Extracto
Las mutaciones de la poliposis adenomatosa coli (
APC
) de genes son comunes y fuertemente asociado con el desarrollo de los adenomas y carcinomas colorrectales. Aunque ampliamente estudiado en las poblaciones modernas, los informes sobre los tumores viscerales en las poblaciones antiguas son escasos. A lo mejor de nuestro conocimiento, la caracterización genética de las mutaciones asociadas con el cáncer colorrectal en muestras antiguas todavía no se ha descrito. En este estudio hemos secuenciado puntos de acceso para las mutaciones en el gen APC aisladas de 18
siglo XX natural preservado momias húngaros humanos. Si bien se encontraron secuencias de APC de tipo salvaje en dos momias, descubrimos que la mutación de sentido erróneo E1317Q, conocido por ser un cáncer colorrectal predisponente mutación, en un gran tejido del intestino de un 18
º momia siglo. Nuestros datos sugieren que esta predisposición genética al cáncer ya existía en la época anterior a la industrialización. Este estudio pone de investigaciones similares de especímenes antiguos de diferentes épocas y lugares geográficos a cabo, y compartida con el propósito de obtener un análisis de mayor escala que arrojará luz sobre el pasado epidemiología del cáncer y en la evolución del cáncer
Cita.: Feldman M, Hershkovitz I, Sklan EH, Kahila Bar-Gal G, Pap I, Szikossy I, et al. (2016) La detección de un gen supresor tumoral variante genética que predispone a cáncer colorrectal en un siglo 18 Húngara mamá. PLoS ONE 11 (2): e0147217. doi: 10.1371 /journal.pone.0147217
Editor: David Caramelli, Universidad de Florencia, Italia
Recibido: 30 de septiembre de 2015; Aceptado 30 de diciembre de 2015; Publicado: 10 Febrero 2016
Derechos de Autor © 2016 Feldman et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. Todo relevante los datos están dentro del papel
Financiación: Este trabajo fue apoyado por:. Fundación Dan David; El Tassia y el Dr. Joseph Presidente Meychan de la Historia y Filosofía de la Medicina. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer colorrectal es una causa importante de morbilidad y mortalidad en los países occidentales [1,2]. Las mejoras en la detección temprana y el tratamiento han dado lugar a disminución de las tasas de mortalidad, mientras que las tasas de incidencia han ido en aumento [3]. Típicamente, los precursores de cáncer colorrectal son los pólipos adenomatosos, que son grupos neoplásicas benignas de las células [4]. La mayoría de los pólipos adenomatosos esporádicos, así como la mayoría de los cánceres colorrectales contienen alteraciones genéticas típicas [5].
poliposis adenomatosa coli (APC)
es un importante gen supresor de tumores que se encuentra en el cromosoma 5q21 humano. Las mutaciones en APC están fuertemente asociados con el desarrollo de los adenomas y carcinomas colorrectales [6]. Alrededor del 50% de la población desarrollará pólipos colorrectales iniciados por tales mutaciones durante un período de vida normal [7]. se detectaron mutaciones somáticas del gen APC no sólo en pacientes con carcinoma colorrectal, pero también en pacientes con cáncer de páncreas [8], cáncer gástrico [9], carcinoma de células escamosas oral de [10], hepatoblastoma, cáncer de mama, tumor cerebral y desmoide tumor [11]. Alrededor del 80% de las mutaciones somáticas del gen APC se producen en "punto caliente" específica y se agrupan dentro de una región del codón 764 al codón 1596 se llama la región de la mutación grupo (MCR). Más de 95% son mutaciones de terminación de cadena que resultarían en la expresión de la proteína truncada. se requiere la inactivación de ambos alelos de APC para el desarrollo de la mayoría de los tumores en el colon y el recto [12].
Cáncer tiene primeras documentaciones. Papiros médicos egipcios que datan del 1500 AC que se han encontrado para describir los tumores. Herodoto y Hipócrates tanto mencionan cáncer [13-15]. La mayoría de los informes sobre paleopatológicos tumores en las poblaciones del pasado se basan en el tejido óseo, que es más abundante en los sitios arqueológicos. Sin embargo, se ha informado de algunos tumores en tejidos blandos [16-26]. Si bien hay muchas teorías con respecto a la prevalencia de cáncer en nuestros días, lo que se necesita el cáncer asociado con el estilo de vida, la alimentación, la inactividad física y los patrones reproductivos, más información desde diferentes puntos de tiempo en la historia para comprender mejor el papel de estos factores en las poblaciones históricas .
momificación natural permite la conservación de los tejidos blandos. Las muestras de tejidos momificados pueden proporcionar información muy valiosa desde puntos antropológicos, históricos y de vista médico. Ellos nos pueden enseñar lecciones importantes con respecto a la evolución de las enfermedades que podrían ser de valor para predecir futuros cambios evolutivos. En 1994 y 1995 más de 265 momias fueron excavadas a partir de criptas selladas en la iglesia Dominicana en Vac, Hungría. Las criptas fueron utilizados de forma continua durante varios enterramientos de familias de clase media y clérigos, a partir de 1731-1838. La temperatura en las criptas osciló entre ocho a once grados centígrados, las criptas estaban mal pero continuamente ventilados y los restos fueron protegidos contra la humedad por virutas de pino que llenaron muchos de los ataúdes. Estas fueron las condiciones ideales para la conservación natural que causa aproximadamente el 70% de los organismos a ser total o parcialmente momificado. El nivel de conservación de las muestras de tejidos momificados y abundante información de archivo contemporánea sobre los individuos de la colección de momias de Hungría motivado un estudio morfológico y genético de los restos humanos [27]. Estudios previos han encontrado evidencia genética de
Mycobacterium tuberculosis gratis (
M
.
tuberculosis
) presencia en estas momias [28-34], lo que indica que esta cohorte se puede utilizar para genética estudios. Además, esta cohorte se compone de individuos que forman una distribución de la edad de ancho. Por lo tanto, es compatible con el estudio de mutaciones del cáncer asociado, ya que el riesgo de tales mutaciones aumenta con la edad [3]. Aquí hemos utilizado las momias aspiradora para evaluar la existencia de una predisposición genética al cáncer colorrectal en la era pre-industrialización mediante la secuenciación de los "puntos calientes" en el gen APC. Tres de tales secuencias se amplificaron y secuenciaron a partir de 3 momias diferentes. La variante E1317Q APC, se sabe que predisponen al cáncer colorrectal se detectó en una muestra de colon de una momia. Mientras que sólo unas pocas secuencias de APC se obtuvieron de la presencia de la variante E1317Q en el ADN de un 18
siglo XX individuo sugiere que la predisposición genética al cáncer ya existía en la época anterior a la industrialización. Este estudio, sin embargo exige un análisis a gran escala con fines comparativos epidemiológicos.
Materiales y Métodos
Muestras y precauciones contra la contaminación
El siglo 18 "mamá Colección Vác" se aloja y curada en el Departamento de Antropología del Museo de Historia Natural de Hungría, en Budapest, Hungría. La colección contiene 265 ejemplares momificados de forma natural, parcialmente momificados y esqueléticos (registrados bajo los números de inventario: 2009.19.1-2009.19.264). Un total de 51 muestras se obtuvieron de 20 momias VCA (Tabla 1). Las muestras se recogieron en el Departamento de Historia Natural Museo de Antropología de Hungría de conformidad con la normativa sobre el tratamiento de los restos arqueológicos humana en Hungría [35]. Sin antigua obra de ADN amplificación de genes humanos nunca fue hecho en los locales. El muestreo se llevó a cabo usando las medidas para evitar la contaminación contemporáneo de los especímenes. Las muestras fueron tomadas usando una técnica de no tocar con bisturís desechables, de los órganos internos. Estas regiones anatómicas no se expusieron previamente al ambiente exterior y por lo tanto estaban protegidos del contacto con excavadoras o otros que han manejado las momias. Las muestras se colocaron en tubos libres de ADN estériles y se almacenaron a temperatura ambiente.
Se extrajo el ADN en un laboratorio designado ADN antiguo (aDNA). Para prevenir la contaminación por ADN contemporánea, los tubos se abrieron sólo en una campana de UV eradiated designada donde la extracción de ADN se llevó a cabo. El laboratorio aDNA era físicamente aislada del laboratorio en el que se utilizó ADN moderno. El procedimiento se llevó a cabo en cámaras estériles UV cada una equipada con sistema separado de pipetas, tubos estériles desechables, las puntas de filtro, reactivos de grado de biología molecular y soluciones. ropa de protección desechable se utiliza y cambia con frecuencia. capuchas irradiados con UV separadas se utilizaron para la preparación de ADN, las extracciones de ADN y la preparación de PCR. Para minimizar aún más la contaminación de ADN contemporánea todos los reactivos, tubos e instrumentos tales como hojas de bisturí desechables se irradiaron con UV antes de su uso. Se incluyeron controles negativos múltiples para la extracción y amplificación para asegurar la autenticidad de los hallazgos aDNA. protocolos aDNA siguieron los requisitos estándar establecidos para el campo [36].
DNA extracción
Se extrajo el ADN a partir de tejido momificado usando una modificación del tiocianato de guanidina (GuSCN) método desarrollado por Boom et al R . [37] y el método de purificación a base de sílice desarrollada por Höss M & amp; Pääbo S [38]. Alrededor se cortó 500 mg de tejido en pequeños fragmentos de aproximadamente 5 mm, colocados en un tubo que contiene UV estéril irradiado agua destilada doble (ddH2O) y se incubaron a 56 ° C durante la noche. El ddH2O se retiraron y 500 l de tampón de extracción, que consiste en 4 M de guanidinio tiocianato (GuSCN) (Sigma), 0,1 M Tris-HCl pH 6,4 (Sigma), 0,02 M EDTA pH 8 (Biological Industries) y 1,3% de Triton X- se añadieron 100 (Sigma), junto con 10 l de 25 mg /ml de proteinasa K al tejido. El tejido se incubó adicionalmente a 56 ° C durante 48 h. Las muestras se hirvieron a 94 ° C durante 10 minutos y luego se centrifugaron a 13.000 rpm durante 3 minutos. El sobrenadante (que alberga el ADN extraído) se transfirió a un nuevo tubo estéril. Para extraer el ADN del sobrenadante 1 ml de yoduro de sodio (NaI) (6 M, Merck), 10 l lineal acrilamida (5 mg /ml, Ambion) y sílice 8 l (/1 g ml, Sigma) se añadieron. Las muestras se incubaron a 4 ° C durante 1 h para permitir la unión del ADN a las perlas de sílice. Las perlas de sílice se sedimentaron por centrifugación y el sedimento se lavó dos veces. El primer lavado se realizó utilizando tampón de lavado que contiene 0,01 M Tris-HCl pH 7,5, cloruro de sodio 0,05 M (NaCl) (Frutarum), 0,1 M EDTA pH 8 y 250 l de etanol absoluto (Biolabs) y ddH2O hasta un volumen de 500 l . El segundo lavado fue con etanol absoluto. La perlas de sílice obtenido sedimento se secó por aire y de la aDNA se eluyó a 56 ° C con tampón Tris-EDTA (TE, Tris 1 M pH 8 y 0,5 M EDTA pH 8). El extracto aDNA se almacenó a -20 ° C
amplificación
ADN
La amplificación del gen APC se llevó a cabo en una mezcla de reacción 25 ul incluyendo 7μL del extracto aDNA con:. Tampón 10X, 25 mM MgCl
2, 2,5 mM de dNTP de, 10 mM de BSA (Biolabs), 12 pmol de cada conjunto de cebadores y 1,25 unidades de AmpliTaq Gold® 360 ADN polimerasa (Applied Biosystems). El aDNA se amplificó utilizando un termociclador con una fase inicial de arranque en caliente a 95 ° C durante 10 minutos seguido por 45 ciclos de 15 segundos a 95 ° C de desnaturalización, 45 segundos recocido a 60-48 ° C (touch-down) y 45 -60 segundos de elongación a 72 ° C. Un paso de extensión final a 72 ° C durante 10 minutos y se llevó a cabo después de los 45 ciclos.
Los extractos aDNA fueron amplificados utilizando dos conjuntos de cebadores del gen APC que fueron diseñados por los autores de este estudio utilizando el software Primer 3.0 y el uso de dos conjuntos de cebadores publicados de la región variable hiper en la región humana mitocondrial control (d-loop) [39]. Los conjuntos de cebadores de APC fueron diseñados para amplificar los puntos calientes de mutación conocidos en la región MCR. La amplificación de la d-loop mitocondrial se utilizó como control a los extractos de pantalla de salida que pueden estar contaminados con ADN moderno de los investigadores y como una indicación adicional de la autenticidad aDNA. Los conjuntos de cebadores que se utilizaron para amplificaciones se describen en la Tabla 2.
Análisis de secuencias obtenidas
amplificaciones positivos se secuenciaron en la Unidad de Secuenciación del ADN de la Facultad Wise de Ciencias de la Vida, Universidad de Tel Aviv a través de ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer. Las secuencias obtenidas se verificaron inicialmente mediante el Centro Nacional de Información Biotecnológica algoritmo BLAST [40]. Los cromatogramas fueron examinados individualmente para confirmar la calidad de las secuencias, utilizando Sequencher 4.9 [41]. secuencias de sentido y antisentido se generaron a partir de cada conjunto de cebadores como un control adicional para descartar errores de secuenciación. Las secuencias sentido y antisentido se reunieron en un contig en Sequencher 4.9. Cada contig individuales fue inspeccionado y verificado visualmente; ambigüedades se resolvieron visualmente. Secuencias con cromatogramas de mala calidad se excluyeron del estudio. Una última contig de todas las secuencias se ha generado utilizando una referencia publicada. mitocondriales perfiles parciales se determinaron para las momias, para todo el personal que trabaja en el laboratorio aDNA y para todos los recolectores de muestras. Para el control de la contaminación durante o después del muestreo, perfiles mitocondriales parciales y secuencias de APC parciales obtenidos a partir de muestras de momias se compararon con las secuencias de referencia y a los perfiles del personal de laboratorio (Tablas 3 y 4). Las secuencias obtenidas a partir de muestras de momias también se compararon entre sí para el control de la contaminación cruzada. Observamos que los antiguos perfiles mitocondriales parciales y las secuencias cromosómicas antiguos pueden estar influenciados por procesos de desaminación postmortem [42]. Por lo tanto, algunas transiciones observados podrían atribuirse al daño del ADN y no a herencia materna o sustituciones cromosómicas respectivamente. daño en el ADN postmortem no influye en nuestro análisis tiene la intención de controlar la contaminación ensayando si momias comparten el mismo patrón de SNP como investigadores y no afecta a ningún transvertions observados. Sin embargo, se deben considerar las implicaciones de daño en el ADN en caso de que las secuencias se utilizan para otros fines.
Resultados
APC es un importante gen supresor de tumores. Las mutaciones en APC están fuertemente asociados con el desarrollo de los adenomas y carcinomas colorrectales [6]. Para evaluar la presencia de predisposición genética al cáncer colorrectal en la era pre-industrialización se intentó amplificar la región MCR del gen APC a partir del ADN obtenido de los órganos internos de las momias Vac. secuencias parciales de la región MCR gen APC se obtuvieron con éxito de tres momias. Dos secuencias de APC de tipo salvaje se obtuvieron a partir de dos números de momias 51 y 63 (Tabla 3, las figuras 1 y 2). Las secuencias de la APC gen MCR (posición 4377 a 4484 y la posición 3956 a 4068) adquirido de una muestra de tejido de colon de la mamá 88 (Tabla 3, las figuras 1 y 2) indicó que este individuo era homocigoto para una mutación sin sentido en el codón 1317 ( GAA a CAA) (figuras 1 y 3). Esta es una variación genética conocida APC que sustituye la glutamina un aminoácido hidrófilo no cargado con glutamato un amino ácido hidrófilo ácido (E1317Q). Esta mutación se ha relacionado con una predisposición al desarrollo de múltiples adenomas colorrectales y cáncer colorrectal [43]. El resto de la secuencia parcial APC MCR para esta mamá era idéntica a la de referencia (NM_000038.5) que codifica para la proteína de tipo salvaje. Las secuencias de todos los investigadores que manejan la muestra o equipo se encontraron para ser idéntica a la de referencia.
parciales secuencias APC amplificados con cebadores APC1309 en comparación con la secuencia de referencia NCBI NM_000038.5. miembros del personal de laboratorio se indican con las iniciales. muestras antiguas se indican con un número momia. El cebador de secuenciación está subrayada en la secuencia de referencia. La mamá número 88 es el único portador de la mutación E1317Q.
APC secuencias parciales que fueron amplificadas con cebadores APC1450 se comparan con la secuencia de referencia NCBI NM_000038.5. El cebador de secuenciación está subrayada en la secuencia de referencia. Estas secuencias parciales de APC de las dos momias eran idénticas a la secuencia de referencia que codifica para la proteína de tipo salvaje.
En destaque es la mutación sin sentido homocigotos G → C E1317Q.
mitocondrial aDNA se conservó en 50% de las momias analizadas (Tabla 1). mitocondriales perfiles parciales (posiciones 16004-16442) se determinaron para las 3 momias de los cuales se obtuvieron las secuencias APC MCR (Tabla 4). Mamá 51 y 63 mostraron un perfil único diferente de la secuencia de referencia Cambridge (NC_012920.1), diferentes entre sí y diferentes de los perfiles obtenidos a partir de todos los manipuladores. la amplificación por PCR detecta el ADN mitocondrial con una mayor sensibilidad en comparación con la detección de ADN cromosómico. Esta diferencia en la sensibilidad se explica principalmente por un mayor número de copias por célula del ADN mitocondrial [44,45]. Por lo tanto, si la muestra se había contaminado con ADN moderno es habría sido detectado probable ADN mitocondrial moderna. Los perfiles únicos de las momias indican que las secuencias obtenidas para las dos momias son auténticos y que no había contaminación cruzada entre las muestras de momias.
La secuencia mitocondrial parcial de la mamá 88 era idéntica a la secuencia de referencia de Cambridge . Entre los investigadores, sólo las secuencias mitocondriales parciales del Dr. colofonia-Arbesfeld (R.R.A) y el Prof. Hershkovitz (I.H), quien participó en la recogida de las muestras, fueron idénticas a la secuencia de referencia de Cambridge como se esperaba debido a su origen europeo. Sin embargo, la observación de la mutación E1317Q no podía ser debido a la contaminación de la mamá 88 por ADN de Dr. colofonia Arbesfeld o Prof. Hershkovitz desde ni ellos o cualquier otro de los investigadores, tener la mutación APC E1317Q (Fig 1).
Discusión
Hemos encontrado la mutación sin sentido E1317Q APC en una muestra de la gran tejido del intestino recuperado de un 18
º momia siglo. Las secuencias de tipo salvaje APC, en la misma posición, se obtuvieron de otras dos momias de la misma colección.
La capacidad de recuperar materiales genéticos a partir de tejido antiguo fue un tremendo paso adelante en la comprensión de la historia evolutiva de las enfermedades. Mientras que la mayoría de enfermedades estudios aDNA se centraron en el antiguo ADN del patógeno [46-48], la investigación genética del cáncer en poblaciones históricas se ha descuidado un poco. Hay informes sobre tumores o neoplasias benignas en muestras antiguas; algunos incluso volver a la era de los dinosaurios [49]. Sin embargo, éstos se basan principalmente en la presencia de lesiones óseas específicas o estudios histológicos e información no genética. En los casos de osteosarcoma Hungría; mieloma; y el carcinoma metastásico fueron reportados en las muestras históricas [50-53]. A lo mejor de nuestro conocimiento, el cáncer o mutaciones asociadas con el cáncer aún no se han reportado en los estudios de ADN antiguo.
La escasez de informes sobre tumores en tejidos blandos antigua permanece en comparación con el gran número de autopsias llevó a cabo en momias han llevado a algunos investigadores a la hipótesis de que los tumores malignos son poco frecuentes en las poblaciones del pasado, en comparación con los tiempos modernos debido a la corta duración de vida de las personas que impidió el desarrollo del cáncer [15,24]. Por el contrario, los informes paleopatológicos basados en la investigación de los restos óseos sugieren que las tasas de tumores fueron similares entre el pasado y las poblaciones modernas examinados [20,23]. Los registros históricos indican que la esperanza de vida fue estadísticamente bajado por la mortalidad infantil y materna y, sin embargo hubo muchos individuos vivir hasta una edad bastante avanzada para desarrollar otras enfermedades mediados de edad de edad, como las enfermedades degenerativas [15]. Otra hipótesis tratando de explicar la rareza de tumores en tejidos blandos antigua es que los tumores podrían no estar bien conservados en el tejido postmortem momificado. Sin embargo, estudios experimentales muestran que la momificación conserva las características de malignidad [54]. Por lo tanto, en una sociedad antigua que carecen de la intervención quirúrgica, la evidencia de cáncer, si existe en el tejido, debe permanecer en todos los especímenes conservados momificados. Las muestras de tejidos blandos arqueológicos hechos son escasos en comparación con los restos óseos [55] presentan un desafío para el análisis de datos relacionados con el cáncer antigua genéticos, debido al tamaño pequeño de la muestra. Esto pone de relieve la importancia de la acumulación de datos procedentes de estudios como este, con el tiempo la creación de una base de datos suficiente para estudios posteriores. En los últimos años, el uso de la secuenciación de próxima generación (NGS) ha vuelto común en la investigación del ADN antiguo [56]. escopeta secuenciación se llevó a cabo con éxito por Kay et al. 2015 para generar
M
.
genoma secuencias de la tuberculosis
de tejidos blandos y óseos de las momias VCA, lo que demuestra que los datos de todo el genoma de bacterias se pueden obtener a partir de tejido momificado en general, y de la colección de momias Vác, en particular [33]. Sin embargo, en base a los datos comunicados por Kay et al. [33], la cobertura media veces mayor para los genomas humanos es muy baja (no más de 0,09 cobertura media veces), lo que indica sería necesario el enriquecimiento de ADN específica para analizar regiones cromosómicas específicas, tales como la región de APC MCR. Por otra parte, los datos de todo el genoma humano hasta el momento no ha sido obtenido a partir de tejido momificado. Por lo tanto, se optó por emplear el enfoque clásico de la amplificación por PCR y secuenciación directa para caracterizar las mutaciones del gen APC de las momias Vac. Dado que el enfoque clásico es más limitado en la capacidad para tratar la contaminación, se utilizaron medidas estrictas para evitar la contaminación del ADN durante el procesamiento de la muestra como se describe en la parte métodos; incluyendo la comparación de las secuencias de APC de las momias con las de todos los manipuladores de muestra. Nuestros resultados confirman que el aislamiento de regiones cromosómicas relacionadas con el cáncer específicos de tejido momificado es factible y podría motivar el desarrollo futuro de las matrices de enriquecimiento dirigidas a capturar regiones de ADN relacionadas con el cáncer. Tales enfoques podrían aumentar los rendimientos de ADN para estas regiones de interés y pueden ser combinados con técnicas de NGS para proporcionar medios adicionales de autenticación y una perspectiva más amplia sobre la evolución del cáncer.
Cáncer Colorrectal surge como el efecto acumulativo de múltiples mutaciones en muchas los genes que permiten a la célula para escapar de los controles regulatorios que favorezcan la proliferación incontrolada. Estas mutaciones se pueden heredar o somático y este último puede verse afectada en gran medida por factores ambientales (por ejemplo, fumar, la contaminación del aire y la nutrición) [57].
Los estudios que examinan la relación entre la mutación APC E1317Q y el cáncer colorrectal han demostrado resultados diferentes. Mientras que algunos estudios sugieren que la mutación contribuye a una predisposición a los adenomas y carcinomas colorrectales con baja y variable penetrancia [58,59], otros afirman que la variante se asocia con sólo un aumento moderado en el riesgo de cáncer colorrectal [60-62]. La elección del grupo de control en algunos de los estudios que no encontraron un riesgo significativamente mayor de cáncer colorrectal debido a E1317Q ha sido criticado y fue propuesto para ser la causa de la contradicción respecto a los efectos E1317Q sobre el cáncer colorrectal [43]. Por lo tanto, un posible papel de E1317Q en la génesis tumoral colorrectal puede existir y se debe estudiar más a fondo. Se ha sugerido E1317Q tiene efectos sutiles en el secuestro de β-catenina o la degradación, pero el mecanismo molecular exacto que causa la predisposición para el cáncer colorrectal es desconocido [59].
Nuestros datos sugieren que el individuo 88 pueden haber tenido una predisposición para desarrollar adenomas y carcinomas colorrectales, pero no podemos decir si esas condiciones realidad manifiestan en este individuo. La preservación morfológica del tejido del colon momificado no fue suficiente para diferenciar visualmente los adenomas o carcinomas de tejido normal. El hecho de que la mamá 88 era homocigoto para la secuencia de APC E1317Q aumenta algo la probabilidad de manifestación, ya que es posible especular que homozygousity fue causado por un evento de pérdida de heterozygousity que es común en la neoplasia y se encuentra comúnmente en pacientes con cáncer colorrectal que muestran APC pérdida de función [63]. Como la variante E1317Q APC es poco frecuente en la población general moderna (0,3%, NCBI SNP rs1801166 base de datos) [40], las probabilidades de heredar un alelo mutado de cada padre son muy bajo, lo que aumenta la posibilidad de que una mutación somática en verdad había ocurrido. Sin embargo, no tenemos datos sobre la historia familiar momia de 88 o de la frecuencia del alelo a los 18
ª siglo Hungría, por lo tanto, no podemos descartar la herencia de homozygousity para E1317Q en este caso. La ausencia de la mutación en los tejidos tomados de otros órganos restantes, habría confirmado la mutación somática ser y no una mutación de línea germinal hereditaria. Desafortunadamente, el nivel de conservación de ADN genómico en los otros tejidos muestreados de mamá 88 (hígado) no era suficiente para la amplificación con éxito de las secuencias genómicas de APC. En general, las mutaciones somáticas en esta parte del MCR del gen APC son más comunes en las poblaciones modernas que las mutaciones de la línea germinal [64].
La obesidad, la inactividad física, una dieta rica en carne roja o procesada, alcohol el consumo y el tabaquismo a largo plazo son factores de riesgo específicos para el cáncer [3] colorrectal. Estos factores de riesgo fueron menos frecuentes o inexistentes en la pre-industrializada 18
siglo XX Hungría [65,66]. Las frecuencias de cáncer en poblaciones históricas, como la 18
población húngara del siglo XX podrían estar vinculados con la ausencia de los factores ambientales de la vida moderna, tales como el consumo de tabaco o la contaminación [57,67]. Aunque la APC MCR es una región genómica frecuentemente mutado en la población de hoy en día [68], la única mutación detectada en las secuencias de APC MCR obtenidos a partir de las 3 momias era E1317Q en momia del 88. Estos datos se combinan con datos futuros de estudios similares que abarcan diferentes momentos y ubicaciones pueden dilucidar la relación entre la ocurrencia de mutaciones del cáncer colorrectal predisponentes y estilo de vida histórica. La sociedad humana ha experimentado enormes cambios de estilo de vida y el medio ambiente durante los últimos siglos. La capacidad de comparar el espectro de mutaciones históricos para el espectro moderno parece importante para la comprensión de la etiología y la patogénesis molecular de la neoplasia. Nuestros datos, que indican la presencia de un cáncer de predisposición mutación y posiblemente cáncer en una persona de la
siglo XX se combina con los datos que se acumula a partir futuros estudios aDNA puede proporcionar una imagen más completa de la epidemiología del cáncer.
Reconocimientos
Nos gustaría dar las gracias a Nir Skalka y Hila mayo para ayudar con el trabajo de laboratorio.