Extracto
Objetivo
Para investigar la prevalencia, genotipos, y los valores de pronóstico de Epstein-Barr virus (EBV) y el virus del papiloma humano (VPH) infecciones en pacientes japoneses con diferentes tipos de cáncer de cabeza y cuello (CCC).
Métodos y materiales
HPV y el ADN del VEB, genotipos y EBV
LMP-1
variantes, y la expresión de ARNm de VPH fueron detectados por PCR a partir de muestras HNC fresco congelado. genotipos de VPH se determinaron por secuenciación directa, VEB y el ARN codificado (
EBER
) se examinó por hibridación in situ.
Resultados
De los 209 pacientes con CCC, 63 (30,1 %) tenían infección por el VPH, y el VPH-16 fue el subtipo más común (86,9%). VPH
E6 /E7
expresión de ARNm se encontró en 23 de 60 (38,3%) casos positivos de ADN de VPH detectados. El sitio de mayor prevalencia de HPV fue la orofaringe (45,9%). Entre 146 (69,9%) HNCS en los que se identificó ADN del VEB, 107 (73,3%) y 27 (18,5%) contenían tipos A y B, respectivamente, y 124 (84,9%) mostraron la existencia de
del-LMP- 1 |. Sin embargo, sólo 13 (6,2%) fueron positivos para HNCS
EBER
, 12 (92,3%) de los cuales deriva de la nasofaringe. Co-infección de VPH y
EBER
se encontró en sólo el 1,0% de HNCS y el 10,0% de los CPN. Kaplan-Meier análisis de supervivencia mostró significativamente mejor específica de la enfermedad y la supervivencia global en el ADN HPV + /mRNA + carcinoma de células escamosas (OPC) de los pacientes de la orofaringe que en los otros pacientes OPC (
P
= 0,027 y 0,017, respectivamente). El análisis multivariado mostró que la etapa T1-3 (
P
= 0,002) y el VPH-positivo estado de ARNm (
P = 0,061
) predijeron independientemente mejor supervivencia específica de la enfermedad. No se encontraron diferencias significativas en la supervivencia específica de la enfermedad entre el
EBER
-positivo y pacientes NPC-negativos (
P = 0,155
).
Conclusiones
Nuestros hallazgos indican que la co-infección con el VPH y EBV es raro en HNC. SCC de la orofaringe con infección activa por VPH se relacionó con un resultado muy favorable, mientras que el estado de EBV no era pronóstico en la cohorte APN
Visto:. Deng Z, T Uehara, Maeda H, M Hasegawa, Matayoshi S, A Kiyuna , et al. (2014) Virus de Epstein-Barr y el virus del papiloma infecciones humanas y el genotipo de distribución en los cánceres de cabeza y cuello. PLoS ONE 9 (11): e113702. doi: 10.1371 /journal.pone.0113702
Editor: Jeffrey Chalmers, La Universidad Estatal de Ohio, Estados Unidos de América
Recibido: 18 Julio, 2014; Aceptado: 28 Octubre 2014; Publicado: 18 Noviembre 2014
Derechos de Autor © 2014 Deng et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. La autores confirman que todos los datos que se basan los resultados son totalmente disponible sin restricciones. Todos los datos relevantes se encuentran dentro del papel
Financiación:. Este estudio fue apoyado por el subsidio KAKENHI 26462610 (Sociedad Japonesa para la Promoción de la Ciencia) con el Dr. Suzuki, conceder KAKENHI 26462611 (Sociedad Japonesa para la Promoción de la Ciencia) el Dr. Deng, una beca de la Fundación de Ciencias de Okinawa Investigación médica Dr. Deng, y una subvención del Centro de Desarrollo de Ciencia y Tecnología, Ministerio de Educación de la República Popular de China con el Dr. Deng. Este estudio también fue apoyado y llevado a cabo en cooperación con la Sociedad para la Promoción de Ryukyu de Oto-Rhino-laringología. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
cáncer de cabeza y cuello (CCC) es el cáncer sexto líder en el mundo, con más de 600.000 nuevos casos reportados cada año [1]. El exceso de alcohol y el consumo de tabaco son dos factores de riesgo tradicionales e importantes consecuencias para HNC. En las dos últimas décadas, la incidencia de HNC, como el carcinoma de laringe o hipofaringe, ha disminuido considerablemente debido a las estrategias preventivas dirigidas a estos factores de riesgo. Sin embargo, la incidencia del carcinoma orofaríngeo de células escamosas (OPC) ha aumentado considerablemente, sobre todo en los jóvenes de aparición HNC en ausencia de estos factores de riesgo tradicionales, lo que sugiere la participación de otros factores. Virus del papiloma humano (VPH) es ahora también un factor etiológico establecido para la aparición y desarrollo de HNC, especialmente OPC. Se observó un aumento en la proporción de cáncer orofaríngeo relacionado con el VPH en los Estados Unidos desde 1973 hasta 2004 [2]. Del mismo modo, dos estudios de cohortes retrospectivos de Estocolmo, Suecia, mostraron aumentos en la proporción de VPH positivos de cáncer de amígdalas del 23,3% en 1970 al 93% para el período 2006-2007 y en el de la base de VPH-positivo de cáncer de lengua de 58 % para el período 1998-2001 al 84% para el período 2006-2007 [3], [4]. Además, el hecho de que se detecta el VPH en HNC no orofaríngea sugiere que su papel en el desarrollo y la progresión de HNC no está limitada a la orofaringe [5], sino que incluye la nasofaringe, donde el virus de Epstein-Barr (EBV) es consistentemente detectado en las células cancerosas de las regiones de alta y baja incidencia [6].
EBV es un herpesvirus ubicuo que afecta a más del 90% de la población adulta del mundo y que se asocia con una variedad de trastornos malignos, incluyendo la enfermedad de Hodgkin, linfoma de Burkitt, linfoma de células B [7], [8], [9], y el carcinoma gástrico [10]. En la cabeza y el cuello, el establecimiento de una infección latente de transformación EBV y los posibles cambios genéticos virales que se producen en las células epiteliales pueden contribuir al desarrollo, el crecimiento y las capacidades invasivas de carcinoma nasofaríngeo (NPC) [6]. El análisis del ADN del VEB en plasma ha demostrado ser útil en la detección temprana de la APN en los individuos cuando no hay sospecha clínica de tumor [11]. Varias proteínas virales de VEB incluyen las proteínas latencia asociada a la membrana, proteínas-1 y -2 latentes (
LMP-1
y
LMP-2
), y los antígenos nucleares EBV (
EBNA1-6
) [9], [12]. EBV está clasificado como tipo A o B basado en el polimorfismo vinculado en
EBNA CD -
2
,
-3A
,
-3B
, y
-3C
[13].
LMP-1
se ha encontrado que es un oncogén EBV [14]. Comprende un citoplásmica corta de aminoácidos N-terminal (aminoácidos 1-23), seis dominios transmembrana (aminoácidos 24-186), y un C-terminal (aminoácidos 187-386). Se requiere el C-terminal y los dominios transmembrana de
LMP-1 Opiniones de la máxima activación del factor nuclear-kappa B (NF-kB), la activación de las cuales está ligada a la inhibición de la apoptosis [15 ], [16], [17]. Una deleción de 30 pares de bases (pb) en la región 3'c-terminal de la
LMP-1 | gen (
del-LMP-1 |) ha sido reportado en NPC en pacientes chinos . Esta supresión puede resultar en la pérdida de los aminoácidos 346 a 355 en el
LMP-1 | proteína. La proteína de supresión tiene una vida media más larga y confiere mejorada NF-kappa B y la actividad de señalización de JNK /AP1 en células epiteliales. Estas propiedades de
del-LMP-1 | variante se localizan en los dominios transmembrana y pueden contribuir a un fenotipo más maligno de NPC [18]. Estudios previos han encontrado
del-LMP-1 | esté presente en más del 75% de los pacientes NPC en el sudeste de Asia y África del Norte [19], [20], [21]. El predominio de la específica
LMP-1
variantes en la APN puede reflejar diferencias en las propiedades biológicas o moleculares de
LMP-1
variantes. Por otra parte,
del-LMP-1
tiene inmunogenicidad más baja que la del no-variante, que puede dar lugar al desarrollo de tumores en huéspedes inmunocompetentes través escapar vigilancia inmunológica [22]. Sin embargo, la prevalencia y el papel de EBV en HNC en sitios distintos de la nasofaringe son controvertidos. Mientras que el ADN del VEB ha sido identificado por la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en el 72-92% de CCE oral, SCC laringe, la faringe y los casos de SCC [23], [24], [25], [26], la prevalencia de la infección por VEB basado en la hibridación in situ (ISH) de orientación EBV ARN codificado (
EBER
), el ensayo estándar de oro para determinar si un tumor es de biopsia relacionados con EBV, es significativamente inconsistente en estos tipos de cáncer [23], [27 ], [28], [29]. Además, la incidencia de NPC difiere entre regiones geográficas y, a pesar de la infección por EBV se producen ampliamente en todo el mundo, esto indica que un subtipo de EBV está involucrado en NPC.
Co-infección con virus y las interacciones virus /virus directos o indirectos haber sido encontró en algunos tumores malignos, y un ejemplo típico de un tumor maligno debido a las interacciones virus /virus es virus del herpes asociado al sarcoma de Kaposi (HVSK) inducida por el sarcoma de Kaposi en pacientes con SIDA [30], [31]. La evidencia reciente indica que los individuos con el VPH están en riesgo significativamente mayor de contraer el virus de la inmunodeficiencia (VIH) humana [32], [33]. Co-infección de HPV y herpes simplex virus 1 (HSV-1) también se observa en un subconjunto de casos HNC [5]. Como el VPH y EBV son los dos virus más comunes en HNC, que deben aclararse si la co-infección conduce a su interacción en HNC y por qué la prevalencia del VPH ha aumentado en las últimas décadas.
Este estudio prospectivo investigó el frecuencia de genotipos EBV,
del-LMP-1
variantes, y los genotipos de VPH en muestras congeladas frescas de pacientes con HNC con el fin de analizar los efectos de EBV y el VPH coinfección en diferentes tipos de HNC. Los hallazgos fueron examinados para las asociaciones con las características clínicas y el pronóstico.
Materiales y Métodos
Las muestras clínicas y líneas celulares
Se reclutaron 209 pacientes con HNC confirmado patológicamente por el Departamento de Otorrinolaringología, Cirugía de Cabeza y cuello de la Universidad de Ryukyus, Japón, entre diciembre de 2006 y marzo de 2014. Escrito, el consentimiento informado se obtuvo de cada paciente y el protocolo de investigación fue aprobado por el Comité de Ética de la Universidad de Ryukyus. Las muestras de tejido obtenidas por biopsia o escisión quirúrgica se congelaron en nitrógeno líquido y se almacenan hasta su posterior análisis.
Las líneas de células CaSki (ECACC, Salisbury, Reino Unido) y Raji (ATCC, Tokio, Japón) fueron utilizados como controles para la amplificación del VPH
L1
y
E6 /E7
genes y el VEB
LMP-1 | y
EBNA-3C
genes, respectivamente , y se cultivaron de acuerdo con las instrucciones del proveedor.
extracción de ADN y PCR para la detección de ADN de VPH y EBV ADN
ADN se extrajo de las muestras y las células utilizando el kit de purificación de tejido Gentra (Qiagen, Germantown, MD) de acuerdo con el protocolo del fabricante. La presencia y la integridad del ADN en todas las muestras se verificó por PCR â-globina de amplificación de genes usando cebadores PC04 y GH20 [34].
La presencia de ADN de VPH se analizó por PCR utilizando los conjuntos de cebadores consenso general
GP5 + /GP6 +
y
MY09 /11
[35], [36]. Las muestras de ADN negativas para el VPH utilizando
GP5 + /GP6 +
o
MY09 /11
fueron re-amplificado por (auto) PCR anidada utilizando el
GP5 + /GP6 +
par de cebadores como descrito anteriormente [37]. Agua (control negativo) y el ADN a partir de células CaSki HPV-16-positiva (control positivo) fueron incluidos en cada serie de amplificación. Los productos de PCR fueron purificados y secuenciados directamente con un ABI PRISM 3130 × l Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Carlsbad, CA). Las secuencias fueron alineadas y se comparan con los de los tipos de HPV conocidos en la base de datos GenBank utilizando el programa BLAST.
presencia de ADN del VEB y tipificación se realizó mediante PCR utilizando cebadores que abarcan el
EBNA-3C
gen como se describe anterior [13]. Debido a sitios de los cebadores que flanquean las regiones de variación de tipo específico, los productos resultantes de la PCR fueron dos tamaños diferentes derivados de
EBV-A gratis (153 pb) y
EBV-B Opiniones (246 pb) ( Figura 1). Como controles positivos, dos muestras positivas EBV de tipo A y tipo B, confirmados por PCR y secuenciación directa fueron incluidos en cada reacción de PCR
Panel central:. 316 una banda específica pb mostró de tipo salvaje
LMP -1 gratis (muestras 3, 4, 6, 7 y control positivo PC-1) y una banda específica de 286 pb indica la deleción de 30 pb
LMP-1 | (muestras 1, 2, 5, y PC-2). Los productos de los controles positivos se confirmaron por secuenciación directa. Panel inferior: la secuencia de deleción de 30 pb de
del-LMP-1
desde wild-type LMP-1 por análisis de secuencia
También examinamos la
LMP-1.
gen como se informó anteriormente [19]. La línea prototipo Raji de células (ATCC), que retiene el extremo carboxi terminal de 30 pb, produce un fragmento de 316 pb y se usó como control positivo para el tipo salvaje
LMP-1
. Se cree que las muestras con una longitud más corta del producto PCR que la observada con Raji para contener el
LMP-1
deleción (
del LMP-1-
, 286 fragmento bp). Además, una muestra con una variante de deleción de 30 pb verificada por PCR y secuenciación directa también se incluyó en cada reacción de PCR.
Detección de VPH
E6 /E7
mRNA mediante transcripción inversa PCR
el ARN total extraído de muestras tumorales utilizando el ARN ™ kit totalmente (Ambion, Austin, TX) de acuerdo con los protocolos del fabricante se suspendió en 50 l dietil ultra-alta calidad de agua tratada con pirocarbonato-.
Antes la síntesis de ADNc, cualquier ADN residual se retiró por incubación con 1 U de DNasa I (Ambion) a temperatura ambiente durante 25 min. a continuación, se sintetizó ADNc a partir de ARN total libre de ADN usando el kit de RETROscript® (Ambion) según las instrucciones del fabricante. Para examinar la presencia de ADN contaminante en las muestras de ARN, todos los ensayos se realizaron con y sin transcriptasa inversa.
Para detectar alto riesgo
E6 /E7
transcritos de ARNm, la PCR se realizó con ADNc obtenido a partir de muestras de ADN de VPH-positivos por PCR utilizando el Virus del Papiloma humano escribiendo SET Takara (Takara Bio Inc., Otsu, Japón), que puede identificar tipos de alto riesgo del VPH 16, 18, 31, 33, 35, 52, y 58. para verificar los VPH-16 transcripciones
E6 /E7 mRNA
, los VPH-16 muestras de ADN-positivos también fueron examinados utilizando un enfoque de la mitad de PCR anidada con ADNc como se describe anteriormente [38].
ISH para
EBER
La presencia de EBV en las células cancerosas se confirmó mediante ISH para
EBER
. En pocas palabras, se deparaffinized secciones 4 micras de espesor a partir de bloques de parafina con formalina e incluidos fijación, re-hidratados, y predigerido con proteinasa K. La solución de hibridación que contenía isotiocianato de fluoresceína (FITC) y conjugado con sonda de oligonucleótido EBV (
EBER
sonda de APN, cócteles de
EBER 1 | y
2
; Dako, Glostrup, Dinamarca) se aplicó durante 90 minutos a 55 ° C. Un kit de detección de Dako ISH (Código No. S5201) con conejo F (ab ') sustrato anticuerpo y la enzima 2 anti-FITC (5-bromo-4-cloro-3-indolilfosfato y nitroazul de tetrazolio) se utiliza para visualizar los productos de hibridación. Los cortes teñidos fueron contrastados con Nuclear Fast Red (Vector Laboratories, Burlingame, CA). señales de color azul oscuro que aparecen en el núcleo fueron reconocidos como
EBER
positivo.
El análisis estadístico
Se utilizó estadística descriptiva para caracterizar las características basales de los pacientes. Se utilizó la prueba U de Mann-Whitney o la prueba de Kruskal-Wallis para las variables continuas, y se utilizó la prueba de Pearson Chi-cuadrado o la prueba exacta de Fisher para las variables categóricas.
supervivencia libre de recurrencia se definió como el tiempo desde al final del tratamiento para la recurrencia del cáncer o el último seguimiento. la supervivencia específica de la enfermedad se definió como el tiempo desde el final del tratamiento al hundimiento de la enfermedad o el último seguimiento. Las curvas de supervivencia se evaluaron mediante el método de Kaplan-Meier, y las distribuciones de supervivencia se compararon mediante la prueba de log-rank.
P
los valores inferiores a 0,05 se consideraron significativos. Todos los análisis estadísticos se realizaron utilizando el software SPSS (SPSS para Windows versión 12.0; SPSS, Inc., Chicago, IL).
Resultados
características clinicopatológicas de los pacientes
Localización de el tumor primario fue la nasofaringe en 20 pacientes (9,6%), orofaringe en 74 (35,4%), hipofaringe en 50 (23,9%), la laringe en 28 (13,4%), y la cavidad oral en 37 (17,7%). De los 209 pacientes, 168 recibieron tratamiento curativo (quimiorradioterapia concurrente en el 73, la cirugía y la radioterapia postoperatoria o quimiorradioterapia (dosis de radiación, 50-54 Gy) en el 51, la cirugía sola en el 27, y la radioterapia sola en 17), 30 pacientes recibieron tratamiento paliativo, y 11 tenían ningún tratamiento. Características demográficas y clínicas se resumen en la Tabla 1.
infección por VPH y genotipos en HNC
Se detectó ADN de VPH en el 30,1% (63/209) de los 209 pacientes, y el orofaringe fue el lugar de mayor prevalencia (45,9%; 34/74). La genotipificación de las neoplasias mostró que la mayoría de las muestras de ADN de VPH-positivos contenían alto riesgo de VPH-16 (86,9%; 53/63 tumores). Los otros tipos de VPH incluidos el VPH-33 (4 casos), el VPH-35 (2 casos), el VPH-56 (1 caso), el VPH-58 (2 casos), y el VPH-67 (1 caso). No se encontraron infección o de bajo riesgo múltiples tipos de VPH (Tabla 1).
De las muestras de ADN de VPH-positivo 63, 60 estaban disponibles para la extracción de RNA y HPV
E6 /E7
la expresión del ARNm se encontró en 23 (38,3%) de ellos. Curiosamente, la mayor parte del HPV
E6 /E7
tumores mRNA-positivos (87,0%; 20/23) derivado de la orofaringe. Mientras que el 60,6% (20/33) de los OPC de VPH ADN-positivos fueron positivos para la expresión de ARNm de VPH viral, VPH
E6 /E7
transcritos de ARNm se encontró en sólo 3 de 27 (11,1%) HNCS no orofaríngeos, que deriva de la nasofaringe, laringe, cavidad oral o (Tabla 2).
el análisis de la correlación estadística entre el estado de infección por VPH y características histoclinical reveló ninguna relación significativa entre la presencia de ADN de VPH y el sexo, la edad , estadio TNM, o etapa nodal. ADN del VPH era más probable que se encuentre en los no fumadores o fumadores ligeros (es decir, índice y Brinkman lt; 400;
P = 0,030
). Además, se observaron correlaciones significativas entre el VPH y la localización del tumor (
P
= 0,002) y entre el VPH y la diferenciación del tumor (
P Hotel & lt; 0,001).
la infección por VEB, genotipos, y la supresión de 30 pb
LMP-1 | variante HNC en
Tal como se indica en la Tabla 2, la amplificación por PCR de la
EBNA-3C
gen mostraron EBV ADN en 146 (69,9%) de las 209 muestras HNC: 107 (73,3%) contenida tipo a, 27 (18,5%) contenía tipo B y tipo a y tipo B se encontraron juntos en 12 (8,2%) casos. También se investigó la prevalencia de la
LMP-1 | variante y encontramos
del-LMP-1 Hoteles en 124 (84,9%) de los 146
EBNA
casos -positivos. Casi todos los casos de tipo A EBV (98,1%; 105/107) contenía
del-LMP-1 |, mientras que poco más de la mitad de los casos de tipo B (63,0%; 17/27) contenía tipo salvaje
LMP-1 gratis (
P Hotel & lt; 0,001).
La prevalencia de ADN del VEB por subsitio era del 95,0% (19/20), el 79,7% (59/74), 64.0 % (32/50), 50,0% (14/28) y 59,5% (22/37) de los tumores de la nasofaringe, orofaringe, hipofaringe, laringe y cavidad oral, respectivamente. De las 17 muestras que contienen la APN tipo A VEB, 16 (94,1%) mostraron
del-LMP-1 |, incluyendo 6 OMS tipo I, 6 casos de tipo II de la OMS casos, y 4 de tipo III de la OMS casos.
Para determinar la presencia de infección por VEB en las células tumorales,
EBER
se examinó también por ISH en todas las muestras HNC (Figura 2). En contraste con la alta prevalencia de ADN del VEB identificado por PCR, sólo el 6,2% (13/209) de HNCS fueron positivos para
EBER
. la infección por VEB en HNC fue localizada principalmente en la nasofaringe (92,3% [12/13] de
EBER
-positivas tumores; nasofaringe vs HNC no nasofaringe,
P Hotel & lt; 0,001).
EBER
se detectó en el 60,0% (12/20) de los pacientes con NPC, incluyendo 2 (22,2%, 2/9) con la OMS tipo I, 6 (100%, 6/6) con la OMS tipo II , y 4 (80%, 4/5) con la OMS tipo III, pero en sólo el 1,4% (1/74) de los pacientes con OPC. Ninguno de los
EBER
-positivos casos derivados de la hipofaringe, laringe, cavidad oral o
Una micrografía:. La mayor parte de las células neoplásicas eran (carcinoma nasofaríngeo positivo, × 100, 100 bar = m), como se indica por la flecha en la alta ampliación (× 200). Micrografía B: aunque algunos linfocitos positivos son evidentes (flecha), no hay células neoplásicas fueron positivas. Micrografías C y D:. Las secciones teñidas con hematoxilina y eosina (HE) guía empresas
VPH y EBV co-infección en HNC
Tanto el VPH ADN y el ADN del VEB se detectó por PCR en 45 (21,5%) del total de 209 pacientes. Sin embargo, de los 13
Eber
HNCS -positivos, solamente 2 eran VPH-16 positivo y ambos derivados de la nasofaringe. Dado que la infección por VEB en HNC se define como
Eber
células tumorales positivas al por ISH, las tasas de co-infección de VPH y EBV en HNC y el CNP eran sólo el 1,0% y 10,0%, respectivamente (Tabla 3). Aunque la infección por VPH fue más común en los OPC, ninguno de los casos OPC de ADN de VPH-34 positivo fue co-infectados con este virus, según lo confirmado por
EBER
ISH.
El análisis de supervivencia
Como no había suficiente tejido para la detección de ARNm en un caso, se evaluaron los resultados del tratamiento de los pacientes 73 OPC basado en la condición de VPH. Cincuenta y cuatro pacientes con OPC primaria no tratados previamente tuvieron una remisión completa después de recibir un tratamiento curativo primario, 5 mostraron persistencia de la enfermedad después del tratamiento curativo, 10 se sometieron a tratamiento paliativo, y 4 tenían ningún tratamiento. La mediana de seguimiento para los pacientes cuyos datos fueron censurados fue de 41 meses (rango, 3-86 meses). En el último seguimiento, 18 (24,7%) de los 73 pacientes OPC habían muerto de la enfermedad y 2 habían muerto de enfermedades no relacionadas. De Kaplan-Meier análisis mostró que no hay diferencias significativas en la supervivencia específica de la enfermedad o la supervivencia global entre los pacientes con VPH ADN OPC + y pacientes con VPH ADN OPC (
P = 0,332
y
P = 0,378
, respectivamente; Fig. 3). Sin embargo, en comparación con los pacientes con VPH OPC mRNA- (es decir, tanto a los pacientes con VPH ADN OPC + /mRNA- y pacientes con VPH ADN OPC /mRNA-), OPC pacientes con VPH ADN + /+ ARNm tenían una mejor supervivencia global y específica de la enfermedad (
P = 0,027
y
P = 0,017
, respectivamente). La tasa de supervivencia específica de la enfermedad a los 3 años fue del 95,0% (IC del 95% = 85,5% -100%) en la cohorte con el ADN del VPH + /ARNm + y el 73,8% (IC del 95% = 61,4% -86,1%) en la cohorte con el VPH ADN + /mRNA- o HPV DNA /mRNA-.
específico de la Enfermedad de supervivencia y las tasas de supervivencia fueron significativamente mejores en los pacientes OPC ADN de VPH-positivo /ARNm-positivas que en el ADN del VPH-positivo /negativo ARNm y ADN de VPH-negativo /ARNm-negativos pacientes OPC. Sin embargo, no se encontraron diferencias significativas en la supervivencia específica de la enfermedad o la supervivencia global entre los pacientes OPC ADN de VPH-positivo y negativo del ADN del VPH.
Para evaluar el valor predictivo independiente de todos estos factores para disease- supervivencia específica en multivariado OPC, univariado y los análisis se realizaron utilizando modelos de Cox de riesgos proporcionales. En el análisis univariado, los pacientes OPC con la condición de VPH ADN + /+ ARNm demostraron significativamente mayor supervivencia específica de la enfermedad (
P = 0,029
; razón de riesgo (HR) = 0,12; intervalo de confianza del 95% (IC) = 0.01-0.99) que los otros pacientes OPC (Tabla 4). OPC pacientes categorizados como T4, estadio ganglionar 2-3, y los bebedores de alcohol pesados (alcohol por día & gt; 50 g) tuvieron una supervivencia significativamente menor específica de la enfermedad (T4,
P = 0,002
, HR = 0,15, 95 % CI = 0,04-0,50; nodal etapa 2-3,
P = 0,040
, HR = 3,49; IC del 95% = 01/01 a 12/03; bebedor de alcohol,
P = 0,040
, HR = 3,49; IC del 95% = 01.01 a 12.03), en comparación con los pacientes clasificados como etapa T1-3, estadio ganglionar 0-1, y los fumadores leves y no fumadores. El modelo final del análisis multivariante mediante un modelo de riesgos proporcionales de Cox para la identificación de la supervivencia específica de la enfermedad justa de los OPC mostró que la etapa T1-3 (
P = 0,002
; ajustado HR = 0,22; IC del 95% = 0,08 0,56) y el estado de ARNm del VPH-positivo (
P = 0,061
; ajustado HR = 0,15; IC del 95% = 0,02-1,10) predijo una mejor supervivencia específica de la enfermedad (Tabla 4)
Además, se evaluó el pronóstico en los 54 pacientes que tenían OPC remisión completa después de recibir un tratamiento curativo primario. La supervivencia libre de recurrencia de 3 años fue del 100% para los pacientes con VPH ADN OPC + y el 75,1% (IC del 95% = 59,1% -91,2%) en los pacientes con VPH ADN OPC (
P
= 0,002) ( Figura 4A). Por lo tanto, la supervivencia específica de la enfermedad a 3 años en pacientes VPH ADN + OPC fue significativamente mejor que en los pacientes VPH ADN (100% vs 88,9%,
P = 0,015
) (Figura 4B). Curiosamente, los pacientes VPH ARNm + OPC también mostraron significativamente mejor supervivencia libre de recurrencia que los pacientes VPH mRNA- OPC (
P = 0,032
) (Figura 4C), y las tasas de supervivencia sin recidiva de 3 años fueron del 100% y 80,4%, respectivamente. Sin embargo, los pacientes con VPH ARNm OPC + demostraron sólo una tendencia ligeramente más fuerte hacia la supervivencia específica de la enfermedad justo en comparación con los pacientes con VPH OPC mRNA- (100% vs 91,2%,
P = 0,080
) (Figura 4D).
Después de un tratamiento curativo, los pacientes VPH ADN OPC-positivos mostraron significativamente mejor supervivencia libre de recurrencia y las tasas de supervivencia específica de la enfermedad en comparación con los pacientes OPC ADN de VPH-negativas. Se encontraron resultados similares en pacientes VPH ARNm OPC-positivos.
Para evaluar la influencia de EBV en la supervivencia de los pacientes con NPC, los pacientes fueron estratificados de acuerdo a la detección de
EBER
. Entre 20 pacientes con NPC, 18 fueron tratados a nivel local y los detalles del tratamiento y los resultados estaban disponibles en el momento del diagnóstico para estos pacientes. El tiempo medio de seguimiento fue de 21 meses (rango, 3-63 meses). Aunque los pacientes con
EBER
-positivo APN mostraron una tendencia hacia la supervivencia específica de la enfermedad mejorado en comparación con los pacientes con
EBER
-negativo NPC, no se encontraron diferencias significativas entre estos dos grupos (
P
= 0,155) (Figura 5A). Del mismo modo, 16 casos recibieron quimiorradioterapia concomitante curativa para el carcinoma primario, y no se encontró ninguna diferencia significativa en la supervivencia específica de la enfermedad entre el
EBER
-positivo APN y los
EBER
negativos al cohortes de la APN (
P = 0,381
) (Figura 5B).
No se encontraron diferencias significativas en las tasas de supervivencia específica de la enfermedad entre los
EBER
-positivo (infección por VEB tumor) y
Eber
pacientes NPC-negativos.
Discusión
la prevalencia global del VPH en HNC fue ligeramente superior en el presente estudio (30,1%) que en los estudios internacionales, que han informado de 25.9% de los casos de VPH-ADN-positivo para estas entidades tumorales [39]. Por otra parte, nuestros hallazgos del estudio fueron consistentes con los informes anteriores que muestran que la orofaringe era el subsitio de la más alta prevalencia de VPH en HNC, y el genotipo viral más común en HNC asociado al VPH fue el VPH-16 [39], [40]. A diferencia del cáncer de cuello de útero, donde el VPH
E6 /E7
transcripciones se identifican en la mayoría de las muestras de ADN de VPH-positivo [41], sólo el 38,4% de los casos de VPH ADN HNC-positivos mostraron VPH
E6 /E7
positividad ARNm en el presente estudio.
E6 /E7
ARNm se considera como un marcador de la transformación maligna de VPH, y la demostración de oncogénico
E6 /E7 transcripción
puede sugerir que cancerigenos VPH es impulsada mecánicamente posible, mientras que el VPH-ADN positivos /ARN resultados negativos pueden reflejar simplemente la transcripción, ya sea de bajo nivel o no-transcripcional activo, y posiblemente una infección "pasajero". El hecho de que aproximadamente el 90% de los casos con el VPH transcripcionalmente activo se originó en la orofaringe apoyó la idea de una estrecha relación entre el VPH y el OPC. Estudios previos han demostrado que la carga viral de ADN de VPH exhibe gran variación entre las regiones de cabeza y cuello, y copia los números de ADN en los OPC eran mucho más altos que en HNCS no orofaringe. La baja multiplicidad relativo de infección por VPH en cabeza y cuello sitios no orofaringe, incluyendo la hipofaringe, laringe y cavidad oral, se puede correlacionar con baja
E6 /E7
la expresión de ARNm en tumores en estos sitios [42], [43]. Además, Wiest informó de que la mayoría de tumores que no expresan
E6 /E7
contienen una mutado
p53
gen, en el que se interrumpe con frecuencia el gen E6. La falta de
E6 /E7
expresión podría ser debido a la interrupción del gen E6 o alteraciones en el control transcripcional [38].
En estudios anteriores, los pacientes con NPC en Taiwán mostró comúnmente una mayor prevalencia de HPV (35-51%) [44], [45], [46] que los de Europa y los Estados Unidos (9-27%) [47], [48], [49]. Además, aproximadamente el 22% de los casos de SCC cavidad bucal en Taiwán puerto de ADN del VPH de alto riesgo [50], [51]. Curiosamente, en el presente estudio, una incidencia relativamente alta de HPV fue también encontrado en algunos HNCS no orofaríngeas, como NPC (30,0%) y SCC cavidad oral (29,7%). La mayoría de nuestros pacientes fueron reclutados de Okinawa, una isla del sur de Japón muy cerca de Taiwán, lo que puede sugerir geográficamente y racialmente distintas características de VPH y que el VPH oncogénico puede estar asociada con un subconjunto de carcinomas comprenden la cavidad bucal y la nasofaringe. Dadas las bajas tasas de detección de
transcripciones E6 /E7 mRNA
, sin embargo, el papel del VPH en estos HNCS no orofaringe necesita más aclaraciones.
Este estudio mediante PCR en muestras congeladas frescas de CPN mostraron que el tipo de EBV a es predominante y
del-LMP-1
es común en la población japonesa, resultados que concuerdan con los datos obtenidos de la misma clase de especímenes recolectados en el sudeste de Asia y África del Norte [19], [20], [52], [53]. Lo contrario se ha observado en las muestras de los pacientes europeos asociados a EBV APN y donantes sanos, en los de tipo salvaje
LMP-1 | aislamientos son más prominentes que
del-LMP-1
variantes [54 ]. La deleción de 30 pb
LMP-1 | variantes actividad de transformación de exposiciones e inducir cambios tumorigénicas, y la proteína de eliminación tiene una vida media más larga y una mayor capacidad de activar NF-kB y JNK /AP1 en células epiteliales, por lo tanto contribuyendo a un fenotipo más maligno NPC [18], [55]. Las características de distribución de variantes EBV pueden sugerir un mayor potencial tumorigénico de
del-LMP-1 Hoteles en regiones endémicas del sudeste de Asia y África del Norte en comparación con el tipo salvaje EBV. Sin embargo, las conclusiones contradictorias de diferencias significativas en la frecuencia de
del-LMP-1 Hoteles en muestras de garganta de lavado entre las regiones endémicas y no endémicas en China [56] hacen hincapié en la necesidad de futuras investigaciones para aclarar si
del-LMP-1
es de hecho un polimorfismo fenotipo correlacionados APN y no un polimorfismo geographical- o relacionados con el origen étnico.
a pesar de que más de la mitad de los casos con este virus tipo B contenía tipo salvaje
LMP-1 |, la mayor parte de los casos con el tipo-A EBV contenida
del-LMP-1 |. Nuestros resultados están en concordancia con un estudio previo de Corea [19], en la que la mayoría (87%) del tipo A EBV exhibió la
del-LMP-1 | variante y la EBV tipo B exhibieron silvestre escriba
LMP-1
con más frecuencia. Curiosamente, de tipo salvaje
del-LMP-1 | no sólo se encuentra en el 64,3% de tipo B VEB, pero fue predominante (64,1%) de tipo A EBV en células mononucleares de sangre periférica de los portadores sanos [57]. Por otra parte, Correa et al investigaron 7 pacientes con SIDA con linfoma primario del sistema nervioso central y se encontró que
del-LMP-1
se detectan siempre con el tipo B VEB [58], que era diferente de los hallazgos en la APN. En su conjunto, la fuerte asociación de tipo EBV y
LMP-1 | variantes podría ser debido a las características intrínsecas de este virus. La variación de
LMP-1 |, junto con los polimorfismos en otras regiones del genoma viral, puede aumentar la posibilidad de que la enfermedad asociaciones específicas de determinadas cepas de virus.
Nuestros resultados mostraron la misma predominancia de