Crónica enfermedad > Cáncer > artículos del cáncer > PLOS ONE: Evaluación cuantitativa del efecto del citocromo P450 2C9 y polimorfismo del gen del cáncer colorrectal

PLOS ONE: Evaluación cuantitativa del efecto del citocromo P450 2C9 y polimorfismo del gen del cáncer colorrectal


Extracto

actividad de la enzima CYP2C9 está involucrado en el metabolismo de las sustancias relacionadas con el cáncer colorrectal (CRC), y se funcionalmente ligada a un polimorfismo genético. Dos variantes alélicas de la
CYP2C9
gen, es decir,
CYP2C9 * 2 y

CYP2C9 * 3
, difiere del tipo salvaje
CYP2C9 * 1 por
sustituciones de aminoácidos individuales. Estos alelos mutados codifican enzimas con propiedades alteradas que están asociados con un deterioro del metabolismo. En la última década, una serie de estudios de casos y controles se han llevado a cabo para investigar la relación entre el
CYP2C9
polimorfismo y la susceptibilidad CRC, pero los resultados fueron contradictorios. Para investigar esta incoherencia, se realizó un meta-análisis de 13 estudios con un total de 20,879 sujetos para
CYP2C9
* 2 * 3 y polimorfismos para evaluar el efecto de
CYP2C9
sobre la susceptibilidad genética para CRC. En general, la razón de probabilidad de CCR fue de 0,94 (IC del 95%: 0,87 a 1,03; p = 0,18) y 1,00 (IC del 95%: 0,86 a 1,16; p = 0,99) para
CYP2C9 * 2 y
* 3 portadores, respectivamente. No hay resultados significativos se observaron en los heterocigotos y homocigotos en comparación con el genotipo salvaje para estos polimorfismos. En los análisis estratificados de acuerdo con el origen étnico, tamaño de la muestra, criterio diagnóstico, estado HWE y el sexo, no se obtuvo ninguna evidencia de cualquier forma de asociación entre genes y enfermedades. Nuestro resultado sugiere que la * 2, * 3 polimorfismos de
CYP2C9
gen no están asociados con la susceptibilidad CRC

Visto:. Zhao Y, Y Han, Zhang L, Wang Y, Ma Y, Zhang F, et al. (2013) La evaluación cuantitativa del efecto del citocromo P450 2C9 y polimorfismo del gen del cáncer colorrectal. PLoS ONE 8 (4): e60607. doi: 10.1371 /journal.pone.0060607

Editor: Momiao Xiong, Universidad de la Escuela de Salud Pública de Texas, Estados Unidos de América

Recibido: 17 de diciembre de 2012; Aceptado: 28 Febrero 2013; Publicado: 5 Abril 2013

Derechos de Autor © 2013 Zhao et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan

Financiación:. Este trabajo fue apoyado por el Proyecto China Fundación postdoctoral ciencia financiada (20100480542, 201104227), la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81201535), Naturaleza Fundación de Ciencias de Shanghai (12ZR1436000), Asociación de Promoción de la Innovación Juvenil y el Programa de Innovación conocimiento de Shanghai Institutos de Ciencias Biológicas, Academia china de ciencias. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito

Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia

Introducción

el cáncer colorrectal (CCR) es el tercer tipo de cáncer más común en el mundo occidental y es responsable de aproximadamente 50.000 muertes por año [1]. estudios basados ​​en la familia han sugerido que la enfermedad tiene un componente genético, con un estudio de gemelos grande realizado en los países escandinavos que sugieren que hasta un 35% de los cánceres colorrectales puede ser debido a la susceptibilidad hereditaria [2]. Sin embargo, los síndromes de predisposición mendelianos reconocidos, como el cáncer colorrectal hereditario sin poliposis y la poliposis adenomatus, representan menos del 5% de la incidencia global del cáncer colorrectal [3]. Por lo tanto,, polimorfismos de baja penetrancia comunes pueden conferir una parte sustancial del riesgo genético, pero dado que se espera que el efecto estimado de cada polimorfismo a ser pequeños, son necesarios estudios a gran escala para reducir la incertidumbre relacionada con el tamaño de los efectos y proporcionar pruebas sólidas de asociación.

los componentes específicos de la dieta occidental, incluyendo el consumo de carne (en especial carne roja y /o bien hecho) y la grasa de la dieta (ácidos grasos poliinsaturados en particular) se han propuesto como factores de riesgo que influyen en la susceptibilidad al cáncer colorrectal [4] - [5]. Se ha sugerido que esto puede ser debido a los hidrocarburos cancerígenos aromáticos policíclicos (HAP) y aminas heterocíclicas (HCA) producido cuando la carne se cocina a altas temperaturas. Los datos de ambos in vitro e in vivo sugieren que la exposición a HAP aumentar significativamente el riesgo de cáncer colorrectal [6], [7]. Citocromo P450 2C9 (CYP2C9) es una enzima P450 clave que desempeña un papel importante en el metabolismo y bioactivación de muchos mutágenos dietéticos y ambientales [8]. Una variedad de estudios han demostrado que el metabolismo de PAH y otros procarcinógenos a través de CYP2C9 bien puede conducir a la activación de los compuestos cancerígenos [9], [10]. actividad de la enzima CYP2C9 en el hombre es modulada por los polimorfismos genéticos. Los alelos variantes
CYP2C9 * 2
(R144C) y 3 * (I359L) producen enzimas que metabolizan lentamente en comparación con el tipo salvaje
CYP2C9 * 1
[11], [12]. Por lo tanto,
CYP2C9
gen puede ser un buen candidato para estudios de genética sobre la Convención
.
En los últimos años, importantes esfuerzos se han dedicado a la exploración de las relaciones entre el
CYP2C9
polimorfismos y el riesgo de CCR entre las distintas poblaciones. Sin embargo, los resultados no siempre son consistentes. Hay varias explicaciones posibles para esta discordancia, como el tamaño de la muestra, el origen étnico, múltiples pruebas de hipótesis sin corregir, y el sesgo de publicación. Meta-análisis es un procedimiento estadístico para combinar los resultados de varios estudios para producir una única estimación de la mayor efecto con una mayor precisión. Se ha convertido en importante en la genética del cáncer debido a un rápido incremento en el número y tamaño de los conjuntos de datos. El objetivo del presente estudio es realizar un metanálisis integral para evaluar la asociación entre el
CYP2C9
* 2 * 3 y el polimorfismo y la CRC.

Materiales y Métodos

estrategia de búsqueda Literatura

Se realizaron búsquedas en PubMed, Embase, y el ISI web of Science para todos los artículos sobre la asociación entre el
CYP2C9
polimorfismos y el riesgo de CCR publicados antes de finales de mayo de 2012. en el siguiente se utilizaron las palabras clave: "colorrectal" o "colo *", "cáncer" o "tumor" o "carcinoma", y "
CYP2C9
" o "citocromo P450 2C9". Estudios adicionales se identificaron mediante una búsqueda manual de las referencias de los estudios originales y artículos de revisión sobre la asociación entre el
CYP2C9
polimorfismo y CRC. No se aplicó ninguna restricción de idioma. criterios

inclusión y exclusión

Se examinaron los resúmenes de todas las citas y los estudios recuperados. Se utilizaron los siguientes criterios para incluir estudios publicados: (i) la identificación de los casos de cáncer colorrectal se confirmó histológicamente o patológicamente, (ii) estudios de casos y controles o de cohortes para evaluar la asociación entre el
CYP2C9
* 2 o * 3 polimorfismo y el riesgo de CCR y (iii) la información genotipo de distribución de casos y controles o odds ratio (OR) con su intervalo de confianza del 95% (IC) y P-valor. Las principales razones para la exclusión de los estudios fueron: (i) la revisión, o editorial o comentario; (Ii) duplicado estudios; (Iii) no se informaron datos suficientes.

Datos abstracción

Dos investigadores extrajeron información de todas las publicaciones elegibles de forma independiente de acuerdo con los criterios de inclusión mencionados anteriormente. Los desacuerdos se resolvieron mediante discusión con los co-autores. Para cada estudio incluido, la siguiente información se extrajo de cada informe de acuerdo con un protocolo fijo: en primer lugar del apellido del autor, año de publicación, la definición y el número de casos y controles, criterio diagnóstico, la frecuencia de genotipos, fuente de los controles, el género, la edad, Hardy -Weinberg equilibrio (HWE) de estado, origen étnico y método de genotipificación.

métodos estadísticos

Se evaluó la primera HWE en los controles para cada estudio mediante la bondad del ajuste de prueba (chi-cuadrado o de Fisher la prueba exacta) y un P & lt; 0,05 se consideró como un desequilibrio significativo. La fuerza de la asociación entre el CRC y el
CYP2C9
* 2 * 3 y el polimorfismo se estimó utilizando RUP, con los correspondientes IC del 95%. Para el polimorfismo * 2, lo primero que calcula los riesgos de la * 2 heterocigotos y homocigotos los genotipos 2 * sobre la Convención, en comparación con la de tipo salvaje * 1 homocigoto. El riesgo de portadora * 2 * 1 contra el cáncer se evaluó a continuación en el modelo dominante. La misma evaluación se llevó a cabo para el polimorfismo * 3
.
Tanto estadístico Q de Cochran [13] para probar la heterogeneidad y el I
2 estadística para cuantificar la proporción de la variación total debido a la heterogeneidad [ ,,,0],14] se calcularon. De efectos aleatorios y medidas de resumen de efectos fijos se calcula como la media ponderada de la varianza inversa del logaritmo de odds ratio de. Los resultados de resumen de efectos aleatorios fueron reportados en el texto, ya que toma en cuenta la variación entre los estudios. La importancia de la OR general fue determinada por el Z-test. Subsidiaria análisis de subgrupos incluyeron análisis o de efectos aleatorios meta-regresión con máxima verosimilitud restringida [15]. (Casos ≥500 o & lt; 500 casos) Grupo étnico (raza caucásica vs asiático), el estado de HWE entre el control (sí o no), criterio diagnóstico (ICD-9 frente a otros), tamaño de la muestra y el sexo fueron pre-especificados como características para la evaluación de la heterogeneidad. Etnicidad, tamaño de la muestra, el estado de HWE, y la distribución de sexos en los casos y controles se analizaron como covariables en el meta-regresión.

Con el fin de evaluar la estabilidad de los resultados, de un solo sentido los análisis de sensibilidad se realizaron mediante la eliminación de cada uno estudio individual a su vez del total y volver a analizar el resto. análisis de pruebas de regresión y de embudo parcela de Egger se utilizaron para evaluar el sesgo de publicación [16], [17]. Los análisis se realizaron utilizando el software STATA versión 10.0 (Stata Corporation, College Station, TX, EE.UU.). Todos los valores de p son de dos caras en el nivel P = 0,05.

Resultados

Características de los estudios

Hay 63 artículos relevantes para los términos de búsqueda. El proceso de selección de los estudios se muestra en la Figura S1. Un total de 13 estudios examinó la asociación entre el
CYP2C9
polimorfismo y CRC se incluyeron en el metanálisis actual [18] - [30]. Entre ellos, se identificaron 12 estudios para la
CYP2C9 * 2
polimorfismo, que incluye un total de 9154 casos y controles 10900, y para el polimorfismo * 3 Se identificaron 12 estudios con un total de 7701 casos y 9287 controles. Características de los estudios incluidos en el metanálisis actual se presentan en la Tabla 1.

CYP2C * 2 y el CRC riesgo

La estimación combinada de riesgo de CCR de
CYP2C9
* 2 polimorfismo se muestra en la Figura? 1. La comparación entre los casos y los controles de CRC se investigó en 15 conjuntos de datos. En general, no hubo heterogeneidad significativa entre los estudios sobre el riesgo de CCR de
CYP2C9 * 2
polimorfismo (P & gt; 0,05). El OR combinado del modelo de efectos fijos no fue significativa con OR de (IC del 95%: 0,87 a 1,03; p = 0,18) 0,94 para los portadores de la variante. Del mismo modo, no se encontraron asociaciones significativas para los heterocigotos (OR = 0,92 IC del 95%: 0,85 a 1,00; p = 0,06) y homocigotos (OR = 1,19, IC del 95%: 0,98 a 1,45; p = 0,07) en comparación con el genotipo salvaje . El análisis de subgrupos de riesgo de CCR de
CYP2C9 * 2
también se realizó para explorar las fuentes de heterogeneidad. En el análisis de subgrupos según la etnia, tamaño de la muestra, el estado de HWE, criterios diagnósticos y el sexo, no se encontraron resultados significativos en casi todos los modelos genéticos (Tabla 2).

A pesar de que la prueba formal de heterogeneidad no fue significativa, se realizó metarregresión como también había indicios de que el origen étnico, tamaño de la muestra, el estado de HWE, y la distribución por sexos entre los casos y controles como posibles fuentes de heterogeneidad. Sin embargo, el meta-regresión mostró que ninguna de estas covariables contribuyó significativamente a la heterogeneidad entre los resultados de los estudios individuales (P & gt; 0,05 para todos).

CYP2C9 * 3 y el riesgo de CCR

En general, los genotipos variantes de la
CYP2C9 * 3
no se asociaron con el riesgo de CCR en comparación con la de tipo salvaje homocigotos * 1 (* 3 heterocigóticos: OR = 1,00; IC del 95% = 0,86 a 1,17; p = 0,99 ; * 3 homocigotos: OR = 0,87, IC del 95% = 0,43 a 1,74; p = 0,69). Del mismo modo, no se observaron asociaciones en el modelo genético dominante (OR CI = 1,00, 95% = 0,86 a 1,16, P = 0,99; Figura 2). Sobre la base de la posible infravaloración del verdadero efecto del polimorfismo en el riesgo de CCR, se estratificó estos estudios según el grupo étnico, tamaño de la muestra, el estado de HWE, criterios diagnósticos y el sexo. En los análisis estratificados, los genotipos variantes tenían ninguna relación significativa de la CRC en todos los subgrupos, en comparación con el tipo salvaje. Resultados similares se observaron en el modelo genético dominante (Tabla 3)

En el análisis de meta-regresión, tamaño de la muestra (p = 0,93), el género de los casos (p = 0,34) y controles ( criterios P ​​= 0,37), diagnóstico (p = 0,91) y el estado de equilibrio de Hardy-Weinberg (p = 0,05) no explican de manera significativa tal heterogeneidad. Por el contrario, el origen étnico (P = 0,001) se correlacionaron significativamente con la magnitud del efecto genético.

Los análisis de sensibilidad y el sesgo de publicación

Un único estudio que participan en el meta-análisis ha sido eliminada cada vez para reflejar la influencia del conjunto de datos individual a las RUP agrupados, y las RUP agrupados correspondientes no se han alterado cualitativamente, lo que sugiere que los resultados de este meta-análisis son estables (Figura S2 y S3). Además, si se excluyen los estudios que no estaban en HWE, los resultados fueron persistentes y robusto (Tabla 2 y 3). La forma del gráfico en embudo no indicó ninguna evidencia de asimetría evidente (Figura S4 y S5), lo que sugiere ningún sesgo de publicación entre los estudios incluidos. Los resultados estadísticos todavía no mostraron publicación preferencial de resultados positivos en estudios más pequeños (prueba de Egger, p = 0,96 para la portadora * 2; p = 0,95 para 3 * portadora)

Discusión

A. número de factores predicen CRC; Sin embargo, los mecanismos detallados de CRC siguen siendo motivo de especulación. Sin embargo, las evidencias acumulativos han sugerido un papel importante para la genética en la determinación de riesgo de CCR [2]. Los estudios de asociación son apropiadas para la búsqueda de genes de susceptibilidad que participan en CRC [31]. CYP2C9 es una enzima P450 clave implicados en el metabolismo de sustratos exógenos y endógenos. Una variedad de estudios han demostrado que el metabolismo de hidrocarburos aromáticos policíclicos y otros procarcinógenos a través de CYP2C9 bien puede conducir a la activación de los compuestos cancerígenos [19], [27].
CYP2C9
es un gen polimórfico en la población humana; las variaciones genéticas se han estudiado con respecto a una variedad de tipos de cáncer. En los últimos años, varios estudios epidemiológicos moleculares han llevado a cabo para evaluar el papel de la * 2 y * 3 polimorfismos en el
CYP2C9
gen en el riesgo de CCR; Sin embargo, los resultados siguen siendo contradictorios y no concluyentes. Como método estadístico de gran alcance, meta-análisis puede proporcionar un enfoque cuantitativo para la puesta en común de los resultados de las diferentes investigaciones sobre el mismo tema, y ​​por lo tanto una evaluación cuantitativa de la asociación entre el
CYP2C9
polimorfismo y el riesgo de CCR fue de gran valor. La presente meta-análisis, incluyendo 9463 casos y controles 11416 de 13 estudios de casos y controles, exploró la asociación entre la * 2 y * 3 polimorfismo de
CYP2C9
de genes y el riesgo de CCR. A lo mejor de nuestro conocimiento, este es el primer meta-análisis exhaustivo sobre la relación entre el
CYP2C9
polimorfismo y la susceptibilidad CRC. En general, no se encontró ninguna asociación significativa entre la
CYP2C9
* 2, * 3 polimorfismo y la susceptibilidad CRC. En el análisis estratificado por grupo étnico, tamaño de la muestra, el estado de HWE, criterios diagnósticos y el sexo, asociaciones significativas fueron todavía no observadas en todos los modelos genéticos.
CYP2C9
genotipo no se ha encontrado para ser un factor determinante de la susceptibilidad al cáncer colorrectal de acuerdo con los resultados del presente metanálisis.

A pesar de CYP2C9 está activo en el metabolismo de varios medicamentos comúnmente recetados, incluyendo la warfarina , fenitoína y fármacos anti-inflamatorios no esteroideos (AINE) [32], su papel en el metabolismo de xenobióticos y carcinógenos no está bien definido, aunque se ha demostrado que metabolizar el carcinógeno benzo [a] pireno (B [a] P) en el metabolito altamente mutagénico B [a] P-7,8diol-9,10-epóxido [33].
CYP2C9 * 3
codifica una proteína con aproximadamente el 5-30% de la actividad del alelo de referencia común [34], y por lo tanto por lo que pensamos que
portadores CYP2C9 * 3 alelo
han reducido carcinógeno activar la habilidad y por lo tanto reduce el riesgo de enfermedad. Sin embargo, el aumento del riesgo de CCR asociado con
CYP2C9 * 2
genotipo en estudios anteriores sugiere que la enzima puede desempeñar un papel más importante en la desintoxicación de sustancias cancerígenas.

Los datos epidemiológicos indican el uso de AINE es inversamente asociado con el riesgo de desarrollar cáncer de colon [35]. Metabolismo de los AINE implica la oxidación por las enzimas CYP y /o conjugación, en particular la glucuronidación por las enzimas de fase II. Las principales enzimas implicadas son CYP2C9 y UGT1A6, ambas enzimas tienen formas variantes [26]. La modulación de la quimioprevención de los AINE en el riesgo de CCR por el genotipo de
CYP2C9
y
UGT1A6
ha sido reportado en la población caucásica [26], [36]. Recientemente, la interacción entre los
UGT1A6
y
CYP2C9
, la aspirina o el uso de ibuprofeno, y el riesgo de CCR se determinaron en los casos de CCR 2295 y 2903 controles. Sus datos mostraron el mayor efecto de la lenta metabolización-
CYP2C9
variantes de la actividad quimiopreventivo de ibuprofeno contra el CRC, y variantes CYP fueron más eficaces en individuos de tipo salvaje en lugar de la variante
UGT1A6
[ ,,,0],25]. Por lo tanto, la contribución de los genes - la interacción de genes, así como de genes -. Interacción medicamento debe ser considerado en futuros estudios para dilucidar la contribución de los
CYP2C9
polimorfismo de CRC etiología

A pesar de que no existe una asociación entre los
CYP2C9
* 2, * 3 polimorfismo y el riesgo de CCR, las asociaciones entre los
CYP2C9
polimorfismo y el riesgo de CCR podrían modificarse cuando se expone a algunos factores como el tabaco de fumar [29]. Chan et al [29] informó de que
CYP2C9
genotipos modificó el riesgo de CCR asociado con el consumo de tabaco. Las mujeres con genotipos variantes que fumaban & gt; 20 paquetes-años tenían 2,5 veces más probabilidades de adenoma comparación con las mujeres con genotipos de tipo salvaje que fumaban ≤ 20 paquetes al año. Debido a los datos limitados en los estudios primarios, no fue posible analizar cuantitativamente los efectos de modificación del hábito de fumar en las relaciones entre los
CYP2C9
polimorfismos y el riesgo de CCR.

Las limitaciones también, inevitablemente existido en este meta-análisis. En primer lugar, se llevaron a cabo la mayoría de estudios en población caucásica. Por lo tanto, podría ser en virtud de potencia para la interacción detectada entre la población asiática en el análisis de subgrupos. Por lo tanto, otros estudios incluyendo un espectro más amplio de los sujetos deben realizarse para investigar el papel de estas variantes en diferentes poblaciones. En segundo lugar, nuestros resultados se basaron en estimaciones no ajustadas ya que no disponemos de datos originales. Por lo tanto, nosotros no fuimos capaces de tener en cuenta otros factores como la obesidad, la inflamación, la aspirina /uso de AINE, vitamina D y vitamina E, que pueden modificar las estimaciones de riesgo, como se informa en publicaciones anteriores. Por lo tanto, la evaluación de la asociación entre el
CYP2C9
se necesita polimorfismo y estas covariables y el CRC con el fin de determinar claramente el impacto de
CYP2C9
polimorfismo en la etiología de la CRC. En tercer lugar, el meta-análisis es un tipo de estudio retrospectivo, y podría existir el sesgo de recuerdo y selección. A pesar de esto, nuestro meta-análisis también tenía algunas ventajas. En primer lugar, un número considerable de casos y controles fueron reunidos a partir de diferentes estudios, que aumentaron significativamente la potencia estadística del análisis. En segundo lugar, no se detectó sesgo de publicación; lo que indica que todo el resultado combinado puede ser imparcial
.
En conclusión, este meta-análisis evalúa la relación de buque de variantes génicas con el riesgo de CCR y revela que
CYP2C9
* 2 * 3 y polimorfismo no está asociada con susceptibilidad alterada a CRC. Dado que los estudios entre las demás se limitan en la actualidad, más estudios que incluyen un espectro más amplio de temas deben ser realizadas para investigar el papel de estas variantes en estas poblaciones, lo que debería conducir a una mejor comprensión, la integral de la asociación entre el
CYP2C9
polimorfismo y CRC.

Este meta-análisis se basará en el documento PRISMA (Lista de verificación S1).

Apoyo a la Información
Figura S1. Francia El proceso de selección de los estudios de asociación.
doi: 10.1371 /journal.pone.0060607.s001 gratis (TIF)
figura S2.
El resultado de los análisis de sensibilidad para CYP2C9 * 2 portador y el riesgo de CCR.
doi: 10.1371 /journal.pone.0060607.s002 gratis (TIF)
Figura S3.
El resultado de los análisis de sensibilidad para CYP2C9 * 3 portador y el riesgo de CCR.
doi: 10.1371 /journal.pone.0060607.s003 gratis (TIF)
figura S4.
gráfico en embudo para la asociación entre 2 y CYP2C9 * portador y el riesgo de cáncer colorrectal; También se realizó la prueba de Egger para investigar la simetría del gráfico en embudo (
P
= 0,96).
doi: 10.1371 /journal.pone.0060607.s004 gratis (TIF)
Figura S5.
gráfico en embudo para la asociación entre y CYP2C9 * 3 portador y el riesgo de cáncer colorrectal; También se realizó la prueba de Egger para investigar la simetría del gráfico en embudo (
P
= 0,95).
doi: 10.1371 /journal.pone.0060607.s005 gratis (TIF)
Lista de verificación S1.
PRISMA 2009 Lista de verificación.
doi: 10.1371 /journal.pone.0060607.s006 gratis (DOC)

El conocimiento de la salud

Mi susto con el cáncer

¿Quién iba a pensar Me enorgullezco en el hecho de que he

Enfermedades mesotelioma - La quimioterapia como tratamiento para el mesotelioma

Hay tres tipos tradicionales de tratamiento para los pacient

Los síntomas del cáncer de páncreas

El páncreas es responsable de la creación de insulina que re

Enfermedades de sentido común

Enfermedad del corazón | Enfermedades artículos | Enfermedad pulmonar | las preguntas más frecuentes de salud | Salud mental | Diabetes | El sentido común de la Salud | Enfermedades comunes | senior Health | Primeros auxilios
Derechos de autor © Crónica enfermedad[www.enfermedad.cc]