Extracto
Antecedentes
Hemos informado anteriormente el papel de la IL-6 en un modelo murino de la caquexia por cáncer y actualmente documentado un paciente en el que tocilizumab, anticuerpo del receptor anti-IL-6, mejorado de manera espectacular la caquexia inducida por la IL-6 sobre-expresión de cáncer de pulmón. A pesar de este potencial para aliviar la caquexia por cáncer, tocilizumab no ha sido aprobado para este uso clínico. Por lo tanto, nuestro anterior ensayo clínico previsto de tocilizumab, diseñamos los dos estudios descritos aquí para evaluar los niveles de IL-6 en pacientes con cáncer de pulmón y el efecto de tocilizumab en un modelo murino de la caquexia por cáncer humano.
métodos
en primer lugar, se midió IL-6 niveles en suero en pacientes con cáncer de pulmón y se analizó su asociación con la caquexia y la supervivencia. A continuación, se examinó el efecto de un análogo de roedor de tocilizumab (MR16-1) en el modelo experimental caquexia.
Resultados
séricos de IL-6 fueron mayores en pacientes con caquexia que aquellos sin caquexia. En pacientes con cáncer de pulmón resistentes a la quimioterapia, la IL-6 nivel sérico elevado asociaron con la mortalidad, y el nivel de corte para afectar a su pronóstico fue de 21 pg /ml. Mientras tanto, el trasplante de IL-6 que expresan las células de carcinoma de pulmón de Lewis en ratones causó la caquexia, que luego recibieron MR16-1 o 0,9% de solución salina. El crecimiento del tumor fue similar en ambos grupos; Sin embargo, el grupo MR16-1 perdieron menos peso, mantiene mejor la ingesta de alimentos y el agua y tenía características caquécticos más leves en la sangre. MR16-1 también prolongó la supervivencia de los ratones trasplantados LLC-IL6 (36,6 frente a 28,5 días, p = 0,016).
Conclusión
Nuestros estudios clínicos y experimentales revelaron que los niveles séricos de IL-6 es un marcador sustituto para la evaluación de la caquexia y el pronóstico de pacientes con cáncer de pulmón metastásico resistente a la quimioterapia y que tocilizumab tiene el potencial de mejorar el pronóstico y mejorar la caquexia que por lo destruye su calidad de vida. Este resultado favorece en gran medida nuestros ensayos clínicos para evaluar la seguridad y eficacia del tratamiento con tocilizumab en pacientes con aumento de suero de IL-6
Visto:. Ando K, Takahashi M, Kato M, N Kaneko, Doi T, Y Ohe , et al. (2014) El tocilizumab, una terapia propuesta para la caquexia de Interleukin6-expresión de cáncer de pulmón. PLoS ONE 9 (7): e102436. doi: 10.1371 /journal.pone.0102436
Editor: Rossella Rota, Ospedale Pediatrico Bambino Gesú, Italia |
Recibido: 9 de noviembre de 2013; Aceptado: 18 Junio 2014; Publicado: 10 de julio 2014
Derechos de Autor © 2014 Ando et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio fue apoyado por becas-en-Ayudas a la Investigación Científica no.21591003 (Kazuhisa Takahashi) y no.23591906 (Fumiyuki Takahashi) del Ministerio de Educación, Cultura, Deportes, Ciencia y Tecnología de Japón. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
la caquexia por cáncer es un estado hipercatabólicos caracterizado por la reducción de los pacientes en el músculo y el tejido graso, así como la anorexia, astenia y anemia. Esta condición es frecuente en pacientes con cáncer avanzado y acompañado por un deterioro de la calidad de vida y supervivencia corta [1] - [5]. Estos cambios parecen ser parte de una respuesta inflamatoria que incluye la elaboración de citoquinas proinflamatorias tales como interleucina-6 (IL-6) y factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α) [6] - [8]. También en un estudio de cáncer de pulmón, los pacientes con caquexia habían aumentado las respuestas inflamatorias que se manifiestan a medida que aumenta de IL-6 en suero, el receptor de TNF-α soluble y la proteína C-reactiva (CRP) [9]. En consecuencia, la gestión de estas citoquinas es vital como es la paliación de los síntomas y la reducción de la angustia en el tratamiento de pacientes con caquexia por cáncer.
IL-6, que es una citoquina multifuncional que participan en las respuestas inflamatorias e inmunológicas que son característica de muchas enfermedades autoinmunes, se considera que es un mediador clave de la caquexia [10], [11]. Para dilucidar el papel de la IL-6 en la caquexia inducida por cáncer de pulmón, que previamente establecido una línea celular de cáncer de pulmón transfectadas con IL-6 cDNA y se trasplantaron estas células en ratones C57BL /6 [12]. Como resultado, la IL-6 inducida por cambios marcados caquécticos en estos ratones, incluyendo los tiempos de supervivencia cortos. Comparativamente, los resultados en los ratones tratados con un análogo de tocilizumab que disminuye los síntomas y duración de la vida alargadas sugirieron que este tratamiento se dirige específicamente a la caquexia del cáncer [12]. Además, actualmente experimentado y describimos un paciente en el que tocilizumab, anticuerpo del receptor anti-IL-6, caquexia aliviado dramáticamente inducida por la IL-6 sobre-expresión de cáncer de pulmón [13]. Este paciente, cuyo diagnóstico fue de carcinoma de células grandes con caquexia por cáncer, sufrió un estado funcional (PS) que se deterioró a una escala ECOG de 4 con un aumento de la IL-6 en suero a 173 pg /ml. Sin embargo, una vez que comenzó la IL-6 focalización tratamiento con tocilizumab, sus síntomas caquécticos, PS y los niveles de albúmina mejoraron rápidamente, y un período de supervivencia de nueve meses seguidos sin síntomas relacionados con la caquexia [13]. Ese resultado y en nuestros informes anteriores indican que tocilizumab, que se ha utilizado principalmente para el tratamiento de la artritis reumatoide, la artritis idiopática juvenil sistémica y la enfermedad de Castleman, tiene un buen potencial como terapia para la caquexia por cáncer, pero todavía no ha sido aprobado. En consecuencia, para evaluar la eficacia y seguridad de tocilizumab, actualmente estamos planeando el ensayo clínico.
MR16-1, un anticuerpo receptor de rata anti-IL-6, se ha caracterizado como un análogo de roedores adecuada de tocilizumab [14], [15]. Anteriormente, Mori et al. informó que MR16-1 impidió el desarrollo de la anemia relacionada con el cáncer en un modelo experimental, LC-06 ratones JCK [16]. Sin embargo, si tales cambios MR16-1 suprime caquécticos como la pérdida de peso y apetito aún no está claro y debe ser evaluado antes de que el ensayo clínico. Por lo tanto, como paso previo, se ha determinado que aquí si el suero de IL-6 es un marcador sustituto fiable para su uso en pacientes con cáncer de pulmón y la caquexia, y verificado la eficacia de MR16-1 en nuestro modelo experimental previamente establecido de esa condición.
Materiales y Métodos
la recolección de datos para la evaluación de IL-6 niveles en suero en pacientes con cáncer de pulmón
durante el período abril 2010 a marzo 2011, la sangre periférica se obtuvo de 33 pacientes con cáncer de pulmón que fueron diagnosticados mediante pruebas patológicas en Kameda Medical Center, 1000 cama centro de atención terciaria. El suero se separó y se almacenó a -70 ° C hasta su análisis. Se excluyeron los pacientes que no den su consentimiento o cuyo estado pueda interferir con los resultados del estudio, por ejemplo, enfermedad infecciosa o enfermedad coexistente. Como los datos de medición a partir de muestras de sangre, se obtuvo su consentimiento informado verbal y por escrito en sus registros clínicos. Nuestra revisión retrospectiva, el procedimiento de consentimiento verbal y el análisis de sus datos en su estudio fueron aprobados por el Comité de Ética del Centro Médico Kameda.
Evaluación de parámetros caquexia en pacientes con cáncer de pulmón
En primer lugar, para evaluar las características clínicas de los pacientes, hemos designado dos grupos que representan a la presencia o ausencia de la caquexia por cáncer en el momento de la toma de muestras de suero. El grupo de la caquexia y el grupo no-caquexia se compararon en términos de las características iniciales y los factores en sus muestras de sangre. El diagnóstico de la caquexia por cáncer fue establecida basada en el consenso internacional publicada, que fue la pérdida de peso superior al 5%, o la pérdida de peso superior al 2% en los individuos que ya muestran el agotamiento de acuerdo con el peso corporal y la altura actual [índice de masa corporal (IMC) menor de 20 kg /m
2] o degenerado pérdida de músculo esquelético (sarcopenia) [1]. A continuación, para evaluar la relación entre estos parámetros y la supervivencia en pacientes caquécticos con cáncer de pulmón metastásico, se seleccionaron 19 pacientes con estadio IIIb o IV de cáncer cuya atención de apoyo se habían recibido sólo después de la evaluación de IL-6. A continuación, analizó la correlación entre las características de los pacientes y el tiempo de supervivencia. Por último, se calculó el nivel de corte más adecuado de suero de IL-6 para su supervivencia.
Líneas celulares y cultivos con modelos animales de la caquexia por cáncer
originaron
células de cáncer de pulmón de Lewis (LLC) como un carcinoma espontánea del pulmón en un C57BL 6 de ratón /[17], [18]. Establecimos células LLC transfectadas con el IL-6 gen humano (LLC-IL6), que tiene una potente capacidad para inducir la caquexia del cáncer en ratones, como se describe anteriormente [12]. En resumen, la IL-6 de ADNc se introduce en Sal I sitio del vector de expresión de ADNc eucariota BMGNeo, y se transfectó en células LLC utilizando el reactivo de lipofectina (Gibco BRL, Gaithersburg, MD) según las instrucciones del fabricante [12], [19 ]. Las células se mantuvieron en Modificado de Iscove Medio (IMDM, Wako, Osaka, Japón) de Dulbecco con 20% suero bovino fetal, penicilina y estreptomicina (100 U /ml y 100 mg /ml, respectivamente).
modelos murinos de caquexia
libre de Virus 5 semanas de edad, machos C57BL /6J se obtuvieron de Japan SLC (Hamamatsu, Japón). Los animales eran alojada en grupo (5 por jaula) a una temperatura de 24 ± 2 ° C, humedad relativa del 55% ± 10%, y A /12 h ciclo de oscuridad 12 h de luz. Después de la habituación de 1 semana, los ratones se alojaron dos por jaula durante el experimento. Se proporcionaron agua clorada y los alimentos irradiados
ad libitum
. Todos los procedimientos realizados en los animales fueron aprobados por el Cuidado de Animales institucional y el uso comité (IACUC) de la Universidad de Juntendo.
previamente establecido el modelo de caquexia experimental de trasplante de células LLC-IL-6 en ratones de 6 semanas de edad [12 ]. Además, en muchos otros estudios que determinaron la patogénesis de la caquexia del cáncer y la eficacia farmacológica, se utilizaron ratones a cinco a seis semanas de edad para el trasplante de líneas celulares de cáncer, como se informó [16], [20], [21]. Por consiguiente, también en este estudio, LLC-IL6 (1 × 10
6) se inoculó por vía subcutánea en el flanco derecho de cada ratón a las 6 semanas de edad, después de un período anterior de la vivienda, y hemos designado el día de LLC- IL6 la inoculación como día 0.
MR16-1 tratamiento del protocolo
MR16-1 (baja. Nº MC45038) es un anticuerpo contra el receptor de rata anti-IL-6, y fue suministrado amablemente a partir el laboratorio de Chugai Pharmaceutical Co. (Kamakura, Japón). Tal como se presenta en la introducción, Mori et al. previamente determinado la eficacia de MR16-1 para la anemia relacionada con el cáncer cuando se inyecta por vía intraperitoneal en una dosis una vez por semana de 20 mg /kg [16]. Por otro lado, se evaluaron parámetros previamente en caquécticos detalle en veintiún días después de la inoculación del tumor y también confirmó que nuestro modelo experimental con caquexia LLC-IL6 produjo supervivencia de aproximadamente tres semanas sin ningún tratamiento [12]. Además, en la situación clínica, tocilizumab lo general se administra cada dos o cuatro semanas con el mismo intervalo para el tratamiento de la artritis reumatoide (RA) y la enfermedad de Castleman [22], [23]. Del mismo modo, empezamos el tratamiento MR16-1 a una dosis semanal de 20 mg /kg comenzando el día 3 con el fin de administrar con el mismo intervalo y evaluamos los parámetros caquécticos, en veintiún días después de la inoculación del tumor.
Evaluación de MR16-1 efecto sobre cachecia y la supervivencia
en primer lugar, para evaluar la eficacia de MR16-1 en la caquexia, veinte ratones se asignaron a cuatro grupos. Los ratones en el grupo 3 y 4 representa el modelo de la caquexia por cáncer en el que LLC-IL6 se inoculó por vía subcutánea (grupo de la caquexia por cáncer), mientras que los grupos 1 y 2 recibieron sólo la misma cantidad de solución salina, cloruro de sodio 0,9% (grupos de control sanos). Además, los grupos 2 y 4 recibieron MR16-1 tratamiento que en el protocolo anterior (con la etiqueta "con MR16-1"), y los grupos 1 y 3 recibieron la misma cantidad de solución salina (con la etiqueta "sin MR16-1").
Se evaluó el peso corporal, la ingesta de alimentos y el agua y el volumen del tumor dos veces por semana como se describe anteriormente [20]. El volumen del tumor en los grupos 3 y 4 se calculó mediante (longitud) x (anchura)
2/2 (cm
3) [24]. Veintiún días después de la inoculación del tumor, los ratones fueron anestesiados con somnopentyl y sacrificados. En el momento del sacrificio, se recogieron muestras de sangre, los músculos y luego disecados y pesados de las extremidades y de la grasa del tejido alrededor de los testículos [25], [26]. Para determinar el estado nutricional de estos animales, que mide los niveles de glucosa y triglicéridos en suero y el recuento evaluado de glóbulos blancos (WBC), hematocrito (Ht) y plaquetas (PLT) cuenta en la sangre. Cada grupo constaba de cinco ratones, y todos los experimentos se realizaron dos veces
A continuación, para determinar el efecto de MR16-1 en la supervivencia, veinte ratones también fueron trasplantados con LLC-IL6 y dividió al azar en dos grupos: Uno. grupo recibió MR16-1 con el mismo protocolo que el anterior, y el segundo grupo recibió solamente la misma cantidad de solución salina. Cada grupo constaba de diez ratones, y se analizó su tiempo de supervivencia después de la inoculación del tumor. tratamiento semanal se ha continuado con el mismo intervalo hasta que se confirme su muerte.
Medición de parámetros caquécticos en Bligoo sangre
Para la evaluación de los datos de los pacientes en nuestro estudio clínico, suero de IL-6 fueron determina usando radioinmunoensayo ligado a enzimas disponibles comercialmente y kits ligados a enzimas ensayo inmunoenzimático (ELISA) de acuerdo con las instrucciones del fabricante (SRL Inc., Tokio, Japón). Otros parámetros también se midieron mediante un examen de rutina en Kameda Medical Center. Además, para evaluar la eficacia de MR16-1 en los animales experimentales, el suero de IL-6 se midió mediante el uso de un murino IL-6 ELISA Kit, y todos los demás parámetros se midieron usando las pruebas de laboratorio de rutina (KAC Inc., Kyoto, Japón) .
Los análisis estadísticos
se realizaron análisis estadísticos con SPSS versión 20, y los datos se expresan como media ± desviación estándar. La prueba de Chi-cuadrado o la prueba de Mann-Whitney se utilizó como apropiada para comparar las características de los pacientes en nuestro estudio clínico. Las correlaciones de las características de los pacientes con la supervivencia se evaluaron mediante análisis de correlación de Spearman. Para determinar el nivel de corte más adecuado de suero de IL-6 para una supervivencia mes, se utilizó el criterio de información de Akaike (AIC), que es un indicador para evaluar la bondad de ajuste para un modelo estadístico [27], [28]. Un valor menor AIC indica un modelo más fiable para predecir los resultados. Las tasas de supervivencia se estimaron con el método de Kaplan-Meier usando el valor de corte calculado por análisis de AIC.
Para evaluar la eficacia de MR16-1, se compararon las variables para los dos grupos utilizando un desapareado
t
-test o diferencias significativas honesta de Tukey después de análisis de varianza (ANOVA). La curva de supervivencia de cada grupo se analizó mediante la prueba de log-rank. Para todos los análisis estadísticos, el valor de p menor de 0,05 fue considerado significativo.
Resultados
Perfil clínico de 33 pacientes con cáncer de pulmón
Como muestra la Tabla 1, entre los 33 pacientes perfilado en este estudio clínico, la edad media fue de 71,3 ± 10,0 años y el 76% eran varones. Diecisiete de los pacientes habían sido diagnosticados de adenocarcinoma (52%), trece con carcinoma de células escamosas (39%), uno con carcinoma de células grandes (3%) y dos con carcinoma de células pequeñas (6%). Un total de 26 pacientes habían sido tratados con quimioterapia (n = 22), la radioterapia (n = 4) o la cirugía (n = 1) antes o después de la evaluación de IL-6. Siete pacientes recibieron sólo la atención de apoyo. Después de las evaluaciones para este estudio, 19 pacientes tenían sólo la atención de apoyo; 11 tenían una historia de la administración de quimioterapia y uno tenía la radioterapia. Dieciocho pacientes fueron diagnosticados con la caquexia por cáncer, según lo establecido en el estudio internacional de consenso [1].
características de los pacientes en el grupo de la caquexia (n = 18) en comparación con el grupo de no-caquexia (n = 15) se muestran en la Tabla 1. la media de edad, sexo, índice de masa corporal, estado histológico y el estadio de la enfermedad no fueron estadísticamente diferentes para los dos grupos. El grupo caquexia tenía una mayor proporción de pacientes con un estado de bajo rendimiento (ECOG & lt; 2, 77,8% frente a 20,0%), y más de ellos fueron tratados con medidas de soporte después de la evaluación del desempeño, (77,8% vs. 33,3%) que en el grupo no-caquexia. En las muestras de sangre, recuento de leucocitos fueron mayores en el grupo de la caquexia (11.722 vs. 5873 /l), al igual que el contenido de CRP (7.1 vs. 2.5 mg /dL), y los niveles séricos de IL-6 (40,2 vs. 13,0 pg /mL ); Sin embargo, los niveles de albúmina del grupo caquexia eran más bajos (2,7 frente a 3,5 g /dl) que en el grupo no-caquexia. La proteína total no fue diferente entre los dos grupos (6,4 frente a 6,7 g /dl).
Nuestros resultados se asemejan a los de una gran cohorte anterior de los pacientes con cáncer de páncreas estudiado por Bachmann et al [29]. En consecuencia, aunque el número de pacientes incluidos en nuestro análisis era relativamente pequeña, los resultados seguros de que nuestros datos son valiosos para un análisis más detallado.
correlación de suero de IL-6 niveles con la supervivencia
a continuación, se correlacionó los parámetros analizados caquécticos con la supervivencia en 19 pacientes con estadio IIIB o IV del cáncer que recibieron tratamiento de soporte después de la evaluación de IL-6 (Tabla 2). Todos los pacientes habían sido diagnosticados con cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC); diez con adenocarcinoma, ocho con carcinoma de células escamosas y uno con carcinoma de células grandes. Los tiempos de supervivencia después de que la evaluación tuvieron una correlación negativa estadísticamente significativa con el estado funcional del ECOG (r = -0,621, p = 0,005), la PCR (r = -0,529, p = 0,020) y suero de IL-6 (r = -0,639, p = 0,003), y una correlación positiva con los niveles de albúmina (r = 0,588, p = 0,008). los recuentos de WBC (r = -0,425, p = 0,069) y proteína total (r = 0,515, p = 0,060) también tendían a correlacionar con una supervivencia prolongada, pero no en el nivel de significación estadística. Mientras tanto, el suero de IL-6 niveles correlacionan bien con albúmina (r = -0,449, p = 0,054) y PCR (r = 0,543, p = 0,016), pero no con la proteína total (r = -0,006, p = 0,981).
también consideramos que era importante incluir el análisis de los pacientes que habían sido diagnosticados con cáncer de pulmón de células pequeñas (SCLC) o que habían estado bajo tratamiento para determinar el efecto de la IL-6 en la quimioterapia. Sin embargo, dado que el número de estos pacientes era pequeña, no pudimos verificar su efecto sobre la quimioterapia o su pronóstico en este estudio.
concentraciones séricas de IL-6 niveles y la supervivencia
Para determinar la más adecuada corte de nivel de suero de IL-6 contenido de los pacientes y su relación con la supervivencia, la AIC se calculó (Figura 1A). Como resultado, se obtuvo el valor más pequeño AIC en 20 o 21 pg /mL en los niveles séricos de IL-6 y vinculado a 21 a 28 días de tiempo de supervivencia, respectivamente (AIC = -10,395, cada combinación era el mismo valor). Esto reveló que los pacientes con IL-6 niveles séricos ≥21 pg /ml podía predecirse para tener el tiempo de supervivencia inferior de un mes o menos.
(A) Un umbral conservador ligado 20 o 21 pg /ml de IL-6 en el suero (eje y) con 21 a 28 días de tiempo de supervivencia (eje x), tal como se determina por análisis de AIC (ver Métodos), identificando de forma satisfactoria el nivel de corte más adecuado (eje z, AIC = -10.395). Tenga en cuenta que los pacientes con niveles séricos de IL-6 ≥21 pg /ml se predice que tienen menos tiempo de supervivencia. (B) La probabilidad de sobrevivir a uno y tres meses después de la evaluación fue menor en los pacientes con IL-6 & gt; 21 pg /ml que aquellos con & lt; 21 pg /ml (la supervivencia a un mes, el 20,0% vs. 77,8%, p = 0.007; y tres meses de supervivencia 10,0% vs. 33,3%, p = 0,025). (C) La proporción de pacientes con IL-6 ≥21 pg /ml fue del 80,0% para los pacientes que sobrevivieron menos de un mes, el 20,0% de los pacientes que sobreviven uno a tres meses y el 25,0% para los pacientes que sobrevivieron más de tres meses.
sobre la base de las estadísticas de la AIC, los pacientes fueron divididos en aquellos con IL-6 & gt; 21 pg /ml y & lt; 21 pg /ml y se analizaron para determinar la probabilidad de supervivencia mediante el método de Kaplan-Meier. Figura 1B muestra el patrón de supervivencia después de la evaluación de IL-6. No la probabilidad de supervivencia de uno y tres meses después de la evaluación es claramente menor en los pacientes con IL-6 & gt; 21 pg /ml que con & lt; 21 pg /ml (un mes supervivencia, 20,0% vs. 77,8%, p = 0,007 , y tres meses de supervivencia 10,0% vs. 33,3%, p = 0,025). Se clasificaron los más pacientes en tres grupos de acuerdo con el tiempo de supervivencia: plazo de un mes, de uno a tres meses y más de tres meses. Análisis de los niveles de IL-6 en suero en cada grupo, como representa la figura 1C, indicó que la proporción de pacientes con IL-6 ≥21 pg /ml era 80,0% que sobrevivieron en el plazo de un mes, mientras que 20,0% sobrevivió durante una a tres meses, y el 25,0% sobrevivió más de tres meses.
El efecto de MR16-1 en la caquexia por cáncer en células LLC-IL6 ratones portadores de
en el día 21 de nuestros experimentos por duplicado, un total de ocho de cada diez ratones sobrevivieron en cada grupo de la caquexia por cáncer (grupos 3 y 4), mientras que todos los diez ratones sobrevivieron en grupos de control sanos (grupos 1 y 2). Hemos sacrificado un total de 36 ratones, y sus parámetros caquécticos se muestran en la Tabla 3.
En cuanto a la comparación entre los ratones no tratados del control sano (grupo 1) y el grupo de la caquexia por cáncer (grupo 3), peso de las canales (grupo 1, 25,9 g vs. grupo 3, 22,1 g, p & lt; 0,001), los pesos de músculo gastrocnemio (128,1 mg vs. 60,4 mg, p = 0,006), músculo cuádriceps (102,7 mg vs. 14,7 mg, p & lt; 0,001), músculo bíceps femoral (145,4 mg vs. 27,1 mg, p & lt; 0,001), y el tejido de grasa alrededor de los testículos (490,5 mg vs. 169,4 mg, p & lt; 0,001) fueron significativamente mayores en el grupo 1 que en el grupo 3. los valores de Ht (32,8 vs. 9,4%, p = 0,001), triglicéridos (87,0 vs. 23,0 mg /dl, p & lt; 0,001) y glucosa (311,6 vs. 29,6 mg /dl, p & lt; 0,001) también fueron mayores en el grupo 1 que las en el grupo 3, respectivamente. Dado que estos resultados fueron similares a los de nuestro informe anterior [12], se confirmó la reproducibilidad de nuestro modelo experimental establecido.
En cuanto a la comparación entre los ratones caquexia por cáncer tratados y no tratados (grupo 3 [sin MR16-1 ] y 4 [con MR16-1]), por el contrario, los pesos de la canal (grupo 3, 22,1 g vs. grupo 4, 24,1 g, p = 0,032), los pesos de músculo gastrocnemio (60,4 mg vs. 106,6 mg, p & lt ; 0,001), músculo cuádriceps (14,7 mg frente a 48,5 mg, p = 0,007), músculo bíceps femoral (27,1 mg frente a 59,4 mg, p = 0,001), y la grasa tejido alrededor de los testículos (169,4 mg vs. 312,4 mg, p = 0,015) fueron significativamente mayores en el grupo 4 que el grupo 3. Además, el CMB (48.350 frente a 4.100 /l, p = 0,004) fue significativamente menor recuento, y los valores de Ht (9,4 vs. 21,8%, p = 0,004 ), triglicéridos (23,0 vs. 48,0 mg /dl, p = 0,005), y glucosa (29,6 vs. 101,0 mg /dl, p = 0,003) fueron mayores en el grupo 4 que los del grupo 3, respectivamente (Tabla 3). Mientras tanto, el suero de IL-6 fueron mayores en el grupo 4 que el grupo 3 (41,9 ± 17,9 frente a 296,1 ± 283,2 pg /ml, p & lt; 0,001).
La figura 2 muestra los cambios de peso corporal de serie (A) , el crecimiento del tumor (B), y la alimentación (C) y agua (D) de admisión. En cuanto a la comparación entre los grupos de la caquexia por cáncer, el crecimiento del tumor no fue estadísticamente significativamente diferente (Figura 2B, p = 0,061), pero los pesos corporales se mantuvo mayor en el grupo 4 (Figura 2 A, p = 0,032). Se observaron reducciones progresivas de la ingesta de alimentos y agua en ambos grupos después de la inoculación de células LLC-IL-6, pero MR16-1 tendieron a mejorar estos valores hasta el punto de que las diferencias significativas fueron prominentes en el día 14 (Figuras 2C, p & lt; 0,001, y la Figura 2D, p & lt; 0,001). Estos resultados indican que la administración de MR16-1 disminuyó significativamente la reducción de la ingesta de peso en canal, de alimentos y agua sin afectar el crecimiento del tumor en un modelo murino de la caquexia.
Trasplante de IL-6 que expresan células LLC causada caquexia en ratones (grupos 3 y 4), mientras que los grupos 1 y 2 recibieron sólo la misma cantidad de solución salina, cloruro de sodio 0,9% (grupos de control sano). Administramos MR16-1 (grupos 2 y 4) o 0,9% de solución salina (grupos 1 y 3), respectivamente. El peso corporal, el tamaño del tumor y la ingesta de alimentos y el agua se midió en los días 0, 3, 7, 10, 14, 17 y 21 después del trasplante. La cantidad medida de alimento o el agua se dividió por el número de ratones y días para determinar cada ingesta por animal por día. La significación estadística se evaluó con diferencias significativas de Tukey Honest (HSD) después del ANOVA de una vía. Los datos representan la media y la S.D. (Datos S.D. de peso se muestran en la Tabla 4). El crecimiento del tumor no fue significativamente diferente entre los grupos 3 y 4 (B), pero el peso corporal (A) y la comida (C) y la ingesta de agua (D) se mejoraron significativamente en el grupo 4 (†, p & lt; 0,01). No se observaron diferencias significativas en el peso de la canal y la ingesta de alimentos y agua entre los no tratados (grupo 1) y ratones sanos tratados (grupo 2).
Seguridad de MR16-1 en ratones sanos de control
Para determinar la seguridad de MR16-1, evaluamos también otros parámetros bioquímicos en los ratones de control sanos y los entre los grupos 1 y 2. compararon Como se muestra en las Tablas 3 y 4, los parámetros bioquímicos no fueron estadísticamente significativamente diferentes entre estos dos grupos. Los recuentos de WBC (4,667 vs 3,867 /l, p = 0.8644) y plaquetas (548.000 vs. 693.000 /l, p = 0,249) tampoco fueron significativamente diferentes, pero los valores de Ht (32,8 vs. 35,4%, p = 0,049) fue mayor en el grupo 2 que en el grupo 1. cambios en serie del peso corporal y la ingesta de alimentos y agua no fueron diferentes entre los dos grupos (Figura 2).
El efecto de MR16-1 sobre la supervivencia en LLC-IL6-ratones portadores
Veinte ratones fueron trasplantados con células LLC-IL6 y se dividió en dos grupos; con (tratado) o sin MR16-1 (sin tratar). Se determinó el tiempo de supervivencia como se muestra en la Figura 3. Los tiempos de supervivencia de ratones tratados y no tratados fueron 36,6 ± 11,1 y 28,5 ± 4,1 días, respectivamente, y MR16-1 mejoraron significativamente el tiempo de supervivencia global después de la inoculación del tumor (p = 0,016). Estos resultados indican que MR16-1 tiene el potencial de mejorar la supervivencia, así como suprimir la progresión de la caquexia por cáncer.
Cada grupo constaba de diez LLC-IL6 ratones trasplantados. Un grupo recibió MR16-1 (línea continua), y el otro grupo recibió solamente la misma cantidad de solución salina (línea de puntos). tratamiento semanal se ha continuado con el mismo intervalo hasta que se confirme su muerte. Media ± S.D. de la supervivencia de los ratones trasplantados LLC-IL6 sin MR16-1 fue de 28,5 ± 4,1 días. La inyección de MR16-1 prolongó la supervivencia de los ratones trasplantados LLC-IL6 a 36,6 ± 11,1 días (p = 0,016).
Discusión
En nuestra clínica y
In estudios in vivo
, que mostraron la utilidad de la IL-6 en suero como un marcador sustituto para evaluar el pronóstico y la eficacia de anti-IL-6 anticuerpo del receptor como un mediador de la caquexia por cáncer. Se encontró que (1) la presencia de IL-6 en suero se correlacionó fuertemente con la supervivencia en pacientes portadores de cáncer de pulmón metastásico resistente a la quimioterapia; (2) pacientes con concentraciones séricas de IL-6 niveles ≥ 21 pg /ml se predice que tienen tiempos de supervivencia más cortos; (3) MR16-1 tuvo el efecto beneficioso de mejorar la caquexia del cáncer y la supervivencia. En consecuencia, hemos demostrado por primera vez que la IL-6 fue un tratamiento útil y bien orientadas para el cáncer de pulmón metastásico resistente a la quimioterapia, y tocilizumab parecía ser un agente anti-caquexia prometedor y novedoso para el tratamiento de pacientes con IL-6 sobre-expresión de los tumores.
en la actualidad, la asociación de los marcadores bioquímicos con el pronóstico ha sido ampliamente reportado en pacientes con cáncer metastásico. Es decir, los niveles elevados de PCR indican reacción inflamatoria sistémica de estos pacientes y se refieren a su baja concentración suelen esquelético índice muscular y albúmina de suero, así como mal pronóstico [30] - [32]. Algunos estudios informaron que los niveles de corte de la PCR y la albúmina para afectar el pronóstico era de 10 mg /L y 3,5 g /dl, respectivamente [33] - [35]. Puesto que estas reacciones son el resultado de los efectos de citoquinas, los resultados también indican que los niveles séricos de IL-6 niveles llevan lógicamente una fuerte correlación con el tiempo de supervivencia en pacientes con cáncer de pulmón metastásico resistente a la quimioterapia. Por otra parte, se encontró que un suero de IL-6 nivel de 21 pg /ml es un umbral conservador para afectar a su pronóstico. Este punto de corte se basó en los datos de este estudio, pero consideramos que podría ser un indicador más preciso que la PCR y la albúmina.
En cuanto al tratamiento de la caquexia por cáncer, de los varios agentes evaluados por lo ahora, los corticosteroides y los progestágenos han sido la mejor muestra para aliviar la anorexia por cáncer en ensayos prospectivos y un meta-análisis [36] - [38]. Sin embargo, ningún agente que mejora la duración de la vida o la calidad de vida cada vez se ha documentado. Por lo tanto, se necesita con urgencia el establecimiento de una nueva modalidad terapéutica para aliviar la caquexia por cáncer. En ese contexto, se informó anteriormente de que tocilizumab había mejorado notablemente la caquexia por cáncer de un paciente inducida por un IL-6 sobre-expresión de cáncer de pulmón [13]. A pesar de que el tumor de este paciente había progresado poco a poco, su estado general se había estabilizado, y él sobrevivió nueve meses después de comenzar el tratamiento con tocilizumab [13]. Del mismo modo, en modelos animales experimentales, MR16-1 disminuyó la progresión de la caquexia. Por otra parte, el suero de IL-6 niveles aumentaron en un grupo tratado con MR16-1 comparación con un grupo control sin tratar. En lo que respecta a estos mecanismos, Nishimoto et al. analizó la cinética de suero IL-6 y el receptor soluble de IL-6 (sIL-6R), así como la proporción de sIL-6R saturado con tocilizumab después de su administración a pacientes con la enfermedad de RA y Castleman. Los autores informaron que sIL-6R aumentó notablemente como lo hizo IL-6. Es decir, la administración de tocilizumab condujo a la formación de tocilizumab /sIL-6R complejos inmunes lo que prolonga la vida media de eliminación de sIL-6R. La falta de disponibilidad posterior de libre de tocilizumab IL-6R a continuación, inhibió el consumo mediada por IL-6R de IL-6 [39]. Nuestros resultados están de acuerdo con esas respuestas en un estudio previo y en nuestro caso reportado [13], [39]. Por consiguiente, creemos que tocilizumab es útil para el tratamiento de la caquexia inducida por la IL-6 sobre-expresión de cáncer.
Mientras tanto, también hemos considerado algunas preocupaciones con respecto a un papel inhibitorio de la IL-6. En primer lugar, se sabe que algunas citoquinas a participar en la inmunidad anti-tumor mediante la activación o regulación de la función de las células T efectoras antitumoral [40] - [42]. Por lo tanto, el bloqueo de IL-6 de señalización podría promover el crecimiento y la diferenciación de las células tumorales mediante la inhibición de la inmunidad anti-tumor. Por el contrario, nuestros resultados revelaron que el crecimiento del tumor no fue estadísticamente diferente, a pesar de un modesto aumento en los ratones tratados con MR16-1 que en el grupo control no tratado.