Extracto
Antecedentes
Como un gen de reparación de genes (MMR),
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juega un papel importante en el mantenimiento de la integridad cromosómica. Varios estudios han investigado las asociaciones de
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-93G & gt;. A (rs1800734) y Ile219Val (rs1799977) en diversos tipos de tumores con resultados discordantes, pero su papel en el cáncer de ovario en la población china queda por esclarecer
Métodos
en un análisis de casos y controles, se evaluó la asociación entre estos dos polimorfismos y el riesgo de cáncer de ovario en 421 pacientes con cáncer de ovario y 689 sujetos de control en la población china mediante regresión logística.
resultados
se encontró que la variante
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genotipos (-93AA y AG) están asociados con el riesgo de cáncer de ovario (odds ratio [OR] = 2,02, 95% de confianza intervalo [IC] = 1,42 a 2,89) en comparación con el genotipo -93GG. El alelo A aumenta el riesgo de cáncer de ovario en una forma dependiente de la dosis (
P
& lt; 10
-4). Prueba funcional mostró que el alelo -93A aumentó
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promotor de la actividad transcripcional y la actividad luciferasa. Sin embargo, no se encontraron diferencias significativas en las frecuencias genotípicas en el sitio Ile219Val entre los casos y controles
Conclusiones
Estos hallazgos indican que la -93G & gt;. Un polimorfismo en
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puede afectar a la susceptibilidad al cáncer de ovario en la población Chinese
Visto: Niu L, S Li, Liang H, Li H (2015) el
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-93G & gt; Un polimorfismo y el riesgo de. el cáncer de ovario en la población china. PLoS ONE 10 (8): e0135822. doi: 10.1371 /journal.pone.0135822
Editor: Yifeng Zhou, Facultad de Medicina de la Universidad Soochow, CHINA
Recibido: 20 Junio, 2015; Aceptado: 27 Julio 2015; Publicado: 14 Agosto 2015
Derechos de Autor © 2015 Niu et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están dentro del papel
Financiación:. Este estudio fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencia Natural de las subvenciones de China (N ° 81202040 en HL), Fundación de Ciencias Naturales Municipal de Beijing (Nº 7142167 de HL) y el Programa Nova Beijing (núm 2009B03 a HL)
Conflicto de intereses:. los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de ovario es uno de los tipos más comunes de. neoplasias ginecológicas [1]. A nivel mundial, a partir de 2010, aproximadamente 160.000 personas habían muerto a causa de cáncer de ovario, frente a los 113.000 en 1990 [2]. Los estudios epidemiológicos han demostrado que algunos factores etiológicos, incluyendo la edad de la menarquia temprana, la edad tardía de la menopausia, la obesidad, el uso de estrógenos y la terapia de reemplazo hormonal, y la susceptibilidad heredada, están asociados positivamente con el cáncer de ovario [3, 4]. Además, la incidencia de cáncer de ovario aumenta con la edad. Debido a que existe una terapia estándar, pero no obtiene resultados ideales, el cáncer de ovario sigue siendo un reto terapéutico. Estudios recientes indican que no hay diferencia significativa en los resultados clínicos de operación radical y quimioterapia basada en platino adyuvante para las personas con diferentes polimorfismos genéticos, lo que sugiere que la susceptibilidad genética juega un papel importante en el riesgo de un individuo de desarrollar cáncer de ovario [5, 6]
sistemas
reparación del ADN tienen un papel esencial en el mantenimiento de la integridad genómica y la estabilidad. Es bien conocido que las variantes genéticas de los genes de reparación pueden afectar a la función de las proteínas codificadas y alteran su capacidad de reparación del ADN, que a su vez puede conducir a la susceptibilidad a los diferentes tipos de cáncer y también pueden ser factores pronósticos adversos una vez que el cáncer se ha desarrollado [7 , 8]. Como un componente clave del sistema de reparación de genes de ADN (MMR),
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en el control del ciclo celular y la apoptosis [10 a 12]. La disfunción de la
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gen puede resultar en el fracaso para llevar a cabo todas las funciones del sistema de MMR y puede estar asociada con una predisposición para el cáncer [13, 14]. Varios polimorfismos han sido identificados en el
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genes [15-17]. Recientemente, los estudios han explorado la asociación de un importante y frecuente de polimorfismo, es decir -93G & gt; A (rs1800734), que se encuentra en la región núcleo promotor de
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, con la susceptibilidad al desarrollo de diversos tumores malignos humanos, incluyendo el tabaco carcinoma -related vía oral [18], cáncer de pulmón [19], el cáncer colorrectal [20] y el carcinoma papilar de tiroides (PTC) [21]. Otro sitio polimórfico missense ampliamente estudiada en el gen
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es Ile219Val, una de A a G de transición que ocurre en el codón 219 que conduce a un cambio de aminoácido que ha sido estudiado en los cánceres en las poblaciones europeas [22, 23]. Aunque el hecho de que el
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genes se han relacionado con varios tipos de cáncer, la asociación de estas variaciones con cáncer de ovario en la población china no se ha estudiado. La hipótesis de que el
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polimorfismos del gen -93G & gt;. A y Ile219Val (rs1799977) puede causar la susceptibilidad individual al cáncer de ovario al afectar la capacidad de reparación del ADN desajuste
Teniendo en cuenta el importante papel de
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Materiales y Métodos
población de estudio
los pacientes elegibles (421) fueron los cáncer de ovario diagnosticados consecutivamente reclutados entre marzo de 2003 mayo de 2009 en el hospital Tercer Universidad de Pekín (Beijing) y el hospital del cáncer de la Academia china de Ciencias médicas (Beijing). Los pacientes procedían de la ciudad de Beijing y sus regiones circundantes menores de 90 años. Los controles (689) fueron emparejados a los casos por edad (± 5 años) vivían en la región de Beijing y fueron seleccionados al azar de los que se sometieron a un examen físico en los hospitales. La tasa de respuesta fue del 96,5%. El examen físico incluye la radiografía de tórax, ecografía abdominal, ginecológica y los exámenes citológicos cervicales. Los criterios de selección incluyen, sin antecedentes de cáncer o las operaciones anteriores en el ovario. El estado histológico del tumor y la estadificación clínica se basaron en los criterios de la Federación Internacional de Ginecología y Obstetricia (FIGO) [24]. Las características clínicas de los pacientes de nuestro estudio se presentan en la Tabla 1. En la contratación, se pidió a todos los participantes a dar su consentimiento informado por escrito para la recogida de sangre de ellos y completaron un cuestionario estructurado. El procedimiento de estudio fue aprobado por la Universidad de Pekín Tercer Hospital y el Hospital del Cáncer de la Academia China de Ciencias Médicas.
Genotipado análisis
ADN genómico se aisló de la sangre periférica del estudio sujetos utilizando el kit DNA Blood Mini (QIAGEN, Valencia, CA). plataforma de MALDI-TOF se utilizaron para determinar el genotipo de
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-93G & gt; A y polimorfismos Ile219Val como se describe anteriormente [25, 26]. Para el control de calidad, 5% de las muestras se seleccionaron al azar para repetir, y 50 muestras se incluyeron para secuencia directa para confirmar los genotipos de los análisis de espectrometría de masas. Hardy-Weinberg se comprobó en todos los grupos de la muestra.
Reportero plásmidos, transfecciones y ensayos de luciferasa
Las construcciones de reportero alélicas 93G y 93A se prepararon por la Sociedad GENEWIZ (Pekín, China) mediante la amplificación la región núcleo promotor de
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, un fragmento de 282 pb de -299 a la -17 como se describe anteriormente [27], y después se clonó en el vector de luciferasa pGL3-basic (Promega, Madison, WI, EE.UU. ). Se utilizaron células 293T y células SKOV-3 (línea celular de cáncer de ovario) para transfectar los plásmidos indicadores anteriores con Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.) a través de los procedimientos publicados previamente [28, 29], el vector vacío fue utilizado como una control negativo. Las actividades de luciferasa de Renilla se midieron con el sistema Dual-Luciferase reportero de ensayo (Promega).
Análisis en tiempo real de los
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ARNm
El ARN total partir del veintiocho muestras de tejido de cáncer de ovario obtenidos a partir de muestras de biopsia-eliminado de los pacientes individuales se extrajo usando el reactivo TRIzol (Invitrogen, Inc.). La expresión génica relativa cuantificación de
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se llevó a cabo utilizando el ensayo SYBR Green a través de ABI Prism 7500 secuencia sistema de detección (Applied Biosystems). β-actina se utilizó como controles endógenos para
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expresiones. Los cebadores utilizados para
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fueron 5'-CAGAGGAAGATGGTCCCAAA-3 '(F) y 5'-TCTTCGTCCCAATTCACCTC-3' (R), y aquellos para β-actina fueron 5'-GGCGGCACCACCATGTACCCT-3 '(F ) y 5'-AGGGGCCGGACTCGTCATACT-3 '(R). La expresión relativa de
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se llevaron a cabo mediante el uso de la 2
cálculo -ΔΔCT.
El análisis estadístico
Se utilizaron dos lados chi-cuadrado pruebas para evaluar las diferencias en el índice de la edad y masa corporal (IMC) distribuciones así como las frecuencias de los alelos y genotipo entre los casos y controles. Las frecuencias genotípicas observadas en los controles sin cáncer se puso a prueba de equilibrio de Hardy-Weinberg (HWE) por la bondad del ajuste
x
2 pruebas. Las asociaciones de todos los genotipos con riesgo de cáncer de ovario se calcularon los odds ratios (OR) y los intervalos de confianza del 95% (IC), seguido por el análisis de la estratificación con ajuste para la edad y el IMC. El poder estadístico se calcula aplicando el software PS (http://biostat.mc.vanderbilt.edu/twiki/bin/view/Main/PowerSampleSize, consultado el 14 de Dic, 2010). Las diferencias en la actividad de luciferasa y los niveles de ARNm de
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en tejidos de cáncer de ovario entre diferentes cada alelo fueron examinados por ANOVA de una vía y la prueba t de Student. La DL de los dos SNPs se detectó el programa de 2LD y el procedimiento estadístico PROC alelos en SAS /Genética (SAS Institute, Inc., Cary, NC, EE.UU.) de software.
P Hotel & lt; 0,05 se utilizó como criterio de significación estadística, y todas las pruebas fueron de dos caras y realizado con el software SAS (versión 9.1; SAS Institute, Cary, NC, EE.UU.).
resultados
genotipos y riesgo de cáncer de ovario
La asociación de cáncer de ovario con -93G & gt; a se determinó sobre la base de 421 casos y 689 controles. Los resultados de genotipado en la Tabla 2 mostraron que
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-93G & gt; A se asoció significativamente con el riesgo de cáncer de ovario. En comparación con los controles sanos, portadores -93AA y AG se asociaron significativamente con el riesgo de cáncer de ovario (odds ratio ajustado [OR] = 2,02, 95% intervalo de confianza [IC] = 1,42-2,89). Además, la frecuencia -93A alelo en los casos (65,6%) también fue significativamente mayor que en los controles (52,4%) (
P
& lt; 10
-4). Sin embargo, no hubo diferencia significativa entre los diferentes genotipos de la variante Ile219Val y la susceptibilidad a cáncer de ovario. Enlace desequilibrio análisis mostró que el vínculo entre -93G & gt; A y Ile219Val fue relativamente débil (r
2 = 0,051), lo que sugiere que cada uno puede tener un efecto independiente sobre el riesgo de cáncer de ovario y por lo tanto no ser adecuado para el análisis de haplotipos
el riesgo de cáncer de ovario en relación con el
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-93G & gt; a genotipos se determinó aún más con la estratificación por edad y el IMC. No se observó ninguna asociación significativa entre los genotipos variantes y el riesgo de cáncer de ovario
Efectos de la
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-93G & gt;. Un polimorfismo en la actividad transcripcional
Teniendo en cuenta que -93G & gt; Un polimorfismo podría estar asociada con el riesgo de cáncer de ovario, dos construcciones de indicador de luciferasa (pGL3-
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-G-alelo y pGL3-
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-A-alelo) se utilizaron para transfectar transitoriamente 293T células para determinar directamente los efectos de la -93G & gt; Un polimorfismo en la actividad transcripcional de la
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promotor. Como se muestra en la figura 1A, en comparación con la construcción que contiene el alelo -93G, la construcción que contiene el alelo -93A exhibió significativamente mayor actividad de la luciferasa (
P
& lt; 0,001). En consonancia con un aumento de
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actividad transcripcional del promotor para el alelo -93A en las células 293T, la actividad de la luciferasa de la construcción que contiene el alelo -93A apareció a ser mayor en las líneas celulares en SK-OV-3 células (
P
= 0,002).
(a) Representación esquemática de las construcciones de genes informadores que contienen la región núcleo promotor de
hMSH1 gratis (un fragmento de 282 pb a partir de -299 a -17) con la G o alelo en el sitio polimórfico -93 (superior). Se muestra la expresión de luciferasa de dos construcciones (pGL3-93G y pGL3-93A) en células 293T y SK-OV-3 cotransfectadas con PRL-SV40 para normalizar la eficiencia de transfección (inferior). Cada grupo tiene seis repeticiones, y los experimentos de transfección fueron repetidos tres veces. Los datos son las medias ± error estándar de la media. El asterisco indica un cambio significativo. (B)
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nivel de expresión en veintiocho tejidos ováricos cáncer con diferentes -93G & gt; A genotipos (6 -93GG, 10 y 12 -93AG -93AA); los datos son las medias ± error estándar de la media. El nivel de expresión de los genotipos -93GG y -93AG fueron significativamente más alta que la del genotipo AA (
P Hotel & lt; 0,001).
Asociación de
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-93G & gt; a genotipos con
hMLH1 expresión
a fin de evaluar el efecto de los SNP -93G & gt; a sobre el riesgo de cáncer de ovario, examinamos
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de expresión entre los diferentes genotipos del SNP en veinte y ocho tejidos de cáncer de ovario individuales (6 -93GG, 10 y 12 -93AG -93AA) por PCR en tiempo real. Como se muestra en la figura 1B, en los veinte y ocho tejidos de cáncer de ovario,
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expresión fue significativamente mayor en aquellos con la -93GG y genotipos -93AG que en aquellos con el genotipo -93AA (GG, 0,428 ± 0,036 , AG, 0,287 ± 0,026; AA, 0,192 ± 0,029; prueba de ANOVA:
P Hotel & lt; 0,001)
Discusión
En el presente caso-control basado en el hospital. estudio, hemos tratado de identificar los factores genéticos que confieren susceptibilidad individual al cáncer de ovario. Los resultados obtenidos mediante el análisis de 421 pacientes y 689 controles sanos mostraron que
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-93G & gt; A se asocia con el riesgo de cáncer de ovario en la población china. Nuestros datos muestran que, en comparación con el genotipo GG, los sujetos que llevan el -93AA y genotipos AG habían aumentado significativamente el riesgo de cáncer de ovario (
P Hotel & lt; 10
-4).
recientemente, la mutación de los genes de reparación del ADN en la etiología de varios tipos de cáncer ha estado recibiendo una gran cantidad de atención. Se ha propuesto que las variantes genéticas en los genes de reparación del ADN que potencialmente dan como resultado la expresión de proteínas alterada o función conducirían a un fallo en el reconocimiento de daños en el ADN y la reparación, que a su vez permitiría mutaciones posteriores a acumulan y por lo tanto podría aumentar la susceptibilidad a múltiples tipos de cáncer [30 -32]. En los seres humanos, hay varias vías de reparación del ADN que son esenciales para la integridad del genoma, incluyendo la reparación por escisión de base (BER), la reparación por escisión de nucleótidos (NER), ADN de doble filamento se rompe (DSBs) y MMR [33]. Un conjunto altamente conservada de proteínas MMR durante mucho tiempo ha sido conocido por ser el principal responsable de la reparación de las bases mal durante la replicación del ADN [34, 35]. Sin embargo, estudios recientes han observado con frecuencia que
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juega un papel central en el sistema MMR en la escisión y posterior hebra desajuste de reparación [36, 37]. La variante genética de la
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gen puede afectar a la capacidad de MMR de la proteína codificada y por lo tanto podría contribuir al riesgo de cáncer. Hasta la fecha, ha habido un gran interés en la asociación entre dos polimorfismos ampliamente estudiados (-93G & gt; A y Ile219Val) y diferentes tipos de cáncer; Sin embargo, los resultados son contradictorios. El polimorfismo común
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-93G & gt; A se encuentra en la región del promotor de núcleo, 93 nucleótidos cadena arriba del sitio de inicio de la transcripción, contiene secuencias de consenso putativo factor de transcripción sitios de unión, y puede desempeñar un papel importante en la regulación
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actividad promotora, modulando así la susceptibilidad al cáncer [38]. El
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-93G & gt; Un polimorfismo se ha investigado en varios estudios, pero los resultados no son consistentes. Recientemente,
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-93G & gt; una variante genotipos (AA, AG) se han asociado con un mayor riesgo de cáncer de pulmón [39], el cáncer de mama [40] y el cáncer colorrectal [41]. Curiosamente, un estudio reciente de los indios de Asia usando 242 pacientes de carcinoma oral y 205 controles sanos encontró que el genotipo GG mostró prevalencia significativamente mayor en los pacientes en comparación con los controles sanos (P & lt; 0,0006) [18]. Nuestros resultados indican que los genotipos variantes (AA, AG) de
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-93G & gt;. Una puede estar relacionado con el riesgo de cáncer
Otra comúnmente estudiada
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polimorfismo, Ile219Val , es una mutación no sinónimos que cambia Ile 219 a Val, posiblemente alterando la función de la proteína hMLH1. Varios estudios han informado de que el
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Ile219Val polimorfismo está estrechamente relacionado con la aparición de una variedad de cánceres, incluyendo el cáncer de pulmón [42], cáncer de mama [40] y el cáncer gástrico [43]. Sin embargo, la asociación entre el
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Ile219Val variante genotipos y el riesgo de cáncer no es la misma en diferentes tipos de cáncer y grupos étnicos. Por ejemplo, en el cáncer de próstata, Burmester et al. encontrado que el
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Ile219Val polimorfismo se asoció significativamente con mayores tasas de cáncer de próstata en personas de ascendencia europea, mientras que Fredriksson et al. mostró que
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no tenía un papel importante en el cáncer de próstata en una población finlandesa [22]. Nuestros resultados sugieren que no existe una asociación entre este polimorfismo y el cáncer de ovario en la población china.
Algunas limitaciones pueden existir en el presente estudio debido a su diseño basado en el hospital se limita a la población china. Además, inherente sesgo de selección que presenta factores de confusión desequilibradas podría afectar a las conclusiones de la corriente de nuestros resultados, ya que los casos y los controles eran de diferentes centros. Sin embargo, las frecuencias genotípicas entre los controles se ajustan a la ley de desequilibrio de Hardy-Weinberg, lo que sugiere la selección del sujeto al azar, y que alcanzan una potencia de más de 90% Estudio (prueba bilateral, α = 0,05) para detectar un OR de 2,02 para el
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-93 genotipos AA + AG (que ocurrieron con una frecuencia de 78,2% en los controles) en comparación con el genotipo -93GG, lo que sugiere que este hallazgo es notable.
en conclusión, el presente estudio indica que en la población china, los portadores de los genotipos AG -93AA y tienen mayor riesgo de cáncer de ovario en comparación con los portadores de GG. A lo mejor de nuestro conocimiento, este estudio proporciona la primera evidencia de que la -93G & gt; Un polimorfismo en
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se asocia con un riesgo significativo de desarrollar cáncer de ovario en la población china. Además se requieren estudios de casos y controles de base poblacional independientes para validar nuestros resultados en muestras de mayor tamaño, así como en diferentes poblaciones.