Extracto
De acuerdo con las células madre del cáncer de la teoría (CSC), los tumores malignos pueden ser heterogéneos en los que una pequeña población de células madre cancerosas conducir la progresión del cáncer. Debido a sus capacidades intrínsecas, células madre cancerosas pueden sobrevivir a una variedad de tratamientos y luego llevar a la resistencia terapéutica y la recurrencia del cáncer. CSC pancreáticos se han notificado a ser responsables de los comportamientos malignos de cáncer de páncreas, incluyendo la supresión de la protección inmune. Por lo tanto, el desarrollo de estrategias inmunológicas para erradicar células madre cancerosas pancreáticas puede ser de gran valor para el tratamiento de cáncer de páncreas. En este estudio, hemos enriquecido células madre cancerosas pancreáticas mediante el cultivo de células Panc-1 en condiciones de formación de esferas. Panc-1 células madre cancerosas expresan niveles bajos de HLA-ABC y CD86, como se mide por citometría de flujo análisis. Encontramos además que las células madre cancerosas Panc-1 modulan la inmunidad mediante la inhibición de la proliferación de linfocitos que es promovido por fitohemaglutinina (PHA) y los anticuerpos monoclonales anti-CD3. Las células dendríticas derivadas de monocitos (DC) fueron acusados de lisados totales generados a partir de Panc-1 células madre cancerosas obtenidas de cultivo esfera del tumor. Después de co-cultivo con linfocitos en diferentes proporciones, los Panc-1 CSC lisados modificados DC promover eficazmente la proliferación de linfocitos. La eficiencia de la activación alcanzó 72,4% y 74,7% en las proporciones de 01:10 y 01:20 con linfocitos. Los linfocitos activados secretan altos niveles de INF-γ e IL-2, que son fuertes citocinas antitumorales. Por otra parte, Panc-1 CSC lisados modificados DC indujo efectos citotóxicos significativos de linfocitos en Panc-1 células madre cancerosas y células Panc-1 parentales, respectivamente, como se muestra por ensayo deshidrogenasa de lactato (LDH). Nuestro estudio demuestra que el desarrollo de la vacuna basada en células madre cancerosas es una estrategia prometedora para el tratamiento del cáncer de páncreas
Visto:. Yin T, P Shi, Gou S, Q Shen, Wang C (2014) Las células dendríticas cargadas con pancreático Las células madre del cáncer (CSC) Los lisados inducen antitumoral inmune Killing efecto in vitro. PLoS ONE 9 (12): e114581. doi: 10.1371 /journal.pone.0114581
Editor: Jingwu Xie, Escuela de Medicina de la Universidad de Indiana, Estados Unidos de América
Recibido: 31 de julio de 2014; Aceptado: 11 de noviembre de 2014; Publicado: 18 de diciembre 2014
Derechos de Autor © 2014 Yin et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. La autores confirman que todos los datos que se basan los resultados son totalmente disponible sin restricciones. Todos los datos relevantes se encuentran dentro del papel
Financiación:. Este estudio fue apoyado por becas de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Nº 30801100)
Conflicto de intereses:. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia.
Introducción
el cáncer de páncreas es una de las enfermedades más letales del sistema digestivo, lo que se ubica como la primera causa de muerte por cáncer en los países desarrollados. En los últimos años, la incidencia de cáncer de páncreas y la muerte relacionada es cada vez mayor en los países en desarrollo, mientras que el pronóstico de la mayoría de los pacientes con cáncer pancreático no mejoró durante los últimos treinta años. La mayoría de los pacientes con cáncer de páncreas pierde oportunidad para la resección quirúrgica, debido al hecho de la etapa avanzada de la enfermedad en el diagnóstico, y la resistencia intrínseca o adquirida a la quimioterapia o la radioterapia, que es una característica típica de cáncer de páncreas [1]. Por lo tanto, es urgente para explorar nuevas estrategias de intervención específica para el tratamiento de cáncer de páncreas
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Las células madre del cáncer (CSC) son una subpoblación de células tumorales que poseen una fuerte auto-renovación y diferenciación habilidades para conducir la carcinogénesis y la progresión de cáncer. Recientemente, la ESA CD44 + CD24 + + células madre cancerosas pancreáticas se ha confirmado que poseen un mayor potencial tumorigénico, y son responsables del comportamiento maligno de cáncer de páncreas [2]. la erradicación completa de estas células madre cancerosas puede proporcionar la esperanza como una nueva estrategia terapéutica para tratar el cáncer de páncreas. Sin embargo, la capacidad anti-apoptótica es una de las características destacadas de las CSC a través de múltiples tipos de tumores, lo que resulta en la muerte ineficaz en la quimioterapia y la radioterapia estándar [3] - [4]. Las células madre cancerosas remanentes pueden convertirse así en el origen de la recurrencia y la fuente de fracaso del tratamiento.
La inmunoterapia del cáncer activa las respuestas inmunitarias antitumorales del paciente a rechazar las células tumorales malignas. Células madre cancerosas expresan ciertos biomarcadores que tienen antigenicidad distinta, que pueden inducir respuestas inmunes específicas [5] - [6]. CSC se han demostrado para ser reconocido y eliminado por las células CD8 + T citolíticas [7]. Por otra parte, se ha demostrado que la inmunidad intrínseca contra las CSC puede dictar supuesto la progresión del cáncer [6]. Por lo tanto, es una estrategia atractiva para inducir respuestas inmunes contra células madre cancerosas pancreáticas para el tratamiento de cáncer de páncreas. DC son células presentadoras de antígeno potentes y juegan un papel fundamental en la inducción de respuestas inmunes primarias contra antígenos asociados a tumores. Un número de estrategias han sido desarrolladas para modificar las DC con antígenos específicos de tumor para generar respuestas inmunes anti-tumorales. vacuna DC antígeno modificado tumor débiles pueden provocar fuertes respuestas inmunes anti-tumorales in vitro e in vivo [8]. En este estudio, hemos modificado los DC con antígeno de células madre cancerosas de páncreas, y se investigó el efecto letal de las respuestas inmunitarias producidas por CSC-CC en células madre cancerosas pancreáticas in vitro.
Materiales y Métodos
Declaración de Ética
el uso de sujetos humanos fue aprobado específicamente por el Comité de Investigación clínica de Ética del hospital de la Unión, Tongji Medical College, HUST. Las muestras de sangre se obtuvieron de donantes sanos. Todos los voluntarios habían conocido y aceptado que la sangre se va a utilizar para la investigación científica. Todos los participantes firmaron un formulario de consentimiento informado por escrito antes de donar la sangre.
Cultivo de células
La línea celular de cáncer de páncreas Panc-1 se cultivaron en medio Eagle modificado por Dulbecco suplementado con suero bovino fetal al 10% ( Sigma Chemical Co., St. Louis, MO), penicilina (100 U /ml) y estreptomicina (100 U /ml) a 37 ° C incubadora con 5% de CO
2. La condición de cultivo de células de cáncer pancreático para formar esferas tumorales en suspensión se describen anteriormente [9]. Brevemente, se diluyeron las células individuales enzimáticamente disociadas a una densidad de 10
3 células /ml en medio de formación de esferas (SFM). Las células se pasaron cada 10 a 14 días y se volvieron a sembrar en el SFM. Los cúmulos esféricos de las células cultivadas en esta condición fueron nombrados Panc-1 células madre cancerosas. SFM utilizado fue DMEM-F12 suplementado con 10 ng /mL factor de crecimiento fibroblástico básico (Peprotech), 20 ng /ml de factor de crecimiento epidérmico (Peprotech), 5 ug /ml de insulina, 2,75 ug /ml de transferrina, 2,5 ng /selenito de sodio ml (Sigma), y 0,4% de albúmina de suero bovino (Amresco).
Preparación de lisado de células tumorales
cáncer de páncreas células (Panc-1 esfera, Panc-1) se incubaron con 0,01% de EDTA -Solución de 5 min. Después de lavar dos veces en PBS, las células se resuspendieron en medio libre de suero. Las suspensiones de células se congelaron a -80 ° C y se descongelaron de cuatro ciclos de congelación-descongelación. Después de la eliminación de restos de crudo, los lisados se centrifugaron durante 10 min a 300 g de la gravedad. Se recogieron los sobrenadantes y las concentraciones de proteína de los lisados se determinó mediante el ensayo de Bio-Rad (Bio-Rad, Munich, Alemania).
Preparación de células de cáncer pancreático lisados modificados DC
mononucleares de sangre periférica células (PBMCs) de dos donantes sanos se aislaron por centrifugación Ficoll en gradiente de densidad. Las PBMCs se cultivaron en RPMI 1640 suministrado con 10% de suero en las placas de cultivo para la adhesión a 37 ° C con 5% de CO
2 durante dos horas. Se eliminaron las células no adherentes y se cultivaron en medio que contenía 10 U /ml de IL-2 para la generación adicional de la población de linfocitos. Se recogieron las células adherentes y se cultivaron en presencia de GM-CSF (Genzyme, 100 ng /ml) e IL-4 (Genzyme, 100 ng /ml) durante 6 días a 37 ° C, 5% CO2. A continuación, las células se incubaron con lisados de células de cáncer pancreático (esfera Panc1 y Panc-1) a una concentración de 100 g por cada 2 × 10
5 DCs por 24 hrs. Posteriormente, las DCs fueron activadas con TNF-α (20 ng /ml) durante 24 hrs.
análisis fenotípico inmunológica
La citometría de flujo se realizó un análisis para detectar los fenotipos inmunes de tumor y las células dendríticas. Los anticuerpos incluyen anti-HLA-DR-FITC, anti-HLA-ABC-FITC, anti-HLA-DQ-PE, anti-CD80-FITC, anti-CD54-FITC, anti-CD1a-FITC y anti-CD86-PE , (eBioscience). FITC-IgG y PE-IgG se utilizaron como controles internos. Para la tinción, 5 × 10
5 células se sembraron en el pozo placa 96 U (Corning, EE.UU.) y se incubaron con 5 l de cada anticuerpo a 4 ° C durante 30 minutos. Después de lavar con PBS, se recogieron las células a 1.000 g durante 5 minutos gravedad. A continuación, las células se resuspendieron en 300 l de PBS y se sometieron a análisis de citometría de flujo.
inhibición de las células de cáncer de páncreas en la proliferación de linfocitos
Panc-1 células madre cancerosas se cosecharon como células estimuladoras. Después de haber sido tratado previamente con mitomicina C (25 ug /ml), las células estimuladoras fueron cocultivadas con el 1 × 10
6 /ml de linfocitos no adherentes (reactores) en una proporción de 01:10 en presencia de PHA (Sigma) o anticuerpos monoclonales anti-CD3 (OKT3, eBioscience). Se añadió bromuro de tetrazolio (MTT) (Sigma) a cada pocillo - A continuación, 20 l 5 ug /l de ácido 3- (4, 5-dim etiltiazol-2-il) -2, 5 difenil- 2H. Después de la incubación durante 4 h, el sobrenadante se reemplazó con 150 ml de sulfóxido de dimetilo (Sigma). La absorción (A) se leyó a 570 nm utilizando un espectrofotómetro. La tasa relativa de proliferación celular se calculó como sigue: (A-B) /(C + D) x 100%. (A) grupo experimental: Panc-1 células madre cancerosas + + linfocitos PHA /OKT3; (B) control positivo: + linfocitos PHA /OKT3; (C) de control en blanco: Panc-1 células madre cancerosas + PHA /OKT3. Los experimentos se realizaron por triplicado.
efecto activador de Panc-1 células madre cancerosas modificado DC en la proliferación de linfocitos
Para investigar la capacidad de las células madre cancerosas Panc-1 modificados DC para activar la proliferación de linfocitos, diferente grupos de DC (Panc-1 CSC-DC, DC) se recogieron como células estimuladoras. Después del pretratamiento con mitomicina C (25 mg /ml, Roche), las células estimuladoras se co-cultivaron con 1 × 10
6 /ml de linfocitos alogénicos no adherente (reactores) en placas de 96 pocillos en proporciones que van desde 1: 10 a 1:20 y eran de cultivo a 37 ° C, 5% de CO
2 durante 96 h. Los linfocitos cultivados solos sin estimular se establecieron como controles. A continuación, 20 l 5 g /l de ácido 3- (4, 5-dim etiltiazol-2-il) -2, 5 2H difenil - tetrazolio se añadió bromuro (MTT) (Sigma) a cada pocillo. Después de la incubación durante 4 h, los sobrenadantes fueron reemplazados con 150 l de sulfóxido de dimetilo (Sigma). La absorción (A) se leyó a 570 nm utilizando un espectrofotómetro. El número relativo de linfocitos después de la activación se calculó como: Un experimento /A de control x 100%. La tasa de proliferación celular se calculó como: (A-A experimento control) /A de control x 100%. Los experimentos se realizaron por triplicado.
detección de citoquinas por Elisa ensayo
Para determinar la capacidad estimulante de las células dendríticas en la activación de linfocitos, de los sobrenadantes de los linfocitos se recogieron 72 h después de haber sido estimulado con DC , y las concentraciones de IFN-γ, IL-2, IL-10 se midieron por ELISA kit de R & amp; D de acuerdo con la directriz de la fabricación. Los resultados se obtuvieron mediante el uso de un espectrofotómetro de microplacas. Los experimentos se realizaron por triplicado.
Ensayo de citotoxicidad
Los Panc-1 CSC lisados modificados DC y las células dendríticas primitivos (1 × 10
5 /ml) se cultivaron en una proporción de 1:10 con linfocitos durante 5 días. Se recogieron las células no adherentes y se contaron como células efectoras. Las células del cáncer pancreático se sembraron en placas de 12 pocillos a una densidad de 1 ×
5 /ml 10 cada uno. células efectoras fueron co-cultivadas con células de cáncer pancreático en proporción diferente durante 20 h en 37 ° C, 5% de CO
2 incubadora. Se recogió el sobrenadante libre de células y se analizó mediante un kit de la liberación de LDH no radiactivo de acuerdo con las instrucciones del fabricante. La actividad de la LDH de las células efectoras sólo se detectó como controles, y las actividades de LDH en diferentes grupos de reacción relativos al grupo de controles se calcularon como la citotoxicidad de diferentes países en desarrollo. Los experimentos se realizaron por triplicado.
Análisis estadístico
Los datos se expresan como media ± SD. Se evaluaron las diferencias estadísticas entre los diferentes grupos mediante la prueba t de Student. Todos los análisis se realizaron utilizando el software SPSS 18.0. P & lt; 0,05 se consideró significativo un
Resultados
cultura de páncreas células madre cancerosas y de formación de esferas
Las capacidades de formación de esferas de células cancerosas en medio libre de suero han sido durante mucho tiempo para acostumbrarse. enriquecer las células madre similares. La relación entre la esfera de formación de capacidades en medio libre de suero y la propiedad de células madre de las células de cáncer de páncreas Panc-1 han sido probados en nuestros estudios anteriormente [9], [10]. Nuestros estudios preliminares encontraron que las células Panc-1 se pueden propagar a formar esferas con propiedades de células madre. Por otra parte, estas células madre similares mostraron una mayor resistencia a la quimioterapia y una mayor capacidad de migración. En este estudio, se recogieron las células madre cancerosas Panc-1 cultivadas en medio libre de suero para el estudio adicional de la estrategia de matar inmunológico (Fig. 1).
El fenotipo inmunológico de las células Panc-1 esfera
Se detectó la expresión de moléculas inmunológicas en Panc-1 esfera por métodos FACS. Como se muestra en la Fig. 2, Panc-1 esfera expresaron bajos niveles de HLA-ABC y CD80 en comparación con las células Panc-1. No se encontró ninguna diferencia entre las esferas con respecto a otros marcadores moleculares inmunes incluyendo HLA-DR, HLA-DQ, CD86 y CD1a Panc-1 y Panc-1. La baja expresión de marcadores moleculares inmunes en Panc-1 esfera indica que la capacidad estimulante de células madre cancerosas baja en el sistema inmunológico.
Ejemplo representativo de análisis FCM mostró que el MHC I y CD80 se expresaron humilde de Panc-1 células madre cancerosas en comparación con células Panc-1. No se encontraron diferencias significativas para otras moléculas inmunes incluyendo CD86, HLA-DR, HLA-DQ, CD86 y CD1a. La expresión de CD80 y HLA-ABC en Panc-1 células madre cancerosas se muestra mediante una línea continua. La expresión de CD80 y HLA-ABC en células Panc-1 se muestran mediante una línea de puntos
Efecto de las células de cáncer de páncreas en la proliferación de linfocitos
Los CSC se ha informado de modular inmune e inducir la inmunosupresión a través de múltiples mecanismos. Para determinar si células madre cancerosas pancreáticas modulan la activación de los linfocitos, los efectos de Panc-1 células madre cancerosas en proliferación de linfocitos promovidos por PHA o anticuerpos monoclonales anti-CD3 se analizaron mediante el ensayo de MTT. Panc-1 esferas se co-cultivaron con linfocitos. PHA o anti-CD3 anticuerpos monoclonales se utilizan para activar la proliferación de linfocitos. Los resultados mostraron que la proliferación de linfocitos activados por PHA o anticuerpos monoclonales anti-CD3 se inhibió en presencia de células madre cancerosas pancreáticas comparación con los controles (Fig. 3).
Los linfocitos se estimularon para proliferar con PHA o anti- anticuerpos monoclonales CD3. Panc-1 células madre cancerosas se co-cultivaron con linfocitos en una relación de 1:10 en presencia de PHA o anticuerpos monoclonales anti-CD3. Los linfocitos estimulados con PHA o anticuerpos monoclonales anti-CD3 únicamente se establecieron como control. ensayo de MTT indicó que la proliferación de linfocitos promovido por PHA o anticuerpos monoclonales anti-CD3 se inhibió en presencia de Panc-1 células madre cancerosas.
La capacidad estimulante de lisados CSC modificado DC en la proliferación de linfocitos
Para determinar el efecto de la CSC lisados modificada-DC sobre la proliferación de linfocitos, diferente proporción de DC (Panc-1 CSC DC y primitivo DC) fueron co-cultivadas con linfocitos. Los efectos de activación de diferente DC sobre la proliferación de linfocitos se demostraron por el método MTT. La proliferación de linfocitos se demostró con la observancia a DO570 nm. Como se muestra en la Fig. 4, DC cargadas con lisados de páncreas CSC suscitó una fuerte proliferación de linfocitos, (Fig. 4A). El efecto de activación de DC diferente en los linfocitos puede ser reflejada por la tasa de proliferación de linfocitos, y el efecto de activación de Panc-1 esfera lisados carga DC en los linfocitos alcanzado 72,4% y 74,7% en la proporción de 1:10 y 1:20, mientras que la la proliferación de linfocitos activados por CC sólo alcanzó el 17,5% y el 14,6% (Fig. 4B).
diferentes países en desarrollo (Panc-1 CSC DC, DC) fueron cocultured con linfocitos (reactores) en placas de 96 pocillos a diferentes proporciones (01:10, 01:20). Los linfocitos cultivados solos se establecieron como controles. Después de 96 h, el número relativo de células se calculó como la absorbancia por métodos de MTT. Los experimentos se realizaron por triplicado. A. El número relativo de linfocitos después de la estimulación se puede reflejar mediante la absorbancia. Panc-1 células madre cancerosas modificados DC estimuló la proliferación de linfocitos de fuerte en comparación con los grupos de CC. B. Los efectos de activación de las DC en los linfocitos pueden ser reflejadas por la tasa de proliferación de linfocitos. Los Panc-1 CSC lisados modificados DC lograron una tasa significativa la proliferación de linfocitos alta en comparación con los grupos de CC.
pancreático CSC lisados modificado DC provocó la secreción de IFN-gamma de IL-2 e IL-10 en los linfocitos
para determinar la activación de los linfocitos por células madre cancerosas de páncreas modificado DC, detectamos las citoquinas secretadas por las células T de acuerdo a los materiales y métodos. DC pulsado con lisados de células de cáncer de páncreas de secreción inducida de citocina Th1 IFN-γ, IL-2 y la citoquina Th2 IL-10. Nuestros resultados muestran que la regulación de IFN-γ fue especialmente significativo para la esfera Panc-1 modificado DC, y la secreción de IFN-γ se incrementó a 5,03 veces en comparación con el grupo DC primitivo. La secreción de IL-2 se incrementó a 2,28 veces en comparación con el grupo DC primitivo (Fig. 5). Mientras tanto, la citoquina asociada a Th2 IL-10 también aumentó en Panc-1 antígeno CSC carga DC. La cantidad de IL-10 en el sobrenadante aumentado hasta 7,3 veces en lisados Panc-1 esfera modificado DC con respecto al primitivo DC, pero significativamente menor que la de la citoquina asociada Th1 (Fig. 5).
diferentes DCs fueron co-cultivadas con 1 × 10
6 /ml de linfocitos en placas de 96 pocillos. Los sobrenadantes de los linfocitos se recogieron 72 h después de haber sido estimulado con DC, y las concentraciones de IFN-γ, IL-2, IL-10 se midieron mediante ensayo de ELISA. CSC pancreáticas lisados modificados DC provocaron la secreción significativa de IFN-γ, IL-2 e IL-10 en linfocitos.
pancreático células madre cancerosas modificado DC inducida fuerte efecto letal sobre células madre cancerosas de páncreas
en comparación aún más el efecto de la destrucción específica de linfocitos activados por células madre cancerosas pancreáticas modificado DC. linfocitos autólogos estimulados con CSC-DC se recogieron y co-cultivadas con Panc-1 células madre cancerosas en proporción diferente. El efecto de destrucción específica se detectó por métodos de LDH. Los linfocitos activados por DC cargado con Panc-1 escombros CSC mostraron efecto significativo matanza en Panc-1 células madre cancerosas en comparación con DC controla en proporción diferente (Fig. 6). Por otra parte, se encontró que los primitivos Panc-1 lisados celulares cargados DC provocó un efecto letal más débil en Panc-1 células madre cancerosas en comparación con Panc-1 CSC lisados modificados DC (Fig. 7A). Sin embargo, Panc-1 células madre cancerosas modificados DC provocaron efectos comparables en ambos matanza Panc-1 células madre cancerosas y células Panc-1. Aunque los efectos de matar fueron más débiles en Panc-1 de células en comparación con Panc-1 DC, no hubo diferencia significativa entre el Panc-1 DC y Panc-1 CSC-DC (Fig. 7B). Este efecto letal fue especialmente significativo en una menor proporción de 01:10 y 01:20 con linfocitos.
Diferentes DCs fueron co-cultivadas en una proporción de 1:10 con linfocitos durante 5 días. Se recogieron las células no adherentes y se contaron como células efectoras. Efectores (1 × 10
6 células) se cocultured con las células de cáncer de páncreas en proporción diferente durante 20 horas a 37 ° C en un 5% de CO
2 incubadora. Se recogió el sobrenadante libre de células y se analizó por el ensayo de LDH. Los Panc-1 CSC lisados modificados DC mostraron fuerte efecto letal sobre Panc-1 células madre cancerosas en comparación con los controles.
Diferentes países en desarrollo (Panc-1DC, Panc-1CSC DC) fueron co-cultivadas en una proporción de 01:10 con linfocitos durante 5 días. Se recogieron las células no adherentes y se contaron como células efectoras. Efectores (1 × 10
6 células) se cocultivaron con las células de cáncer de páncreas (Panc-1, Panc-1 CSC) a una relación diferente para 20 horas a 37 ° C en una incubadora de CO2 al 5%. Se recogió el sobrenadante libre de células y se analizó por el ensayo de LDH. A. Los Panc-1 CSC lisados modificados DC mostraron fuertes efectos asesinos en Panc-1 células madre cancerosas en comparación con Panc-1 lisados modificados DC. B. Panc-1 CSC lisados modificados DC tuvieron efectos matanza comparables en las células Panc-1 en comparación con la vacuna Panc-1 DC.
Discusión
Los CCC han sido conocidos por su resistencia a la terapia y puede ser la causa de la recaída de tumores malignos, como se informó anteriormente [10] - [11]. Desarrollo de la inmunidad antitumoral puede ser por tanto un enfoque alternativo eficaz para erradicar células madre cancerosas pancreáticas. Desafortunadamente, las CSC puede romper la vigilancia inmune del cuerpo a través de múltiples mecanismos. CSC se han notificado a ser débil inmunogénica. Ohlfest et al informaron de que las células CD133 + gliomas humanos expresan niveles bajos de células de la activación de ligandos natural killer (NK) MHC I o. Bajo la expresión de estas moléculas de estimulación inmunológica puede ayudar a las células madre cancerosas gliomas para evadir la adaptación y ataques inmune innata [12]. Consistentemente en nuestro estudio, el análisis de citometría de flujo reveló que células madre cancerosas pancreáticas expresan bajos niveles de HLA-ABC y CD80. Bajo la expresión de moléculas MHC puede debilitar la identificación de antígeno células madre cancerosas por el sistema inmune del cuerpo humano. Baja expresión de CD80 puede conducir a la anergia inmune [13]. Las características inmunológicas observadas sugirieron bajo inmune estimulando capacidades de células madre cancerosas pancreáticas para el sistema inmunológico. También se informó de los CAC para modular las respuestas inmunes. Heimberger et al informaron de que células madre cancerosas contribuye evasión inmune a través de la inducción de células T reguladoras y secretar moléculas de inmunosupresores específicos [14], [15]. También se informó de que el melanoma maligno iniciar células puede modular la respuesta inmune antitumoral a través de inhibidores de la activación de células T y la inducción de células T reguladoras [14]. Nuestro estudio encontró que la activación de linfocitos estimulada por PHA o anticuerpos monoclonales anti-CD3 se inhibió en presencia de Panc-1 esfera. Esto indica que las CSC pancreáticas pueden tener características inmunosupresores. Romper la tolerancia inmune de células madre cancerosas pancreáticas y la inducción de respuestas inmunes contra las CSC puede ser estrategias eficaces y prometedores para eliminar células madre cancerosas
.
DC son células presentadoras de antígeno profesionales que desempeñan un papel clave en la inducción y la conducción de las respuestas inmunes primarias , haciéndolos como un objetivo esencial en la generación de inmunidad terapéutica contra el cáncer [16]. Modificación de las DC con antígeno tumoral puede inducir la activación de células T y la respuesta inmune antitumoral. vacunación basada en DC representa una estrategia tan prometedor y potente para provocar inmunidad antitumoral para el tratamiento del cáncer. Generación de DC cargadas con antígenos asociados CSC puede presentar un método nuevo y valioso para provocar la respuesta inmune a la erradicación de células madre cancerosas. Se ha informado de que los linfocitos T citotóxicos contra células madre cancerosas puede ser inducida por la fusión de células madre cancerosas con DC o la transfección de células madre cancerosas mRNA en células dendríticas [17] - [18]. En este estudio, se cobraron DC con los desechos células madre cancerosas de páncreas. Después de co-cultivo con linfocitos, este DC modificado activa y estimula la proliferación de linfocitos y la secreción de INF-γand IL-2. La sobre regulación de IFN-γ, que es un fuerte citoquina antitumoral, fue especialmente significativo. Mientras tanto, se encontró que la citoquina Th2 asociado IL-10 también se incrementó después de la estimulación DC. IL-10 es una citocina inmunosupresora potente que inhibe la activación de células T. Aunque la regulación de IL-10 fue mucho menor en comparación con la citoquina Th1 asociada, la inhibición de IL-10 puede mejorar la respuesta inmune contra células madre cancerosas.
Nuestro estudio adicional reveló que los linfocitos activado por Panc-1 CSC lisados DC modificado mostró efectos significativos de matar tanto en Panc-1 células madre cancerosas Panc-1 y. Por otra parte, el efecto letal sobre Panc-1 células madre cancerosas provocada por Panc-1 CSC-DC era más fuerte, en comparación con Panc-1 DC. Teniendo en cuenta que el cáncer de páncreas es resistente a las terapias casi todos disponibles en la actualidad, y la resistencia terapéutica puede ser atribuido a los CAC. El desarrollo de la inmunoterapia con células madre cancerosas de páncreas se convierte en un enfoque prometedor para tratar el cáncer de páncreas en un futuro próximo.
Hasta la fecha, el aislamiento de células madre cancerosas de páncreas se ha logrado principalmente a través de la selección de células marcador dependiente de superficie específica. marcadores de superficie celular reportados incluyen CD44, CD24, CD133, ESA, y otros por los CSC pancreáticas [2], [19]. Sin embargo, células madre cancerosas pancreáticas seleccionadas a través de los marcadores de superficie celular pueden ser heterogéneos, ya que ninguno de estos marcadores parece caracterizar selectivamente una población pura de células madre cancerosas [20] - [21]. Por otro lado, el cultivo de las esferas CSC en el sistema de cultivo acondicionado de células madre puede ser otro enfoque para enriquecer células madre cancerosas pancreáticas. En el estudio actual, hemos enriquecido células madre cancerosas pancreáticas mediante el uso de sistema de cultivo esfera no adherente. Los restos de la esfera de células se utiliza para cargar CC y recoger células madre cancerosas modificados DC. La reacción inmune inducida por este tipo de enfoque puede dirigirse directamente a la mayoría de la población células madre cancerosas pancreáticas.
En resumen, nuestros resultados mostraron que la inmunoterapia basada en DC puede ser una estrategia ideal para eliminar las células madre cancerosas pancreáticas. Este prometedor tratamiento inmunológico pena mayor desarrollo teniendo en cuenta la resistencia intrínseca de células madre cancerosas pancreáticas a las terapias existentes.
Los autores declaran que no existe ningún conflicto de intereses en relación con la publicación de este documento.