Extracto
Los métodos basados en la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (PCR) puede acelerar el diagnóstico de la aspergilosis invasiva, pero están limitados por la falta de estandarización. Se evaluó la prueba MycAssay ™ Aspergillus disponible en el mercado para el diagnóstico de la aspergilosis invasiva en pacientes sin cáncer hematológico. Se reunieron prospectivamente 322 menores muestras de las vías respiratorias (noviembre de 2009-enero de 2011) de 175 pacientes con infección de las vías respiratorias inferiores y las siguientes condiciones predisponentes: cáncer sólido (16,8%), cirrosis (16,8%), la terapia con corticosteroides (71,7%), el VIH infección (15,6%), enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC, 52,6%), trasplante de órganos sólidos (riñón [1,2%], corazón [3%], el hígado [4,6%]), o ninguno (3,5%). Se obtuvieron especímenes cuando esté indicado y se analizaron en el laboratorio de microbiología clínica.
Aspergillus
ADN fue extraído y amplificado por medio de MycXtra® y MycAssay ™ Aspergillus.
Aspergillus spp
. se aisló a partir de 65 muestras (31 pacientes). De acuerdo con la Organización Europea para la Investigación y Tratamiento del Cáncer y los criterios de Bulpa (para pacientes con EPOC), 15 tenían aspergilosis invasiva probable. resultados MycAssay ™ Aspergillus fueron negativos (n = 254), positivo (n = 54), o indeterminada (n = 14). La sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo, valor predictivo negativo y diagnóstico odds ratio de la MycAssay ™ (primera muestra /cualquier muestra) fueron 86,7 /93, 87,6 /82,4, 34,1 /34,1, 92,2 /100, y 48 /68.75. Las diferencias entre la proporción de muestras con las determinaciones positivas de PCR (63%) y la proporción de muestras con
Aspergillus
spp. aislamiento (75%) no alcanzó significación estadística (
P = 0,112
). El tiempo medio desde la cultura a la visualización de la muestra del crecimiento fúngico fue de 3 días, en comparación con ~ 4 horas para MycAssay ™ Aspergillus PCR. MycAssay ™ Aspergillus mostró una alta sensibilidad para el diagnóstico de la aspergilosis invasiva en pacientes sin cáncer hematológico. La sensibilidad aumenta cuando se utilizan múltiples muestras. En comparación con el cultivo de hongos, PCR reduce significativamente el tiempo de diagnóstico
Visto:. Guinea J, C Padilla, Escribano P, Muñoz P, B Padilla, Gijón P, et al. (2013) Evaluación de MycAssay ™ Aspergillus para el diagnóstico de la aspergilosis pulmonar invasiva en pacientes sin cáncer hematológico. PLoS ONE 8 (4): e61545. doi: 10.1371 /journal.pone.0061545
Editor: David R. Andes, Universidad de la Escuela de Medicina de Wisconsin, Estados Unidos de América
Recibido: Diciembre 21, 2012; Aceptado: 11 de marzo de 2013; Publicado: 19 Abril 2013
Derechos de Autor © 2013 Guinea et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio fue financiada en parte por subvenciones del Fondo de Investigación Sanitaria (FIS) CP09 /00055 y PI09 /1257 (Instituto de Salud Carlos III) y por subvenciones de Myconostica. Jesús Guinea (MS09 /00055) y Pilar Escribano (CD09 /00230) están soportados por el FIS. Los kits MycXtra® y MycAssayTM Aspergillus utilizadas para llevar a cabo el estudio fueron amablemente apoyados por Izasa (Barcelona, España). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:. Los autores declaran que los kits de MycXtra® y MycAssayTM Aspergillus fueron suministrados amablemente de Izasa ( Barcelona, España). Esto no altera la adhesión de los autores a todas las políticas de PLoS ONE sobre los datos y compartir materiales.
Introducción
La aspergilosis invasiva es una infección oportunista que afecta a pacientes con diversos grados de inmunosupresión. Los pacientes con neutropenia profunda y prolongada han tenido tradicionalmente el mayor riesgo de la aspergilosis invasiva [1], [2], [3], [4], [5]. Otros grupos de riesgo incluyen los receptores de órganos sólidos trasplantados, pacientes con enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), los pacientes que recibieron corticosteroides u otros agentes inmunosupresores, y los pacientes con cirrosis hepática [6], [7].
El número de los pacientes sin neoplasias hematológicas que se ven afectados por la aspergilosis invasiva es cada vez mayor. La mortalidad en este grupo es alta, probablemente debido al bajo índice de sospecha de la infección y el consiguiente retraso en el diagnóstico [8], [9], [10], [11]. Como resultado favorable depende de la terapia antifúngica rápido y adecuado, el diagnóstico rápido es cada vez más importante
La detección de galactomanano en suero ha demostrado ser útil para el diagnóstico de la aspergilosis invasiva en pacientes neutropénicos.; por desgracia, su sensibilidad es inferior a 50% en pacientes sin neutropenia [12], [13], [14], [15], [16]. La detección de galactomanano en muestras de lavado broncoalveolar (BAL) es más sensible que la detección en muestras de suero, aunque las muestras de BAL no siempre están disponibles [15]. El aislamiento de
Aspergillus Hoteles en muestras del tracto respiratorio inferior de pacientes no neutropénicos es a menudo la primera evidencia microbiológica de la aspergilosis pulmonar invasiva. Sin embargo, como la cultura es lenta, la detección de
Aspergillus Hoteles en muestras clínicas se retrasa.
Los métodos basados en la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (PCR) puede acelerar el diagnóstico de la aspergilosis invasiva, pero son limitado por una falta de normalización [17], [18]. MycAssay ™ Aspergillus es un tiempo real de la técnica de PCR recientemente comercializado para la detección de
ADN Aspergillus Hoteles en muestras del tracto respiratorio inferior. Este ensayo se ha estudiado principalmente en muestras de BAL de pacientes con neoplasias hematológicas o de los ingresados en unidades de cuidados intensivos [19].
En el presente estudio, se evaluó la prueba MycAssay ™ Aspergillus en muestras respiratorias, incluyendo BAL, esputo espontáneo, y aspirado bronquial, para el diagnóstico de la aspergilosis invasiva en pacientes sin cáncer hematológico.
Materiales y Métodos
pacientes y muestras clínicas
a partir de noviembre 2009 a enero 2011 , se reclutaron 175 pacientes con una o más muestras respiratorias inferiores presentados en el laboratorio de microbiología. La mayoría de los pacientes (96,5%) tenían la sospecha clínica de infección del tracto respiratorio inferior y al menos un factor del huésped aspergilosis pulmonar invasiva, excluyendo el cáncer hematológico. Se recogieron un total de 322 muestras. Las muestras con resultados indeterminados se ensayaron de nuevo, y se eligió el segundo resultado. Las muestras que muestra un resultado PCR indeterminada de confirmación se excluyeron del análisis (n = 14; 4,3%). El número de muestras estudiadas /recogida fue el siguiente: esputo espontáneo (n = 142/145), aspirado bronquial (n = 104/111), BAL (n = 61/65), y protegido catéter cepillo (n = 1/1 ).
Dos pacientes tuvieron una sola muestra, cada uno con un resultado indeterminado, y se excluyeron del análisis. Los 173 pacientes restantes se clasificaron como tener o no tener la aspergilosis pulmonar invasiva u otra infección molde de acuerdo con los criterios revisados de la Organización Europea para la Investigación y Tratamiento del Cáncer (EORTC) [20], [21] o criterios de Bulpa (exclusivamente para los pacientes con EPOC) [20], [21]. La colonización se define como el aislamiento de
Aspergillus
spp. en muestras respiratorias inferiores en los pacientes que no cumplan con la EORTC o criterios de Bulpa. La cirrosis se incluyó como un factor del huésped, ya que la aspergilosis invasiva se ha encontrado en pacientes críticamente enfermos con cirrosis y otras condiciones que predisponen [8]. Los factores predisponentes para la aspergilosis invasiva fueron el cáncer activo sólido (16,8%), la cirrosis (16,8%), el consumo de corticoides (71,7%), la infección por el VIH (15,6%), EPOC (52,6%), el trasplante de órganos sólidos (riñón [1,2%] , corazón [3%], el hígado [4,6%]), neutropenia, (4,6%), o ninguno (3,5%). Una alta proporción de los pacientes (90%) fueron consumiendo antibióticos cuando se tomó la muestra.
Se obtuvieron Todas las muestras sólo cuando esté indicado clínicamente, y no se solicitaron muestras adicionales para el estudio. Las muestras se recogen de forma prospectiva y las cartas de los pacientes se revisaron retrospectivamente. Los médicos estaban cegados al resultado de la PCR, que no se incluyó como criterio de diagnóstico microbiológico.
Procesamiento de la muestra, genómica
Aspergillus
extracción de ADN y amplificación utilizando MycAssay ™ Aspergillus
Las muestras se dividieron para el cultivo de hongos y la extracción de ADN. Todas las muestras se procesaron para
Aspergillus
la detección de ADN, y la mayoría (n = 298/308; 97%) se cultivaron en ambas bacterias y los medios de comunicación de hongos. muestras de BAL (1 ml) se centrifugaron a 3.000
g
durante 10 minutos. Los gránulos concentrados obtenidos se procesaron para cultivo de hongos y estrías en placas de medio de cultivo. Esputo y aspirado bronquial se convirtieron a fluido por la adición de acetilcisteína (Pharmazam, España) y se añadieron a las placas de agar utilizando un asa estéril (10 l). Los medios de cultivo de hongos eran agar Sabouraud-dextrosa y agar con cloranfenicol infusión de cerebro y corazón con agentes antibacterianos. Los medios de cultivo bacterianos fueron agar sangre de oveja y agar chocolate. aislados fúngicos filamentosos se identificaron de acuerdo a los procedimientos morfológicos estándar.
Las muestras para la extracción de ADN se almacenaron congeladas a -20 ° C hasta su análisis por lotes. muestras mucosas gruesas, tales como esputo y aspirado bronquial, se convirtieron a fluido por la adición de reactivo de BBL ™ MycoPrep ™ (Becton Dickinson, Shannon, Irlanda). Estas muestras y las muestras de BAL (1 ml) se centrifugaron a 3000
g
durante 20 minutos. Los gránulos obtenidos se procesaron para
Aspergillus
extracción de ADN usando el kit de MycXtra® manual de ADN fúngico de extracción (Myconostica, ahora una compañía Lab21, Cambridge, Reino Unido), que incluye una etapa de rotura mecánica. BAL sobrenadantes se almacenaron para la determinación de galactomanano.
purificada extraída genómico
Aspergillus
ADN se amplificó adicionalmente utilizando el kit MycAssay ™ Aspergillus (Myconostica, ahora una compañía Lab21, Cambridge, Reino Unido) en el Cepheid SmartCycler ® plataforma (Cepheid, Sunnyvale, California, EE.UU.). MycAssay ™ Aspergillus fue diseñado para la detección de ADN genómico de 18
Aspergillus
especies diferentes (incluyendo
A.
Fumigatus,
A. Flavus
,
A. Terreus
, y
A. niger
) usando balizas moleculares. El ensayo se dirige el gen 18S rRNA y contiene un control interno de origen vegetal para evitar resultados falsos negativos debido a la presencia de inhibidores de la PCR.
Brevemente, 10 l de ADN extraído se mezcló con los reactivos de amplificación en un volumen de reacción final de 25 mL. resultados de la PCR para cada muestra se informaron como negativas (muestras sin
Aspergillus
amplificación de ADN con la amplificación positiva del control interno), positivos (muestras con
Aspergillus
amplificación del ADN), o indeterminados (muestras con
Aspergillus
amplificación de ADN negativo y el fracaso de la amplificación del control interno). El kit de extracción de ADN MycXtra® y MycAssay ™ Aspergillus se aplicaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante [22]. El punto de cruce (Cp) fue el ciclo en el cual la prueba de PCR en tiempo real se convirtió en positivo
Análisis de los datos
Ninguno de los pacientes había demostrado la aspergilosis pulmonar invasiva.; Sólo aspergilosis invasiva probable era considerado como una infección real. Se calculó la sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo (VPP), el valor predictivo negativo (VPN), la razón de verosimilitud para un resultado positivo (LR +), razón de verosimilitud para un resultado negativo (LR), y la razón de posibilidades de diagnóstico (DOR) de la PCR para el diagnóstico de la aspergilosis pulmonar invasiva. Como múltiples muestras respiratorias fueron estudiados en varios pacientes, los valores de diagnóstico de la PCR se calcularon en base tanto en los resultados de la primera muestra presentada al laboratorio de microbiología y de los resultados de cualquier muestra del mismo paciente. PCR y cultivo de hongos se describen y se compararon mediante la prueba de chi-cuadrado y un método binomial para el cálculo de los intervalos de confianza del 95%.
Ética declaración
Este estudio fue aprobado por el comité de ética local (Comité Ético de Investigación Clínica (CEIC-A1)). Los participantes dieron su consentimiento informado por escrito para participar en el estudio. Todos los datos de los pacientes fueron anónimos después de la recolección.
Resultados
Los 173 pacientes estudiados eran en su mayoría de sexo masculino (76,3%) y tenían una edad media de 60,8 ± 19,5 (2-96) años. Los pacientes fueron clasificados como aspergilosis invasiva probable (n = 15; 8,7%), posible aspergilosis invasiva (n = 3; 1,7%),
Aspergillus
colonización (clínicamente no significativa
Aspergillus aislamiento
[n = 21; 12,2%], scedosporiosis pulmonar [n = 1; 0,6%]), o infección molde no invasiva. Los 15 pacientes con aspergilosis invasiva probable se resumen en la Tabla 1. En el momento de la recogida de muestras, todos los pacientes tenían fiebre que no responde a los antibióticos de amplio espectro, y el 80% requirió ingreso a la unidad de cuidados intensivos. Una alta proporción (40%) tenían EPOC como la condición predisponente subyacente. En 14 de los 15 casos, el pulmón infectado era el único órgano. determinación de galactomanano en suero fue único positivo en 5 (35,7%) de los 14 pacientes en los que se aplicó.
Aspergillus spp
. fueron aislados en 63/308 (22%) muestras de 31 pacientes. La distribución de las especies fue el siguiente:
A. fumigatus gratis (n = 45),
A. niger gratis (n = 10),
A. terreus gratis (n = 7),
A. flavus
(n = 5), y otra (n = 3) spp.
Aspergillus spp
. se aisló en una o más muestras clínicas de los 15 pacientes con aspergilosis invasiva probable.
MycAssay ™ Aspergillus fue positivo en muestras 54/254 (17,5%), y en al menos una muestra de 14 de los 15 pacientes con aspergilosis invasiva. Los valores de Cp de las determinaciones positivas de PCR fueron más bajos en muestras de pacientes con aspergilosis probable que en las muestras de pacientes con clínicamente no significativa
Aspergillus gratis (30,18 ± 3,3 frente a 33 ± 2,66;
P =
0,001). Este hallazgo indica una mayor carga de
Aspergillus spp
. en pacientes con aspergilosis invasiva que en los que no.
Como era de esperar, la proporción de muestras con
Aspergillus
aislada o con resultados positivos de PCR fue mayor en los pacientes con aspergilosis invasiva (Tabla 2). La concordancia entre cultivo de hongos y PCR fue alta en todas las muestras y en las muestras de pacientes con o sin la aspergilosis invasiva (83,9%, 86,5% y 83,5%, respectivamente). Las discrepancias se encuentran sobre todo en las muestras de rendimiento
Aspergillus
sin amplificación de ADN (aproximadamente el 10% de las muestras). Curiosamente, la mayoría de las discrepancias se encontraron en las muestras de pacientes sin la aspergilosis invasiva (resultados de PCR-negativo /cultivo positivo, el 86%; los resultados de la PCR-positivo /negativo en cultivo, 94,4%). Las muestras con resultados positivos de PCR /cultivo negativo mostraron valores de Cp más altas que las muestras en las que la cultura y la PCR fueron concordantes. El análisis de muestras de pacientes con aspergilosis invasiva indicó que la proporción de muestras en la que el resultado de la PCR fue positiva (63%) no difería de la proporción de muestras en la que
Aspergillus
spp. se aisló (75%) (
P = 0,615
). Los resultados de la comparación de la PCR y el cultivo de hongos con BAL, esputo y muestras de aspirado bronquial se muestran en la Tabla 3. El rendimiento de la PCR y el cultivo de hongos no difirió con el tipo de muestra estudiada (
P
& gt ; 0,05)
la sensibilidad, especificidad, VPP, VPN, LR +, LR y el DOR del ™ Aspergillus MycAssay y cultivo de hongos para el diagnóstico de la aspergilosis pulmonar invasiva que se realiza en la parte inferior. muestras respiratorias de los pacientes se muestran en las Tablas 4 y 5. La sensibilidad fue mayor cuando se estudiaron varias muestras por paciente; Sin embargo, el análisis de múltiples muestras no afectó especificidad en cualquier medida. Con el fin de estudiar cómo el valor diagnóstico de la PCR podría verse afectada en diferentes situaciones, los pacientes se dividieron en los siguientes grupos: los pacientes con EPOC (n = 91), pacientes con infección no mejora con antibióticos (n = 28), y los pacientes en la unidad de cuidados intensivos con neumonía (n = 35). La sensibilidad y la especificidad no se vieron afectados por esta estratificación. Resultados MycAssay ™ Aspergillus estaban disponibles aproximadamente 4 horas después de la recepción de la muestra. En contraste, el número de días a la visualización de crecimiento fúngico en las placas de cultivo microbiológicos fue como sigue: media, n = 4,3 ± 4,1; mediana, n = 3; y el modo, n = 2.
En 14 de los 15 pacientes con aspergilosis pulmonar invasiva probable, se tomaron las muestras antes del inicio del tratamiento antifúngico, y se estudiaron no hay muestras adicionales durante tratamiento antifúngico. Las muestras seriadas de la paciente restante (n. ° 15, Tabla 1) fueron estudiados; de las cinco muestras tomadas durante el tratamiento antifúngico, tres fueron positivos para MycAssay y dos eran negativas. Curiosamente, después de que las muestras estuvieron en rojo por MycAssay, la condición clínica del paciente mejoró. De los tres pacientes con aspergilosis invasiva posible, uno de ellos recibió voriconazol y mejorado, y dos no recibieron tratamiento antifúngico y murió. El resultado de MycAssay ™ Aspergillus fue negativo para las muestras de los tres pacientes con aspergilosis invasiva posible.
Discusión
El espectro de pacientes con riesgo de aspergilosis pulmonar invasiva se ha ampliado en los últimos años a causa de un aumento en el número de pacientes con factores predisponentes distintos de trastornos hematológicos. Esta expansión se ha ilustrado en los estudios llevados a cabo en grandes hospitales de tercer nivel donde la recolección caso no se limitaba a las unidades de barrio hematología y de cuidado intensivo y donde se realizan un gran número de autopsias [6], [8], [23].
la aspergilosis invasiva en pacientes con neoplasias no hematológicas se caracteriza por una alta mortalidad (60-100%) [6], [10], [11], lo que probablemente refleja las limitaciones de las herramientas de diagnóstico actuales basado en radiología o la microbiología y el bajo índice de sospecha clínica.
el diagnóstico de la aspergilosis invasiva se basa en una combinación de hallazgos clínicos compatibles en pacientes con factores de riesgo, junto con la evidencia histopatológica de la invasión, los hallazgos radiológicos, el aislamiento de
Aspergillus
spp en muestras del tracto respiratorio inferior, o la detección de biomarcadores que circulan en los fluidos. La histopatología es necesaria para obtener un diagnóstico definitivo, aunque las biopsias de pulmón rara vez se obtienen [24]. En comparación con los cultivos y pruebas de diagnóstico molecular, la precisión del diagnóstico anatomopatológico es en el mejor de 80% [25]. Los hallazgos radiológicos que son comunes en pacientes con neutropenia y la aspergilosis invasiva son poco frecuentes en pacientes no neutropénicos [8], [26]. Cultura de menores muestras de las vías respiratorias de los pacientes con sospecha clínica es aún ampliamente utilizado, aunque es lento y limitado por la baja sensibilidad y especificidad [27]. Además, la detección de circulación de galactomanano en muestras de suero de pacientes no neutropénicos tiene una baja sensibilidad para el diagnóstico de la aspergilosis invasiva [6], [14], [16].
En este escenario, el desarrollo de procedimientos diagnósticos rápidos, sensibles y específicos para detectar
Aspergillus
en las muestras de las vías respiratorias de los pacientes sin neoplasias hematológicas es atractivo. Uno de los nuevos procedimientos más alentadores es ADN
Aspergillus
la detección por PCR en tiempo real. En nuestro estudio, los resultados de PCR estaban disponibles tan pronto como 4 horas después de la recogida de muestras, que es un cambio de tendencia necesidad más rápidamente que los 3 días que se requieren para observar el crecimiento de
Aspergillus
en la cultura. Sin embargo, el tiempo a partir del cultivo de la muestra y la detección de crecimiento de hongos se podría reducir mediante la inspección de las placas de cada día, incluso en el fin de semana. Por otra parte, la amplificación simultánea de ADN en muestras respiratorias y cultivo de hongos nos permitirá identificar cepas a nivel de especie y realizar pruebas de sensibilidad a los antifúngicos de aislamientos.
La detección de
ADN Aspergillus Hoteles en muestras de BAL es alentador y confirma el diagnóstico de la aspergilosis invasiva en más pacientes que los procedimientos convencionales [28]. Se ha estudiado principalmente en pacientes con trastornos hematológicos [29], [30], [31]. Un reciente meta-análisis mostró una sensibilidad y una especificidad de 0,91 y 0,92, respectivamente, pero pone de relieve la falta de normalización [32]. Sin embargo, el papel de la PCR en las muestras de las vías respiratorias de los pacientes no hematológicas requiere una evaluación adicional. BAL muestras se recogieron en 4 de los 15 pacientes con aspergilosis invasiva probable. En todos los casos, las concentraciones de galactomanano BAL estaban por encima de 0,5 ng /ml.
La falta de estandarización de la
Aspergillus
PCR hasta la fecha ha obstaculizado su introducción en los criterios de definición para la aspergilosis probable [20 ]. MycAssay ™ Aspergillus es un tiempo real disponible en el mercado PCR para la detección de los más clínicamente relevante
Aspergillus
especies [22]. Como prueba de la marca CE totalmente estandarizada con controles completos de calidad de fabricación, MycAssay ™ Aspergillus cumple con los requisitos para la normalización de los
Aspergillus
PCR necesaria para confirmar un diagnóstico de la aspergilosis invasiva. MycAssay ™ Aspergillus fue ensayada previamente en muestras de BAL [19], las muestras de esputo [33], [34], y muestras de tejidos [35]. MycAssay puede llevar a cabo en el laboratorio de microbiología clínica por personal capacitado en tecnología de biología molecular; el costo estimado de la prueba por la determinación en España es de 25-30 €.
Se evaluó MycAssay ™ Aspergillus en muestras del tracto respiratorio inferior (incluyendo LBA, esputo espontáneo, y aspirado bronquial) de pacientes con factores predisponentes que no sea malignidad hematológica y la sospecha clínica de la aspergilosis invasiva. Se encontró que los tres tipos de muestras del tracto respiratorio inferior estudiados eran adecuados para la detección de
Aspergillus spp
. DNA. Nuestro estándar de oro fue clínico en el que se clasificaron los pacientes utilizando los criterios propuestos por la EORTC [20], [21] o por Bulpa [20], [21]. La sensibilidad de la PCR fue alta y aumenta cuando se estudiaron varias muestras por paciente; especificidad no se vio afectada por la inclusión de múltiples muestras por paciente. La sensibilidad también fue alta en los pacientes con EPOC, una condición predisponente en una gran proporción de los pacientes estudiados. MycAssay ™ Aspergillus mostró un alto VPN, lo que sugiere que un resultado de PCR negativo en cualquier muestra del tracto respiratorio inferior de un paciente sin cáncer hematológico podría resultar útil para descartar la aspergilosis invasiva. En contraste, el PPV del ensayo fue baja. Una explicación para este hallazgo es que MycAssay ™ Aspergillus es capaz de detectar
ADN Aspergillus
en muestras de pacientes colonizados o de pacientes con otras formas de aspergilosis, incluyendo crónica y aspergilosis pulmonar alérgica [36], [37] ( Tabla 5). Otra explicación podría ser la baja prevalencia de la aspergilosis pulmonar invasiva que se encuentra en la población de estudio.
La principal limitación de nuestro estudio es que no se pudieron incluir los casos comprobados histológicamente, porque no hay biopsias pulmonares fueron recogidos o post mortem los análisis efectuados. Esta es una limitación común en los estudios que evalúan el papel de las nuevas herramientas de diagnóstico para el diagnóstico de la aspergilosis invasiva. Por lo tanto, los pacientes fueron diagnosticados con aspergilosis invasiva basada en datos microbiológicos o radiológicos. El hecho de que
Aspergillus
fue aislado de muestras de las vías respiratorias inferiores en todos los pacientes podría explicar la alta correlación encontrada entre el cultivo de hongos y PCR. En nuestros pacientes, MycAssay ™ Aspergillus no nos permitió diagnosticar nuevos casos que podrían perderse con el cultivo de hongos. Otra limitación es que clasificamos nuestros pacientes utilizando los criterios de la EORTC, que fueron desarrolladas específicamente para los pacientes con cáncer. EORTC criterios fueron elegidos en ausencia de criterios específicos para los pacientes que no tienen cáncer.
Llegamos a la conclusión de que MycAssay ™ Aspergillus realizó en muestras del tracto respiratorio inferior mostró una alta sensibilidad para el diagnóstico de la aspergilosis invasiva en pacientes sin cáncer hematológico. La sensibilidad aumenta cuando se analizaron varias muestras. La sensibilidad fue alta para los pacientes con EPOC, que es una población de riesgo emergente en algunos hospitales. MycAssay ™ Aspergillus demostró ser particularmente útil para descartar el diagnóstico de la aspergilosis invasiva y reduce significativamente el tiempo de diagnóstico en comparación con el cultivo de hongos convencional. MycAssay ™ Aspergillus debe usarse simultáneamente con el cultivo de hongos de muestras del tracto respiratorio inferior con el fin de proporcionar datos adicionales sobre la susceptibilidad antifúngica y asegurar la identificación precisa de los aislados.
Reconocimientos
Nos gustaría dar las gracias Thomas O'Boyle para la edición y revisión del artículo. Agradecemos las valiosas sugerencias de David W. Denning después de su revisión crítica del manuscrito. Este estudio fue presentado en parte en el 21º Congreso Europeo de Microbiología Clínica y Enfermedades Infecciosas (ECCMID) y el Congreso Internacional 27 sobre Quimioterapia (CPI), Milán, Italia, 2011 (P-2095).