Extracto
señalización de Wnt es bien conocida por desempeñar un papel importante en la regulación del desarrollo, la proliferación celular y la diferenciación celular en una amplia variedad de normal y tejidos cancerosos. A pesar de la riqueza de conocimientos sobre cuándo y dónde varios
WNT
genes se expresan y eventos aguas abajo bajo su control, se publicaron sorprendentemente poca evidencia de cómo se regulan. Hemos informado recientemente que WNT7A aberrante se observa en carcinomas de ovario seroso, y WNT7A es el único ligando acelerar la progresión del tumor de ovario a través de CTNNB1 (β-catenina) /señalización de TCF en la ausencia de mutaciones CTNNB1. En el presente estudio, mostramos que
WNT7A
es un objetivo directo de
miR-15b
en el cáncer de ovario. Demostramos que un reportero de la luciferasa que contiene el sitio de unión putativa de
miR-15b
en el
WNT7A
3'-UTR fue reprimida de manera significativa por
miR-15b
. La mutación del sitio de unión putativa de
miR-15b
en la actividad luciferasa
WNT7A
3'-UTR restaurado. Por otra parte,
miR-15b
fue capaz de reprimir el aumento de los niveles de actividad TOPFLASH por WNT7A, pero no las inducidas por S33Y. Además,
miR-15b
disminución dependiente de la dosis
WNT7A
expresión. Cuando evaluamos el impacto pronóstico de
WNT7A
y
miR-15b
expresión utilizando conjuntos de datos del TCGA, una correlación inversa significativa en la que alta expresión de
WNT7A Opiniones y bajo la expresión de
miR-15b
se asoció con tasas de supervivencia reducidas de pacientes con cáncer de ovario. El tratamiento con decitabina aumentó de forma dependiente de la dosis
miR-15b
expresión, y el silenciamiento de
DNMT1
aumentó significativamente
miR-15b
expresión. Estos resultados sugieren que
WNT7A
es post-transcripcionalmente regulados por
miR-15b
, lo que podría ser el regulado por el promotor hipermetilación, potencialmente a través de DNMT1, en el cáncer de ovario.
Visto: MacLean JA II, rey ML, Okuda H, K Hayashi (2016) WNT7A Reglamento por el miR-15b en el cáncer de ovario. PLoS ONE 11 (5): e0156109. doi: 10.1371 /journal.pone.0156109
Editor: Kwong-Kwok Wong, de la Universidad de Texas MD Anderson Cancer Center, Estados Unidos |
Recibido: 21 Marzo de 2016; Aceptado: 9 Mayo de 2016; Publicado: 19-may 2016
Derechos de Autor © 2016 MacLean et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. Todo relevante los datos están dentro del apoyo de sus archivos de información en papel y
Financiación:.. Este trabajo fue financiado por los Institutos nacionales de Salud CA179214
Conflicto de intereses:. los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
microARN (miRNA) son pequeños ARN no codificantes que regulan la expresión génica mediante silenciamiento post-transcripcional del ARNm. Los procesos regulados por miRNAs implican una variedad de vías biológicas, y su desregulación es una característica común del cáncer humano [1-3]. La familia de miR-15 incluye seis miembros altamente conservadas,
miR-15a
,
miR-15b
,
miR-16-1
,
miR-16- 2
,
miR-195
y
miR-497
, que se agrupan en tres cromosomas diferentes [4, 5]. El
miR-15a /16-1
clúster, se informó originalmente como el blanco de 13q14 supresiones o regulación a la baja en la leucemia linfocítica crónica (LLC) [6]. En concreto,
miR-15a
y
miR-16-1
regular directamente
BCL2
, que es un oncogén anti-apoptótica [7], y por lo tanto actúan como supresores de tumores mediante la inducción de la apoptosis [8]. Otros estudios han demostrado que
miR-15a
y
miR-16-1
actuar como supresores de tumor putativo apuntando
BCL2
,
IMC1 CCND1
,
MCL1
y
Wnt3a
en la LLC, melanoma, así como los cánceres de colon, de vejiga, de ovario y de próstata [4, 9, 10]. El
miR-15b
/
miR-16-2
clúster, que se encuentra en 3q25, también se ha informado de actuar en la supresión tumoral por la orientación
BCL2
,
BM1
,
CCND1
y
SUZ12
[11-13]. Reducción de
miR-15b
se observó en la LLC, melanoma, cáncer de lengua gástrico y quimioresistente, así como las células madre del cáncer [11-15]. Supresión de
miR-15b
y
miR-16-2
promueve la patogénesis de las células B [11]. Por lo tanto, los objetivos directos de los miembros de la familia miR-15 es probable que sean críticos oncogenes.
Recientemente hemos informado de que la regulación al alza de WNT7A (única entre 19 ligandos Wnt) da como resultado un desarrollo acelerado y la progresión del cáncer de ovario (OvCa), y juega un papel crítico en la progresión tumoral mediada por el WNT7A /CTNNB1 vía [16, 17] de señalización. Nuestros estudios indican además que
FGF1
será un objetivo directo de la señalización /CTNNB1 WNT7A, y que esta vía tiene un gran potencial como diana terapéutica OvCa [16]. Uno de nuestros resultados mostraron claramente que la alta expresión de
WNT7A
y
FGF1
se correlacionaron en OvCa, especialmente en los carcinomas serosos, y la escasa supervivencia general de los pacientes [16]. Por lo tanto, WNT7A codifica un factor oncogénico potente de relevancia para OvCa. Sin embargo, todavía no conocemos la respuesta a por qué se vuelve WNT7A sobreexpresa específicamente en serosa OvCa.
En el presente estudio, mostramos que WNT7A abundante, presente en OvCa, es post-transcripcionalmente las reguladas por
miR-15b
. En apoyo de su papel en la inhibición del cáncer, los pacientes tenían Ovča pobre tasa de supervivencia global en el grupo con alta expresión de
WNT7A Opiniones y baja expresión de
miR-15b
. Por otra parte, nuestros resultados indican que modula DNMT1
miR-15b
transcripción a través de la metilación del promotor.
Materiales y Métodos
Los reactivos y plásmidos
El 3'- segmentos UTR del endógena de
WNT7A
gen y su forma mutante fueron amplificados por PCR, y se subclonaron en el vector PMIR-INFORME (Thermo Fisher) usando los sitios de restricción SpeI y HindIII para generar pMIR-
WNT7A
y pMIR-
WNT7A
mutación 3'-UTR que contiene plásmidos. Decitabina (5'aza-2'deoxycytidine, también conocido como: 5-aza-2 'dC),
mir Vana
miARN mímica (control negativo y hsa-miR-15b-5p), DNMT1 siRNAs, pre- miR-15b construcciones de expresión y de doble sistema de ensayo indicador de luciferasa se compraron a Cayman Chemical, Thermo Fisher, Qiagen, Sistema de Biociencias y Promega, respectivamente.
Las líneas celulares
OVCAR3, OVCAR5, SKOV3, y ES2 células fueron adquiridos de la American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, EE.UU.). OVCAR4 células fueron dotados del Dr. Joanna Burdette (Universidad de Illinois en Chicago). Kuramochi, OVKATE y OVSAHO fueron adquiridos de banco de células JCRB (Osaka, Japón). SKOV3.ip1 células fueron adquiridos de banco celular de la Universidad de Texas MD Anderson Cancer Center. Todas las células se autentican mediante análisis de repetición corta en tándem (STR) y se pasaron dentro de los 6 meses siguientes a la recepción. Todas las células se ensayaron de forma rutinaria para la proliferación celular y la incorporación BrdU así como la contaminación por micoplasma. Todas las líneas celulares mostraron una morfología similar, las tasas de crecimiento característicos, y permanecieron negativos para la contaminación por micoplasmas lo largo de todos los experimentos. células OVCAR4, Kuramochi, OVKATE y OVSAHO se cultivaron en RPMI 1640 con 10% de FBS y penicilina /estreptomicina, y otras células se cultivaron en DMEM con 10% FBS, glutamina 2 mM y penicilina /estreptomicina. Todas las líneas celulares se cultivaron en un incubador humidificado a 37 ° C y constante de 5% de CO
2.
Cuantitativo PCR en tiempo real (qPCR) de ensayo
El ARN total fue extraído a partir de células y cDNA fue sintetizado a partir de ARN total usando la alta capacidad de cDNA transcripción reversa kit de Thermo Fisher. la expresión génica relativa se determinó por SYBR verde (Bio Rad) la incorporación usando un Bio-Rad MyCycler como se describe anteriormente [18]. Micro ARN fue extraído de las células utilizando kit de aislamiento de Enlace miRNA Pure (Thermo Fisher), y se sintetizó ADNc mediante el uso de miScript II RT Kit (Qiagen). miARN expresión relativa se determinó mediante kit miScript SYBR Green PCR (Qiagen), y miR-15b y cebadores específicos SNORD68 (Qiagen). Una tabla de los oligonucleótidos utilizados para cada gen se presenta en la Tabla S1.
proliferación celular y la adhesión ensayos
La proliferación celular, se realizaron ensayos de adhesión y migración tras nuestros métodos descritos anteriormente [16, 17] . Para evaluar la proliferación celular, las células fueron sembradas en placas de 24 pocillos, y se contaron 24, 48 y 72 horas por la condesa II FL Automated Cell contador (Thermo Fisher) con exclusión de azul de tripano. Para evaluar la adhesión celular, las células se sembraron en placas de 24 pocillos y se recogieron después de 4 h de incubación.
análisis estadísticos
Todos los datos experimentales fueron sometidos a ANOVA de una vía y las diferencias entre las medias individuales eran a una prueba de rango múltiple de Tukey utilizando Prism 5.0 (GraphPad). QPCR datos fueron corregidos para las diferencias en la carga de la muestra a partir de datos del
RPL19
como covariable. Las pruebas de significación se realizaron utilizando los términos de error apropiados de acuerdo con las expectativas de los cuadrados medios para el error. Un valor de p de 0,05 o menos fue considerado significativo. Los datos se presentan como medias con el error estándar de las medias (SEM). El método de Kaplan-Meier se utilizó para calcular las tasas de supervivencia y se evaluó mediante la prueba de log-rank utilizando un conjunto de datos TCGA, TCGA-OV que contenía 554 tumores primarios de ovario con conjuntos de datos completos, fue seleccionado para el análisis de supervivencia.
resultados
WNT7A expresión en células Ovča en función de los antecedentes genéticos o características
Cuando se informó de la importancia clínica de WNT7A durante la transformación maligna de OvCa, nuestros resultados mostraron que
WNT7A
fue altamente expresado en carcinomas serosos, el subtipo más común /agresiva de OvCa [16, 17]. Por lo tanto, WNT7A aberrante podría ser inducida por el fondo genético anormal o correlacionada con personajes agresivos en OvCa. Cuando examinamos
WNT7A
niveles de expresión en células Ovča, abundante
WNT7A gratis (& gt; 1000 veces) se observó en las células serosas Ovča invasivos o de alto grado (SKOV3.ip1, Kuramochi, y OVCAR4 OVSAHO, S1 figura). Nota: Las células Kuramochi, OVCAR4 y OVSAHO se han confirmado recientemente como líneas celulares Ovča serosos de alto grado por el perfil genómico [19]. células SKOV3.ip1 poseen características altamente invasivos y metastásicos ya que estas células se aíslan a partir de ascitis de fluidos [20]. células ES2, OVCAR3 y OVCAR5 poseen perfiles genómicos que son parcialmente similares a los tumores serosos Ovča.
WNT7A es un objetivo directo de miR-15b
Hemos examinado la activación transcripcional del
WNT7A
promotor mediante el uso de ensayos de reportero de luciferasa, sin embargo, nuestro análisis de deleción no reveló ninguna sitios críticos o reguladores potenciales dentro de una distancia de 10 kb arriba-abajo o corriente de los
promotor WNT7A
(datos no mostrados) . Por lo tanto, hemos sometido el
WNT7A
3'-UTR a un análisis in silico usando 3 algoritmos diferentes (TargetScan, PicTar y Miranda) para identificar las secuencias de semillas de coincidencia putativo miARN. Los tres motores de búsqueda detectados
miR-15a
,
miR-15b Opiniones y
miR-195 secuencias de unión de consenso gratis (figura 1A) en la 3'-UTR de
WNT7A gratis (figura 1B). Seguidamente, evaluó el impacto pronóstico de
WNT7A
y /o
miR-15b
expresión usando TCGA conjuntos de datos (número total de pacientes es 554). Si bien alta expresión de
miR-15b gratis (n = 278) mostró un buen pronóstico (p = 0,0394) en comparación con baja expresión de
miR-15b gratis (n = 276),
WNT7A
no mostró ninguna correlación (alta expresión de WNT7A, n = 279 vs = baja expresión de WNT7A, n = 275, p = 0,2364). Existe una correlación significativa inversa en la que alta expresión de
WNT7A
y baja expresión de
miR-15b gratis (n = 147 n = 146 vs de bajo expresión de
WNT7A
y alta expresión de
miR-15b) se asoció con una menor tasa de supervivencia de pacientes con cáncer de ovario en un test de log-rank (p = 0,0297, figura 1C). NOTA: alta expresión de
WNT7A
/
miR-15b
n = 132 y baja expresión de
WNT7A
/
miR-15b
n = 129 no se incluyeron en el análisis de correlación inversa. Sin embargo, hay una correlación inversa se observó entre
WNT7A
y
miR-15a
o
miR-197 gratis (datos no mostrados). Por lo tanto, nos centramos en
miR-15b
para otros análisis. Además, se analizó la correlación inversa entre el
BCL2
y
miR-15b
, como
BCL2
es uno de los objetivos conocidos de miR-15 familia y actúa como un oncogén. Sin embargo, ninguna asociación significativa entre la
BCL2
y
se observó miR-15b
en relación con la tasa de supervivencia de pacientes con cáncer de ovario utilizando TCGA-OV conjuntos de datos (P = 0,2760), lo que sugiere que
WNT7A
es un objetivo crítico más relevante de
miR-15b
con respecto a OvCa.
(a) Bioinformática predicción de la interacción con secuencias de genes miARN cabezas de serie de la 3'-UTR de
WNT7A
usando tres algoritmos diferentes. (B) Esquema de la supuesta
miR-15b
secuencia de unión en el
WNT7A
3'-UTR. (C)
WNT7A
o
BCL2
y
miR-15b
expresión se correlaciona inversamente con la supervivencia calculada con TCGA-OV conjuntos de datos (n total = 554, alta
WNT7A
/
miR-15b
, n = 132; alta
WNT7A
/baja
miR-15b
, n = 147; bajo
WNT7A
/alta
miR-15b
, n = 146; bajo
WNT7A
/
miR-15b
, n = 129) por el método de Kaplan-Meier usando Prism 5.0. El valor P se determinó mediante la prueba de rango largo.
Se utilizó TargetScan 7.0 [21], para identificar
miR-15b
sitios diana dentro del
WNT7A
3'-UTR y encontró una supuesta
sitio de miR-15b
unión (figura 1B). Para examinar si
miR-15b
se une a esta secuencia, las células fueron transfectadas con Ovča plásmido PMIR-informe que contiene el sitio de unión putativa de
miR-15b
en el
WNT7A
3'-UTR, y
mir
Vana miRNA mimic (control negativo o miR-15b), y luego se midió la actividad de luciferasa (Fig 2A). La actividad de luciferasa fue reprimida de manera significativa por
miR-15b
en comparación con el control negativo. En el estudio anterior, hemos demostrado que WNT7A activa la vía de señalización canónica CTNNB1 [16, 17]. Con el fin de determinar si
miR-15b
inhibe la acción de WNT7A, examinamos CTNNB1 actividad transcripcional mediada por la construcción de reporte TOPFLASH (figura 2B). Hemos encontrado que
miR-15b
reprimidos significativamente la actividad del indicador TOPFLASH. Cuando la actividad de TOPFLASH se incrementó en WNT7A o CTNNB1 mutado-S33Y (un control positivo establecido para la activación del reportero TOPFLASH) en células ES2, que humilde o indetectable poseen WNT7A endógeno,
miR-15b
era capaz de reprimir el aumento de los niveles de actividad TOPFLASH por WNT7A, pero no las inducidas por S33Y (Fig 2B). Por otra parte, la mutación del sitio de unión putativa de
miR-15b
en el
WNT7A
3'-UTR (5'TGCTGCT3 'a 5'TaaTGCT3') restauró la actividad de la luciferasa previamente reprimidos por
miR-15b gratis (figura 2C). En apoyo de estos hallazgos,
miR-15b
disminución dependiente de la dosis
WNT7A
niveles de mRNA en células Ovča (figura 3). Estos resultados sugieren que
WNT7A
expresión está regulada directamente por
miR-15b Hoteles en OvCa. Debido a
IMC1
y
BCL2
han sido reportadas como genes diana de
miR-15b
en el cáncer [12, 13], se examinaron también los niveles de mRNA en OvCa. Mientras que
miR-15b
fue capaz de disminuir
BCL2
,
IMC1
no fue regulada por
miR-15b Hoteles en células Ovča.
(a) reportero de luciferasa de la
WNT7A
3'-UTR en las células SKOV3.ip1 y OVSAHO 48 horas después de la transfección de
miR-15b
o un control negativo sinóptico. Letras diferentes denotan actividades reportero que tienen estadísticamente significativa (P & lt; 0,05) las diferencias en las actividades medias. análisis de reportero (B) TOPFLASH en las células SKOV3.ip1 y OVSAHO 48 horas después de la transfección de
miR-15b
o imitan control negativo (izquierda). El análisis TOPFLASH informador en células ES2 48 horas después de la transfección de
miR-15b
mímica, WNT7A o S33Y con los controles negativos (gráfico o pcDNA3.1, derecha). (C) Análisis reportero de luciferasa de la
WNT7A
3'-UTR, la mutación de
WNT7A
3'-UTR o vector PMIR-INFORME en las células SKOV3.ip1 y OVSAHO 48 horas después de la transfección de
miR-15b
o imitan control negativo.
Los datos se establece en el nivel de fondo de 1 con respecto a los niveles de control. Las diferentes letras indican las transcripciones que tienen estadísticamente significativa (P & lt; 0,05). Diferencias en los niveles de expresión de medias
miR-15b inhibe la proliferación celular y la adhesión
El papel de
miR 15b
como un supresor de tumores se ha caracterizado, como la pérdida de
miR-15b
en ratones conduce al desarrollo de tumores malignos de células B [11], y la sobreexpresión de
miR-15b
suprime la diseminación metastásica utilizando xenoinjertos de cáncer de lengua [12]. En el presente estudio,
miR-15b
se forma dependiente del tiempo menos proliferativa (Figura 4A), y la reducción de la adhesión celular (figura 4B), lo que indica que
miR-15b
también actúa células que sobreexpresan Ovča la adhesión, ya sea con
miR-15b
expresar o control de las células.
miR-15b como supresor tumoral en OvCa.
(a) la proliferación celular o (B) está regulada por el promotor hipermetilación
Nuestros resultados actuales sugieren que la expresión abundante de
WNT7A
es probable inducido debido a la regulación a la baja de
miR-15b
. El impacto pronóstico de los pacientes con Ovča correlación inversa de
WNT7A
y
miR-15b
apoyar esta hipótesis. Por lo tanto, hemos probado la posibilidad de que
miR-15b
podría ser reducido regulado en OvCa través de la hipermetilación del promotor. El tratamiento con un inhibidor de la DNMTs, 5-aza-2'dC, de forma dependiente de dosis elevadas de
miR-15b
expresión y la disminución de
WNT7A
expresión en células Ovča (Figura 5A). Cuando se examinaron los niveles de expresión de tres isoformas Dnmt activos (
DNMT1
,
DNMT3A
y
DNMT3B
) en 5-aza-2'dC (5 M) tratados OvCa células, sólo el
DNMT1
se redujo en las células SKOV3.ip1 y OVCAR4 (figura 5B), lo que indica que DNMT1 podría ser funcional para metilar
miR-15b
. De hecho, el silenciamiento de
DNMT1
aumentó significativamente
miR-15b
expresión en células Ovča (figura 5C), lo que sugiere que
miR-15b
es potencialmente las reguladas, especialmente en Las células que expresan WNT7A alta, por hipermetilación del promotor a través de DNMT1 en OvCa.
(a) 5-aza-2'-dC induce tratamiento
miR-15b
expresión (izquierda) y disminuye
WNT7A
expresión (derecha) en las células Ovča. Las células fueron tratadas con 5-aza-2 'dC durante 3 días, y
miR-15b
o
WNT7A
se evaluó por qPCR en comparación con el control M 0 (puesto a nivel de fondo de 1 en cada célula). Letras diferentes denotan transcripciones que tienen estadísticamente significativa (P & lt; 0,05) las diferencias en los niveles de expresión medios. (B)
DNMT1
,
DNMT3A
y
DNMT3B
niveles de expresión se evaluaron en las células después de Ovča aza-5-2 'dC tratamiento (5 M) durante 3 días . (C) Los niveles de expresión de
DNMT1 gratis (superior) y
miR-15b gratis (parte inferior) se evaluaron en las células transfectadas con Ovča DNMT1 siRNA 1-4, DNMT1 siRNA mezclar o control de mezcla aleatoria. Las diferentes letras indican las transcripciones que tienen estadísticamente significativa (P & lt; 0,05). Diferencias en los niveles de expresión de medias
Discusión
señalización de Wnt es bien conocida por desempeñar un papel importante en la biología del cáncer [22 ]. Mientras CTNNB1 es el mediador clave de la señalización de WNT, hemos demostrado que WNT7A es el único ligando activador CTNNB1 intacta la señalización /TCF (es decir, dentro de células que carecen de la activación por la mutación de CTNNB1), especialmente el subtipo seroso OvCa [16, 17]. A pesar de la riqueza de los conocimientos relativos a la expresión de diversos ligandos Wnt y eventos aguas abajo bajo su control, sorprendentemente haya poca evidencia publicada de cómo
WNT
genes están regulados, y por qué algunos miembros están regulados positivamente en determinados tipos de tumores. Recientemente,
Wnt3a
, que promueve la tumorigénesis a través de la proliferación celular acelerado y la invasión [23], se encuentra que es regulada directamente por el
miR-15a /16-1
clúster y la regulación positiva de
Wnt3a
está inversamente correlacionada con una disminución de
miR-15a
y
miR-16-1
en los tumores de próstata avanzado [10]. En el presente estudio, los programas de semilla de coincidencia de la bioinformática identificado tres miembros de la familia miR-15 altamente conservadas,
miR-15a
,
miR-15b
y
miR-195
, lo que podría ser reguladores críticos de la
WNT7A
. Sin embargo, ni
miR-15a
ni
miR-195
exhibió correlaciones inversas significativas con
WNT7A Hoteles en los conjuntos de datos de supervivencia del paciente Ovča. Por lo tanto,
WNT7A
expresión es más probable sujeta a regulación por
miR-15b Hoteles en OvCa.
El trabajo previo en la LLC ha demostrado la actividad supresora de tumores de la
miR-15a /16-1
clúster depende de la represión de los
BCL2
[8].
BCL2
También se ha informado que un objetivo directo de
miR-15b
utilizando un modelo de drogas resistentes células de cáncer gástrico [13]. Se ha caracterizado que
miR-15b /16-2 ratones knockout
desarrollan enfermedad maligna de células B, mientras BCL2 ligeramente hasta reguladas en las células B de ratones knockout [11]. Nuestros resultados mostraron que
miR-15b
reprimidos
BCL2
expresión en células Ovča. Sin embargo, hay una correlación inversa entre el
BCL2
y
miR-15b
se observó en el análisis de supervivencia de los pacientes en OvCa. Estos resultados sugieren que la regulación de BCL2 por
miR-15b
tiene un menor impacto en la tumorigénesis de ovario.
Las acciones de los
miR-15b
como un supresor de tumores se han demostrado claramente en la patogénesis de las células B en la LLC [11]. Además, la sobreexpresión de
miR-15b
inhibe la metástasis difusión a través de la transición epitelio-mesénquima en el modelo de xenoinjertos de células de cáncer de lengua chemoresistant [12]. Regulación a la baja de
miR-15b
se produce en las células madre del cáncer de mama, y la sobreexpresión de
miR-15b
inhibe su crecimiento y diferenciación [15]. La inhibición de la proliferación celular de orientación de la ciclina D1, y la inducción de apoptosis por
miR-15b
también se ha informado [11 a 14, 24]. Nuestros resultados más apoyo
miR-15b de búsqueda: 's función supresora de tumores, y añadir la inhibición de la proliferación celular OvCa y la adhesión celular a su lista de tumores relevantes.
En el presente estudio, se demostró que 5-aza-2 'dC, un inhibidor de la actividad DNMT, aumentó
miR-15b
expresión. Del mismo modo, la disminución de
DNMT1
fue observado por el tratamiento de la 5-aza-2 'dC, y el silenciamiento de
DNMT1
aumentó
miR-15b Hoteles en células Ovča. Aumento de los niveles DNMT1 han sido reportados en OvCa, con la expresión más baja en la etapa primaria I /II tumores y pico de expresión que se producen en la etapa III /IV [25]. DNMT1 mediada por la hipermetilación del promotor induce la reducción de E-cadherina y progresa función invasivo de OvCa [26]. Hay un informe que examina la correlación entre la alteración en el número de copias en la localización cromosómica de los
miR-15b
y los cambios en
miR-15b
estado de metilación de mama, de ovario, cabeza y cuello , pulmón y cáncer de riñón utilizando conjuntos de datos TCGA [27]. Este grupo se encontró correlación significativa entre la
miR-15b
expresión y variación del número de copia en los loci, así como entre los
de expresión y de metilación de miR-15b
niveles en los tipos de cáncer relevantes y los datos agrupados de todos los tipos de cáncer. Nota: No se dispone de cáncer de ovario en TCGA (sólo expresión y el número de copias alteración) pero no los datos de metilación. Por otra parte, la región promotora del
miR-16-2
, que está presente en un clúster con
miR-15b
localizado en el cromosoma 3q25, es metilado en la policitemia vera células CD34 + [28]. Aunque la regulación epigenética de la
miR-15b Hoteles en OvCa queda por investigar, DNMT1 puede ser uno de los reguladores para suprimir
miR-15b
.
En resumen, hemos encontrado que
WNT7A
se regula directamente por
miR-15b Hoteles en OvCa. Como WNT7A activa el crecimiento tumoral y la progresión en OvCa a través de la WNT7A /CTNNB1 vía de señalización [16, 17], regulación a la baja de
miR-15b
permite aberrante
WNT7A
expresión se apoyan aún más el impacto de WNT7A y sus mecanismos en OvCa.
Apoyo a la Información
S1 Fig. . Relativa
WNT7A
expresión fue evaluada por qPCR en las células Ovča
datos se expresan como ES2 veces por encima de los niveles de expresión, que eran el fondo cerca y arbitrariamente el valor 1. De
doi: 10.1371 /registro diario. pone.0156109.s001 gratis (EPS)
Tabla S1. Los cebadores para la PCR cuantitativa
doi: 10.1371 /journal.pone.0156109.s002 gratis (PDF)
Reconocimientos
Agradecemos al Dr. Manjeet Rao (La Universidad de Texas Health Science Center en San Antonio) para proporcionar vectores PMIR-INFORME, y el Dr. Joanna Burdette (Universidad de Illinois en Chicago) para proporcionar a las células OVCAR4.