3CA CD -
EGFR /KRAS
co-mutación (
p
= 0,014, Figura 4B). diferencia significativa en RFS también se encontró entre los casos con y sin
PIK3CA
mutación en
EGFR /KRAS de tipo salvaje
subgrupo (
p = 0,046
; Figura 4C). Los pacientes del grupo E20 tenían un RFS más largos que los del grupo E9 (
p
= 0,003; Figura 4D).
PIK3CA
amplificación no se asoció con la supervivencia global (
p = 0,491
; S4A figura en el Archivo S1) o la supervivencia libre de recurrencia (
p = 0,884
; Figura S4B en presentar S1). Además, realizó un análisis multivariado (Cox de riesgos proporcionales) con
PIK3CA
estado de mutación, subtipo histológico, la edad, el sexo, estadio tumoral, grado tumoral como variables, y no se encontró el valor pronóstico de forma independiente
PIK3CA
mutación en estos factores

curvas de supervivencia libre de recurrencia para pacientes: con o sin
PIK3CA mutación
(a);. con la única
PIK3CA mutación
, coexistencia de
PIK3CA
y otra mutación genética, y los de
PIK3CA
grupo de tipo salvaje (B). con o sin
PIK3CA
mutación en
EGFR /KRAS
grupo de tipo salvaje (C); con
PIK3CA
mutación en el exón 9 o el exón 20 (D).

Discusión

En nuestro estudio, se determinó la expresión de las proteínas en la vía PI3K, molecular alteración en
PIK3CA
y su impacto sobre la supervivencia en pacientes con NSCLC. A lo mejor de nuestro conocimiento, este es el mayor cohorte de análisis múltiple
PIK3CA
alteración de genes y la actividad de la vía PI3K y encontramos un impacto negativo en el pronóstico de un solo
PIK3CA
mutación en NSCLC. Nuestro estudio mostró frecuente superposición de
PIK3CA Opiniones y
EGFR /KRAS mutaciones
y demostró un valor de mal pronóstico de
PIK3CA
mutación en
EGFR /KRAS de tipo salvaje
pacientes.

la frecuencia de
PIK3CA
mutación, tal como se determina por secuenciación directa fue 3,9% en el pulmón carcinoma de células escamosas y el 2,7% en el adenocarcinoma, que es comparable con el valor de 2,9% y 2,5 % en un informe anterior que examinó un pequeño número de pacientes japoneses [21]. Curiosamente, a diferencia de
PIK3CA CD -
KRAS
co-mutación, que es más frecuente en los países occidentales [28], la mitad de los
PIK3CA
pacientes mutantes en nuestro estudio tenido
EGFR
mutaciones simultáneas. Esto puede atribuirse a la mayor prevalencia
EGFR
mutaciones en pacientes con cáncer de pulmón de Oriente que con
KRAS
mutaciones [17], [29]. Además, aunque PI3K se pudo activar por quinasas receptoras y Ras, que a su vez activan p-Akt, el /vía y Akt PI3K
EGFR
vías de señalización interactuaron estrechamente, la señalización de PI3K podría tener activadores adicionales y objetivos de abajo [11 ], [30]. Nuestros hallazgos sobre la coexistencia de
PIK3CA
y otras mutaciones genéticas dentro de
EGFR
vías de señalización son consistentes con estas observaciones.

De acuerdo con estudios anteriores, la alta expresión de PI3K, p p110α -Akt, mTOR y la pérdida de PTEN se encontró en el 79,4%, 52,9%, 73,5%, 23,5% de los
PIK3CA
grupo mutante y el 38,9%, 31,5%, 41,7%, 27,8% de los
PIK3CA
grupo de tipo salvaje [20], [26], [27], [31], [32]. Hemos observado que la presencia
PIK3CA
mutación se asocia con una alta expresión de p110α PI3K, p-Akt, mTOR en el CPNM, similar a los resultados de carcinoma de células claras de ovario [31]. Sin embargo, una investigación reciente sobre el cáncer colorrectal informó
PIK3CA
mutación no estaba de acuerdo con la expresión de la proteína PI3K p110α, lo que indica que
PIK3CA
mutaciones podría no ser la única causa que lleva a una alta expresión de p110α PI3K y podría desempeñar diversos papeles en la actividad de la vía PI3K en distintos tipos de carcinomas [26]. Se demostró además que la PI3K p110α expresión se correlacionó positivamente con la expresión de p-Akt y mTOR, mientras que la expresión de p-Akt también se correlacionó positivamente con la expresión de mTOR tanto en
PIK3CA
grupo mutante y
PIK3CA
grupo de tipo salvaje. Estos resultados se pueden entender con facilidad debido a que
PIK3CA
activa p-Akt y mTOR regula positivamente [27], [31]. Un estudio realizado por Marsit et al. sugiere que la regulación de PTEN no es siempre a nivel genético, pero también puede ocurrir en el nivel de transcripción o traducción, que también podría explicar la escasa correlación entre la pérdida de PTEN y
PIK3CA mutación
observó [12]. El análisis posterior demostró que la asociación
PIK3CA
mutante tumores con elevada expresión de PI3K p110α eran más propensos a ser la etapa II a IV de la enfermedad en comparación con los tumores sin expresión de alto PI3K p110α. También se encontró que la expresión de PI3K p110α que se correlaciona con las lesiones primarias y metastásicas, lo que sugiere que p110α PI3K podría estar implicado en la progresión tumoral y las metástasis [25], [26]. El mecanismo molecular exacto todavía se requieren más estudios.

Para ampliar nuestra comprensión del mecanismo por debajo de la activación de la vía PI3K, se investigó la correlación entre los
PIK3CA
variables de amplificación y clinicopathological en la misma serie de pacientes con CPNM.