Extracto
Antecedentes
La morbilidad y mortalidad de cáncer aumentan notablemente cada año. Es una pesada carga para la familia y la sociedad. La detección de biomarcadores de pronóstico puede ayudar a mejorar el efecto theraputic y prolongar el tiempo de vida de los pacientes. microARN tienen un papel influyente en el pronóstico del cáncer. Los resultados de los artículos que tratan de la relación entre los polimorfismos de microARN y el pronóstico del cáncer son inconsistentes.
Métodos
Llevamos a cabo un meta-análisis de 19 publicaciones sobre la asociación de cuatro polimorfismos comunes, rs2910164 MIR-146a , MIR-149 rs2292832, rs11614913 MIR-MIR-196a2 y 499 rs3746444, con el pronóstico del cáncer. Cocientes de riesgo combinados con un 95% intervalo de confianza para la relación entre cuatro polimorfismos genéticos y la supervivencia global, la supervivencia libre de recurrencia, la supervivencia libre de enfermedad, la recurrencia se calculan. se llevó a cabo el análisis de subgrupos según la población y el tipo de tumor.
Resultados
genotipo GG de miR-146a puede ser el factor protector para la supervivencia global, especialmente en la población caucásica. C-que contienen genotipos del acto MIR-196a2 como una función de riesgo para la supervivencia general. existe el mismo resultado en la población asiática, en células no pequeñas de cáncer de pulmón y cáncer digestivo. Los pacientes con el alelo C de miR-149 tienen una mejor supervivencia global, especialmente en células no pequeñas de cáncer de pulmón. no se obtienen resultados significativos para MIR-499 polimorfismos.
Conclusiones
Los polimorfismos genéticos en MIR-146a, MIR-MIR-196a2 y 149 pueden estar asociados con la supervivencia global. Este efecto varía con los diferentes tipos de cáncer. polimorfismo genético en mir-499 puede no tener nada que ver con el pronóstico del cáncer
Visto:. Xia L, Ren Y, Fang X, Z Yin, Li X, Wu W, et al. (2014) Papel pronóstico de polimorfismos comunes en los cánceres de microARN: Evidencia de un meta-análisis. PLoS ONE 9 (10): e106799. doi: 10.1371 /journal.pone.0106799
Editor: William B. Coleman, Universidad de Carolina del Norte Facultad de Medicina, Estados Unidos de América
Recibido: 15 Abril, 2014; Aceptado: August 1, 2014; Publicado: 22 Octubre 2014
Derechos de Autor © 2014 Xia et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. La autores confirman que todos los datos que se basan los resultados son totalmente disponible sin restricciones. Todos los datos relevantes se encuentran dentro del apoyo de sus archivos de información en papel y
Financiación:. Subvención no. 81272293 y no. 81102194 de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China. ZBS y YZH recibieron los fondos. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer es una causa principal de morbilidad y mortalidad en el vasto marjority de las regiones en el mundo. La incidencia estimada mundo y la mortalidad en 2012 es de 14.09 millones y 8,2 millones, respectivamente [1], [2]. De acuerdo con la tendencia de desarrollo, los nuevos casos en 2030 alcanzarán los 22,2 millones [3]. Cáncer en sí mismo y el tratamiento médico para el cáncer han sido una pesada carga para la familia y la sociedad. Un constante aumento de la atención, estos años, se centra en la divulgación de los métodos que podrían tratar a los pacientes de manera eficaz y económicamente. La detección de biomarcadores ayudará a diagnosticar pacientes que subyace en un período temprano y la identificación de sitios genéticos específicos pueden promover el efecto theraputic y prolongar el tiempo de vida de los pacientes.
Con el desarrollo de las investigaciones médicas, es ampliamente reconocido que los polimorfismos en genes de microARN pueden actuar como un papel esencial en la carcinogénesis y la progresión. microRNAs (miRNAs) son la endógena, pequeños ARN no codificantes con una longitud de 18-25 nucleótidos. La región de la semilla de los miRNAs puede reconocer y complementaria se combinan con el 3'UTR del ARNm especificado, interrumpiendo así la biosíntesis. Numerosos estudios han detectado un mayor o menor nivel de microRNAs en pacientes con un peor pronóstico que aquellos con buen resultado [4], [5]. Los polimorfismos en los microARNs pueden alterar su capacidad de combinar con el ARNm objetivo y, en consecuencia strenghen o debilitar su capacidad para interrumpir la biosíntesis [6].
Una vez detectado, microARN han dado mucha atención por sus múltiples papeles en la tumorigénesis.
miR-146a muestra una función más amplia en el cáncer. Puede dirigirse a TRAF6 [7], IRAK1 [8], y por lo tanto juegan un papel importante en el pronóstico de los pacientes que sufren la inflamación después de la cirugía o la quimioterapia. También se puede regular por incremento la expresión de PDGFRA [9] para activar la capacidad de regeneración de las células endoteliales. Dos picos de miR-146a aparecen en 8 h y 24 h después de la quimiorradioterapia en el estudio [10]. Se puede influir en la expresión de WASF2. WASF2 molecular es el de aguas abajo que puede transmitir la señal de GTPasa de actina de músculo esquelético, por tanto, afectar a la capacidad de migrar [11].
Otros encuentran el miR-196 familia puede dirigirse a HOXC8 [12] y LSP1. Y el polimorfismo del gen puede alterar la capacidad [6]. Hoxc puede influir en la capacidad de la migración y Invasian de las células y la capacidad depende de la relación de la expresión entre miR-196a y HOXC8 ARNm [12]. La alta expresión de LSP1 en el mieloma múltiple puede influir en el efecto de un nuevo medicamento contra el cáncer, bortezomib, en la inducción de la apoptosis celular.
Los estudios determinaron el papel directo de miR-149 en la caja forkhead M1 (FOXM1) ARNm de evitar que el proceso EMT, que es importante en la proliferación de tumor [13]. La expresión de miR-149 podría afectar la maduración Puma para prolongar la vida útil de las células [14]. En el cáncer gástrico, miR-149 puede evitar que el ciclo celular por abajo de la regulación de proteínas en la vía de ZBTB2 ARF-HDM2-p53-p21 [15]. miR-149 también puede inducir apoptosis celular mediante la regulación negativa de la expresión de Akt1, E2F1 y b-Myb [16], [17].
El mecanismo biológico subyacente de miR-499 en el cáncer no está aclarada. Algunas herramientas bioinformáticas se utilizan para explorar el mecanismo potencial. Dos supresores del cáncer de mama, NBN y BCL2L14, son objetivos de hsa-miR-499 predijeron [18].
Los polimorfismos genéticos en miRNAs pueden influir en el pronóstico del cáncer, ya sea al afectar la maduración [6], [19], [20] o mediante la alteración de la capacidad para combinar con los ARNm diana [6]. Los estudios demostraron que SNP en MIR-146a puede influir en la expresión de miR-146a madura [20], [21]. se observó polimorfismo Mir-196a2 para alterar la capacidad de combinar con objetivo [6]. Mir-149 polimorfismo puede afectar a su capacidad para regular abajo objetivos que afectan a la maduración de miR-149 [22].
Recientemente, el nuevo papel de los polimorfismos de microARN en el pronóstico de los pacientes con cáncer atrae un cierto interés. En diferentes tipos de cáncer, microRNAs mostrar a tener diferentes roles. En glioma [23], miRNAs muestran el papel riesgo de muertes, mientras que en el cáncer gástrico [24], que pueden funcionar como un factor de protección para la supervivencia global. Aunque en el mismo tipo de cáncer, microRNA puede tener diferentes funciones. Esto puede ser el resultado de la muestra de tamaño pequeño en un solo estudio. Con los resultados controvertidos, llevamos a cabo este meta-análisis para evaluar la relación entre los polimorfismos genéticos comunes en cuatro microARN (miR-146a rs2910164, MIR-149 2292832, rs11614913 MIR-196a2, MIR-499 rs3746444) con el pronóstico del cáncer. A lo mejor de nuestro conocimiento, este es el primer meta-análisis en relación con los cuatro polimorfismos genéticos con el pronóstico del cáncer.
Métodos
Estrategia de búsqueda
Este meta-análisis se llevó de acuerdo con las directrices del meta-análisis de los estudios observacionales en grupo Epidemiología (MOOSE) [25]. Tomamos una estrategia de búsqueda exhaustiva en este estudio. La estrategia de búsqueda utiliza los siguientes términos variable combinados por "microARN", "mir", "cáncer", "carcinoma", "tumor", "supervivencia", "la supervivencia global", "recurrencia", "la supervivencia libre de enfermedad", "la supervivencia libre de recurrencia", "la supervivencia específica de la enfermedad", "Real" y "pronóstico". Todas las bases de datos o fuentes en línea disponible, como PubMed, Scie, CBM, Google académico, CNKI, Wanfang, se realizaron búsquedas; Después de un hojear del título y el resumen, los artículos, incluyendo un resumen de conferencia, artículos originales y revisiones, fueron descartadas; Las listas de referencias Se realizaron búsquedas también. La última vez para la búsqueda de marzo de 2014. Se evaluaron sólo comentarios publicados en Inglés
Los estudios elegibles incluidos en este meta-análisis cumplen los siguientes criterios:. (I) analizar el papel de los cuatro polimorfismos de microARN en el cáncer ; (Ii) Investigar el resultado de supervivencia global o de otras variables clínicas, como la RFS, DSS, DFS y la recurrencia; (Iii) recursos humanos e IC del 95% son accesibles. Los artículos fueron excluidos en base a cualquiera de los siguientes criterios: (i) los materiales o datos duplicados; (Ii) La falta de recursos humanos y el 95% CI.
Datos de extracción
Dos autores extrajeron los datos de forma independiente. Si no es consistente, el tercer autor se unirá a discutir. Cualquier controvery se resolverá por votación. Todos los datos fueron objeto de consenso. Se estableció contacto con los autores de los artículos de los datos que faltan por correo electrónico. Se extrajo información que incluye el nombre del primer autor, año de publicación, el origen de la población de estudio, el tamaño de la población de estudio, tipo de tumor, el método de determinación del genotipo, el sitio de polimorfismo, el método de análisis de supervivencia, HR (IC del 95%), y el seguimiento -up tiempo (meses). Los valores de HR & gt; 1 se consideraron indicativos de asociaciones significativas con un mal resultado
Métodos estadísticos
La heterogeneidad se evaluó a través de las estadísticas Q. (P & lt; 0,05 se consideró heterogénea). Cualquier heterogeneidad significativa entre los estudios se resolvió mediante el modelo de efectos aleatorios. De lo contrario, se utilizó el modelo de efectos fijos. La estadística de I
2, que mide el porcentaje de la variación total entre los estudios que se debe a la heterogeneidad en lugar de al azar, también se evaluó. El efecto de los polimorfismos de los genes miARN en los resultados de supervivencia (OS) se calcula utilizando diagramas de bosque. se realizó un análisis estratificado de CR agrupado e IC del 95% para la relación entre los polimorfismos con el pronóstico del cáncer en la población y diversos tipos de cáncer. CR agrupado se calculó mediante un modelo de efectos fijos o de efectos aleatorios modelo según el caso. HR & gt agrupado; 1 indica mal pronóstico y fue considerado estadísticamente significativo si el IC del 95% no contenía 1 [26]. corrección de Bonferroni se aplicó para controlar el potencial de error falso positivo. En este meta-análisis, la comparación múltiple para miR-146a, MIR-196a2, miR-149 y miR-499 se llevó a cabo el 13, 12, 9 y 9 veces, respectivamente. El valor de p estadísticamente significativa después de la corrección de miR-146a, MIR-196a2, miR-149 y miR-499 es 0,0038 (0,05 /13), 0,004 (0,05 /12), 0,0056 (0,05 /9) y 0,0056 (0,05 /9). El sesgo de publicación se evaluó mediante el gráfico en embudo y el test de Begg. P & gt; 0,05 se consideró indicativo de una falta de sesgo de publicación [27]. El análisis de sensibilidad se llevó a cabo mediante la eliminación de los artículos uno por uno. Todos los análisis se realizaron con STATA 13.0 visión. Todo el valor de p es dos caras y un valor de p inferior a 0,05 se consideró estadísticamente significativa.
Resultados
Características de los Estudios
El diagrama de flujo de la proceso de selección de los estudios se presenta en la Figura 1. Diecinueve [7], [23], [24], [28] - [43] publicaciones elegibles están incluidos en este meta-análisis con 8890 pacientes totalmente. Siete [44] - [50] están excluidos por falta de datos precisos y genotipos. Estos artículos elegibles fueron publicados entre 2008 y 2014. Doce [23], [24], [28] - [35], [37], [43] estudios sobre la relación entre el polimorfismo miR-146a y el pronóstico del cáncer. De ellos, nueve artículos se centran en la relación con la supervivencia global, uno en la relación con la recurrencia, tres en relación con la supervivencia libre de recurrencia (SLR) y tres en relación con la supervivencia libre de enfermedad (DFS). El número de los artículos relativos a la relación entre los polimorfismos en mir-196a2, miR-149 y miR-499 y el pronóstico del cáncer es, respectivamente, de catorce [7], [24], [29] - [31], [33] - [35 ], [37] - [41], [43], ocho [24], [29], [31], [33], [34], [36], [37], [42] y siete [24 ], [29] - [31], [33], [34], [37]. La población original contiene americano, coreano, chino, indio, español y alemán. El tipo de tumor cubre el cáncer colorrectal (CCR), cáncer gástrico (CG), el cáncer no microcítico de pulmón no microcítico (CPNM), carcinoma de células escamosas de esófago (CECA), el carcinoma hepatocelular (CHC), cáncer de vejiga, carcinoma de células escamosas de la próstata ( sccop), carcinoma de cabeza y cuello de células escamosas (HNSCC), hodgkin lymphomam, nasofaríngeo y los linfomas malignos. Características de los artículos elegibles se resumen en la Tabla S1. Los datos originales de este meta-análisis se enumeran en la Tabla S2.
Hemos utilizado una estrategia global de la búsqueda para descartar a los artículos relacionados con posibles en la medida de lo posible. 26 artículos centrados en la asociación entre los cuatro polimorfismos genéticos y el pronóstico del cáncer se proyectan hacia fuera. 7 artículos están excluidos en ananlysis cuantitativa por falta de datos para calcular agrupada HR y 95% IC.
resultados del metanálisis principal
Los resultados del metanálisis de relación entre los polimorfismos y la supervivencia global del cáncer se resumen en la Tabla 1. El diagrama de bosque y gráfico en embudo se enumeran en la Figura 2 y la Figura 3. los resultados de los análisis de subgrupos de población original se resumen en la Tabla 2 y los resultados de los análisis de subgrupos por tipo de tumor se resumen en Tabla 3.
los diagramas de bosque para CR agrupado e IC del 95% estimado para demostrar el papel de miR-146a en el modelo dominante (a), MIR-196a2 en el modelo recesivo (b), miR-149 en dominante modelo (c) y miR-499 en AG vs AA (d) en la supervivencia global.
gráficos de embudo del sesgo de publicación para MIR-146a en el modelo dominante (a), MIR-196a2 en recesiva modelo (b), miR-149 en el modelo dominante (c) y miR-499 en AG vs AA (d).
Mir-146a
En este estudio, nos propusimos modelo dominante de miR-146a como GG vs CC + CG, modelo recesivo CC vs GG + CG. Un resultado significativo existente en el modelo dominante indicats el papel protector del genotipo frecuentes homóloga en la supervivencia global (HR = 0,74; IC del 95%: 0,61 a 0,94; p = 0,004, Tabla 1). Cuando estratificado, se observó la asociación entre polimorfismos de miR-146a y la supervivencia global en la población americana en el modelo dominante (p = 0,004, Tabla 2). No se observó ninguna asociación significativa entre el polimorfismo miR-146a y el cáncer digestivo o CPNM en nuestro estudio (Tabla 3). Mientras que, en Wang et al. [32] y Lin et al. estudios [49], los polimorfismos Mir-146a pueden estar asociados con la recurrencia del cáncer de pulmón, por otra parte los polimorfismos pueden estar relacionados con DFS (por GG vs CC + CG, HR = 0,649, 95% CI 0,423-0,996, Tabla S3). Observamos ninguna asociación con la SSR (HR = 0,669; IC del 95%: 0,371 a 1,205, Tabla S3).
Mir-196a2
A continuación, nos propusimos como modelo dominante CC + CT frente a TT, recesiva modelo CC vs CT + TT. CT genotipo del MIR-196a2 tiene un papel arriesgar de manera significativa en la supervivencia global (IC HR = 1,710, 95% 1,070-2,735; p = 0,025, Tabla 1). Sin embargo, la asociación se debilitó en gran medida después de la corrección de Bonferroni (P & gt; 0,004). Aun así, se observó una asociación entre el genotipo CC robusto y pobre supervivencia global en modelo recesivo (CI HR = 1,401, 95% 1,202-1,633, P & lt; 0,001, Tabla 1). Consistentemente, se observó la asociación robusta en población asiática (IC HR = 1,361, 95% 1,163-1,592; p & lt; 0,001, Tabla 2) y en el cáncer digestivo (HR = 1,235, IC 95% 1,008-1,512; p & lt; 0,001, Tabla 3) y NSCLC (HR = 1,657, IC95 1,312 a 2,092, P & lt; 0,001, Tabla 3). Por otra parte, los alelos que contienen genotipos C pueden estar asociados con la SSR (para CT frente a TT, HR = 0,675, IC del 95% 0,485 a 0,94; para CC + CT frente a TT, HR = 0,687; IC del 95%: 0,504-0,936, el cuadro S3). No se observó ninguna asociación con DFS (Tabla S3) en este meta-análisis.
Mir-149
Para mir-149, que establece el modelo dominante como CC + CT frente a TT, modelo recesivo CC vs CT + TT. En nuestro estudio, observamos el papel protector del alelo C en la supervivencia global del cáncer y una tendencia en la relación con el número de alelo C (para CC frente a TT, HR = 0,81; IC del 95%: 0,615 a 1,065, p = 0,131; para CT frente a TT, HR = 0,748; IC del 95%: 0,585-0,955; p = 0,020; para el modelo dominante, HR = 0,747; IC del 95%: 0,638 a 0,875, P & lt; 0,001, Tabla 1). No se observó ninguna asociación significativa entre rs11614913 y la supervivencia global del cáncer digestivo en cualquier modelo (Tabla 3). Si bien, la variante genética puede estar asociado de forma significativa con NSCLC (para CC frente a TT, HR = 0,725; IC del 95%: 0,519 a 1,012, p = 0,058; para el modelo dominante, HR = 0,733; IC del 95% ,601-,893, P = 0,002 , Tabla 3).
Mir-499
Hemos establecido como modelo dominante AG + GG vs AA para MIR-499 polimorfismo. En nuestro meta-análisis, que no ganó ningún resultado significativo en cualquier modelo (Tabla 1). Los resultados de los análisis estratificado indicado que miR-499 polimorfismo puede no tener relación con la supervivencia global de cáncer en la población asiática (tabla 2). No se observó ninguna asociación significativa entre rs3746444 y la supervivencia global del cáncer digestivo o NSCLC en cualquier modelo (Tabla 3).
Discusión
En este meta-análisis, encontramos que el genotipo GG de miR-146a puede ser un factor de protección para el sistema operativo, especialmente en la población asiática. Aunque la asociación estadísticamente significativa con la recurrencia y DFS se detectó en nuestro estudio, debemos notar que sólo hay dos artículos incluidos. No obstante, los resultados implican el papel de miR-146a en el pronóstico del cáncer y que deberían elucubrar en el futuro. Para MIR-196a2, nos encontramos con una cuestión interesante. El alelo C es un factor de riesgo para la supervivencia global, que es un factor protector para RFS. Esto puede ser el resultado de los diferentes tipos de cáncer, diversos período de tiempo de seguimiento o las diferencias en las características basales. Una cosa notable es que la asociación entre el polimorfismo MIR-196a2 y RFS no es compatible con el informe en el artículo Chae [46] 's. En el artículo de Chae [46], se informa de un valor P mayor que 0,05 para la relación entre ellos. El artículo [46] no está incluido en este meta para que no proporciona recursos humanos e IC del 95%. Este meta-análisis implica que el alelo C de miR-149 podría tener un papel protector en el pronóstico del cáncer. Estadísticamente no se concluyeron resultados significativos para MIR-499 polimorfismos. Esto puede ser el resultado de un número relativamente pequeño de artículos que tratan de la asociación de miR-499 polimorfismos con el pronóstico del cáncer. El análisis estratificado implica la asociación de los polimorfismos en mir-196a2 y MIR-149 con NSCLC, mientras que la asociación de los cuatro polimorfismos con la supervivencia global del cáncer digestivo sólo se observó en los polimorfismos MIR-196a2 en este meta-análisis.
Hemos realizado el análisis estratificado por la población para determinar la asociación de estos cuatro polimorfismos de microARN con el pronóstico del cáncer. Para los artículos en parte, se observa que la mayor parte de los estudios se realizan en la población asiática. Sólo 4, 2 y 1, respectivamente, se llevan a cabo en Caucasico, la población europea e india. Se llevó a cabo el análisis estratificado por tipo de cáncer. Con un pequeño número de artículos incluidos, el número de artículos para cada subgrupo es 5 a la más. Qué lástima que no somos capaces de llevar a cabo un análisis estratificado por edad, sexo, estado somking u otros estadios patológicos para los artículos insuficientes. Algunos estudios han reportado el importante papel de estos polimorfismos cuando divididos en subgrupos por edad [7], [23], [44], el género [23], [29], [44], u otras etapas patológicas [7], [29] .
Algunos defectos existe en nuestro meta-análisis. En primer lugar, el número de artículos incluidos es relativamente pequeño, especialmente para miR-149 y miR-499. En segundo lugar, realizamos un análisis estratificado por población, la mayoría de los cuales son asiáticos, y el tipo de tumor, la mayoría de los cuales son el cáncer digestivo y NSCLC, en lugar de otras características iniciales. En tercer lugar, existe cierta heterogeneidad en la relación entre el polimorfismo MIR-196a2 y el pronóstico del cáncer. Cuando excluir el artículo del Wang [7], la disapear heterogeneidad. Esto puede deberse a la diferente función del polimorfismo en el pronóstico del cáncer. Para el polimorfismo MIR-196a2 en el artículo de Wang, el genotipo CC es un factor protector (HR = 0,72, 0,55 a 0,95) en el cáncer gástrico. Excluidos, el CR agrupado es igual a 1.476 y el 95% intervalos de CI entre 1,222 a 1,782, que implica el factor de riesgo para el polimorfismo MIR-196a2 en todos los tipos de cáncer. Esto también puede ser el resultado de la diferencia en las características basales. En cuarto lugar, un valor de p de 0,04 para el sesgo de publicación se obtiene en la asociación entre el polimorfismo mir-149 y la supervivencia global en el cáncer en el modelo dominante. Esto puede deberse a la pequeña cantidad de artículos incluidos en este meta-análisis.
Sin embargo, existen muchas ventajas en nuestra meta-análisis. En primer lugar, este es el primer meta-análisis sobre la relación entre los cuatro polimorfismos comunes en los microARN y el pronóstico del cáncer. Lo que es más, no existe heterogeneidad en los modelos para los polimorfismos en el miR-146a y miR-499. Sin sesgo de publicación se observa en los modelos de los polimorfismos en el miR-146a, miR-149 y miR-499. En consecuencia, los resultados de nuestro meta-análisis son estables y fiables. El último pero no menos importante, el número total de pacientes en nuestro meta-análisis es relativamente grande, que alcanza 8057 totalmente.
Conclusiones
Todos los resultados observados en nuestro apoyo de meta-análisis el papel de los polimorfismos en el miR-146a, miR-149 y miR-196a2 en el pronóstico del cáncer, con sus funciones puede diferir de una población a otra, de un tipo de cáncer a otro. Se necesitan más estudios con un mayor número de pacientes en diferentes poblaciones para determinar el papel en varios tipos de cáncer.
Apoyo a la Información sobre Table S1.
Información básica de los artículos incluidos en el meta-análisis
doi:. 10.1371 /journal.pone.0106799.s001 gratis (DOC) sobre Table S2.
Los datos originales para el metanálisis
doi:. 10.1371 /journal.pone.0106799.s002 gratis (DOC) sobre Table S3.
La asociación de los polimorfismos de los genes miARN con DFS y RFS
doi:. 10.1371 /journal.pone.0106799.s003 gratis (DOC)
archivo S1. Empresas El siete artículos excluidas y los motivos
doi:. 10.1371 /journal.pone.0106799.s004 gratis (DOC)
Lista de verificación S1.
PRISMA lista
doi:. 10.1371 /journal.pone.0106799.s005 gratis (DOC)