Extracto
Antecedentes
La mediana de supervivencia es de 10 meses y 2 años de supervivencia es del 20% en el cáncer de pulmón de células no pequeñas metastásico (CPNM) tratados con quimioterapia basada en platino. Una pequeña fracción de los cánceres de pulmón de células no escamosas albergan mutaciones de EGFR, con un mejor resultado a gefitinib y erlotinib. La evidencia experimental sugiere que la sobreexpresión BRCA1 aumenta la sensibilidad a docetaxel y la resistencia al cisplatino. RAP80 y Abraxas interactúan las proteínas que forman complejos con BRCA1 y podrían modular el efecto de BRCA1. Con el fin de examinar más a fondo el efecto de las mutaciones de EGFR y los niveles de ARNm de BRCA1 en el resultado en NSCLC avanzado, se realizó un ensayo clínico prospectivo, no aleatorizado de fase II, poniendo a prueba la hipótesis de que la terapia personalizarse conferiría un mejor resultado sobre el tratamiento no personalizado. En un análisis exploratorio, que también examinó el efecto de los niveles de ARNm y RAP80 Abraxas.
Metodología /Principales conclusiones
Nos trataron 123 pacientes con carcinoma metastásico de pulmón de células no escamosas utilizando un enfoque personalizado. ARN y el ADN se aislaron a partir de muestras de tejido microdissected tumor incrustado en parafina. Los pacientes con mutaciones de EGFR fueron tratados con erlotinib, y los que no tienen mutaciones de EGFR recibieron quimioterapia con o sin cisplatino en función de sus niveles de ARNm de BRCA1: bajo, cisplatino y gemcitabina; intermedia, cisplatino y docetaxel; alta, docetaxel solo. Un análisis exploratorio examinó RAP80 y Abraxas expresión. La mediana de supervivencia de 28 meses superó por 12 pacientes con mutaciones de EGFR, y fue de 11 meses para 38 pacientes con baja BRCA1, 9 meses para 40 pacientes con BRCA1 intermedia, y 11 meses para los 33 pacientes con alta BRCA1. Dos años de supervivencia fue de 73,3%, 41,2%, 15,6% y 0%, respectivamente. La mediana de supervivencia fue influenciado por la expresión de RAP80 en los tres grupos de BRCA1. Por ejemplo, para los pacientes con baja tanto BRCA1 y baja RAP80, la supervivencia media supera los 26 meses. RAP80 fue un factor importante para la supervivencia en pacientes tratados de acuerdo con los niveles de BRCA1 (cociente de riesgos instantáneos [IC del 95%, 1-1,7] 1,3; p = 0,05).
Conclusiones /Importancia
La quimioterapia personalizada de acuerdo a los niveles de expresión de BRCA1 se asocia con un excelente medio de supervivencia y de 2 años para algunos subgrupos de pacientes con CPNM, y RAP80 podrían desempeñar un efecto modulador fundamental en este modelo de la quimioterapia personalizada.
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ClinicalTrials.gov NCT00883480
Visto: Rosell R, Pérez-Roca L, Sánchez JJ, Cobo M, T Moran, Chaib I, et al. (2009) brinda un servicio personalizado en no pequeñas de pulmón de células de cáncer basados en mutaciones del EGFR y la expresión de ARNm de BRCA1. PLoS ONE 4 (5): e5133. doi: 10.1371 /journal.pone.0005133
Editor: Mikhail V. Blagosklonny, Instituto de Investigaciones Ordway, Estados Unidos de América
Recibido: 1 de diciembre de 2008; Aceptó 3 de marzo de 2009; Publicado: 5 Mayo 2009
Derechos de Autor © 2009 Rosell et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio recibió el apoyo parcial de Redes de cáncer, España (RD06 subvención /0020/0056). La fuente de financiación no participó en la recopilación, análisis e interpretación de los datos, la redacción del informe, o la decisión de presentar para su publicación
Conflicto de intereses:. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia.
Introducción
La mediana de supervivencia de los pacientes con cáncer de pulmón no microcítico avanzado o metastásico (CPNM) es de sólo 10-11 meses, ya sea con la quimioterapia estándar basada en cisplatino [1], [ ,,,0],2] o la quimioterapia basada en cisplatino personalizado basado en reparación por escisión de complementación cruzada 1 (ERCC1) la expresión del ARNm, [3] y la tasa de supervivencia de dos años es sólo 14-21%. [1], [2], [3]
Los dos proto-oncogenes conocidos actualmente para ser más comúnmente mutado en el adenocarcinoma de pulmón son K-RAS y EGFR [4]. cánceres pulmonares causadas por la activación de mutaciones en el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) - principalmente ya sea deleción en el exón 19 o la mutación L858R en el exón 21 - responden a inhibidores de tirosina quinasa de molécula pequeña (gefitinib y erlotinib), [5], [6], [7] con un informó recientemente la supervivencia media a gefitinib de 17,5 meses. [8] la tasa de respuesta fue del 90% en nuestras mutaciones examinar EGFR ensayo retrospectivo en pacientes tratados con gefitinib, [9] y los datos agrupados de los ensayos prospectivos de gefitinib en pacientes con mutaciones de EGFR mostraron una tasa de respuesta del 80%. [10] sin embargo, no hay mutaciones de EGFR se encontraron en 454 pacientes con carcinoma de células escamosas del pulmón. [11]
un creciente cuerpo de evidencia indica que el cáncer de mama gen de susceptibilidad al 1 (BRCA1) confiere sensibilidad a la apoptosis inducida por drogas antimicrotúbulos (paclitaxel y vincristina), pero induce resistencia a los agentes que dañan el ADN (cisplatino y etopósido) y radioterapia. [12], [13], [14], [15] estos hallazgos preclínicos son compatibles con una variedad de modelos experimentales de mama y células de cáncer de ovario: la expresión inducible de BRCA1 mayor sensibilidad paclitaxel; [16] una interferencia corto inactivación mediada por RNA de BRCA1 endógeno llevó a paclitaxel y docetaxel resistencia; [17 ], [18], [19] y la reconstitución de las células BRCA1 deficiente de tipo salvaje BRCA1 mayor sensibilidad a paclitaxel y vinorelbina. [17] Este diferencial de efecto de la expresión de BRCA1 mRNA de modulación también se observó en las células tumorales aisladas de derrames malignos de CPNM y pacientes con cáncer gástrico, donde los niveles de BRCA1 ARNm correlacionados negativamente con la sensibilidad a cisplatino y positivamente con la sensibilidad docetaxel [20] en dos estudios retrospectivos -. en NSCLC [21] y el cáncer de ovario [19] pacientes - encontraron que los niveles bajos o intermedios BRCA1 mRNA correlacionaron con una supervivencia significativamente mayor después de la quimioterapia basada en platino, [19], [21] mientras que la supervivencia en los pacientes con mayor expresión de BRCA1 se incrementó después de la quimioterapia basada en taxanos. [19]
BRCA1 es reclutado para los sitios de ADN roturas, que juegan un papel central en la reparación del ADN y en el control de punto de control del ciclo celular. La unión del mediador del daño de ADN de control 1 proteína (MDC1) a la cola fosforilada de la histona H2AX facilita la formación de BRCA1 focos nucleares en rupturas de doble hebra. [22] La proteína asociada al receptor 80 (RAP80) actúa aguas arriba de los genes BRCA1 y se requiere para la acumulación de BRCA1 a los sitios de roturas en el ADN. [23], [24], [25] Abraxas recluta RAP80 para formar un complejo con BRCA1. Tanto Abraxas y RAP80 son necesarios para reparar el daño del ADN y las células agotadas de Abraxas o RAP80 hipersensibilidad exposición a la radiación. [23]
Con el fin de examinar si la personalización de tratamiento podría mejorar los resultados en pacientes con CPNM avanzado, hemos realizado un ensayo prospectivo no aleatorio de fase II del tratamiento personalizado basado en el estado de mutación EGFR y los niveles de expresión de ARNm de BRCA1. Nos decidimos a limitar la inscripción para el carcinoma de células no escamosas con el fin de maximizar la oportunidad de administrar erlotinib en pacientes con mutaciones de EGFR. Los pacientes con la deleción del exón 19 o el erlotinib mutación L858R recibida, mientras que los de tipo salvaje EGFR recibieron quimioterapia basada en los niveles de BRCA1: aquellos con bajos niveles recibieron cisplatino y gemcitabina; aquellos con niveles intermedios recibieron cisplatino y docetaxel; y los que tienen niveles altos recibieron docetaxel solo. En un análisis exploratorio, que también examinó el efecto de los niveles de ARNm y RAP80 Abraxas en estos pacientes.
Resultados
Los pacientes
Entre marzo de 2005 y julio de 2007, un total de 123 pacientes procedentes de 25 centros fueron incluidos en el estudio (Figura 1). Se excluyeron Treinta y cinco pacientes: 3 pacientes no tenían células tumorales en la biopsia; 5 pacientes tenían menos de 50 células tumorales en la biopsia, lo que hace imposible para asegurar resultados correctos; 19 pacientes eran de tipo salvaje EGFR pero con suficiente muestra de tumor después de la evaluación de EGFR para el análisis de la expresión de los genes BRCA1; 2 pacientes se negaron a participar; y 6 pacientes fueron retirados por su médico debido a factores clínicos no relacionados con el estudio. Para todos los 123 pacientes, el aislamiento de ARN y la amplificación PCR tuvieron éxito. En promedio, los resultados de los análisis genéticos estaban disponibles en 8 días (rango, 6-11 días). La mediana del número de ciclos de quimioterapia administradas en los grupos BRCA1 fue de 5 (rango, 1,8). La mediana de seguimiento fue de 8 meses (rango, 1-28 meses). Doce pacientes tenían mutaciones de EGFR y fueron asignados a recibir erlotinib (grupo EGFR). De los 111 pacientes con EGFR de tipo salvaje, 38 estaban en el tercil más bajo de expresión de BRCA1 y fueron asignados a recibir cisplatino y gemcitabina (grupo bajo BRCA1), 40 estaban en el tercil intermedio y fueron asignados a recibir cisplatino y docetaxel (BRCA1 intermedia grupo), y 33 estaban en el tercil más alto y fueron asignados a recibir docetaxel solo (grupo alto BRCA1) (Figura 1).
Entre marzo de 2005 y julio de 2007, se inscribieron un total de 123 pacientes procedentes de 25 centros en el estudio. Las razones para el retiro del paciente: 3 pacientes tenían células tumorales en la biopsia; 5 pacientes tenían menos de 50 células tumorales en la biopsia, lo que hace imposible para asegurar resultados correctos; 19 pacientes eran de tipo salvaje EGFR pero con suficiente muestra de tumor después de la evaluación de EGFR para el análisis de la expresión de los genes BRCA1; 2 pacientes se negaron a participar; y 6 pacientes fueron retirados por su médico debido a factores clínicos no relacionados con el estudio. Los dos pacientes en el grupo de EGFR que no fueron evaluables para respuesta murieron dentro de un mes de entrar en el estudio; los 13 pacientes en el BRCA1 que no fueron evaluables para la respuesta recibida & gt;. 3 ciclos de tratamiento
Las características clínicas de los cuatro grupos se muestran en la Tabla 1 y en la Tabla S1. La mediana de edad para todos los pacientes fue de 60 años. Proporcionalmente más mujeres que hombres estaban en el tercil más bajo de expresión de BRCA1. mutaciones de EGFR se observaron con mayor frecuencia en los no fumadores (p = 0,03) y hembras (P = 0,0001). Cincuenta y cinco por ciento de los pacientes tenían un estado funcional de 1, y el 83% tenía enfermedad en estadio IV. El diecisiete por ciento de los pacientes tenían metástasis cerebrales. Los pacientes con mutaciones de EGFR tenían una mediana de dos sitios de metástasis, en comparación con un sitio en pacientes con EGFR de tipo salvaje (Tabla S2).
La tasa de respuesta global fue del 90% para el grupo de EGFR, 25 % para el grupo de bajo BRCA1, 45,7% para el grupo BRCA1 intermedio, y 41,9% para el grupo BRCA1 alta (Tabla 2). En el análisis por intención de tratar, la tasa de respuesta fue del 75% para el grupo de EGFR, el 21,1% para el grupo BRCA1 baja, del 40% para el grupo BRCA1 intermedia, y el 39,4% para el grupo de alto BRCA1 (Tabla 2).
no se alcanzó la mediana de supervivencia, pero superó los 28 meses para el grupo de EGFR, en comparación con los 10 meses (IC del 95%, 8,5 a 15-5) para los pacientes en los tres grupos BRCA1. supervivencia de dos años para los pacientes en el grupo de EGFR fue del 73,3% y para todos los pacientes en los grupos de BRCA1 fue 26,7%. Para los pacientes en el grupo BRCA1 baja, mediana de supervivencia fue de 11 meses (IC 95%, 1,1 a la 20,9) y 2 años de supervivencia fue de 41,2%. Para aquellos en el grupo de BRCA1 intermedia, la supervivencia media fue de 9 meses (IC del 95%, 05/04 a 12/06) y 2 años de supervivencia fue de 15,6%. Para los pacientes en el grupo de alto BRCA1, la mediana de supervivencia fue de 11 meses (IC 95%, 8.2 a la 13.8) corresponde y 2 años de supervivencia fue del 0% (Tabla 2, Figura 2).
No se alcanzó mediana de supervivencia para 12 pacientes en el grupo de EGFR, 11 meses para 38 pacientes en el grupo BRCA1 baja, 9 meses para 40 pacientes en el grupo BRCA1 intermedia, y 11 meses para 33 pacientes en el grupo de alto BRCA1 (P = 0,01) (véase la Tabla 2) .
la mediana del tiempo hasta la progresión fue de 13 meses (IC 95%, 7.7 a 18.3) en el grupo de EGFR, frente a los 6 meses (IC 95%, 4.7 a 7.2) para los pacientes en los tres BRCA1 grupos. Para los pacientes en los grupos de baja y media BRCA1, tiempo hasta la progresión fue de 5 meses (IC del 95%, 2,7 a 7.3). Para los pacientes en el grupo de alto BRCA1, tiempo hasta la progresión fue de 8 meses (IC 95%, 5,1 a 10.9) (Tabla 2, Figura S1).
transcripciones de ARNm RAP80 y Abraxas
Sobre la base de los resultados de los modelos experimentales [23], [24], [25], un análisis exploratorio de la relación entre los genes BRCA1, RAP 80 y la expresión Abraxas ARNm se llevó a cabo en 86 de 111 pacientes sin mutaciones de EGFR para los que se obtuvo el tejido tumoral suficiente. Características de los pacientes para estos 86 pacientes fueron similares a los de los 111 pacientes; significativamente más mujeres que hombres tenían BRCA1 expresión baja (P = 0,009). La respuesta fue significativamente mayor en los pacientes con niveles de BRCA1 intermedio y alto (P = 0,004). (Tabla S3). Se encontró una correlación estrecha entre el BRCA1 y el PAR 80 niveles (ρ = 0,27; p = 0,02) y entre RAP 80 y los niveles de Abraxas (ρ = 0,41; p & lt; 0,001), pero no entre BRCA1 y niveles Abraxas (ρ = 0,10; P = 0,39).
La mediana de supervivencia fue influenciado por los niveles de RAP 80. En los pacientes con bajos niveles de BRCA1, no se alcanzó la mediana de supervivencia en pacientes con bajos niveles de RAP 80, mientras que fue de 8 meses para los pacientes con dolor abdominal intermedia 80 y 7 meses para aquellos con alta PAR 80 (Tabla 3, Figura 3). En los pacientes con niveles intermedios de BRCA1, la supervivencia media fue de 5 meses en pacientes con niveles bajos RAP 80, mientras que fue de 13 meses para los pacientes con RAP intermedia 80 niveles y 16 meses para aquellos con alta RAP 80 niveles. En los pacientes con altos niveles de BRCA1, la supervivencia media fue de 6 meses en pacientes con baja RAP 80 niveles, 12 meses en pacientes con niveles intermedios RAP80, y 11 meses para aquellos con alta RAP 80 niveles (Tabla 3).
no se alcanzó la mediana de supervivencia de 11 pacientes con bajos niveles de RAP 80, 8 meses para los 9 pacientes con 80 niveles RAP intermedia, y 7 meses por 5 pacientes con alta RAP 80 niveles (P = 0,006).
en los pacientes con bajos niveles de BRCA1, el tiempo hasta la progresión fue de 14 meses en los pacientes con niveles bajos RAP 80, mientras que fue de 4 meses para los pacientes con niveles de RAP80 intermedios y 6 meses para aquellos con altos niveles de PAR 80 (Tabla 4, Figura S2). En los pacientes con niveles intermedios de BRCA1, el tiempo hasta la progresión fue de 4 meses en los pacientes con bajos niveles de RAP 80, mientras que fue de 9 meses para los pacientes con RAP intermedia 80 niveles y 6 meses para aquellos con alta RAP 80 niveles. En los pacientes con altos niveles de BRCA1, el tiempo hasta la progresión fue de 2 meses en pacientes con baja RAP 80 niveles, 10 meses en pacientes con niveles de 80 RAP intermedia, y 4 meses para aquellos con alta RAP 80 niveles (Tabla 4).
se obtuvieron resultados similares cuando la mediana de supervivencia y tiempo hasta la progresión se compararon de acuerdo con los niveles de expresión de ARNm de Abraxas (Tablas S4 y S5). Un análisis exploratorio multivariado en los 86 pacientes, con el uso de un modelo de riesgos proporcionales de Cox, identificado estado funcional ECOG y el PAR 80 como variables significativas para la supervivencia (cocientes de riesgos: estado de funcionamiento 1, 2,72, p = 0,005; RAP 80, 1.3 ; P = 0,05) (Tabla S6). La supervivencia no fue influenciado por otras características clínicas, los tipos de metástasis, la quimioterapia de segunda línea (36 pacientes), o los niveles de Abraxas. El modelo de Cox para el tiempo hasta la progresión también mostró que sólo el estado funcional y el PAR 80 fueron variables significativas (Tabla S7).
Discusión
Las mutaciones en el dominio tirosina quinasa de EGFR induce adenocarcinoma de pulmón en ratones [ ,,,0],26] y una respuesta favorable al gefitinib de primera y de segunda línea y erlotinib en CPNM avanzado. [7], [8] en el presente estudio, la supervivencia media de 28 meses supera en 12 pacientes con mutaciones de EGFR tratados con erlotinib, con una mediana tiempo hasta la progresión de 13 meses y una supervivencia de dos años del 73,3%; estos resultados son similares a los resultados de un meta-análisis de ensayos prospectivos con gefitinib en pacientes con mutaciones de EGFR. [10] La mediana de supervivencia fue de 11 meses en los pacientes con la expresión de BRCA1 más bajo, tratados con cisplatino y gemcitabina, y la supervivencia de dos años fue del 41,2%, que se compara favorablemente con la mediana de supervivencia y de dos años alcanzado con gemcitabina más cisplatino o pemetrexed más cisplatino (10,3 meses y el 22%) en un ensayo aleatorizado reciente. [2] en los pacientes con la más alta expresión de BRCA1, se trató con docetaxel solo, la mediana de supervivencia fue de 11 meses, idéntica a la obtenida en un gran estudio de fase III en pacientes tratados con docetaxel más cisplatino. [1] sin embargo, en nuestro estudio, ningún paciente estaba vivo a los dos años, mientras que en el ensayo de fase III , la supervivencia de dos años fue del 21% [1] Curiosamente, 11 pacientes con la menor expresión de ambos genes BRCA1 y el PAR 80 tuvieron un resultado similar a la alcanzada por los pacientes con mutaciones de EGFR tratados con erlotinib:. no se alcanzó y el tiempo de supervivencia media progresión fue de 14 meses (Tabla 3, Figura 3) respuesta .Chemotherapy se basa sólidamente en el hecho de que los genes de reparación del ADN requieren una serie de pasos de reconocimiento molecular que permiten a las proteínas de respuesta al daño de ADN para localizar en y cerca de las lesiones del ADN. La unión del mediador de la proteína ADN daños puesto de control 1 (MDC1) a la cola fosforilada de la histona H2AX (γH2AX) facilita la formación de focos nucleares en BRCA1 doble filamento se rompe inducidas por irradiación o quimioterapia. Por dimerizar con la proteína BRCA1 dominio RING-asociado (BARD1) a través del anillo de dominio, BRCA1 forma una ubiquitina ligasa E3. Recientemente, se ha demostrado que la RAP 80 objetivos de la ligasa BRCA1-BARD1 E3 a las proteínas de ubiquitina lisina 63 enlaces-MDC1-γH2AX-dependientes en roturas de la doble hebra (revisado en Wang & amp; Elledge [27]). Tres estudios mostraron que la derogación de la RAP 80 reduce la formación de focos BRCA1 inducida al 28%, [23] 2% [24] y 0%. [25] Por otra parte, Abraxas y el PAR 80 la formación de focos es BRCA1-independiente. [ ,,,0],23] por lo tanto, la hipótesis de que si RAP 80 fue elevado, podría causar resistencia a la quimioterapia basada en cisplatino, incluso en presencia de bajos niveles de BRCA1. La evaluación exploratoria de RAP 80, en el presente estudio confirma su efecto modulador sobre el modelo BRCA1 personalizado. Por ejemplo, la mediana de supervivencia en pacientes con la expresión de BRCA1 más bajo disminuyó a medida que aumentó la expresión de PAR 80: 8 meses con RAP intermedia 80 niveles y 7 meses de gran RAP 80 niveles (Tabla 3). La sobreexpresión de los genes BRCA1 confiere sensibilidad a docetaxel y paclitaxel; [12], [17], [19], [20] los pacientes con los niveles más altos de BRCA1, tratados con docetaxel, había una supervivencia media de 11-12 meses cuando la expresión era RAP80 también alto, pero sólo 6 meses, cuando RAP 80 expresión fue baja (Tabla 3). Los pacientes con niveles intermedios de BRCA1, se trató con cisplatino más docetaxel, tenían una mediana de supervivencia global de 9 meses, que aumentó a 13-16 meses cuando RAP 80 niveles eran intermedia o alta (Tabla 3). Estos resultados se pueden explicar por los hallazgos preclínicos que RAP 80 es capaz de trasladar al focos inducida por irradiación en HCC1937 células que expresan un BRCA1 truncado que no es capaz de migrar a focos nucleares. [28] Esto indica que RAP 80 podría sustituir a la BRCA1 función de reparación del ADN en las células que carecen de los genes BRCA1. Por lo tanto, aunque diferentes dobletes de platino muestran la misma [29] - o ligeramente diferentes [2] - la supervivencia general, las diferencias podrían encontrarse al personalizar la quimioterapia basada en un modelo de BRCA1 y el PAR 80.
En el presente estudio , no se encontró correlación entre la expresión de los genes BRCA1 y Abraxas ARNm. Sin embargo, hubo una indicación de que los niveles de expresión de Abraxas modular el efecto de BRCA1. Por ejemplo, los pacientes con la expresión BRCA1 más baja, tratados con cisplatino y gemcitabina, alcanzaron una supervivencia media de 18 meses y el tiempo de progresión de 11 meses cuando los niveles de Abraxas fueron bajos (Tabla S4).
Además de la potencial papel predictivo de BRCA1, la sobreexpresión BRCA1 confiere el comportamiento agresivo en modelos transgénicos de células pequeñas y carcinomas de pulmón de células escamosas, así como en un subconjunto de los adenocarcinomas de pulmón que albergan el intrínseca firma cáncer T /t-antígeno. [30] pronóstico pobre tiene también ha asociado con la sobreexpresión de los genes BRCA1 en CPCNP en estadio temprano. [31] en el presente estudio, la supervivencia de dos años fue del 41% en pacientes con los niveles más bajos de BRCA1, el 16% en aquellos con niveles intermedios y 0% en aquellos con los niveles más altos.
Los mecanismos de la sobreexpresión de los genes BRCA1 o regulación a la baja en el CPNM se tienen que aclarar. Sin embargo, recientemente se ha demostrado que el ADN se rompe rápidamente activan la proteína heterocromatina 1-β (HP1-β), que promueve la fosforilación de la histona H2AX, iniciando el conjunto de señalización para la reparación del ADN BRCA1. [32] Curiosamente, la caseína quinasa 2 promueve la movilización de HP1-β y se asocia con un mal pronóstico en NSCLC. [33] Si bien se observa la metilación BRCA1 en el cáncer de mama ductal, que sólo se encuentra en 4% de NSCLC. [34] baja expresión de BRCA1 en los tumores puede ser debido a la pérdida de metiltransferasas de histonas, lo que conduce a una disminución de la metilación de H3 en la lisina 9 de la cromatina, con la consiguiente regulación a la baja de HP1-β [35].
en este estudio no aleatorizado de fase II, el factor genético y la diferencia de tratamiento son totalmente co-existente, y se debe tener precaución al interpretar los resultados. Sin embargo, el análisis exploratorio indica que existe alguna evidencia para la adaptación de la quimioterapia basada en los genes BRCA1 y el PAR 80 niveles. Por otra parte, en un estudio reciente de pacientes con CPNM IV 96 etapa tratados con docetaxel y gemcitabina, se observó que los niveles de ARNm de BRCA1 aumentaron, la probabilidad de respuesta aumenta y el riesgo de progresión disminuido. Para los pacientes con los niveles de BRCA1 más altos, la tasa de respuesta fue del 58,6%, en comparación con 13,8% para aquellos con niveles intermedios y del 27,6% para los que tienen los niveles más bajos. [36] Sobre la base de estos resultados y los del presente estudio, la española Grupo de pulmón el cáncer es ahora la modificación del protocolo de un ensayo internacional de fase III prevista en NSCLC avanzado para incluir la personalización basada en la RAP 80, así como la expresión de ARNm de BRCA1. Los pacientes en el grupo de control recibirán cisplatino más docetaxel y aquellos en el grupo experimental recibirá quimioterapia basada en RAP 80 y los niveles de ARNm de BRCA1: baja RAP 80 niveles (independientemente de los niveles de BRCA1), cisplatino y gemcitabina; intermedio o alto RAP 80 y bajo o intermedio BRCA1, cisplatino y docetaxel; intermedio o alto RAP 80 y de alta BRCA1, docetaxel solo
Materiales y Métodos
El protocolo para este ensayo está disponible como información de apoyo.; véase el Protocolo S1 y S2 Protocolo.
Declaración de Ética
El protocolo fue aprobado por el comité de ética de revisión institucional de cada centro, y todos los pacientes otorgaron su consentimiento informado por escrito antes de la inscripción.
Los pacientes
reclutó a los pacientes a este ensayo de fase II multicéntrico prospectivo basado en la detección de mutaciones de EGFR, seguido de análisis de la expresión de ARNm de BRCA1 en el tejido tumoral incluido en parafina. elegibilidad clínica incluyó en estadio IIIB con derrame pleural o CPCNP en estadio IV, enfermedad medible por criterios de evaluación de respuesta en tumores sólidos (RECIST), el estado funcional de 0-2 por los criterios del Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG), hematológica adecuada, la función renal y hepática. Se permitió metástasis cerebrales. Los pacientes con tumores de células escamosas, la terapia sistémica para el CPNM avanzado, u otros cánceres clínicamente significativos dentro de cinco años no eran elegibles
Los pacientes con mutaciones de EGFR -. Ya sea la deleción del exón 19 o la mutación L858R - recibió 150 mg de erlotinib diaria oral de forma continua hasta avance de los efectos adversos intolerables. Cada ciclo fue de 28 días. Los pacientes con EGFR de tipo salvaje recibieron quimioterapia personalizarse basándose en los niveles de ARNm de BRCA1. Los pacientes en el tercil más bajo de expresión de BRCA1 recibieron 75 mg /m
2 el día 1 y gemcitabina 1250 mg /m
2 en los días 1 y 8. Los pacientes en el tercil intermedio recibieron 75 mg /m
2 el día 1 y docetaxel 75 mg /m
2 el día 1. los pacientes en el tercil más alto recibieron docetaxel 75 mg /m
2 el día 1. Toda la quimioterapia se repitió cada tres semanas durante un máximo de seis ciclos a menos que hubiera evidencia más temprana de la progresión de la enfermedad o efectos adversos intolerables.
Base de evaluación incluyó una historia clínica, el examen físico y las medidas del tumor de lesiones palpables, así como las lesiones evaluadas por tomografía computarizada. El método de evaluación de referencia se repitió cada dos ciclos, y luego cada seis semanas hasta la progresión de la enfermedad.
Molecular
analiza
recogida de tejido tumoral y microdisección de captura por láser.
BRCA1, RAP80 y Abraxas de expresión génica y mutaciones de EGFR se analizaron en el ARN y el ADN aislado a partir de tejidos tumorales embebidos en parafina. Para cada muestra de tumor una rebanada teñida con hematoxilina /eosina se analizó por nuestro patólogo para seleccionar el área del tumor. Dos cortes de 5 micras se montaron en portaobjetos especiales (PEM-membrana diapositivas, Palm, Oberlensheim, Alemania) para la captura microdissection láser (CAPmover Microdissector, Carl Zeiss MicroImaging, Barcelona, España) para garantizar un mínimo de 90% de las células tumorales. Un portaobjetos se utiliza para el aislamiento de ARN y el segundo se usó para el aislamiento de ADN. Análisis
expresión génica.
análisis de la expresión de genes se realizó en ARN aislado de las muestras de tejido tumoral. El ADNc se sintetizó usando la enzima retrotranscriptasa M-MLV. Molde de cDNA se añadió a Taqman Universal Master Mix (AB; Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.) con cebadores específicos y sondas para cada gen (Tabla S8). Los conjuntos de cebadores y sondas fueron diseñados utilizando Primer Express 2.0 Software (AB) y las secuencias de RefSeq (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=gene). La cuantificación de la expresión génica se realizó utilizando el sistema de detección de secuencias ABI Prism 7900HT (AB).
análisis de mutaciones de EGFR.
Para el aislamiento de ADN a partir de tejido microdissected, el material se incubó con proteinasa K y se extrajo el ADN con fenol-cloroformo y precipitación con etanol. Los cebadores para la amplificación por PCR en las reacciones anidadas para los exones 19 y 21 de EGFR se muestran en la información de apoyo. Las mutaciones se analizaron mediante dos métodos:. Secuenciación de ADN y análisis de la longitud de la etiqueta fluorescente productos de PCR para las deleciones en el exón 19 de EGFR, y de secuenciación y 'ensayo de actividad nucleasa 5 (TaqMan) para la mutación de EGFR en el exón 21 (L858R)
(para más detalles sobre el análisis molecular, véase el texto S1).
el análisis estadístico
los pacientes fueron divididos en grupos basados en terciles de expresión de BRCA1 ya que esta división es menos susceptible al sesgo en múltiples comparaciones. Los puntos de corte para los terciles BRCA1 se obtuvieron de la base de datos española de pulmón Cancer Group, que incluye características clínicas y genéticas de más de 600 pacientes con cáncer de pulmón en España. Las respuestas se registran de acuerdo con los criterios RECIST. La mediana del tiempo hasta la progresión y la supervivencia global se calcula a partir del inicio del tratamiento hasta la primera progresión de la enfermedad o la muerte documentada, respectivamente.
Con el fin de comparar las variables cuantitativas entre los pacientes en cada uno de los grupos de tratamiento, para explorar las asociaciones entre variables dentro de cada grupo, y para estudiar la posible asociación entre las características basales y la respuesta, que utilizaron pruebas paramétricas (t-test o ANOVA de Student) o sus pruebas no paramétricas equivalentes (u de Mann-Whitney, Kruskall Wallis) cuando la normalidad no se mantuvo . La normalidad de las variables continuas se comprobó con la prueba de Kolmogorov-Smirnov. Con el fin de comparar las variables categóricas y porcentajes de respuesta con su IC del 95% entre los grupos de tratamiento, se utilizó cualquiera de las pruebas exacta de Fisher de dos caras o la prueba de Chi-cuadrado.
La asociación de factores de riesgo con el tiempo a -Evento criterios de valoración se analizaron con la prueba de rango logarítmico de dos caras, y el método de Kaplan-Meier se utilizó para trazar el tiempo hasta la progresión y las curvas de supervivencia correspondiente. Se utilizó un análisis de regresión de Cox univariante, con proporciones de riesgo y su IC del 95% para evaluar la asociación entre cada posible factor pronóstico y la supervivencia y el tiempo hasta la progresión. Estos factores se incluyen luego en un modelo de regresión de riesgos proporcionales de Cox multivariado para evaluar la importancia de cada variable independiente sobre la supervivencia y el tiempo de progresión. Se utilizó la prueba de razón de verosimilitud para evaluar la bondad de ajuste, y se utilizó el test de Wald para evaluar el coeficiente de importancia. Para posibles comparaciones múltiples, los valores de p se corrigieron con la corrección de Bonferroni.
Ochenta y seis de los 111 pacientes sin mutaciones de EGFR para los que se dispone se incluyeron tejido tumoral suficiente en un sub-análisis exploratorio de la relación entre BRCA1, RAP80 y expresión Abraxas. Se utilizó la prueba de rangos de Spearman para evaluar la correlación entre BRCA1, RAP80 y la expresión de ARNm ABRAXAS.
Todos los cálculos estadísticos se realizaron con el paquete estadístico informático SPSS, versión 15.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL, EE.UU.) y S-PLUS 6.1. los valores de p de dos caras de menos de 0,05 se consideraron significativos.
Apoyo a la Información
Texto S1.
texto suplementario
doi: 10.1371 /journal.pone.0005133.s001 gratis (DOC 0,04 MB)
Tabla S1.
características clinicopatológicas, los niveles de expresión génica, el estado de mutación del EGFR, y los resultados para todos los pacientes
doi: 10.1371 /journal.pone.0005133.s002 gratis (XLS 0.07 MB)
Tabla S2.
Tipos de metástasis
doi: 10.1371 /journal.pone.0005133.s003 gratis (DOC 0,05 MB)
cuadro S3.
Características de los 86 pacientes en los que RAP 80 y Abraxas se analizaron
doi: 10.1371 /journal.pone.0005133.s004 gratis (0.07 MB DOC) sobre Table S4.
La mediana de supervivencia de acuerdo a los niveles de BRCA1 y Abraxas
doi: 10.1371 /journal.pone.0005133.s005 gratis (DOC 0,03 MB) sobre Table S5.
tiempo hasta la progresión según los niveles de BRCA1 y Abraxas
doi: 10.1371 /journal.pone.0005133.s006 gratis (DOC 0,03 MB) sobre Table S6.
modelo multivariante para la supervivencia de los genes BRCA1 y el PAR 80 como variables continuas
doi: 10.1371 /journal.pone.0005133.s007 gratis (DOC 0,03 MB)
Tabla S7.
modelo multivariante para el tiempo hasta la progresión con el BRCA1 y el PAR 80 como variables continuas
doi: 10.1371 /journal.pone.0005133.s008 gratis (DOC 0,03 MB)
Tabla S8.
Los cebadores y sondas utilizadas en la expresión de genes análisis
doi: 10.1371 /journal.pone.0005133.s009 gratis (DOC 0,04 MB)
Figura S1.
tiempo hasta la progresión según el grupo de tratamiento. Tiempo hasta la progresión fue de 13 meses en el grupo de EGFR, 5 meses en los grupos de baja y media BRCA1 y 8 meses en el grupo de alto BRCA1 (véase la Tabla 2)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0005133.s010
(8.92 MB TIF)
figura S2.
tiempo hasta la progresión en los pacientes del grupo BRCA1 baja de acuerdo con RAP 80 niveles de expresión. Tiempo hasta la progresión fue de 14 meses para los pacientes con bajos niveles de RAP 80, 4 meses para aquellos con niveles intermedios RAP 80, y 6 meses para aquellos con alta RAP 80 niveles (ver Tabla 4)
doi:. 10.1371 /journal.pone .0005133.s011 gratis (10.31 MB TIF)
Protocolo S1. Protocolo de ensayo
doi: 10.1371 /journal.pone.0005133.s012 gratis (1.12 MB PDF)
Protocolo S2.