Extracto
reportar este documento, el desarrollo, la caracterización molecular y funcional de un sistema isogénicas, a la par de células de cáncer de vejiga modelo de cultivo para el estudio de la resistencia a fármacos de platino. La línea celular de cáncer de vejiga humano 5637 se cultivó durante diez meses con incrementos graduales en la concentración de oxaliplatino para generar una línea celular sub 5637R resistente a los medicamentos. El ensayo MTT se utilizó para medir la citotoxicidad de varios fármacos para el cáncer de vejiga. recuento de centelleo líquido permite la cuantificación de la captación del fármaco celular y flujo de salida de oxaliplatino radiomarcado y carboplatino. El impacto de la inactivación intracelular de los fármacos se evaluó mediante la modulación química de los niveles de glutatión. formación y reparación aducto oxaliplatino y carboplatino-ADN se midió utilizando acelerador de espectrometría de masas. factores de resistencia, incluyendo la apoptosis, la señalización del factor de crecimiento y otros se evaluaron con RNAseq de ambas líneas celulares y se incluyeron confirmación de transcripciones seleccionados por RT-PCR. El oxaliplatino, carboplatino, cisplatino y gemcitabina fueron significativamente menos citotóxico para las células 5637R en comparación con las células 5637. Por el contrario, doxorubicina, metotrexato y vinblastina tenían ninguna diferencia depende línea celular en la citotoxicidad. Tras la exposición a dosis terapéuticamente relevantes de oxaliplatino, células 5637R tenían niveles de aductos de ADN menor de drogas que 5637 células. Esta diferencia se explica en parte, por mecanismos de daño pre-ADN, tales como la captación del fármaco y la inactivación intracelular por el glutatión, así como la reparación aducto oxaliplatino-ADN más rápido. Por el contrario, las dos líneas celulares no tenían diferencias significativas en la captación celular carboplatino, la formación de aductos de flujo de salida y de drogas y reparación del ADN, lo que sugiere mecanismos de resistencia diferentes para estos dos fármacos estrechamente relacionadas. Los estudios funcionales se aumentaron mediante análisis RNAseq, lo que demuestra un cambio significativo en la expresión de 83 transcripciones, incluyendo 50 genes conocidos y 22 nuevas transcripciones. La mayoría de las transcripciones no han sido asociados previamente con la quimio-resistencia del cáncer de vejiga. Este sistema modelo y las características fenotípicas asociadas y datos genotípica tiene el potencial de identificar algunos nuevos detalles de los mecanismos de resistencia de importancia clínica para el cáncer de vejiga
Visto:. Wang S, Zhang H, Scharadin TM, Zimmermann M, Hu B , Pan AW, et al. (2016) Molecular Disección de resistencia de platino inducida a través del Análisis Funcional y Expresión génica en una célula Cultura Modelo de cáncer de vejiga. PLoS ONE 11 (1): e0146256. doi: 10.1371 /journal.pone.0146256
Editor: Aamir Ahmad, Escuela de Medicina de la Universidad Estatal de Wayne, Estados Unidos