Extracto
Antecedentes
antígeno prostático específico en suero (PSA ) es el marcador más ampliamente utilizado para el diagnóstico de cáncer de próstata (CaP). Se carece de especificidad y el valor predictivo, lo que resulta en diagnósticos inexactos y sobretratamiento de la enfermedad. El objetivo de este estudio fue evaluar la utilidad de la telomerasa transcriptasa inversa de plasma (hTERT) mRNA como herramienta diagnóstica y pronóstica de CaP y su asociación con los parámetros clínico-patológicas de los tumores.
Principales conclusiones
Los niveles plasmáticos de hTERT mRNA se determinaron mediante qRT-PCR en 105 pacientes consecutivos con niveles elevados de PSA y en 68 voluntarios sanos. El diagnóstico de la enfermedad, la eficacia como factor pronóstico de recurrencia bioquímica y la asociación con los parámetros clínico-patológicos tumorales de hTERT mRNA de plasma y pruebas de PSA en suero se determinaron mediante análisis univariante y multivariante. Los resultados muestran que hTERT mRNA plasma es un biomarcador no invasivo para el diagnóstico de CaP que muestra mayor sensibilidad (85% vs. 83%), la especificidad (90% vs. 47%), valor predictivo positivo (83% vs. 56%) , y el valor predictivo negativo (92% vs. 77%) que el PSA sérico. Plasma hTERT mRNA se asocia significativamente con parámetros clínico pobre tumorales pronóstico y es un predictor independiente significativo de CaP (p & lt; 0,0001). El análisis univariante de plasma identificado hTERT mRNA (pero no el suero PSA) como un factor pronóstico significativo de recurrencia bioquímica. curvas de plasma hTERT mRNA de Kaplan-Meier confirmaron las diferencias significativas entre los grupos y los pacientes con niveles más altos que el valor de corte mostró una disminución de supervivencia libre de recidiva (p = 0,004), mientras que no se observaron diferencias con PSA sérico (p = 0,38). El análisis multivariado indicó que el plasma hTERT mRNA (pero no el suero PSA) y la etapa se asociaron significativamente con la recidiva bioquímica.
Conclusiones
En general, estos resultados indican que el ARNm de hTERT es un tumor no invasivo útil marcador para el diagnóstico molecular de CaP, ha logrado un mayor exactitud diagnóstica y pronóstica que el ensayo de PSA y puede ser de relevancia en el seguimiento de la enfermedad
Visto:. marzo-Villalba JA, Martínez-Jabaloyas JM , Herrero MJ, J Santamaría, Aliño SF, F Dasí circulante (2012) libre de células hTERT mRNA de plasma es un marcador útil para el diagnóstico del cáncer de próstata y se asocia con un mal pronóstico características del tumor. PLoS ONE 7 (8): e43470. doi: 10.1371 /journal.pone.0043470
Editor: Rui Medeiros, IPO, Inst Puerto Oncología, Portugal
Recibido: 30 de abril de 2012; Aceptado: July 20, 2012; Publicado: 20 Agosto 2012
Copyright: © Marzo-Villalba et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Los autores no tienen financiación o apoyo al informe
Conflicto de intereses:.. los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de próstata (CaP) es, con la excepción de cáncer de piel, el cáncer más frecuentemente diagnosticado entre los hombres en las sociedades desarrolladas y la segunda causa de muerte por cáncer después del cáncer de pulmón [1]. El diagnóstico de CaP se ha incrementado dramáticamente en la última década, en gran parte gracias a la amplia utilización de antígeno prostático específico (PSA) [2]. Cuando el PSA sérico se eleva por encima del umbral de 2,5-4,0 ng /ml, el paciente a menudo se considera un candidato para una biopsia con el fin de descartar el riesgo de cáncer. Sin embargo, el uso de niveles séricos de PSA para la detección de CaP es controversial y no se recomienda unánimemente por la comunidad médica internacional. Esta discrepancia se debe al hecho de que la prueba de PSA tiene una especificidad limitada y el valor predictivo, lo que resulta en un número significativo de falsos positivos y, por consiguiente, las biopsias innecesarias [3].
Hay varias razones por las que es difícil para interpretar la prueba de PSA y para tomar una decisión precisa acerca de si debe o no realizar una biopsia. En primer lugar, hasta el 15% de los casos de cáncer (algunos de ellos de alto grado CP) no son diagnosticados en hombres con niveles de PSA por debajo del nivel de corte [4]. En segundo lugar, aunque los niveles séricos elevados de PSA están asociados con CaP, también pueden indicar otras condiciones mucho menos grave, como la prostatitis bacteriana aguda, hiperplasia prostática benigna (HPB), la cistitis, la eyaculación, traumatismo perineal o procedimientos quirúrgicos recientes en el tracto urinario [2]. Los datos del Estudio Europeo aleatorios de detección del cáncer de próstata (ERSPC) mostró que el 10-20% de los hombres tenían niveles de PSA anormales y por lo tanto cumple el criterio actual para una biopsia, aunque sólo alrededor del 24% de los hombres en cuestión finalmente desarrolló CaP [5].
Por otra parte, los resultados de los ensayos clínicos aleatorizados han demostrado que la prueba de PSA produce resultados inconsistentes y sólo tiene un beneficio limitado con respecto a la mortalidad CaP. El ERSPC y los estudios de Gotemburgo revelaron una tasa de mortalidad CaP moderadamente reducida [5], [6], mientras que el de próstata, pulmón, colorrectal y cáncer de ovario Screening Trial (PLCO) no mostró disminución de dicha tasa [7]. A pesar de que los niveles altos de PSA a menudo se asocian con una progresión más agresiva del CP, que no siempre se correlacionan con el comportamiento biológico de la enfermedad, lo que conduce a un sobrediagnóstico y sobretratamiento, con los riesgos innecesarios de orina disfunción sexual e intestinal que esto conlleva [ ,,,0],8].
En este contexto, los nuevos biomarcadores se necesitan radicalmente para detectar CaP clínicamente relevante y realizar precoz y exacto diagnóstico de la enfermedad, reduciendo así el número de biopsias mientras que la detección con éxito como muchos casos de CaP como sea posible.
Con este fin, la telomerasa humana es uno de los marcadores tumorales más prometedores actualmente bajo investigación. Actividad de la telomerasa se ha encontrado para ser elevados en 85 a 100% de los pacientes de cáncer, mientras que es baja o indetectable en las células somáticas normales [9]. Varios investigadores han informado de la detección de la telomerasa transcriptasa inversa (hTERT) mRNA en el plasma /suero de los varios tipos de cánceres, incluyendo el CaP [10] - [17]. En un estudio anterior de un pequeño número de pacientes, nuestro grupo detectó mRNA de hTERT en el plasma de pacientes con CaP y observó que su cuantificación constituye un método sensible y específico para la identificación de pacientes con CaP. Por otra parte, cuando se considera en combinación con PSA, que era un marcador eficaz para el diagnóstico temprano CaP [16]
.
Sin embargo, ninguno de estos estudios han comparado la presencia de hTERT mRNA en el plasma /suero de los pacientes con CaP con el características clínico-patológicas de los tumores. Por lo tanto, el objetivo del presente estudio fue: i) Estudio, en una gran población de pacientes, la relevancia clínica de hTERT mRNA plasmática como marcador de CaP y, ii) analizar la distribución de los parámetros clínico con respecto al plasma hTERT mRNA los niveles en pacientes con CaP.
Materiales y Métodos
pacientes y una recogida de muestras
ciento cinco pacientes que fueron admitidos consecutivamente al hospital Clínico Universitario de Valencia (HCUV) se incluyeron en el estudio. Los criterios de elegibilidad fueron los siguientes: (1) los pacientes con niveles de PSA en suero (PSA corte punto ≥4.0 ng /ml), (2) no hay un diagnóstico previo de cáncer de cualquier tipo; y (3) no hay tratamiento para el CP antes de la extracción de sangre.
Todas las muestras se analizaron prospectivamente sin el conocimiento del estado clínico-sujetos. Los pacientes fueron clasificados de acuerdo a criterios histopatológicos y asignados a uno de tres grupos: CP (edad media ± desviación estándar: 65,8 ± 7,30 años, rango: 49-80), la prostatitis (edad media ± desviación estándar: 65,9 ± 5,69 años, rango: 54- 80), y la HPB (edad media ± desviación estándar: 62,4 ± 8,45 años, rango: 50-71) (Tabla 1). Los pacientes con CaP fueron tratados con prostatectomía radical (26/46; 57%), la braquiterapia (3/46, 6%), radioterapia (13/46; 28%) y la terapia de privación de andrógenos (4/46; 9%). La mediana de duración del seguimiento fue de 10,0 años (rango: 9.5 a 10.4). Criterios de recurrencia bioquímica son los indicados por la Asociación Europea de Urología guías; después de la prostatectomía radical retropúbica, dos valores consecutivos del PSA de 0,2 ml o mayor terapia y después de /ng de radiación, un aumento del nivel de PSA & gt; 2 ng /ml por encima del nadir de PSA [18]. De acuerdo con estos criterios específicos, 7 pacientes tuvieron recurrencia bioquímica
Sesenta y ocho (edad media ± desviación estándar: 61,0 ± 6,32, rango: 50-76) de la misma edad. Voluntarios sanos que no presentan síntomas en el tracto urinario inferior o la historia del CP o cualquier otro tipo de cáncer sirvieron como controles.
periféricos muestras de sangre venosa se obtuvieron de pacientes (antes de la biopsia transrectal de próstata guiada por ultrasonido) y voluntarios sanos en 8 ml de sangre tubos de recogida que contienen gel de citrato de sodio y un medio de gradiente de densidad (Vacutainer CPT 362.761; Beckton Dickinson). Las células mononucleares de la sangre y el plasma se separaron mediante centrifugación de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Este estudio fue aprobado por el comité de ética de la investigación de la HCUV, y todos los sujetos participantes firmaron el consentimiento informado antes de su inclusión en el estudio.
Aislamiento de ARN y plasma hTERT mRNA cuantificación
RNA fue aislado de 250 l de plasma con DNasa I tratamiento, tal como se describe anteriormente [11], [16]. síntesis de cDNA y cuantitativa en tiempo real PCR (qPCR) se ha informado anteriormente [16]. En resumen, el ARN purificado (200 ng) se sometió a transcripción inversa con hexámeros aleatorios utilizando la transcripción inversa TaqMan reactivos del kit (Applied Biosystems) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Cinco l de la reacción RT se mezclaron con 45 l de TaqMan Universal de PCR Master Mix (Applied Biosystems) que contiene 250 nM de los cebadores directo e inverso y 125 nM de la sonda TaqMan. Los cebadores y las sondas TaqMan para condiciones de hTERT y 18S rRNA y la PCR se han descrito en otra parte [17]. Plasma hTERT mRNA se normalizó contra plasma 18S rRNA mRNA. Una curva estándar se ha generado utilizando el colon línea celular de carcinoma HT-29 (ATCC HTB-38). El ciclo umbral (Ct) de cada muestra se midió usando el sistema de detección de secuencias ABI 7700 y se transforma en ng de HT-29 hTERT y HT-29 18S rRNA utilizando las curvas estándar generadas en el mismo experimento. La relación entre ng de hTERT y ng de ARNr 18S representa el hTERT normalizada para cada muestra
Los valores séricos de PSA preoperatorio se midieron mediante la técnica estándar empleado en la HCUV. (Ensayo Elecsys PSA total; Roche Diagnostics) .
Parámetros Clinicopathological
Cuando los resultados de una prueba de PSA apuntaban hacia el CP, el paciente fue sometido a una biopsia de próstata guiada por ultrasonido. Los resultados de todas las biopsias fueron revisados por experimentados uro-patólogos y, si se considera positivo, el paciente en cuestión se trató de acuerdo con el procedimiento estándar seguido en la Unidad de Urología en HCUV en casos de CaP. tumorales se determinaron los factores pronósticos como el grado de Gleason, el por ciento de las biopsias de próstata positivas (calculado como el número de biopsias positivas dividida por el número total de biopsias realizadas), la invasión perineural y la invasión linfovascular. La estadificación clínica se realizó mediante un examen rectal digital (DRE), la ecografía transrectal (ETR) y la resonancia magnética.
Métodos Estadísticos
ARNm de hTERT niveles de plasma y los niveles séricos de PSA se compararon con los parámetros clínico utilizando Mann-Whitney y Kruskal-Wallis pruebas no paramétricas, ya que una prueba de Kolmogorov-Smirnov reveló que ni el ARNm de hTERT ni PSA sérico se distribuyen normalmente. La exactitud de los ensayos de PSA en suero y plasma de ARNm de hTERT en el diagnóstico de CaP fue determinada por características operativas del receptor (ROC), el área correspondiente bajo la curva (AUC ROC) y cocientes de probabilidad (LR). La sensibilidad y especificidad de hTERT mRNA y PSA en suero preoperatorio se calcularon utilizando el mejor valor de corte de la curva ROC, que se determinó de acuerdo con el punto más alto en el eje vertical y el más a la izquierda en el eje horizontal. La asociación entre hTERT mRNA de plasma, suero PSA y parámetros clínico se analizó mediante el análisis univariado. La regresión logística se realizó para determinar predictores significativos de pretratamiento independientes de diagnóstico del CP. La eficacia de hTERT mRNA de plasma y suero PSA como predictores de recurrencia bioquímica se evaluó mediante análisis univariante y multivariante. Se informaron los odds ratios (OR) calculadas por regresión logística y los intervalos de confianza del 95% (IC 95%). Todos los valores p calculados fueron de dos colas, y los valores de probabilidad de menos de 0,05 se consideraron estadísticamente significativos.
Resultados
Plasma hTERT mRNA es un biomarcador no invasivo útil para el diagnóstico de CaP
Los niveles plasmáticos de hTERT mRNA fueron medidos en 105 pacientes consecutivos con niveles elevados de PSA (≥4.0 ng /ml) y 68 voluntarios sanos. La edad del paciente, el PSA sérico preoperatorio y los niveles de ARNm de hTERT en plasma se muestran en la Tabla 1. No se observaron diferencias en la edad entre los diferentes grupos (ANOVA, p = 0,350).
CaP cribado utilizando PSA como el único indicador para la biopsia de próstata reveló que el cuarenta y seis de los 105 pacientes fueron diagnosticados con CaP (43,8%), 47 tenían prostatitis (44,8%) y 12 sufrido de la HPB (11,4%) (Figura 1). Distribución de los niveles de mRNA de hTERT en plasma en pacientes con CaP, prostatitis o BPH y en los controles se muestra en la Figura 2A. valores de la mediana de plasma hTERT mRNA fueron significativamente mayores (p & lt; 0,001) entre los pacientes con CaP (mediana; intercuartiles rango: 1,6; 0,7 a 4,08) que en el control (0,07; 0,02-0,10), prostatitis (0,13; 0,03 a 0,31) y BPH (0.03; 0.01-0.13) grupos. El PSA preoperatorio fue significativamente mayor (p & lt; 0,001) en los pacientes que entre los controles, aunque no se detectaron diferencias significativas entre el grupo de CaP y los grupos de la prostatitis o BPH (Figura 2 B)
Ciento cinco pacientes consecutivos. con niveles elevados de PSA se sometió a una biopsia de próstata. Cuarenta y seis de los 105 pacientes (44%) fueron diagnosticados de CaP, cincuenta y nueve pacientes (56%) no mostraron evidencia de cáncer. CP: Cáncer de próstata HBP:. Hiperplasia Benigna de Próstata
Los datos se expresan como mediana y rango intercuartil. A) La cuantificación de los niveles de hTERT mRNA de plasma discrimina entre pacientes con CaP y de los individuos sanos (p & lt; 0,001). B) A pesar de que los niveles de PSA fueron significativamente mayores en los pacientes con CaP que en los controles (p & lt; 0,001), la cuantificación de los niveles séricos de PSA no fue capaz de discriminar entre CaP, BPH y pacientes con prostatitis. HBP = hiperplasia benigna de próstata.
Todos los pacientes y muestras de control mostraron 18S rRNA de amplificación indica la integridad del ARN aislado (datos no mostrados).
Plasma hTERT mRNA Muestra una mayor precisión diagnóstica el suero de PSA en el CP Diagnóstico
curvas ROC y el mejor valor de corte se utilizaron para determinar la sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo (VPP) y el valor predictivo negativo (VPN) de cada ensayo. La sensibilidad y especificidad del ensayo hTERT mRNA de plasma con respecto a la detección de CaP fueron del 91% y 85%, respectivamente (mejor valor de corte de 0,45), (mejor valor de corte de 0,45, con una curva AUC ROC de 0,932 ± 0,027) , mientras que el análisis de PSA mostró una sensibilidad del 83% y una especificidad del 47% (el mejor valor de corte de 7,2 ng /ml, (mejor valor de corte de 7,2 ng /ml, con una AUC ROC de 0,651 ± 0,054 (Figura 3 ). la comparación del par de ARNm de hTERT y PSA curvas ROC confirmó diferencias significativas (p & lt;.. 0.001) (Figura 3) PPV y NPV fueron mayores para el ensayo de hTERT mRNA que para el ensayo de PSA positivo y negativo LR fueron 5,99 y 0,10, respectivamente, para la prueba de hTERT y 1,57 y 0,37, respectivamente, para el análisis de PSA (Tabla 2). a fin de probar la exactitud diagnóstica de ambas pruebas en el diagnóstico del CP, se optó por una alta sensibilidad (98%) para ambas pruebas y se calculó el especificidad y la razón de verosimilitud asociado. En esta sensibilidad, el ensayo hTERT plasma mostró una mayor especificidad (78% vs. 10%) y la mayor proporción de verosimilitud (4.44 vs 1.10) que la prueba de PSA.
curvas
ROC muestran que plasma hTERT mRNA, pero no PSA en suero, discrimina entre pacientes con CaP y de los individuos sanos o pacientes con prostatitis o BPH. Plasma hTERT mRNA muestra mayor sensibilidad (85% vs 83%), la especificidad (90% vs 47%), PPV (83% vs 56%), NPV (92% vs 77%) y el AUC ROC (0,932 vs 0,651) de PSA con respecto al diagnóstico CaP. comparación del par de mRNA de hTERT y PSA curvas ROC mostró diferencias significativas (p & lt; 0,001).
Combinación de hTERT mRNA de plasma y suero PSA en el diagnóstico de CaP como resultado una sensibilidad del 98%, una especificidad del 42%, un VPP del 57%, un valor presente neto del 96%, LR + 1,69 y un LR- de 0,05 (tabla 2).
Curiosamente, 5 de los 47 pacientes con prostatitis la desarrollada CaP durante un período de cinco años mostró valores promedios de hTERT mRNA el momento del diagnóstico que el resto del grupo prostatitis (1,08 ± 0,80 vs. 0,45 ± 1,00), aunque las diferencias no fueron estadísticamente significativas (p = 0,26), probablemente debido a la cantidad pequeña de los casos analizados.
plasma hTERT mRNA se asocia a peor pronóstico clínico-patológico del tumor parámetros
El análisis univariado mostró que los niveles de mRNA de hTERT de plasma se asociaron significativamente con parámetros clínico pobre pronóstico de tumores como la puntuación de Gleason (p = 0,01), el porcentaje de positividad biopsia con aguja gruesa (p = 0,002), la invasión perineural (p = 0,002), la invasión linfovascular (p & lt; 0,001) y el estadio clínico (p = 0,004). No hubo asociación estadísticamente significativa entre los niveles séricos de PSA preoperatorio y la puntuación de Gleason (p = 0,10), porcentaje de positividad de biopsia de núcleo (p = 0,34), la invasión perineural (p = 0,35) o vascular /linfática (p = 0,15). Sin embargo, se observaron valores de PSA significativamente mayores en los pacientes en una fase clínica avanzada (p & lt; 0,01) (Tabla 3) guía empresas
La tabla 4 muestra los resultados del análisis de regresión logística de los factores predictivos de pretratamiento de CaP.: la edad (p = 0,04) y el plasma hTERT mRNA (p & lt; 0,0001) fueron predictores independientes significativos de CP, mientras que el PSA sérico al momento del diagnóstico (p = 0,94), tacto rectal (p = 0,43) y la ecografía transrectal (p = 0,85) no fueron predictores independientes .
plasma hTERT mRNA es un factor pronóstico de recurrencia bioquímica
plasma hTERT mRNA ha demostrado ser un factor importante de la recurrencia bioquímica. El valor de corte del ARNm de hTERT plasma para optimizar la sensibilidad y especificidad para predecir la recurrencia bioquímica fue de 3.15. En este punto de corte, la sensibilidad y la especificidad fueron del 71,4% y 91,8%, respectivamente, y la curva AUC ROC fue de 0,932 ± 0,02 (Figura 4). La Figura 5A muestra las curvas de Kaplan-Meier para los dos grupos definidos por el valor de hTERT de corte (3,15). El tiempo de supervivencia libre de recurrencia fue significativamente mayor (p = 0,004; prueba de Chi-cuadrado) en pacientes con hTERT mRNA & lt; 3,15 (media ± DE; 10,44 ± 0,26 años; IC del 95%: 9,92 a 10,96) que en los pacientes con valores ≥3.15 (media ± DE; 8,28 ± 0,60 años; IC del 95%: 7,10 a 9,41). Por otra parte, PSA en suero preoperatorio no es un predictor de recurrencia bioquímica. El valor de corte óptimo para predecir la recurrencia bioquímica fue de 14,5. La sensibilidad y especificidad fueron del 100% y 87,7%, respectivamente, y la curva AUC ROC fue de 0,658 ± 0,05 (Figura 4). Las curvas de Kaplan-Meier para los dos grupos definidos por el valor de corte de PSA se muestran en la Figura 5B. No se observaron diferencias en la supervivencia libre de recidiva (p = 0,38) entre los pacientes con PSA & lt; 14,5 (media ± DE; 10,00 ± 0,34 años; IC del 95%: 9,34 a 10,68) y los pacientes con valores de PSA ≥ 14.5 (media ± SD ; 9,09 ± 0,68 años; IC del 95%: 7.77-10.42). comparación del par de curvas ROC mostró diferencias significativas (P & lt; 0,001). (Figura 4)
curvas
ROC muestran que hTERT mRNA de plasma, pero no PSA sérico, es un predictor significativo de recurrencia bioquímica. Plasma hTERT mRNA muestra mayor especificidad (91,8% vs 87,7%) y la curva AUC ROC (0,932 vs 0,658) que el PSA con respecto a la recurrencia bioquímica. El ensayo de PSA muestra una sensibilidad más alta (71,4% frente a 100%) que hTERT mRNA en la predicción de la recurrencia bioquímica. comparación del par de mRNA de hTERT y PSA curvas ROC mostró diferencias significativas (p & lt; 0,001).
Las curvas de Kaplan-Meier indican que existen diferencias significativas en la supervivencia libre de recurrencia entre los grupos de alto y bajo de hTERT (A ), pero no entre los grupos de PSA sérico alto y bajo (B).
Los predictores de recurrencia bioquímica se analizaron con el análisis de regresión de Cox (tabla 5). El análisis multivariado mostró que el ARNm de hTERT (OR: 1,55; IC del 95%: 0,99 a 2,43; p = 0,04) y la etapa (OR: 0,13; IC del 95%: 0,01 a 1,30; p = 0,08) se asoció significativamente con la recidiva bioquímica, mientras ninguno de los otros factores analizados mostraron asociación significativa con la recurrencia bioquímica.
Discusión
el suero de PSA ha sido ampliamente utilizado en la última década en el diagnóstico y seguimiento del CP. Los principales problemas planteados por este enfoque es la falta de especificidad del cáncer y de bajo valor predictivo de PSA, que se traducen en un número innecesario de biopsias de próstata y /o falta de diagnóstico de la enfermedad en los hombres con niveles de PSA por debajo del valor de corte. A pesar de que los niveles altos de PSA a menudo se asocian con tumores más agresivos, el PSA no siempre se correlaciona con el comportamiento biológico de la enfermedad, lo que conduce a un tratamiento excesivo y sus consecuencias (aumento de costes, efectos secundarios y la ansiedad del paciente). El reto para los clínicos es distinguir entre estas diferentes condiciones y evitar tomar decisiones basadas exclusivamente en las mediciones de PSA. Como consecuencia, se requieren nuevas herramientas de diagnóstico para detectar CaP tan pronto y tan precisa como sea posible a fin de reducir el número de biopsias mientras que la detección con éxito como muchos casos de CaP como sea posible.
En este estudio, 105 pacientes con valores de PSA por encima de 4,0 ng /ml se sometieron a una biopsia de próstata para descartar la presencia de CaP. Sólo 46 de estos pacientes (44%) fueron finalmente diagnosticados con CaP, mientras que 47 (45%) y 12 (11%) fueron diagnosticados con prostatitis y la HPB, respectivamente. Estos resultados muestran que la detección del CaP basado en PSA como el único indicador para una biopsia de próstata carece de especificidad y conduce a un gran número (59/105; 56%) de intervenciones innecesarias. A pesar de las diferentes estrategias se han desarrollado en un intento de aumentar la especificidad del PSA, incluida la medición de la velocidad del PSA, niveles de cociente PSA libre /total, y el uso de valores de corte específicos para la edad del paciente y el grupo étnico, su fiabilidad clínica no tiene ha confirmado [2], [19]. Nuestro grupo ha demostrado previamente, en un pequeño número de pacientes, que la cuantificación de hTERT mRNA plasma es un método considerablemente sensible y específico para la identificación de CaP y que, cuando se utiliza en combinación con niveles séricos de PSA, es un método eficaz de diagnóstico CaP [16 ]. Por otra parte, en un informe reciente que hemos demostrado que el plasma hTERT mRNA discrimina entre la enfermedad clínicamente localizado y localmente avanzado y es un predictor de recurrencia en pacientes con CaP [20]. Hemos evaluado ahora la exactitud de hTERT mRNA plasma como una herramienta de diagnóstico para la PCa en un mayor número de pacientes y hemos explorado su asociación con las características clinicopatológicas de tumores. También hemos explorado la utilidad de hTERT mRNA de plasma como factor pronóstico de recidiva bioquímica. Los resultados confirman y extienden los de un informe anterior, ya que indican que hTERT mRNA plasma es un marcador no invasivo del tumor que puede ser utilizado para el diagnóstico de CaP, que muestra una sensibilidad más alta (85% vs. 83%), la especificidad (90% vs . 47%), PPV (83% vs. 56%), NPV (92% vs. 77%) y relaciones de LR que el ensayo de PSA. lo que indica que el ensayo hTERT mRNA de plasma tiene un alto poder de discriminación y, por lo tanto, de alto potencial utilidad como prueba de diagnóstico en el diagnóstico del CaP. Algunas asociaciones médicas recomiendan la reducción del punto de corte de PSA de 4,0 ng /ml a 2,5 ng /ml con el fin de aumentar su sensibilidad y por lo tanto detectar más cánceres en una etapa anterior. Para explorar aún más la precisión diagnóstica de la prueba de PSA, elegimos dos valores de PSA que actualmente se utilizan en la práctica clínica (PSA ≥4.0 ng /ml y ≥2.5 ng /ml) y se calculó la sensibilidad, especificidad, VPP y VPN y LR positivo y negativo . Hemos observado cómo la reducción del punto de corte de PSA aumenta la sensibilidad, pero reduce la especificidad y el VPP. En estos puntos de corte para el PSA, el ensayo hTERT de plasma muestra mucho mayor especificidad (85% frente al 8% y 5%), PPV (83% vs. 47% y 46%) y LR positivo (5,99 vs 1,09 y 1,05), pero la sensibilidad similar (91% vs. 100%), NPV (92% vs. 100%) y LR negativo (0,10 vs 0,00) (Tabla 3). Combinación de hTERT mRNA de plasma y PSA no mejora la precisión diagnóstica. Un aumento limitado de la sensibilidad (91% vs. para hTERT 98% para la combinación hTERT /PSA) resulta en la reducción considerable en la especificidad (85% vs. 42%), PPV (83% vs. 57%) y LR + (5,99 frente a 1,69).
multivariante análisis identificó la edad y hTERT mRNA de plasma en el diagnóstico como predictores independientes significativos de CP, mientras que el PSA sérico al momento del diagnóstico, tacto rectal y la ecografía transrectal no eran predictores en este sentido.
Tomados en conjunto, estos resultados indican que el ensayo de hTERT mRNA plasma tiene un alto poder de discriminación y es, por lo tanto, potencialmente útil para el diagnóstico de CaP.
Curiosamente, 5 de los 47 pacientes con prostatitis que se desarrollaron CaP más de un cinco años periodo mostró valores medios más altos de ARNm de hTERT que el resto de su grupo. Este hallazgo proporciona más apoyo a la idea de que el plasma hTERT mRNA tiene implicaciones para el seguimiento y la detección mínima residual de la enfermedad, aunque el número de pacientes de nuestro estudio era demasiado pequeño para extraer conclusiones firmes. Otros autores han publicado resultados similares, informando que el ARN de la telomerasa podría ser útil para el diagnóstico de CaP avanzado y el seguimiento de los pacientes para la detección de enfermedad mínima residual [15]. Debe señalarse que hTERT ARN se ha evaluado a partir de muestras de plasma, por lo tanto la transcripción de hTERT de fuentes no tumorales, tales como los linfocitos activados, no se podía excluir. Por otra parte, la presencia de hTERT mRNA plasma por encima del nivel de corte puede indicar la presencia de células tumorales circulantes, mayor apoyo a la idea de que el análisis cuantitativo de ARN de circulación libre podría ser útil para el diagnóstico y seguimiento de pacientes con CaP y puede tener implicaciones en un mínimo detección de la enfermedad residual.
el mecanismo por el cual el ARN circulante libre de células se libera en el torrente sanguíneo es desconocida, como es la fuente de ARN circulante. Un origen hematopoyético de ARN circulante ha sugerido, aunque la correlación en las mutaciones, alteraciones de microsatélites, la metilación del promotor en el tumor y plasma emparejado /muestras de suero sugiere que el ARN circulante puede originarse a partir de tejido del tumor [21]. los niveles circulantes de ARN libres de células más altas se han encontrado en pacientes con lesiones malignas que en pacientes sin tumores. Sin embargo, altos niveles de ARN de circulación no son cáncer-específica y aumento de los niveles se han encontrado en pacientes con procesos inflamatorios y lesiones benignas. Los informes recientes han correlacionado los niveles de varios marcadores tumorales en plasma /suero con características clínicas y patológicas de la enfermedad que sugiere que el ARN de circulación libre de células puede proporcionar biomarcadores para el diagnóstico de cáncer, el seguimiento de los pacientes después de la cirugía y el seguimiento de la eficacia del tratamiento [22 ].
Uno de los hallazgos más importantes de este estudio es la asociación entre plasmáticos elevados valores de la hTERT mRNA y los parámetros clínico-patológicas de los tumores. Para el conocimiento de los autores, este es el primer informe que muestra que el plasma hTERT mRNA se asocia significativamente con las características del tumor CaP mal pronóstico, como la puntuación de Gleason (p = 0,01), el estadio tumoral (p = 0,004) y vascular (p & lt; 0,001 ) y la invasión perineural (p. & lt; 0,001)
Aunque el número de pacientes que presentan recidiva bioquímica es limitado (sólo siete pacientes), nuestros resultados también indican que el ARNm de hTERT plasma es un factor pronóstico significativo de recurrencia. Kaplan-Meier de supervivencia confirmaron las diferencias significativas entre los grupos para que los pacientes con niveles de mRNA de hTERT de plasma por encima del valor de corte mostraron significativamente menor supervivencia libre de recurrencia que los pacientes con niveles por debajo del valor de corte. Por otro lado, el PSA sérico no es un predictor de recurrencia bioquímica y no se observaron diferencias significativas en el tiempo libre de recurrencia entre los pacientes por encima y por debajo del valor de corte. El análisis multivariado confirmó que el ARNm de hTERT plasma es (junto con el escenario) es un predictor independiente de recurrencia bioquímica mientras que ninguno de los otros factores analizados (incluyendo PSA) mostró una asociación significativa con la recurrencia bioquímica.
Varios autores han reportado resultados similares en otros tipos de cáncer, lo que indica que el ARNm de hTERT plasma puede tener implicaciones pronósticas [12] - [13], [23] - [24]. Miura et al. medido hTERT mRNA y factor de crecimiento epidérmico receptor (EGFR) mRNA en el suero de pacientes con cáncer de pulmón y mostró que hTERT mRNA se asoció independientemente con el tamaño del tumor, el número de tumores, la presencia de metástasis, recurrencia y el tabaquismo. EGFR mRNA correlacionada con pasos clínicos avanzados y ambos marcadores disminuyó significativamente después de la cirugía [12]. Los mismos autores demostraron que el suero hTERT mRNA es útil para el diagnóstico de los cánceres ginecológicos. Estos pacientes muestran ARNm de hTERT suero más alta que aquellos pacientes con enfermedades benignas e individuos sanos. Serum hTERT mRNA correlacionó de forma independiente con el estadio clínico, CA125 y los parámetros histológicos en el cáncer de ovario [22]. Terrin et al. mostró que hTERT mRNA plasma es un marcador útil para la detección y el seguimiento de carcinoma de colon [17]
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Además de la actividad de la telomerasa, las células de cáncer humano también pueden utilizar un mecanismo de telomerasa-independiente llamada alargamiento alternativo de los telómeros (ALT). Aunque el mecanismo ALT es relativamente común en sarcomas y astrocitomas, nunca se ha informado en CaP. Heaphy et al. han evaluado 1.176 tejidos PCA (incluyendo tanto los adenocarcinomas y carcinomas de células pequeñas) y no encontró un solo ALT-positivo tumores [25] que indica que el mecanismo de ALT no es utilizado por las células de CaP para mantener sus telómeros. En consecuencia, el ensayo de ARNm de hTERT de plasma debe detectar todos los casos de CaP.
Varios nuevos biomarcadores presentes en los fluidos biológicos se encuentran en evaluación para determinar su potencial en la detección temprana y el pronóstico del CP. Altimari et al. mostró que el ADN de hTERT que circula libre en plasma es mayor en pacientes con CaP que en los sujetos de control y se correlaciona con el estadio del tumor. Los autores concluyen que el ADN libre en plasma hTERT es un prometedor biomarcador para el diagnóstico precoz y el seguimiento de CaP [26].