Extracto
CAR es una proteína transmembrana que se expresa en diversas células epiteliales y endoteliales. CAR media la infección adenoviral, así como oncolisis mediada por adenovirus de AxdAdB-3, un adenovirus oncolítico de doble restringido E1A /E1B, en células de cáncer de próstata. Este estudio evaluó además la eficacia terapéutica de AxdAdB-3 con Arg-Gly-Asp (RGD) modificación -fiber (AxdAdB3-F /RGD), que permite la infección dependiente de integrina, en el cáncer de próstata. La susceptibilidad de las células de cáncer de próstata LNCaP, PC3, DU145 y de la infección por adenovirus se asoció con la expresión de CAR. Todas las líneas celulares de cáncer de próstata expresa la integrina α
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3 y α
vβ
5. AxdAdB-3 fue más citopático en células de cáncer de próstata CAR-positivo que en las células CAR-negativos, mientras que AxdAdB3-F /RGD causó potente oncolisis tanto en las células CAR-positivas y CAR-negativos de cáncer de próstata. Por el contrario, AxdAdB3-F /RGD no se citopático contra las células epiteliales normales de la próstata, RWPE-1. La inyección intratumoral de AxdAdB3-F /RGD en xenoinjertos de células de cáncer de próstata CAR-negativos en ratones desnudos inhibió el crecimiento del tumor. El estudio actual demuestra que E1A /E1B de adenovirus de doble restringido oncolítico con una modificación RGD-fibra mejora la eficiencia de la infección y la actividad anti-tumor en células de cáncer de próstata CAR-deficiente, sin afectar las células normales. Los estudios futuros se evaluar el potencial terapéutico de AxdAdB3-F /RGD en el cáncer de próstata
Visto:. Shen Y-H, Yang H, Wang H, Cai Z-J, Xu Y-P, Zhao A, et al. (2016) Arg-Gly-Asp (RGD) -Modificado E1A /E1B de adenovirus mutante doble mejora la actividad antitumoral en cáncer de próstata Las células
in vitro y en ratones
. PLoS ONE 11 (1): e0147173. doi: 10.1371 /journal.pone.0147173
Editor: Ilya Ulasov, Instituto Sueco de Neurociencia, Estados Unidos |
Recibido: 10 de mayo de 2015; Aceptado 30 de diciembre de 2015; Publicado: 22 Enero 2016
Derechos de Autor © 2016 Shen et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. Todo relevante los datos están dentro del papel
Financiación:. Este estudio fue apoyado en parte por una subvención de la Fundación de Ciencias Naturales de la provincia de Zhejiang, china (# LY12H16031) y de la Oficina de Salud de la provincia de Zhejiang, china (# 2012KYA025) .
Conflicto de intereses:. los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de próstata es el tumor maligno más frecuente y en el mundo, especialmente en los países occidentales. Se estima que el cáncer de próstata hará que 220.800 nuevos casos y 27.540 muertes relacionadas con cáncer en los EE.UU. en 2015. [1] En China, la incidencia del cáncer de próstata ha aumentado rápidamente en los últimos decenios, y más del 70% de los pacientes con cáncer de próstata han avanzado o enfermedad metastásica. [2] hasta la fecha, la terapia hormonal es todavía la terapia más útil para los pacientes con cáncer de próstata, pero se administra durante un limitado período de tiempo y casi todos los pacientes de cáncer de próstata que reciben la ablación de andrógenos en última instancia progresar a enfermedad refractaria andrógenos, [3] conocido como el cáncer de próstata resistente a la castración (CRPC). quimioterapia basada en docetaxel se utiliza a menudo para tratar a los pacientes con CRPC, pero la supervivencia libre de progresión sólo dura seis meses. [4] A pesar de que el nuevo inhibidor del receptor de andrógenos (Enzalutamida) y citocromo p450, la familia 17, subfamilia Un polipéptido inhibidor (CYP17) ( abiraterona) han sido reportados para tratar más eficazmente a los pacientes CRPC, tal tratamiento sólo puede mejorar la supervivencia de unos pocos meses. [5, 6] por lo tanto, se necesitan urgentemente nuevos y más eficaces estrategias de tratamiento para mejorar el pronóstico del cáncer de próstata.
estudios anteriores mostraron que un adenovirus oncolítico fue capaz de replicarse y destruir las células cancerosas sin dañar las células normales de forma selectiva. Esta terapia viral oncolítico podría ser clínicamente prometedor para el tratamiento de cánceres humanos, incluyendo el cáncer de próstata. [7-9] Nuestro estudio anterior demostró que un /E1B doble adenovirus oncolítico mutante E1A, AxdAdB-3, tenía actividad antitumoral en un ortotópico, SCID cáncer de próstata (inmunodeficiencia combinada severa) modelo de ratón. [10] Sin embargo, AxdAdB-3 mostraron efectos citopáticos insuficientes en algunas líneas celulares de cáncer de próstata que expresan bajos niveles de receptor de adenovirus virus coxsackie (CAR). [10] CAR es una proteína transmembrana que se expresa en diversas células y funciones epiteliales y endoteliales de mediar la infección adenoviral. Las células de cáncer con expresión CAR disminución se ha informado que son resistentes a la infección viral y la terapia génica mediada por adenovirus. [11] En el cáncer de próstata, la expresión de CAR es frecuentemente ausente, [12, 13], que podría limitar el uso de la terapia génica con adenovirus entregado . Un estudio previo demostró que la inserción del péptido Arg-Gly-Asp (RGD) en el bucle de HI del dominio mando mejorado de fibra del adenovirus mediada por la transducción de genes en las células CAR-negativa a través de la unión del péptido RGD de integrinas en las células diana . [14] por lo tanto, en este estudio, se evaluó la eficacia terapéutica de la doble mutante E1A de adenovirus oncolítico /E1B, AxdAdB-3, con Arg-Gly-Asp (RGD) la modificación -fiber (AxdAdB3-F /RGD) en la próstata cáncer de
in vitro Opiniones y en ratones desnudos.
Materiales y Métodos
líneas celulares y cultivo
línea celular de cáncer de próstata dependiente de andrógenos humano LNCaP (metástasis al nodo de linfa), independiente de andrógenos líneas celulares de cáncer de próstata PC3 humana (metástasis en el hueso) y DU145 (metástasis en el cerebro), y las células epiteliales normales de la próstata adulta infectadas con una sola copia del virus del papiloma humano 18 (llamado RWPE- 1) se obtuvieron de American Type Culture Collection (ATCC) (Manassas, VA, EE.UU.). células LNCaP tienen p53 de tipo salvaje y la expresión de p16; [15, 16] las células PC3 han mutado p53 pero metilado tipo salvaje de p16;. [15, 16] y las células DU-145 tienen tanto p16 p53and mutado [15, 16] riñón embrionario humano se obtuvieron 293 (HEK-293) del Banco de células de la Academia china de Ciencias (Shanghai, china). Las líneas celulares se mantuvieron en Instituto Roswell Park Memorial o medio esencial mínimo de Eagle (por HEK293) suplementado con suero bovino fetal al 10%, 100 IU /ml de penicilina, y estreptomicina 100 mg /ml en humidificado 5% de CO
2 atmósfera a 37 DO. RWPE-1 se mantuvieron en K-SFM medio completo (Cell Systems, Kirkland, WA, EE.UU.) y luego arrestado en K-SFM sin factor de crecimiento del suero antes de la infección viral.
adenovirus recombinante e infección de células
AxCAZ3-F /RGD [17] y AxCAlacZ [18] son E1 suprimido vectores de adenovirus de replicación defectuosa que expresa
Escherichia coli
lacZ gen bajo el control del promotor CAG con o sin un péptido RGD en el bucle HI del dominio perilla de la fibra. AxdAdB-3 tiene un Ad5 competente para la replicación mutante que contiene el (STGHE) mutación SXGXE en lugar del motivo LXCXE (LTCHE) Rb vinculante en E1A y supresión de E1B55 KD [19]. Para construir AxdAdB3-F /RGD utilizando pWEAxKM-F /RGD, hemos clonado los aminoácidos RGD-4C en el bucle HI del dominio perilla de la fibra entre los residuos de aminoácidos 546 y 547 con una deleción E3. Las secuencias de aminoácidos de la RGD-mutación eran T 546 CDCRGDCFCP 547. AxdAdB3-F /RGD fue generado por las células HEK293 co-transfectar con pWEAxKM-F /ADN cósmido RGD, que había sido digerido con
Cla
y
Pac
I, junto con el
EcoR I y
Ase
digerido con ADN-TPC (complejo proteína terminal) de AxdAdB3 [17]. Los vectores virales fueron proporcionados por el Gene Bank RIKEN (Tsukuba, Japón) y se transfectaron en células HEK293 para producir adenovirus y el título viral se determinó mediante un ensayo en placa estándar.
Para la infección, se sembraron células sobre un 6 -bien placa y se cultivó durante la noche. En el día siguiente, las células fueron infectadas con AxCAlacZ o AxCAZ3-F /RGD a una multiplicidad de infección (MOI) de 100 por 24 h. Expresión de la proteína hexon de adenovirus en las células infectadas se determinó mediante análisis de transferencia Western. Mientras tanto, las células se infectaron con AxCAlacZ o AxCAZ3-F /adenovirus RGD a una MOI de 100 durante 24 h y los niveles de proteína hexon adenoviral en células infectadas a continuación, se evaluaron mediante citometría de flujo (que se describe en la siguiente sección) con un anticuerpo monoclonal de ratón anticuerpo hexón (MAB805, Chemicon Internacional, Temecula, CA).
la extracción de proteínas y Western blot
las células se lisaron en tampón de lisis 100 l y la concentración de proteínas se midió por el método BCA. A continuación, cantidades iguales de muestras de proteína en el sobrenadante se separaron usando dodecilsulfato de sodio electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) en un gel de SDS-PAGE 12% y después se transfirieron a una membrana de difluoruro de polivinilideno (Millipore, Billerica, MA, EE.UU.) . A continuación, la membrana se incubó con un anticuerpo monoclonal de ratón anti-hexon (MAB805, Chemicon International, Temecula, CA, EE.UU.) y posteriormente se incubaron con un anti-ratón de anticuerpos IgG durante 1 h seguido por un aumento de quimioluminiscencia (ECL; Cell Signaling Technology, MI , CA, EE.UU.). A continuación, la membrana se expuso a películas de rayos X y analizan en busca de cuantificación utilizando la imagen J Software (Instituto Nacional de Heath, Bethesda, MD, EE.UU.).
La citometría de flujo para determinar la expresión de los niveles de CAR y la integrina en las células
Las células fueron sembradas en una placa de 6 pocillos y se cultivaron durante la noche. Para detectar la expresión de CAR y la integrina α
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3 y α
vβ anticuerpo CAR
5, las células fueron separadas utilizando una solución de disociación libre de enzima y luego se incubaron con un anticuerpo monoclonal de ratón anti-humano (Upstate Biotechnology, Lake Placid, Nueva York, EE.UU.), un anticuerpo monoclonal de ratón anti-humano de integrina α
vβ
3 de anticuerpos (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, EE.UU.), o un anticuerpo monoclonal de ratón integrina anti-humano α
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5 anticuerpo (R & amp; D Systems, Inc., Minneapolis, MN, EE.UU.), todos a una dilución de 1: 100 durante 1 hora en hielo. A continuación, las células se lavaron tres veces con solución salina tamponada con fosfato (PBS), y después se incubaron adicionalmente durante 30 min con un anticuerpo conjugado con isotiocianato de fluoresceína secundaria. Después de los lavados, las células se analizaron inmediatamente por un citómetro de flujo (Becton Dickinson, San Jose, CA, EE.UU.).
Conteo
celular La viabilidad celular Kit-8 (CCK-8) de ensayo
Las células (3 x 10
3 por pocillo) se sembraron en placas de 96 pocillos y se infectaron con AxCAlacZ, AxCAZ3-F /RGD, AxdAdB-3, y AxdAdB3-F /RGD a una MOI de 30 durante 0, 1, 3, 5, y 7 días. La viabilidad celular se evaluó usando CCK-8 (Dojindo, Japón) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Brevemente, se añadieron 10 l de solución de CCK-8 a cada pocillo y se incubaron las células durante 4 h. La absorbancia del formazán coloreado se midió utilizando un lector de microplacas a 450 nm.
Los experimentos con animales
Los efectos antitumorales de AxdAdB3-F /RGD se evaluaron en un modelo de tumor subcutáneo en 6-de semana viejos ratones machos Balb /c. Brevemente, los ratones fueron inyectados por vía subcutánea con 5 x 10
células PC3 6 para la formación de xenoinjerto de tumor de aproximadamente 6-7 mm de tamaño. Los ratones se les administró entonces una inyección intratumoral de AxCAZ3-F /RGD, AxdAdB-3, o AxdAdB3-F /RGD (1 x 10
8 unidades formadoras de placa) una vez al día durante tres días consecutivos. a continuación, el tamaño del tumor se midió utilizando un volumen semanal pinza y el tumor electrónico se calculó usando la siguiente fórmula: volumen = dimensión mayor x dimensión más pequeña
2 x 0,4. Al día 28 después del tratamiento, se sacrificaron los ratones y se tomaron los xenoinjertos tumorales y se procesaron para análisis inmunohistoquímico de la proteína hexon adenoviral para determinar la replicación adenoviral en las lesiones tumorales. Brevemente, las secciones embebidas en parafina se desparafinaron en xileno, se rehidrataron con etanol, y luego a inmunotinción de acuerdo con las instrucciones del fabricante utilizando un kit de inmunohistoquímica que contiene técnica de estreptavidina-biotina (kit LSAB, Dako, Japón) y un anticuerpo anti-hexon monoclonal de ratón (# MAB805, Chemicon International).
El análisis estadístico
Los análisis estadísticos se realizaron utilizando el software SPSS para Windows, versión 19 (SPSS Inc., Chicago, IL, EE.UU.). Los datos se resumieron como media ± desviación estándar y la significación de las diferencias entre los grupos se analizó estadísticamente usando una prueba t de dos colas no apareada. P & lt; 0,05 fue considerado estadísticamente significativo.
Resultados
CAR y la expresión de la integrina en las células de cáncer de próstata y células epiteliales normales de la próstata
citometría de flujo de datos mostraron un alto nivel de expresión en DU145 CAR células, un nivel moderado en LNCaP y células RWPE-1, y un nivel muy bajo en las células PC3 (Fig 1). Expresión de la integrina también fue diferente en estas líneas celulares, pero la línea celular PC3-CAR negativa expresa altos niveles de integrina α
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5 (figura 1).
Las células fueron cultivadas y inmunoti~neron con el coche , integrina α
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3, o α
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5 anticuerpo y después se sometieron a análisis de citometría de flujo. Columnas, los porcentajes de células que expresan CAR, αvβ3 y αvβ5. Los datos se presentan como media ± desviación estándar de tres experimentos independientes.
modificado RGD-fibra capacidad de infección de adenovirus
Después de 24 h la infección con adenovirus, se utilizó el análisis de Western blot para detectar expresión de la proteína hexon de adenovirus en las células infectadas (Fig 2A). expresión de la proteína hexon fue similar en las líneas celulares CAR-positivo DU145, LNCaP y RWPE-1 después de que cualquiera AxCAlacZ o AxCAZ3-F infección /RGD. Sin embargo, la línea celular PC3 CAR-negativo (que expresan α integrina
vβ
5) mostraron altos niveles de expresión de la proteína hexón después AxCAZ3-F /infección RGD en comparación con las células infectadas con AxCAlacZ (figura 2A), lo que indica que RGD -fiber modificación mejorada de adenovirus (AxCAZ3-F /RGD) capacidad de infección en las células del cáncer de próstata CAR-negativo.
a, RGD-fibra modificada capacidad de infección de adenovirus. análisis de transferencia de Western de expresión de la proteína hexon en infección simulada (1) o infección con AxCAlacZ (2) y AxCAZ3-F /RGD (3) en las células de cáncer de próstata. B, análisis de citometría de flujo de expresión de la proteína hexon en las células infectadas con adenovirus RGD o células infectadas con adenovirus AxCAlacZ AxCAZ3-F /. Los datos se presentan como media ± desviación estándar de tres experimentos independientes. ** P & lt; 0,01 y N.S., no significativo estadísticamente. C, los efectos citopáticos de RGD de fibra modificado adenovirus en las células de cáncer de próstata. Las células se infectaron con AxCAlacZ (diamantes), AxCAZ3-F /RGD (cuadrados), AxdAdB-3 (triángulos) y AxdAdB3-F /RGD (círculos) a una MOI de 30 durante 0, 1, 3, 5, y 7 días y después se somete a un ensayo de viabilidad celular. Los datos se presentan como media ± desviación estándar de tres experimentos independientes. ** P & lt; 0,01 y N. S., no es estadísticamente significativa.
También se evaluó la infectividad por fluorescencia de células activadas por la clasificación para detectar la proteína hexón de adenovirus en las células infectadas (Figura 2B). DU145 CAR-positivo, las células LNCaP y RWPE-1 mostraron una expresión similar de proteínas hexón después de uno o AxCAlacZ AxCAZ3-F infección /RGD. En agudo contraste, la línea celular PC3-CAR negativa, expresando αvβ5, mostró expresión de la proteína hexon en células infectadas con AxCAZ3-F /RGD pero no con AxCAlacZ, que fue consistente con los resultados de transferencia de Western.
efectos citopáticos del adenovirus en células de cáncer de próstata
AxdAdB-3 era más citopático en células de cáncer de próstata CAR-positivo (LNCaP o DU145) que en las células CAR-negativas (PC3). AxdAdB3-F /RGD causó potente oncolisis en ambas líneas celulares de cáncer de próstata CAR-positivas y CAR-negativo (figura 2C), lo que indica que RGD-fibra de adenovirus modificado (AxdAdB3-F /RGD) la actividad antitumoral mejorada en células de cáncer de próstata CAR-negativas . Sin embargo, AxdAdB3-F /RGD no citopáticos en la próstata normal línea celular epitelial RWPE-1-HPV inmortalizadas (figura 2B).
La actividad antitumoral de AxdAdB3-F /RGD
in vivo
xenoinjertos de células de cáncer de próstata PC3 primera establecidos en ratones desnudos y luego se inyecta directamente AxdAdB3-F /virus de RGD o control AxdAdB-3 en las lesiones tumorales una vez al día durante tres días. Los ratones se sacrificaron el día 28 y la actividad antitumoral AxdAdB3-F /RGD. curva de crecimiento del tumor, y el volumen del tumor se midieron (Fig 3). xenoinjertos tumorales también se analizaron para la expresión de la proteína hexon viral (Fig 4). Nuestros datos muestran que AxdAdB3-F /RGD crecimiento significativamente inhibido de los xenoinjertos de tumores
en vi vo
a las 4 semanas después del tratamiento en comparación con AxdAdB-3 (P & lt; 0,005; Figura 3).
células PC3 El cáncer de próstata se inyectaron por vía subcutánea en ratones desnudos. Después de lesiones tumorales alcanzaron aproximadamente se inyectó 6-7 mm en tamaño virus en la lesión tumoral una vez al día durante tres días y se sacrificaron los ratones en el día 28. El volumen del tumor se midió después de animales fueron tratados con virus (n = 5 por grupo) . Los datos se presentan como el volumen medio del tumor ± desviación estándar. ** P & lt; 0,005.
AxdAdB3-F /RGD tratamiento resultó en más extensa necrosis tumoral que AxdAdB-3 (tinción HE, ampliación original x 200 en el panel superior, x 400 en el panel medio). La tinción inmunohistoquímica de los tumores tratados con RGD AxdAdB3-F /detectó la proteína adenoviral hexón (panel inferior, aumento original x 400).
Discusión
Nuestro estudio demuestra que la fibra RGD es capaz de modificar la actividad antitumoral de la E1A /E1B de adenovirus mutante doble AxdAdB3-F /RGD en células de cáncer de próstata
in vitro
y en el modelo de xenoinjerto en ratones desnudos. Nuestros datos actuales indican que AxdAdB3-F /RGD posee una actividad terapéutica potente en el cáncer de próstata. AxdAdB3-F /RGD causado fuertes efectos citopáticos en todas las líneas celulares de cáncer de próstata analizadas, independientemente de la expresión del coche. AxdAdB3-F /RGD también inhibe el crecimiento de xenoinjertos de cáncer de próstata en ratones desnudos. Sin embargo, sin modificaciones RGD, virus AxdAdB-3 sólo mostró actividad antitumoral en células de cáncer de próstata CAR-positivo. Se necesitan más estudios para evaluar la seguridad general de estos adenovirus antes de su uso en pacientes humanos.
infección por adenovirus requiere la unión del virus a la superficie de las células diana mediante la unión del dominio mando de la fibra a la República Centroafricana, y la internalización continuación, posterior a través de la interacción de RGD motivos de la base Penton con receptores de la integrina α
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5. [14, 20] por lo tanto, CAR juega un papel crucial en la mediación y la promoción de la infección adenoviral. Por lo general, las células cancerosas expresan niveles muy bajos de proteína CAR y resistentes a la infección adenoviral, y son por lo tanto refractario a la terapia viral mediada por adenovirus. [11] En el estudio actual, se confirmó que la infección AxdAdB-3 fue capaz de reducir la viabilidad de cáncer de próstata líneas celulares DU145 y LNCaP, que expresan niveles moderados o altos de coche, pero tuvo efectos limitados de las células PC3, que expresa niveles muy bajos de coche. De hecho, las líneas celulares de cáncer de próstata y los tejidos tumorales con frecuencia han disminuido o pérdida de expresión de CAR. [12] Para mejorar la capacidad de infección de adenovirus oncolítico en el cáncer de próstata CAR-negativa, se modificó el virus con RGD para producir un AxdAdB3-F /RGD virus, lo que mejora de forma significativa la actividad de adenovirus oncolítico en el cáncer de próstata.
AxdAdB3-F /RGD es un virus que contiene un péptido RGD, que puede mediar no sólo la entrada del virus dependientes del automóvil, sino también CAR-independiente y RGD-integrina (α
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3 y α
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5) dependiente de la entrada del virus en las células diana. Las células cancerosas que expresan la integrina coche o sería por lo tanto susceptibles a la infección AxdAdB3-F /RGD. Por lo tanto, a pesar de la pérdida o disminución de la expresión CAR ocurre con frecuencia en el cáncer de próstata, abundante expresión de α integrina
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5 debería facilitar la infección por el virus. [21] Nuestro estudio confirma esta hipótesis y demostró que la capacidad AxCAZ3-F /RGD mejorada en comparación con la infección AxCAlacZ (sin RGD) en células PC3 CAR-negativo. Por otra parte, AxdAdB-3 fue más citopático en células CAR-positivas en comparación con las células CAR-negativas; Sin embargo, AxdAdB3-F /RGD causó efectos citopáticos potentes tanto en células CAR-positivas y células CAR-negativo. También, AxdAdB3-F /RGD inhibió el crecimiento de xenoinjerto en el modelo de ratón desnudo. Estos datos sugieren que RGD de fibra de adenovirus modificado mejora la capacidad de infección adenoviral y oncolisis eficacia a través de la integrina (αvβ3 y αvβ5) entrada dependiente. Debido a su mayor capacidad de infección, AxdAdB3-F /RGD a una dosis viral inferior podría potencialmente evitar algunos efectos secundarios adversos, mientras que el aumento de la eficacia de la terapia viral.
Nuestros datos actuales demuestran que los niveles de CAR y la integrina α
vβ
3 de expresión son altos en DU145 y baja en las células PC3, que es similar a los hallazgos en un estudio previo realizado por Adams
et
.
al
. [22]. Curiosamente, nuestro estudio encontró que la integrina α
vβ
5 expresión fue alta en DU145 y PC3 células. Esto es incompatible con el estudio de Adams [22], lo que demuestra que la integrina α
vβ
5 expresión es alta en DU145, pero baja en células PC3. Sin embargo, de acuerdo con nuestros resultados, los niveles de α integrina
vβ
5 fueron más altos que la integrina α
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3 en las células PC3 en el informe de Adams. [22]. Sin embargo, las cantidades de α integrina
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5 variada. Otro estudio anterior [23] también demostró que PC3 y LNCaP expresado integrina α
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5 en niveles similares, lo cual es consistente con nuestros resultados actuales. Por lo tanto, se necesitan más estudios para verificar estos datos y sus mecanismos moleculares subyacentes.
Además, nuestros datos actuales demuestran que AxdAdB3-F /RGD tiene menos efectos citopáticos en las células epiteliales de la próstata normal de HPV inmortalizadas. Adams
et
.
al
., [22] informaron de que el mutante adenoviral oncolítico AdΔΔ en modelos de cáncer de próstata (AdΔΔ tiene una mutación de E1A en el CR-2) eliminó la unión a pRb, y la supresión de la 19 KD E1B mejoró la oncolítico potencia. Sin embargo, los estudios publicados han demostrado que, o bien E1A o E1B mutante individual era capaz de replicarse en células normales. [24,25] Nuestro estudio anterior mostró que E1A /E1B doble adenovirus oncolítico mutante, AxdAdB-3, no indujo significativamente toxicidad en comparación a E1A o E1B solo adenovirus mutante en líneas de células normales derivadas de la próstata. [10] Nuestro estudio actual es consistente con los estudios previos que muestran que la doble adenovirus oncolítico mutante E1A /E1B era menos tóxico en comparación con E1A o E1B mutantes individuales en Normal las células, pero tuvieron un efecto oncolítico similar en las células del cáncer. [19, 26] Recientemente, los ensayos clínicos de adenovirus oncolíticos entregados por vía intratumoral, intraperitoneal y por vía intravenosa para el tratamiento de pacientes con recurrentes o quimioterapia avanzada tumores sólidos refractarios se informó a ser segura y potencialmente eficaz. [27] por lo tanto, estos estudios son alentadores y apoyan el uso de AxdAdB3 /F-RGD como un agente terapéutico para el cáncer de próstata. Además, el cáncer de próstata es muy adecuado para la terapia adenoviral oncolítico debido al fácil entrega de adenovirus en el intra-próstata, lo que permite altos títulos de adenovirus para infectar las células tumorales sin diseminación a otros sitios. [9] resultados de replicación El adenovirus en la liberación de la progenie virus para infectar las células tumorales adyacentes, que conduce a la amplificación de virus de entrada. Una vez más, E1A /E1B doble adenovirus oncolítico mutante es capaz de replicarse en las células diana y las células tumorales lisan que tienen anormalidades en p53 y /o p16 /Rb /vías de E2F. [19] El cáncer de próstata a menudo tiene una amplia gama de mutaciones genéticas, incluyendo el p53, pRb, p16 y vías, [28] y sería un sitio ideal para la terapia de órganos adenovirus oncolítico.
Nuestro estudio proporciona una prueba de principio, y se necesita más trabajo antes de que nuestros hallazgos pueden ser traducido en la aplicación clínica. Nuestros datos actuales demuestran que E1A /E1B de adenovirus oncolítico restringido el doble con la modificación RGD-fibra mejora la capacidad de infección viral y la actividad antitumoral tanto en las células CAR-positivos y negativos de cáncer de próstata
in vitro Opiniones y en xenoinjertos de ratones desnudos, mientras afectar a las células normales.