Extracto
Antecedentes
La infección por el virus del papiloma humano de alto riesgo (VPH) ha sido reconocido como un factor causal para el desarrollo de cáncer de cuello uterino y una serie de otros tumores malignos. Hoy en día, las vacunas contra el VPH, altamente eficaz en la prevención de la infección persistente y lesiones precancerosas, están disponibles para la práctica clínica habitual.
Objetivos
Los datos sobre la prevalencia y distribución de VPH tipo-específica en la población de cada país son cruciales para la vigilancia de la prevalencia de tipos específicos de VPH en el inicio de la vacunación contra el VPH.
Métodos
las mujeres que asisten a un examen ginecológico preventivo que no tenían historia de anormal hallazgo y /o cirugía citológico de las lesiones cervicales se inscribieron. Todas las muestras se ensayaron para determinar la presencia de VPH de alto riesgo Hybrid Capture-2 (HC2 HR) y mediante un ensayo de transferencia lineal modificado por PCR inversa con cebadores de amplio espectro (BS-RLB).
Resultados
se analizaron
frotis cervicales de 1393 mujeres. En el 6,5% de las mujeres, se detectaron hallazgos citológicos anormales. En total, el 28,3% (394/1393) de las mujeres fueron positivas para cualquier tipo de VPH por BS-RLB, el 18,2% (254/1393) por HC2 de recursos humanos, y el 22,3% (310/1393) por BS-RLB para los tipos de HPV HR. En las mujeres con resultados atípicos de la prevalencia de recursos humanos y cualesquiera tipos de VPH fueron significativamente más altos que en las mujeres con resultados citológicos normales. En general, se detectaron 36 tipos diferentes de VPH, con el VPH 16 es el más prevalente (4,8%). positividad HPV disminuyó con la edad; la mayor prevalencia fue del 31,5% en el grupo de edad 21-25 años.
Conclusiones
Nuestros sujetos de estudio representan la población de selección real. prevalencia de HPV en esta población en la República Checa es mayor que en otros países de Europa del Este. También el espectro de los tipos de VPH más frecuentes difiere de los reportados por otros, pero VPH 16 es, concordantemente, el tipo más frecuente. VPH prevalencias específicas del tipo específicos de cada país proporcionan información de referencia que permitirá medir el impacto de la vacunación contra el VPH en el futuro
Visto:. Tachezy R, Smahelova J, J Kaspirkova, Salakova M (2013) Tipo Virus del Papiloma Humano Prevalencia en el específico de cáncer de cuello cribado de la población de mujeres checas. PLoS ONE 8 (11): e79156. doi: 10.1371 /journal.pone.0079156
Editor: Daniela Hozbor Flavia, Universidad Nacional de La Plata, Argentina
Recibido: 21. de junio de, 2013; Aceptado: September 26, 2013; Publicado: 12 Noviembre 2013
Derechos de Autor © 2013 Tachezy et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyada por conceder NS 10 /656-3 /2009 y por la subvención NT 12372 del Ministerio de Salud de la República Checa. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:. Biopticka laboratorio es una empresa privada que presta patológico de rutina, citológico y diagnóstico de genética molecular humana de muestras clínicas. El co-autor, Jana Kaspirkova, es un especialista en genética molecular que es responsable de la recogida de muestras apropiado y que han contribuido al análisis de datos. No hay conflicto de intereses en relación con los resultados del estudio y se confirma que esto no altera la adhesión a todas las políticas de PLoS ONE sobre los datos y compartir materiales.
Introducción
papilomavirus humanos (VPH ) son pequeños virus de ADN que infectan la mucosa y la piel epitelios. Actualmente se conocen más de 170 tipos de VPH, 13 clasificados como de alto riesgo y 7 tipos de VPH de alto riesgo, probablemente. Los tipos de VPH de bajo riesgo (LR) causan lesiones benignas, mientras que los tipos de alto riesgo (HR) del VPH se han establecido como agentes etiológicos de cáncer cervical (CC) [1,2]. Además de cáncer de cuello uterino, VPH AR tiene efectos carcinógenos en varios otros sitios anatómicos en las mujeres y los hombres [3]. Los VPH son actualmente la infección de transmisión sexual viral más común en todo el mundo, pero la distribución de los diferentes genotipos varía entre las distintas poblaciones y regiones geográficas [4]. En un meta-análisis de 1 millón de mujeres con resultados citológicos normales, la prevalencia del VPH global estimada fue del 11,7% y no hubo diferencias sustanciales entre los continentes. Sin embargo, cinco tipos de VPH fueron consistentemente los más prevalentes: VPH 16, 18, 52, 31, y 58, independientemente de la ubicación geográfica. En Europa, la prevalencia más alta se registró en países de Oriente [5]. Los datos procedentes de la República Checa publicados antes [6] no fueron incluidos en el meta-análisis debido a que el estudio no cumplía los criterios de inclusión debido a una inadecuada selección de las mujeres con resultados citológicos normales, ya que fueron reclutados en un entorno basado en el hospital. La prevalencia de VPH en este grupo fue alta (23%), pero similar a otros países del Este. alta prevalencia del VPH se informó que se correlaciona con una alta incidencia de CC con dos excepciones, el sur de Asia y Europa del Este [5]. Sin embargo, en la República Checa la incidencia de CC es consistentemente muy alta, de 16,1 /100 000 mujeres (estándar europeo) en 2010, a pesar del hecho de que los recursos financieros considerables están dirigidas hacia la prevención del cáncer de cuello uterino. Las razones son principalmente la falta de coordinación y supervisión que lleva a la sobre-proyección de una minoría de las mujeres, mientras que la mayoría de la población objetivo son menores-seleccionados o no seleccionados en absoluto [7]. La edad recomendada por la Sociedad Ginecológica Checa y obstétrica para el primer examen de las mujeres después del inicio de la vida sexual es de 15 años y no hay ninguna limitación en cuanto a la edad de selección especificados en el programa para la prevención del cáncer de cuello uterino en la República Checa. Sin embargo, las mujeres de entre 25 y 60 años que no asistió a la exploración en los últimos dos años deberían ser invitados por la compañía de seguros de salud [8].
La detección del VPH se ha mostrado como una prueba sólida, reproducible y sensible para la vigilancia de mujeres con resultados citológicos anormales y para el seguimiento de las mujeres tratadas por lesiones cervicales. Además, la detección de VPH también ha sido recientemente demostrado ser una prueba sensible y rentable para la identificación de las mujeres en situación de riesgo en programas de cribado cervical primario [9,10]. Existen dos vacunas contra el virus del papiloma profilácticos, bivalente y tetravalente, están disponibles para la prevención primaria de las enfermedades asociadas al VPH [11]. La evaluación de la prevalencia de tipos específicos de VPH en la población antes del inicio de la vacunación de rutina y la vigilancia de posibles cambios en la distribución de los tipos es importante tanto para la selección de las pruebas de diagnóstico y para la estimación del potencial impacto local de las vacunas contra el VPH en el la prevención de las enfermedades asociadas al VPH en mujeres y hombres.
Materiales y Métodos
Estudio de la población
En la República Checa el intervalo de cribado es de un año. Las mujeres con citología atípica y /o hallazgos colposcópica están programadas para el examen de seguimiento en 3-6 meses de intervalo. la detección y tipificación de HPV se realizó en mujeres que tuvieron su examen ginecológico anterior, hace más de un año, y que no tenían antecedentes de hallazgos anormales o patológicas en el cuello del útero y sin tratamiento previo para las lesiones cervicales.
En total, muestras de 1393 mujeres (edad media 33,5 años; rango de edad 14 - 79 años) fueron seleccionados a partir del banco de muestras del Laboratorio biópticos en Pilsen, República Checa. Estas muestras fueron proporcionados por los ginecólogos que atienden a los pacientes en 5 de 14 diferentes distritos de la República Checa en el período comprendido entre enero de 2010 y diciembre de 2011. Estos lugares incluyen tanto las grandes ciudades y áreas rurales. Las muestras en medio de muestra Transporte (STM) (Qiagen, Hilden, Alemania) fueron enviados al Laboratorio Nacional de Referencia de papilomavirus (PV NRL) con el número de identificación de laboratorio (ID laboratorio) para impedir la identificación personal de los sujetos de estudio en NRL PV. El estudio fue doble ciego. Las personas que realizan la detección del ADN del VPH y tipificación no estaban al tanto de los resultados de la citología y las citologías fueron cegados a los resultados del ADN del VPH. Los resultados citológicos estaban disponibles bajo el ID de laboratorio para el análisis final.
clasificación citológica.
La clasificación citológica se realiza de acuerdo con Bethesda 2001 actualización [12]. A los efectos de este estudio, los hallazgos citológicos se agruparon en cuatro categorías: menores normales, (si las células escamosas atípicas de //células de significación desconocida ASC-US y /o atípicas glandulares, no especificado de otra /AGC-NOS /fueron detectados) , leve (si /LSIL /se detectaron lesiones intraepiteliales escamosas de bajo grado), o grave (si las células escamosas atípicas, no puede excluir lesión intraepitelial /ASC-H /células escamosa de alto grado y /o atípicas glandulares, favorecer la neoplasia /AGC- NEO /, y /o lesiones intraepiteliales escamosas de alto grado /HSIL /) fueron detectados).
Declaración de Ética.
El estudio fue aprobado por el comité de ética del Instituto de Hematología y Transfusión de Sangre. La necesidad de consentimiento informado se renunció por el comité de ética porque las muestras fueron seleccionadas de forma anónima desde el banco de muestras del Laboratorio Biópticos en Pilsen, República Checa (http://www.biopticka.cz/).
la disponibilidad de datos.
el estudio de los datos de origen se harán disponibles a petición, de conformidad con los principios establecidos por el Consejo Nacional de Investigación de Estados Unidos de la Academia Nacional (National Academies Press, 2003).
La detección del VPH y genotipado
Hybrid Capture 2 de ensayo (HC2).
Una alícuota de 200 l de cada medio de muestra Transporte (STM) (Qiagen, Hilden, Alemania) muestra se almacenó a -20 ° C hasta su procesamiento adicional (véase más adelante). Todas las muestras se ensayaron usando el híbrido de la Captura de Alto Riesgo 2 Prueba de VPH ADN (HR HC2) (Digene Corporation, Gaithersburg, MD). Esta prueba permite la detección de tipos de VPH 13 de recursos humanos (VPH 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 y 68). La prueba se realizó según las instrucciones del fabricante. El umbral para la designación del VPH positivo fue un pariente unidad de luz /de corte (RLU /CO) Relación de ≥1.0.
PCR y la hibridación.
Las células de una alícuota de 200 l de cada muestra de STM se sedimentaron por centrifugación y el ADN se extrajo utilizando el kit QIAamp DNA Mini (Qiagen, Hilden, Alemania) de acuerdo con la protocolo del fabricante. La elución final del ADN de la columna se realiza por 100 l de tampón de elución.
La presencia y la integridad del ADN humano fueron confirmadas por PCR con los cebadores MS3 /MS10bio específicos para el gen de beta-globina [13].
La amplificación se realizó en un termociclador PCR (PTC 200, MJ Research Inc., Waltham, MA, EE.UU.) con una mezcla de amplio espectro BSGP5 + cebadores y extremo 5 'marcado con biotina BSGP6 + cebadores que amplifican el 150 fragmento de pares de bases del gen de L1 [13]. Cincuenta microlitros de la mezcla de PCR contenía 4 l de ADN aislado, KCl 50 mM, Tris HCl 10, pH 8,3 (Roche Applied Biosystems, Mannheim, Alemania), 200 M de cada trifosfato de desoxinucleósido, MgCl2 3,5 mM, 1 U de DNA AmpliTaq Gold polimerasa (Roche Applied Biosystems, Mannheim, Alemania), 10 pmol de cada uno de los nueve BSGP5 + cebadores, y 20 pmol de cada uno de los tres BSGP6 5'-biotina + cebadores (MWG-Biotech AG, Ebersberg, Alemania). Después de la desnaturalización inicial a 94 ° C durante 4 minutos, cada uno de los 40 ciclos consistían en la desnaturalización a 94 ° C durante 20 segundos, el cebador de recocido a 38 ° C durante 30 segundos, y elongación de la cadena a 71 ° C durante 80 segundos. Al final, se realizó la incubación a 71 ° C durante 4 minutos. Después de la amplificación, se analizaron 10 l de producto de PCR en un gel de agarosa horizontal 3% (NuSieve 3: 1 agarosa, FMC Bioproducts, Rockland, ME).
Para el genotipado, se utilizó la hibridación de transferencia de la línea inversa (RLB) [14]. El método RLB es capaz de identificar 37 tipos de HPV diferentes en un solo ensayo. Las secuencias de todas las sondas, excepto para aquellos rediseñado según Schmitt [15] (VPH tipos 16, 39, 59, y 82, y las sondas universales U1 y U2), fueron descritos antes [14]. Todas las sondas estaban ligados de forma covalente con el grupo amino 5 'terminal a una membrana Biodyne C activada de carga negativa y se hibridaron con el producto de PCR biotinilado. Después del lavado, la membrana se incubó con conjugado de estreptavidina marcada con peróxido a 42 ° C durante 60 min. Para la detección de quimioluminiscencia de hibridar ADN, la membrana se incubó en ECL líquido de detección (Amersham Biosciences, Uppsala, Suecia) y se expone a Lumifilm (Roche, Indianapolis, IN) durante 5 min.
Las muestras positivas por HC2 HR pero negativos por BS-RLB fueron probados por PCR con los cebadores consenso MY09 /MY11 y HMB01 como se especifica antes [16]. Las muestras positivas se tipificaron por secuenciación como se muestra a continuación.
secuenciación HPV.
Las muestras que no se habían hibridado en la RLB pero había reveló una banda clara en el gel de agarosa se sometieron a secuenciación de nucleótidos de ADN con el fin de determinar el genotipo exacto HPV. Cuarenta microlitros del producto de PCR se cortó del gel de agarosa 2% (NuSieve GTG agarosa, FMC Bioproducts, Rockland, ME, EE.UU.), se purificó utilizando el kit MinElute Gel Extraction (Qiagene, Hilden, Alemania), y se secuenció con el " BigDye Terminator Primer Ciclo de Secuenciación kit "(Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.). El análisis se realizó en un sistema automatizado 3500 ABI PRISM secuenciación (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.) y las secuencias fueron analizadas por el software Chromas y evaluada por el software BLAST (http: //www.ncbi.nlm.nih .gov /BLAST /).
prueba de VPH Linear Array genotipificación (LA).
Las muestras con resultados discrepantes de la HC2 de recursos humanos y los métodos de PCR (véase más arriba) se pusieron a prueba con el LA (Roche). Esta prueba permite la detección de 37 HR y los tipos de VPH LR (VPH 6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 40, 42, 45, 51, 52, 53, 54, 55, 56 , 58, 59, 61, 62, 64, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73 (MM9), 81, 82 (MM4), 83 (MM7), 84 (MM8), IS39, y CP6108). La prueba se realizó de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Desde el ADN extraído, se utilizó la misma cantidad que para el método de BS-RLB (4 l).
Los análisis estadísticos
Multiplicar muestras infectadas eran aquellos en los que se habían detectado dos o más tipos de VPH. Estas muestras se contaron como positivos para un tipo de VPH y también se incluyen entre los aspectos positivos para los demás. La prevalencia de VPH de tipos específicos se expresan como porcentajes de todas las materias de las pruebas para el VPH, y por lo tanto representan la prevalencia del VPH en cualquiera de las infecciones simples o múltiples. Para expresar la representación de cada tipo de infecciones simples y múltiples, cada muestra se le asigna en las fracciones proporcionales a los genotipos particulares, pero cuenta sólo una vez [17]. La diferencia en la prevalencia del VPH en el grupo de mujeres con resultados citológicos normales se compararon con aquellas mujeres con resultados atípicos (ASC-US /AGC-NOS, AGC-NEO /LSIL, ASC-H /H-SIL) con intervalos de confianza del 95% ( CI) utilizando GraphPad InStat (versión 3.00) (GraphPad Software, San Diego, CA). Para las tablas de contingencia, se utilizó la prueba de chi-cuadrado estándar y la prueba exacta de Fisher. Todas las pruebas fueron de dos caras y el nivel de significación fue de a = 0,05. Con el fin de excluir a las diferencias en la estructura de edades entre poblaciones se utilizó estandarización directa (estándar mundial de la OMS). La estadística de Kappa se utilizó para medir el acuerdo para el VPH positividad entre las dos pruebas utilizadas.
Los tipos de VPH detectadas se clasificaron en bajo riesgo (LR) (VPH 6, 11, 32, 40, 42, 43, 44, 54, 61, 62, 72, 74, 81, 90, y 114), de alto riesgo (HR) (VPH 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 y 68), y, probablemente, de alto riesgo (PAR) (VPH 26 , 53, 66, 67, 70, 73, y 82) tipos de Alfa género que contiene los tipos de VPH de la mucosa [18-20]. En nuestro análisis, definimos (basado en la relación filogenética) HPV 31 como estrechamente relacionado con HPV 16, HPV 45 y como estrechamente relacionado con HPV 18. HPV 33, 52, y 58 como más lejanamente relacionado con HPV 16.
El laboratorio está acreditado para CSN eN ISO 15 189 y participa regularmente en programas de control de calidad externos organizados por INSTAND (Alemania) y el Centro de Ciencias Biomédicas de Mendel (Chipre). Por otra parte, el laboratorio ha participado dos veces en la OMS Estudio de VPH LabNet Dominio de ADN del VPH Typing organizado por el Laboratorio de Referencia de la OMS VPH Global [21,22].
Resultados
Fuera de 1393 mujeres de nuestro estudio, el 25,6% (357/1393) eran menores de 25 años y 2.2% eran mayores (32/1393) de 60 años, es decir, 72% estaban dentro del rango de edad recomendado para el cribado. La mayoría de las mujeres - 93,5% (1302/1393) - tuvo resultados citológicos normales. En total, el 6,5% (91/1393) de las mujeres tenían resultados citológicos anormales, 4,4% (61/1393) tuvieron ASC-US o AGC-NOS, 2,0% (28/1393) tenían AGC-NEO o LSIL y 0,1% ( 2/1393) tuvieron ASC-H o H-SIL. Menos mujeres - 18,2% (254/1393) - fueron positivas para VPH AR por el método de HR HC2 en comparación con BS-RLB que detectó el 22,3% (310/1393) de HPV HR o HR y LR VPH positivas y el 28,3% (394 /1393) fueron positivos por BS-RLB para cualquier tipo de VPH. Las prevalencias correspondientes, estandarizadas por edad de la población mundial, fueron 14,7%, 19,5% y 24,6%, respectivamente. Por BS-RLB, 70,6% (278/394) de los sujetos eran HPV positivo para un único tipo de HPV, mientras que 29,4% fueron positivos para múltiples tipos (18,3% para dos, 6,9% para tres, 2,8% para cuatro, 1,3% para cinco y 0,3% para los seis tipos de VPH). tipos de VPH LR, como una sola infección, estaban presentes en 6,0% (84/1396) de las mujeres (Tabla 1).
citológicas
todos
normales
ASC-US /AGC-NOS
AGC-NEO /LSIL
ASC-H /HSIL
valor de p
& amp;
N [%] N [%] N [%] N [%] N [%] HR HC2254 (18,2) 203 (15,6) 23 (37,7) 27 ( 96,4) 1 (50,0) & lt; 0.0001PCR, VPH AR * 310 (22,3) 256 (19,7) 27 (44,3) 26 (92,9) 1 (50,0) & lt; 0.0001PCR, cualquier HPV394 (28,3) 333 (25,6) 33 ( 54,1) 27 (96,4) 1 (50,0) & lt; 0.0001PCR, LR VPH ** 84 (6,0) 77 (5,9) 6 (9,8) 1 (3,6) 0 (0,0) 0.4912HPV 6/11
*** 20 (1.4) 19 (1,5) 0 (0,0) 1 (3,6) 0 (0,0) 0.7503HPV 16/18
#104 (7,5) 86 (6,6) 9 (14,8) 9 (32,1) 0 (0,0) & lt ; 0.0001HPV 31/45
*** 43 (3,1) 37 (2,8) 3 (4,9) 3 (10,7) 0 (0,0) 0.0565HPV 33/52/58
& amp; & amp; 48 (3.4) 38 (2.9) 6 (9.8) 3 (10,7) 1 (50,0) 0.0007Table 1. VPH prevalencia de hallazgos citológicos y por método de detección de ADN del VPH
& amp.; valor de p para la comparación de la prevalencia del VPH en pacientes con normales y atípicas (ASC-US /AGC-NOS, AGC-neo /LSIL, ASC-H /HSIL) citológicas, HR HC2 = prueba Hybrid HR Capturar, PCR = cadena de la polimerasa reacción, ASC-US = células escamosas atípicas de significado desconocido, AGC-NOS = células glandulares atípicas, que no se especifique lo contrario, AGC-NEO = células glandulares atípicas, favorecer la neoplasia, LSIL = bajo grado de lesión intraepitelial escamosa, ASC-H = atípica células escamosas, no pueden excluir de alto grado de lesión intraepitelial escamosa (HSIL), HSIL = alto grado de lesión intraepitelial escamosa * presencia de VPH de AR y también VPH de AR en la infección múltiple con tipos de VPH de BR, ** presencia de tipos de VPH de BR solamente, en infecciones simples o múltiples con otros tipos LR *** muestras que no contienen VPH 16 y /o 18,
muestras#VPH 16 y /o 18 positivos,
& amp; & amp; Las muestras que no contienen VPH 16 y /o 18 y /o 31 y /o 45 Descargar CSV CSV
mujeres normales citológico fueron positivos para VPH de los tipos de recursos humanos en el 15,6% (203/1302) por el test HC2. El uso de BS-RLB, el 19,7% (256/1302) de las mujeres citológicamente normales fueron positivos para VPH tipos de recursos humanos, y el 25,6% (333/1302) para cualquier tipo de VPH (Tabla 1). Las respectivas prevalencias, estandarizadas por edad de la población mundial, fueron 12,5%, 16,3% y 21,4%. De las mujeres del estudio, el 5,9% (77/1393) estaban infectados por el VPH tipos LR.
La prevalencia de la infección múltiple aumenta con la gravedad de los resultados citológicos (p para la tendencia = 0,0003) (Tabla 2). infección múltiple fue más frecuente en la edad más joven y estaba ausente en las mujeres mayores de 55 años (Figura 1).
VPH ADN Prevalencia (%) Grupo de edad
N
HR HC2
PCR VPH AR
PCR CUALQUIER VPH
PCR LR VPH
VPH 6/11
VPH 16/18
≤2015334 (22,2) 43 (28,1) 54 (35,3) 11 (7,2) 4 (1,3) 13 (9,2) 21-2521367 (31,5) 73 (34,3) 87 (40,8) 14 (6,6) 7 (3,3) 26 (12,2) 26-3020229 (14,4) 43 (21,3) 56 (27,7) 13 (6,4) 4 (2,0) 18 (8,9) 31-3521634 (15,7) 42 (19,4 ) 54 (25,0) 12 (5,6) 3 (1,4) 12 (5,6) 36-4019218 (9,4) 24 (12,5) 36 (18,8) 12 (6,3) 2 (1,0) 6 (3,1) 41-4511410 (8,8) 13 (11,4) 17 (14,9) 4 (3,5) 0 (0,0) 3 (2,6) 46-50905 (5,6) 9 (10,0) 17 (18,9) 8 (8,9) 0 (0,0) 7 (7,8) 51-55555 (9,1 ) 4 (7,3) 5 (9,1) 1 (1,8) 0 (0,0) 3 (3,6) 56-60371 (2,7) 3 (8,1) 4 (10,8) 1 (2,7) 0 (0,0) 0 (0,0) 61-65210 (0.0) 2 (9.5) 3 (14,3) 1 (4,8) 1 (4,8) 0 (0,0) & gt; 6590 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) Tabla 2. Edad HPV específico prevalencia por método de detección de ADN de VPH en las mujeres con resultados citológicos normales.
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Independientemente del método utilizado para la detección de VPH, la prevalencia de HPV HR aumenta con la gravedad de hallazgos citológicos mientras que la prevalencia de tipos de VPH LR en la infección única o múltiple se mantiene más o menos estable (Tabla 1). En nuestro estudio, se detectaron sólo dos mujeres con resultados citológicos graves, uno con HSIL fue positiva tanto por HC2 HR y BS-RLB (VPH 33) y un paciente con ASC-H fue negativo con ambos métodos.
La prevalencia de VPH de AR fue dependiente de la edad. Se observó mayor prevalencia de VPH de AR en el grupo de edad de 21-25 años, por tanto HC2 HR y BS-RLB, el 34,2% (78/228) y el 36,8% (84/228), disminución, respectivamente, y rápidamente en las mujeres mayores . En la categoría de edad de 61-65 años, BS-RLB detectó el 9,1% (2/22) de los aspectos positivos de VPH de recursos humanos y de recursos humanos HC2 dio resultados negativos (Figura 2).
En las mujeres con resultados citológicos normales, la prevalencia de VPH de AR fue ligeramente inferior en comparación con toda la cohorte, alcanzando el máximo de 31,5% (67/213) y 34,3% (73/213) a la edad de 21-25 años, según la evaluación de HR HC2 y BS-RLB, respectivamente (Tabla 2).
La detección de ADN de VPH AR por HR HC2 y BS-RLB arrojó resultados concordantes en el 91,4% (1273/1393) de las muestras. La correlación fue significativa (valor de Kappa = 0,7339).
Fuera de 120 muestras discrepantes, 88 eran BS-RLB HC2 HR positivo, pero negativo para VPH de AR. De estos, el 76,1% (67/88) contenía los tipos de VPH de recursos humanos que son el objetivo por el conjunto de recursos humanos HC2. En 32,8% (22/67) de estas muestras, se detectó la infección múltiple HPV. Los tipos de VPH vacunal HR 16 y /o 18 se detectaron en 31,8% (28/88) de estas muestras: en 60,7% (17/28) como una sola infección y en 39,3% (11/28) como parte de un múltiplo infección. Tres de estos 28 pacientes (10,7%) con infección múltiple tenido citológicas sospechosas (ASC-US), mientras que el 89,3% restante de los sujetos tenían citología normal.
Hubo 32 muestras positivas en HC2 HR pero negativos para VPH AR por BS-RLB. En el 56,3% (18/32) de estas muestras, BS-RLB detecta los tipos de VPH LR solamente (VPH 6, 32, 42, 43, 44, 54, 61, 62, 74 y 81); el 43,8% restante (14/32) de las muestras fueron BS-RLB negativo para cualquier tipo de VPH. El valor medio de RLU /CO en esas 14 muestras fue bastante baja (12,3 RLU /CO), que es igual al límite de positividad débil de la muestra en HC2 HR. En 10/18, las muestras positivas por BS-RLB para los tipos de VPH de BR solamente, LA también detecta los tipos de VPH de recursos humanos, sobre todo en el marco de la infección múltiple. En 6/14 muestras negativas por BS-RLB para cualquier tipo, LA también detecta los tipos de VPH de RH (Tabla 3).
VPH TIPO DE MUESTRA
citológicas
HR HC2 [RLU /CO]
BS-RLB
LA
1Normal8.144242,662Normal1.2342423ASC-US14.334242,514Normal3.2005Normal1.742426LSIL35.944,81*31,62,81,52**7Normal1.2008Normal14.34435*9Normal132.70010Normal1.60011Normal1.10012ASC-US2.5424213Normal11.960014Normal6.2740**15Normal1.984242,66,8416Normal2.27616117Normal4.70018Normal1.8035,5919Normal5.9003120Normal1.4344,54*0**21Normal6.1754*31,5422Normal1.470*54,6223Normal1.46425924***Normal5.22623125Normal1.213283,84**26Normal1.8703527Normal10.126161,8128Normal1.1405229Normal5.244359**30Normal3.9005231Normal1.50059,8132Normal23.7766,31Table 3. Resultados de la detección específica del tipo de HPV por medio de Linear Array (LA) en las muestras negativas para el VPH AR sobre BS-RLB pero positivos sobre HC2 HR.
* BS-RLB no detecta el VPH 62, ** LA hace no detectar el VPH 32, 43, 44, 74; *** VPH 66 detectada por medio de MY09 /11 PCR y secuenciación CSV Descargar CSV
En total, se detectaron 35 tipos diferentes de HPV: 20 HR y los tipos de VPH phr y 15 tipos de VPH de BR. La prevalencia según el tipo de VPH y hallazgo citológico se muestran en la Tabla 4. Los tipos de recursos humanos más prevalentes fueron VPH 16 (5,4%), seguidos por el VPH 56, 39, 53 y 18, mientras que los tipos de VPH LR, 42, 54, 44 , fueron más frecuentemente detectado 6 y 61. La prevalencia de VPH, los tipos relacionados de cerca y de lejos vacunales en todas las mujeres, así como en mujeres con citología normal eran casi idénticos y se resumen en la Tabla 1. VPH 6 y /o 11 sólo se encontró en el 1,4% (20/1393) de muestras, mientras que HPV 16 y /o 18 en 7,5% (104/1393) de las muestras. tipos estrechamente relacionados con el VPH 31 y /o 45 estaban presentes en el 3,1% (42/1393) y lejanamente relacionado tipos de VPH 33 y /o 52 y /o 58 en un 3,4% (48/1393) de las muestras.
citológico RESULTADOS
TIPOS todos los
NORMAL
ASC-US /AGC-NOS
AGC-NEO /LSIL
ASC-H /HSIL
N
%
N
%
N
%
N
%
N
%
1393100.0130293.5614.4282.020.1N+%N+%N+%N+%N+%HPV ALL39428.333325.63354.12796.4150.0HR HPV31022.325619.72744.32692.9150.0HPV single27870.624774.21751.51348.11100.0HPV multiple11629.48625.81648.51451.900.06201.4191.500.013.600.01120.120.200.000.000.016755.4634.8711.5517.900.018322.3241.846.6414.300.02610.110.100.000.000.031221.6161.234.9310.700.03210.110.100.000.000.033191.4171.311.600.0150.03550.450.400.000.000.039332.4262.023.3517.900.04050.450.400.000.000.042433.1362.846.6310.700.04330.220.211.600.000.044191.4161.211.627.100.045292.1262.034.900.000.051312.2211.646.6621.400.052241.7171.334.9414.300.053332.4251.9711.513.600.054271.9201.569.813.600.056392.8312.446.6414.300.058141.0110.834.900.000.059130.990.734.913.600.06190.690.700.000.000.06220.120.200.000.000.06670.560.500.013.600.06730.230.200.000.000.068201.4161.211.6310.700.070130.9120.900.013.600.07210.100.000.013.600.07370.570.500.000.000.07450.440.311.600.000.08160.440.311.613.600.082120.990.711.627.100.09020.120.200.000.000.011410.110.100.000.000.0Table 4. La prevalencia de los tipos de VPH en la población de cribado de mujeres checas por citológicas según lo revelado por BS-RLB.
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Discusión
Este estudio proporciona información básica sobre el VPH de tipo prevalencia específica en la República Checa antes del inicio de la vacunación de rutina y permite una mayor vigilancia de los cambios en la prevalencia de una serie de genotipos de VPH. La prevalencia se ha estudiado en la población de cribado de mujeres checas. Se utilizaron dos métodos para la detección del VPH. Con el fin de proporcionar datos comparables a nivel internacional, se seleccionó el más utilizado comercialmente disponible HC2 conjunto de recursos humanos. El segundo método, por otro lado, permite una detección muy sensible de un amplio espectro de tipos de VPH y también de las infecciones múltiples. Los dos métodos dieron resultados concordantes en el 91% de las muestras. VPH y HPV HR son muy prevalentes en la población checa. La prevalencia más alta se observó en el grupo de edad de 21-25 años. En las mujeres mayores de 55 años, no se detectó infección múltiple y casi ningún tipo LR. La mayoría de las mujeres tenían resultados citológicos normales, sólo el 6,5% de las mujeres tenían resultados citológicos anormales. Esto está de acuerdo con los datos anuales en el mayor laboratorio citológico Checa que realiza alrededor de 600 000 exámenes citológicos de cribado de citología por año. Aproximadamente el 7,5% de las mujeres de la población de selección fueron infectados por los tipos vacunales de Recursos Humanos y 6,5% en los tipos de recursos humanos relacionados de cerca y de lejos, mientras LR tipos vacunales fueron mucho menos frecuentes (1,4%). Al igual que en otros países, el tipo de recursos humanos más prevalente fue el VPH 16, pero otros tipos de VPH de recursos humanos (VPH 56, 39/45, 18 y 51) que eran el detectado con mayor frecuencia en la población checa fueron diferentes a los reportados para los países europeos por Bruni et al. (VPH 16, 31, 18, 39, 33 y 66) [5].
El meta-análisis, así como un análisis conjunto de la prevalencia de tipos específicos de VPH en mujeres con resultados citológicos normales en todo el mundo han llevado a cabo [4,5,23], pero los datos publicados anteriormente de la República Checa [6] no se incluyeron debido a su falta de idoneidad. Los datos sobre la prevalencia de tipos específicos de VPH en el cribado de población de Europa del Este son todavía limitados. Ninguno de los países de Europa del Este se incluyó en los primeros análisis combinados [23]. En el meta-análisis de de Sanjosé et al. sólo los datos procedentes de Rusia fueron analizados, mientras que Bruni et al. También se incluyen los datos procedentes de Polonia, Hungría, Bielorrusia y Letonia [4,4,5]. Sin embargo, para algunos países, por ejemplo, Hungría, sólo la prevalencia total de recursos humanos y los tipos de LR se evaluó, para otros países, se analizaron un número limitado de tipos de VPH o sólo una parte de las muestras positivas de HPV se tipificaron. Recientemente, los datos de Eslovenia también se han publicado [24].
La prevalencia del VPH en todo el mundo en mujeres con citología normal en el análisis combinado fue del 10,4%, la prevalencia del VPH en Europa fue del 8,1%, y la distribución varió sustancialmente entre continentes. Europa del Este estuvo representado por un solo estudio de Rusia con 309 mujeres inscritas. la prevalencia del VPH en este estudio fue mucho mayor que en otras regiones europeas (29,1%). VPH 16 fue el tipo más frecuente en todo el mundo (2,5%), así como en Europa del Este (7,4%), pero este resultado debe considerarse con cautela, ya que las muestras positivas a 100 de HPV fueron mecanografiados en el estudio ruso. La prevalencia de HPV 16 en otras regiones europeas era mucho más bajo (1,6% a 3,0%) [4].
El meta-análisis de un millón de mujeres con resultados citológicos normales [5] encontraron una prevalencia global del VPH del 11,7%, comparable en todo el mundo. Este meta-análisis incluyó datos de cinco países de Europa del Este y confirmó una prevalencia sustancialmente mayor de VPH en estos cinco países, en comparación con otras regiones europeas (21,4% vs. 8,8% -10%). En nuestro estudio, la prevalencia de cualquier tipo de VPH en mujeres con resultados citológicos normales fue del 25,6% y fue mayor que en Polonia (16,6%). La prevalencia de tipos de recursos humanos del VPH en mujeres con resultados citológicos normales fueron más bajos en Polonia y Eslovenia (9,6% y 10,7%, respectivamente) que en la República Checa (19,7% y. 15,6% en BS-RLB y HR HC2, respectivamente). En la población de selección de Rusia, Bielorrusia y Letonia, la prevalencia de VPH de los tipos de recursos humanos fue del 27,2%. Dado que en los cuatro estudios, se reclutaron mujeres de la población de selección, las diferencias en la prevalencia pueden reflejar las diferencias reales entre las poblaciones de los cuatro países de Europa del Este o puede ser atribuido al hecho de que se utilizaron diferentes métodos para la detección del VPH como se muestra antes [5]. El estudio polaco utilizó el sistema de + /6 + PCR GP5 que es menos sensible que el sistema modificado utilizado en nuestro estudio. sistema similar a la nuestra fue aplicada por Schmitt et al. [25] a la población de cribado de las mujeres belgas y la prevalencia obtenida en su estudio eran comparables a nuestros datos. En el estudio de Eslovenia, se utilizó un sistema que se dirige a menos tipos de VPH. Sin embargo, en el estudio de Kulmala et al. [26], se utilizó un sistema que detecta sólo nueve tipos de VPH de recursos humanos y la prevalencia era comparablemente alta que en la población Checa. Otra fuente de variabilidad es la distinción entre la AR y los tipos de VPH de BR. En los análisis, hemos incluido tanto en la AR y los tipos de VPH PHR como tipos de AR (ver materiales y métodos). Si se utilizó la misma definición de tipos de recursos humanos como el estudio polaco [27], la prevalencia de HPV HR en la población checa serían todavía mucho más alta, 20,4% para toda la cohorte y el 17,9% para las mujeres con resultados citológicos normales. Nuestros datos confirman la excepcionalmente alta prevalencia de VPH en el cribado de población de los países de Europa del Este, y también son comparables con los resultados de otros numerosos estudios realizados en todo el mundo con el HC2 conjunto más ampliamente utilizado (para revisión ver 5).
En la población de cribado de las mujeres checas, se encontró que la mayor prevalencia de VPH en el grupo de edad de 21-25 años. La prevalencia más alta en la misma categoría de edad se encuentra tanto en los países menos desarrollados y más. En los países de Europa del Este, se observó el pico en el grupo de edad de 25-34 años [5].