Extracto
El cromosoma Y recientemente se ha sugerido que tienen una asociación con el riesgo de cáncer de próstata en las poblaciones humanas. Desde este cromosoma es haploide y carece de recombinación sobre la mayor parte de su longitud, los haplotipos construido a partir de marcadores binarios en todo el cromosoma pueden ser usados para estudios de asociación. Para evaluar la posible contribución del cromosoma Y con el riesgo de cáncer de próstata, por lo tanto, nos hemos analizado 14 binario marcadores del cromosoma Y en los casos de cáncer de próstata 106 y 110 controles de la población coreana. En contraste con los resultados anteriores en la población japonesa, no se observaron diferencias estadísticamente significativas en la distribución de frecuencias de haplogrupos del cromosoma Y entre los grupos de casos y controles de los coreanos. Por lo tanto, nuestros datos implican que las asociaciones se informó anteriormente entre los linajes del cromosoma Y y una predisposición a, o la protección contra el cáncer de próstata podrían explicarse por fluctuaciones estadísticas, o por efectos genéticos que se ven sólo en algunos entornos.
Visto: Kim W, Yoo los conocimientos tradicionales, Kim SJ, Shin DJ, Tyler-Smith C, Jin HJ, et al. (2007) La falta de asociación entre los haplogrupos del cromosoma Y y el cáncer de próstata en la población coreana. PLoS ONE 2 (1): e172. doi: 10.1371 /journal.pone.0000172
Editor Académico: Mikhail Blagosklonny, Ordway Research Institute, Inc., Estados Unidos de América
Recibido: 7 de noviembre de 2006; Aceptado 21 de diciembre de 2006; Publicado: 24 Enero 2007
Derechos de Autor © 2007 Kim et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. WK es apoyado por una beca de la Fundación de Ciencias de Corea y la Ingeniería (KOSEF R01-2005-000-10534-0), República de Corea. CTS es apoyada por el Wellcome Trust
Conflicto de intereses:. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
El cáncer de próstata es uno de los más comunes machista. tipos específicos de cáncer, pero su incidencia varía considerablemente entre las poblaciones, con la posibilidad de desarrollar este tipo de cáncer es mayor en los países occidentales y la más baja en los países asiáticos. Las encuestas recientes sugieren que tanto las alteraciones genéticas y factores dietéticos pueden estar relacionados con el cáncer de próstata [1] - [5], aunque la etiología de esta enfermedad sigue siendo poco clara en la mayoría de los casos
Cada vez hay más pruebas de una. papel del cromosoma y en la malignidad y la progresión del cáncer de los hombres concretos. mutaciones Y-cromosómicas se asocian con cáncer de próstata, ya que la pérdida de este cromosoma es la aberración cromosómica más común observado en el tejido de cáncer de próstata [1], [6]. Muchos de los genes o loci en el cromosoma Y pueden contribuir no sólo a desarrollo de células germinales masculinas y de mantenimiento, sino también a los mecanismos moleculares de desarrollo y la progresión del cáncer de próstata [7] - [10]. Por ejemplo,
SRY
, el determinante del sexo gen en el cromosoma Y, es el regulado en este tipo de cáncer y es un regulador negativo del receptor de andrógenos [11]. La
SRY
gen por lo tanto parece ser candidato a la implicación en la oncogénesis de cáncer de próstata [12].
El cromosoma Y tiene características genéticas especiales que incluyen la ausencia de recombinación sobre la mayor parte de su longitud y el estado haploide. La secuencia de ADN de la región no recombinante del cromosoma Y, por tanto, contiene un único registro de los eventos mutacionales que se produjeron en el pasado. Como consecuencia, los haplotipos construyen a partir de alelos Y-cromosómicas han sido utilizados con éxito para estudiar linajes paternos [13] - [16] y para diferenciar los grupos de población humanos [17] - [20]. Además, cualquier mutación que predispone a, o proteger contra, el cáncer de próstata se acuesta sobre la filogenia bien establecido, por lo que los marcadores binarios que definen los linajes también se pueden utilizar para estudios de asociación. Además, dado que los linajes del cromosoma Y (es decir haplogrupos) son altamente estratificada entre las poblaciones humanas, una asociación tan-haplogrupo específico es probable que sean específicos de la población también.
Curiosamente, los estudios recientes han sugerido que ciertos Y linajes -chromosomal estaban asociados con el riesgo de cáncer de próstata en la población japonesa [12], [21]. Tales hallazgos deben ser replicados en una muestra de población independiente donde los linajes relevantes son comunes. Sobre la base de los resultados de los estudios de población anteriores, los japoneses parecen tener una relación genética más cerca de coreanos que a otras poblaciones de Asia [20], [22], [23] por lo que la población coreana es especialmente adecuado para la prueba de la misma correlación.
en el presente estudio, por lo tanto, hemos investigado la asociación entre los haplogrupos del cromosoma y y una predisposición al cáncer de próstata en la población coreana mediante el examen de 106 casos de cáncer de próstata y 110 controles usando binario marcadores del cromosoma 14.
resultados y Discusión
Hemos observado once linajes del cromosoma y diferentes definidos por los catorce binario marcadores en los casos de cáncer y muestras de control, la mayoría de los cuales son los haplogrupos predominantes esperados en el este de Asia. Las distribuciones de frecuencia de los catorce binario marcadores y los correspondientes haplogrupos del cromosoma Y se muestran en la Figura 1. La población de Corea encuestados que aquí se caracteriza por una alta frecuencia del haplogrupo O-M175 (y sus sublinajes) en ambos grupos de pacientes con cáncer de próstata (84,0% ) y normales controles (76,3%) (Figura 1 y Tabla 1). Este resultado es consistente con los informes anteriores, lo que demuestra que la mayor parte de las poblaciones de Asia oriental comparten una característica genética común de altas frecuencias de cromosomas haplogrupo O-M175 derivados de [20], [24], [25]. La distribución de frecuencias de cromosomas Y estudió aquí también es concordante con los resultados previos de las encuestas de Corea [20], [25].
distribución haplogrupo del cromosoma Y en los casos de cáncer de próstata y los controles en la población coreana. El árbol parsimonioso en la parte superior muestra la relación evolutiva de quince haplogrupos. La nomenclatura es de acuerdo con el Consorcio cromosoma Y [37]. cáncer
aProstate;
Control BNORMAL; Exacta
P = 0,44225
valor ± 0,02442
No se encontraron diferencias estadísticamente significativas (p & lt; 0,05) se observó en la distribución de frecuencias de haplogrupos del cromosoma Y entre el caso y el control grupos (Figura 1). En especial, re-investigaron las asociaciones previamente notificados que se encuentran en la población japonesa en las muestras coreanos. Paracchini et al. [12] informó de que los linajes haplogrupo O-M122-derivados (O3 en su papel) se asociaron con una predisposición estadísticamente significativa con el cáncer de próstata en su muestra japonesa. No se encontró ninguna asociación significativa con el riesgo de cáncer de próstata en nuestras muestras de linajes derivados de O-M122 haplogrupo (OR 1,16 (0,68-1,97), p = 0,60; Tabla 1), a pesar de que estos linajes son más frecuentes en la población coreana que en el japonés [12], [20], [25]. Ni estratificación por edad (& lt; 65) ni por la gravedad de la enfermedad (. Utilizando los criterios de Paracchini et al [12]) condujo a una asociación significativa (OR 1,50 (0,64-3,50), p = 0,35; OR 1,09 (0,59-2,02 ), p = 0,77, respectivamente; Tabla 2). Ewis et al. [21] encontró que el haplogrupo D /E-YAP era excesivamente representados significativamente en sus pacientes con cáncer de próstata y haplogrupo O-SRY (incluyendo el sublinaje O-47z; O2b * y O2b1, respectivamente, en su papel) fue significativamente sub-representadas. La ausencia del haplogrupo D /E-YAP de nuestra muestra de Corea (0%) hizo imposible evaluar la correlación entre este linaje y los casos de cáncer (Figura 1). Sin embargo, podríamos evaluar el efecto protector del linaje O-SRY. En la muestra de Corea, ningún efecto protector fue visto (OR 1,05 (0,58-1,92), p = 0,87; Tabla 1). Estas diferencias podrían reflejar asociaciones falsos positivos en los estudios anteriores, o una susceptibilidad genética expresada por los japoneses que viven en un ambiente diferente: los pacientes examinados por Paracchini et al. [12], por ejemplo, eran de los EE.UU.. Sin embargo, no parece que los efectos a ser una característica general de las poblaciones de Asia oriental, ya que no se detectan en nuestras muestras adicionales procedentes de Corea. Todavía es conveniente estudiar otras poblaciones donde los linajes son comunes.
Distribución de los linajes derivados de O-M122 haplogrupo versus todos los otros linajes combinados en pacientes con cáncer de próstata coreanos aquí estudiadas
las encuestas recientes procedentes de Asia (por ejemplo, Japón, Singapur y Corea) han mostrado una tendencia general de un incremento en la incidencia del cáncer de próstata, aunque la incidencia es aún menor en Asia que en los países occidentales [26]. Parece y Cheng [27] señaló que los aumentos en las tasas de mortalidad ajustadas por edad por 100.000 personas-año, ajustados a la norma mundial, oscilaron entre el 50% en Tailandia al 260% en Corea. La demografía cambiante de cáncer de próstata en Asia puede explicarse por factores ambientales. Muchos países asiáticos pueden estar perdiendo sus hábitos dietéticos de protección y la adquisición de los de alto riesgo mediante la adopción de estilos de vida occidentales [27]. Por lo tanto, pueden ser necesarios más estudios con otras muestras para evaluar diversas acciones conjuntas de los antecedentes genéticos y factores ambientales para la comprensión más completa de la oncogénesis del cáncer de próstata.
Métodos
Pacientes y controles
se analizaron un total de 106 pacientes con cáncer de próstata de Corea, que fueron reclutados para el estudio del Servicio de urología de la Escuela Universitaria de Medicina Eulji en Seúl y Daejeon, Corea. La clasificación histológica de cáncer de próstata se determinó de acuerdo con la recomendación de la Organización Mundial de la Salud (OMS) y el patrón de Gleason. muestras de tejido de cáncer de próstata a partir de todos los pacientes se obtuvieron de las muestras congeladas. Además, un total de 110 hombres coreanos que habían sido diagnosticados como libres de cáncer de próstata en el hospital de la Universidad Eulji en Seúl y Daejeon, Corea fueron reclutados como controles normales. Estos sujetos fueron seleccionados al azar (y por lo tanto es probable que no guardan relación) de la misma área geográfica que los casos. Este estudio fue aprobado por el Comité de Ética del Centro Médico Eulji de la Escuela Universitaria de Medicina Eulji en Seúl, y el consentimiento informado se obtuvo de todos los participantes. Se prepararon
Los ADN de las muestras de cáncer de próstata de los pacientes y la sangre entera muestras de los controles realizados con los métodos estándar [28]
Genotipado
Catorce binario marcadores del cromosoma Y se eligieron para determinar el genotipo de todos los individuos de la muestra:. YAP [29], M7, M9 [30], RPS4Y
711 [31], SRY
465, DXYS5Y [32], P31 [33], M95, M119, M122, M134, M175, M214 [16], línea 1 [34]. Todo se sabe que son polimórficos en el este de Asia. La Y
Alu
de inserción (YAP), RPS4Y
711 (C a T sustitución), M9 (C a G sustitución), M175 (-5 pb), M95 (C a T sustitución), SRY
465 (C a T sustitución), DXYS5Y (G a C sustitución), y la inserción LINEA1 se han escrito utilizando el protocolo descrito previamente [20].
el M7 (C a G sustitución), M134 (-1 pb), M214 (T a C de sustitución), M119 (a a C de sustitución), P31 (T a C de sustitución), y M122 (T a C de sustitución) marcadores fueron amplificados utilizando los siguientes conjuntos de cebadores y modificaciones reportados por Hammer et al. [33] y Underhill et al. [16], [30]: M7, 5'-CTTGACCAATGCCTTGCAAA-3 'y 5'-CAGCCTTGTGATCCAATTA-3'; M134, 5'-AATCATCAAACCCAGAAGGG-3 'y 5'-CCTTGTTAGCTAATTTTGAGC-3'; M214, 5'-TGCTGATACAACACACTGGA-3 'y 5'-AGCCATGGAAATGCCACTTCAC-3'; M119, 5'-GTTATGGGTTATTCCAATTCAGC-3 'y 5'-GAATGCTTATGAATTTCCCAGA-3'; P31, 5'-TAAGGCTGCGTGTTCCCTAT-3 'y 5'-ATATCGTGCCATTGCACACC-3'; M122, 5'-CAGCGAATTAGATTTTCTTGC-3 'y 5'-TGGTAAACTCTACTTAGTTGCCTTT-3'. Cada reacción de PCR se realizó en un volumen total de 25 l que contenía 25 ng de ADN genómico, 22:00 cada cebador, dNTPs 0,2 mM, MgCl 2,0 mM
2, 50 mM de KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 8,3), y 1,5 U Ampli
Taq ADN polimerasa
(Perkin-Elmer, Foster, CA, EE.UU.). Las condiciones de los ciclos de PCR para el marcador M7 utilizan una primera etapa de desnaturalización a 94 ° C durante 5 min, y luego 35 ciclos a 94 ° C durante 45 s, 54 ° C durante 45 seg, 72 ° C durante 1 min, y una final extensión a 72 ° C durante 3 min. Las condiciones de los ciclos para el marcador M134 utilizan una primera etapa de desnaturalización a 94 ° C durante 5 min, y luego 35 ciclos a 94 ° C durante 45 s, 55 ° C durante 45 seg, 72 ° C durante 1 min, y una extensión final a 72 ° C durante 3 min. Las condiciones de los ciclos para el marcador M214 utilizan una primera etapa de desnaturalización a 94 ° C durante 5 min, y luego 35 ciclos a 94 ° C durante 45 s, 53 ° C durante 45 seg, 72 ° C durante 1 min, y una extensión final a 72 ° C durante 3 min. Las condiciones de ciclación para M119 fueron 94 ° C durante 5 min, y luego 35 ciclos a 94 ° C durante 45 s, 56 ° C durante 45 seg, 72 ° C durante 45 seg, y una extensión final a 72 ° C durante 5 min . P31 se amplificó con las condiciones de PCR de 95 ° C durante 5 min, y luego 35 ciclos a 94 ° C durante 30 segundos, 56 ° C durante 30 seg, 72 ° C durante 45 seg, y una extensión final a 72 ° C durante 2 minutos. Las condiciones de los ciclos para el marcador M122 fueron 94 ° C durante 5 min, y luego 35 ciclos a 94 ° C durante 1 min, 54 ° C durante 1 min, 72 ° C durante 1 min, y una extensión final a 72 ° C durante 2 minutos. Los productos de PCR para M122 se digirieron con
Hsp
enzima 92II (New England Biolabs, Beverly, MA, EE.UU.) y se fraccionó en gel de agarosa al 2%. Las mutaciones de la M7, M119, M134, M214 y P31 marcadores se detectaron mediante un método de PCR-SSCP después de la amplificación PCR descrito por Kutach et al. [35]. Los patrones de bandas de sus alelos se evaluaron en una carrera de gel PAGE nativa 10% a 10 ° C en una cámara fría y se visualizaron mediante tinción con plata como se describe en otra parte [36].
Haplogrupos binarios
Y-cromosómicas para todas las muestras de próstata casos de cáncer y controles fueron definidos por el análisis de los 14 polimorfismos binarios. La nomenclatura de los haplogrupos siguió la del consorcio cromosoma Y (YCC) [37].
Análisis de datos
Y haplogrupo frecuencias se calcula contando a partir de los fenotipos observados. Para la prueba de diferenciación de la población significativa entre los casos de cáncer de próstata y los grupos de control, se utilizó una prueba de Chi cuadrado y la prueba exacta de Fisher implementado en la versión del paquete Arlequin 2.0 [38]. El nivel de significación de la prueba se aplicó con una probabilidad de & lt; 0,05 como punto de corte. Además, una prueba de la proporción y la odds ratio (OR) con intervalos de confianza del 95% (IC) se calcularon también (http://home.clara.net/sisa/).
Reconocimientos
Nos gustaría dar las gracias a todos los voluntarios para proporcionar muestras de ADN para hacer posible este estudio. Un agradecimiento especial a todos los urólogos y patólogos en el Centro Médico Eulji del hospital de la Universidad Eulji.