Extracto
Antecedentes
Hay poca información acerca de los mecanismos por los cuales los miRNAs contribuyen a la carcinogénesis pulmonar. El presente estudio se realizó para examinar la expresión y función de miRNAs inducidos por el humo del cigarrillo condensado (CSC) en las células epiteliales de pulmón y cáncer de las vías respiratorias humanas normales.
Metodología
Micro-array y cuantitativa RT- PCR (qRT-PCR) técnicas se utilizaron para evaluar la expresión de genes miARN y huésped en células cultivadas, y los especímenes quirúrgicos. El análisis guiado por el software, el ARN reticular inmunoprecipitación (CLIP), 3 'UTR reportero ensayos de luciferasa, QRT-PCR, se utilizaron centraron súper-arrays y técnicas de Western blot para identificar y confirmar los objetivos de miR-31. inmunoprecipitación de la cromatina (CHIP) técnicas se utilizaron para evaluar las marcas de las histonas y los factores de transcripción en el promotor LOC554202. experimentos de recuento de células y xenoinjertos se utilizaron para evaluar los efectos de miR-31 en la proliferación y la tumorigenicidad de las células de cáncer de pulmón.
Resultados
CSC aumentado significativamente el miR-31 expresión y LOC554202 activado en el epitelio respiratorio normal, y las células de cáncer de pulmón; miR-31 y la expresión LOC554202 persistieron después de la interrupción de la exposición CSC. miR-31 y los niveles de expresión LOC554202 fueron significativamente elevados en muestras de cáncer de pulmón en relación con los tejidos pulmonares normales adyacentes. Los ensayos demostraron reportero CLIP y la interacción directa de miR-31 con Dickkopf-1 (DKK-1) y DACT-3. La sobreexpresión de miR-31 marcadamente disminuida DKK-1 y los niveles de expresión en las células epiteliales DACT3 y cáncer de pulmón respiratorias normales. Knock-down de miR-31 aumentó los niveles de DKK-1 y DACT3, y abrogó disminuye mediadas por CSC en DKK-1 y DACT-3 de expresión. Por otra parte, la sobre expresión de miR-31 disminuido SFRP1, SFRP4, y WIF-1, y el aumento de la expresión de Wnt-5a. CSC aumentó H3K4Me3, H3K9 /14ac y los niveles de C /EBP-beta dentro del promotor LOC554202. Knock-down de C /EBP-β abrogó la activación mediada por CSC de LOC554202. La sobreexpresión de miR-31 mejorado significativamente la proliferación y tumorigenicidad de las células de cáncer de pulmón; knock-down de miR-31 inhibe el crecimiento de estas células.
Conclusiones
El humo del cigarrillo induce la expresión de miR-31 dirigido varios antagonistas de la señalización de células madre del cáncer en el epitelio respiratorio normal y las células de cáncer de pulmón . miR-31 funciona como un oncomir durante la carcinogénesis pulmonar humana
Visto: Xi. S, M Yang, Tao Y, Xu H, J Shan, Inchauste S, et al. (2010) El humo del cigarrillo induce la C /EBP-β mediada por la activación de miR-31 en humanos normales epitelio respiratorio y las células del cáncer de pulmón. PLoS ONE 5 (10): e13764. doi: 10.1371 /journal.pone.0013764
Editor: Oliver Eickelberg, Helmholtz de Múnich /Ludwig-Maximilians-Universidad de Munich, Alemania