Extracto
circulantes de células tumorales (CTC) enumeración promete ser un importante predictor de resultados clínicos para una variedad de cánceres. métodos de enumeración CTC establecidos se basan fundamentalmente en la captura por afinidad de los antígenos de la superficie celular, y han sido criticados por la subestimación de las cantidades de CTC debido al sesgo antigénica. Emergentes estrategias de captura de CTC suelen distinguir estas células en función de sus características biomecánicas asumidos, que a menudo son validados utilizando células cancerosas cultivadas. En este estudio, hemos desarrollado una herramienta de software para investigar las propiedades morfológicas de los CTC de pacientes con cáncer de próstata resistente a la castración y las células de cáncer de próstata en cultivo con el fin de establecer si este último es un modelo apropiado para el primero. Se aislaron dos CTC y las células cancerosas cultivadas a partir de sangre completa utilizando el sistema de CellSearch® y examinamos diversas características cytomorphological. En contraste con las células cancerosas cultivadas, CTC enriquecida por el sistema CellSearch® se encontró que tenían significativamente menor tamaño, relación núcleo-citoplasma más grande, y la forma más alargada. También se encontró que estos CTC para exhibir significativamente mayor variabilidad que las células cancerosas cultivadas en relación y la forma del perfil núcleo-citoplasma
Visto:. Parque S, Ang RR, Duffy SP, Bazov J, Chi KN, Negro PC, et Alabama. (2014) Las diferencias morfológicas entre células tumorales circulantes de pacientes con cáncer de próstata y células cultivadas de cáncer de próstata. PLoS ONE 9 (1): e85264. doi: 10.1371 /journal.pone.0085264
Editor: David T. Eddington, Universidad de Illinois en Chicago, Estados Unidos de América
Recibido: 13 Julio, 2013; Aceptado: 25 Noviembre 2013; Publicado: 8 Enero 2014
Derechos de Autor © 2014 Park et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por becas de Ciencias Naturales e Ingeniería de Investigación de Canadá, Canadian Institutes of Health Research, cáncer de próstata Canadá, Iniciativa de Investigación traslacional de Vancouver próstata Centro para Accelerated Descubrimiento y Desarrollo, programa de formación Ingenieros-en-friega en la UBC, Terry Instituto de Investigación de Fox y un premio del plan de Acción Mundial de Movember (GAP) Iniciativa de biomarcadores del cáncer de próstata. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:. Los autores confirman que el co-autor Peter Negro es un miembro del Consejo Editorial PLOS. Esto no altera la adhesión de los autores a todas las políticas de PLoS ONE en los datos y materiales de uso compartido.
Introducción
Las células tumorales circulantes (CTC) han sido implicados como posibles semillas de la metástasis del cáncer y son, por tanto, de gran importancia en la investigación, la gestión de la enfermedad y el desarrollo de fármacos [1] - [3]. Los métodos establecidos para la captura de estas células, tales como el sistema Veridex CellSearch® (Raritan, NJ, EE.UU.), se basan en la captura por afinidad del antígeno de superficie de las células epiteliales, EpCAM, seguido de etiquetado de fluorescencia de citoqueratina intracelular (CK) [4] - [ ,,,0],6]. Si bien la identificación CTC y enumeración, basado en la expresión de biomarcador epitelial, se puede utilizar para predecir los pobres resultados clínicos [7] - [10] Esta estrategia puede ser propenso a una subestimación del número de CTC debido epitelial a mesenquimal transición [11] - [ ,,,0],14], la mala expresión de estos factores en algunos tipos de tumores [14], o cambios en la expresión de estos factores después de la quimioterapia [15]. Estas limitaciones pueden ser particularmente relevante, dado que la aparición de mesenquimales CTC se asocia con la progresión de la enfermedad [16] y la inclusión de criterios adicionales de identificación CTC puede ser un valioso complemento de la enumeración CellSearch® CTC convencional.
Además a su expresión de antígenos tumorales, es ampliamente aceptado que los CTC tienen características biomecánicas diferenciadas, incluyendo el tamaño más grande que los leucocitos, mayor nuclear citoplásmica (N: C) a la proporción, así como distinta morfología nuclear [17]. Numerosas estrategias han sido desarrolladas para enriquecer para las CTC en base a estas características [18]. CTC se han aislado utilizando centrifugación en gradiente de densidad [19] o por tamaño, usando microporo filtración [20] - [22]. Recientemente, las tecnologías de microfluidos han logrado una eficiencia superior de captura de CTC y el enriquecimiento mediante enfoques tales como la cromatografía hidrodinámica [23] - [28], la filtración de microfluidos [29] - [31], y dielectroforésis [32] - [35]. El desarrollo de estas tecnologías utiliza normalmente células cancerosas cultivadas como un modelo morfológico para CTC clínicos. Sin embargo, mientras que las células cancerosas y algunas CTC tienen características biofísicas comunes [17], CTC puede exhibir características morfológicas distintas, dependiendo del tipo de tumor originario [36]. Una estrategia alternativa sería incorporar la caracterización biomecánica con la estrategia de enumeración CellSearch® CTC basado en antígeno más establecida.
Hemos desarrollado una herramienta de software para analizar las propiedades cytomorphological de las células cancerosas. Empleamos esta herramienta para examinar tanto el paciente como el cáncer de CTC y la morfología modelo de línea celular, después del enriquecimiento CellSearch®. Estos resultados proporcionarán datos importantes para ayudar en la identificación de CTC basado en antígeno combinado y los criterios biomecánicos [36], así como en la elección de los modelos adecuados para la optimización de biomecánica de enriquecimiento de CTC.
Materiales y Métodos
Recogida de muestras de sangre
las muestras de sangre de donantes sanos y pacientes con cáncer de próstata metastásico castración resistente (CRPC) se obtuvieron con consentimiento informado por escrito y se recogieron usando los protocolos aprobados por la junta de revisión ética clínica UBC (http: //investigación. ubc.ca/ethics/clinical-research-ethics-board). Los pacientes CRPC incluidos en este estudio tenían edades, a partir de 53-83 años, y los niveles de PSA, desde 21.1-2200 mg /L (Tabla S1). Las muestras de sangre en ambos casos se recogen y almacenan en tubos Vacutainer CellSave® (Becton Dickinson, Raritan, NJ).
Aislamiento y recuento de CTC por CellSearch
CTC aislamiento y enumeración se realizaron con el sistema CellSearch® como se describió previamente [4], [5], [37]. Brevemente, las muestras de sangre fueron extraídas en tubos de 10 ml CellSave Vacutainer (Becton Dickinson) que contienen anticoagulante de propiedad y conservante. Las muestras se mantuvieron a temperatura ambiente y se procesan dentro de 48 horas después de la recogida. El sistema de captura CellSearch® células EpCAM expresar utilizando perlas magnéticas recubiertas de anticuerpo y luego las etiquetas de estas células con colorantes fluorescentes, tales como DAPI, CD45, y citoqueratinas, con el fin de distinguir las CTC potenciales a partir de leucocitos. Después de la captura inmunomagnética y tinción de fluorescencia, imágenes del candidato CTC se obtienen en campo claro y fluorescencia de tres canales (DAPI, CD45, y citoqueratinas). Las imágenes capturadas se dividen en segmentos en varias imágenes más pequeñas que contienen cada uno una sola célula y vuelven a montar en un panel en el software. Por último, un técnico certificado identifica positivamente los CTC revisando el tamaño, la forma y la intensidad de fluorescencia de cada célula candidata
Cultivo de células y procesamiento
líneas celulares de cáncer de próstata humano LNCaP incluyendo (ATCC.: CRL-1740), DU145 (ATCC: HTB-81), y C4-2 (ATCC: CRL-1595) se propagaron en cultivo utilizando medio RPMI-1640 (Hyclone, Logan, UT) con suero bovino fetal al 10% a 37 ° C con 5% de CO
2. PC3 (ATCC: CRL-1435), las células se cultivaron de manera similar, pero usando DMEM (Hyclone, Logan, UT) medio en su lugar. Las células cancerosas cultivadas fueron añadidos en 7,5 ml de sangre de un donante sano en tubos Vacutainer CellSave® y procesados dentro de las 48 horas de forma idéntica a la muestra del paciente.
Procesamiento de Imágenes
Para estudiar la morfología de los CTC y las células cancerosas cultivadas, que exportan imágenes de células individuales del sistema CellSearch® y las analizaron utilizando un programa de software que hemos desarrollado utilizando LabView (Figura S1; National Instruments, Austin, TX). Las imágenes eran matrices cuadradas con tamaños que van desde 80 a 200 píxeles y formatean como archivos Portable Network Graphics (PNG) como mono de 8 bits o materiales compuestos color de 24 bits (Figura S1). Para el área calculada en píxeles, las imágenes fueron procesadas inicialmente utilizando umbralización clúster para detectar objetos brillantes para que coincida con la exposición automática realizada por el sistema CellSearch® (Figura 1A). Las partículas con píxeles en contacto con el borde del cuadro de imagen se retiraron usando un filtro de partículas de rechazo en frontera para eliminar las células incompletamente delimitadas por las imágenes (Figura S1). imágenes de múltiples partículas también fueron eliminados mediante la segmentación de cuencas. partículas de desechos se retiraron usando-dos iteraciones de un filtro de partículas erosión 3 × 3. Cell y tamaño nuclear se determinó contando el número de píxeles por encima del umbral en la citoqueratina y el canal de DAPI, respectivamente. Resultados para el cálculo de células y el tamaño nuclear se filtraron para eliminar las células con tamaños nucleares improbables, que definimos como el área nuclear superior a 95% de la superficie celular. Estas etapas de procesamiento rechazaron 209 fuera de las 732 imágenes, o 28,5% del total. La mayoría de las imágenes rechazadas contenía fragmentos de células o imágenes de baja calidad (Figura S2). Descargas de Software
Labview realiza la serie de operaciones en grandes conjuntos de datos que varían magos proporcionados por el sistema CellSearch®. Dos paralelas de filtrado y mediciones, tales como el cálculo del área en píxeles (A) y la estimación de la elipse de mejor ajuste (B) se llevan a cabo para obtener un rendimiento óptimo y resultados.
Excentricidad de medición de la forma de la célula
para analizar la excentricidad de la forma celular, una elipse fue equipado con el contorno de la célula. La visión de conjunto de la estimación de la elipse de mejor ajuste usando software LabView se muestra en la Figura 1B. Para mejorar la detección del contorno de la célula, las imágenes eran de contraste mejorado antes de auto-umbralización. Se realizaron tres-iteraciones de un filtro de erosión 3 × 3, así como un único filtro se dilatan para suavizar los bordes de las partículas. Montaje se realizó en una imagen binaria utilizando el contorno método de seguimiento para buscar el perímetro elipse más larga dentro de la imagen (Figura S1). Después de montar la elipse los resultados se confirmaron visualmente por el operador. Para cuantificar la excentricidad de la forma de la célula, se calculó el factor de elongación (EF), que se define como la relación entre los ejes mayor y menor de la elipse que mejor se adapta.
Medida del tamaño de calibración
Para calibrar las mediciones de tamaño de las imágenes CellSearch®, se midió por separado el tamaño de las células de cáncer de próstata en cultivo en suspensión usando el analizador de células a base de fotografiado CEDEX XS (Roche, Alemania). células cancerosas cultivadas Grown se tratan con tripsina y se resuspendieron en medio de cultivo. Los recuentos de células se evaluaron utilizando una dilución 1:01 de la suspensión celular en azul de tripano (Gibco, Grand Island, NY). A 10 l de suspensión celular se carga en el Smart Slide (Roche, Alemania), y después lee para medir el diámetro de la célula. El factor de conversión de píxeles de micrómetros se puede determinar mediante la siguiente ecuación, España
El tamaño de los CTC de muestras de los pacientes se estimó mediante productos del factor de conversión y el área de los CTC se mide a partir de imágenes CellSearch®.
citoplasmática nuclear Ratio Medición
la relación citoplásmica nuclear se define como la relación del área nuclear (a
N) a la zona citoplasmática (a
C), donde a
C se considera como el área de la celda excluyendo a
N.
Muestra Selección
CTC analizados en este estudio se obtuvieron a partir de muestras de sangre de referencia de consentir los pacientes diagnosticados con cáncer de próstata metastásico castración resistente que eran sin quimioterapia previa y se inscribió en una fase II de ensayos clínicos aleatorizados de un nuevo agente [38]. Hemos recogido todas las imágenes que muestran DAPI + CK + CD45- eventos que fueron identificados por CellSearch® de los 83 sujetos incluidos en el ensayo. En base a la probabilidad de que una pequeña fracción de estos eventos representado CTC legítimos que limita el análisis a 19 pacientes que tenían & gt; 40 DAPI + CK + CD45- eventos. Tres de estos pacientes fueron excluidos aún más debido a la baja calidad de las imágenes. CTC enumeración se determinó de forma independiente para los 16 pacientes restantes por un técnico cualificado con CellSearch® los recuentos varió de 11 a 106 CTC /7,5 ml, con un valor medio de 41,5 CTC /7,5 ml. Después de excluir las imágenes inadecuadas (Figura S2), porque no podían ser interpretados por nuestro software, se analizaron un total de 523 CTC de pacientes con cáncer de próstata, junto con 800 células cancerosas cultivadas a partir de las líneas celulares de cáncer de próstata de cuatro.
resultados y Discusión
Tamaño de celda
el análisis de imágenes de células procesados con el sistema de CellSearch® y calibrados contra la microscopía estándar, encontramos diferencias significativas entre tamaño CTC cáncer de próstata y cáncer de próstata células cultivadas (Figura 2 ). Específicamente, el diámetro medio de las CTC capturado por CellSearch®, entre nuestros 16 pacientes, es un poco más de la mitad del de las células de cáncer cultivadas, con 7,97 ± 1,81 micras para CTC y 13,38 ± 2,54 micras para las células cancerosas cultivadas (p & lt; 0,001), respectivamente . Mientras Coumans y colegas [21] emplean una estrategia de filtración de microporos para el enriquecimiento de las dos líneas celulares de cáncer y CTC derivados del paciente, que caracterizan las propiedades biomecánicas de la misma EpCAM
+ CK
+ CD45
- CTC población presenta en este estudio. Su análisis informó que las CTC próstata eran más pequeños que los de mama o cáncer colorrectal, sin embargo, se estima que las CTC cáncer de próstata fueron ~ 25% más grande que nuestro informe actual. Mientras que esta discrepancia puede representar el estrés celular impuesta en el procesamiento de la muestra por inmunocaptura, en el estudio actual, y la filtración de microporos, en el primer caso, esta diferencia también puede haber surgido de las diferentes estrategias empleadas para medir el tamaño de la celda. Coumans utiliza una pipeta para la calibración Coulter tamaño, que era menos preciso que el análisis de imágenes de escala de longitud pequeña (& lt; 10 micras) las estimaciones de tamaño. Además, nuestra estimación de diámetro celular es consistente con el pequeño volumen celular medio reportado por Ligthart y colegas [36], así como otro estudio reciente que muestra el área total de células LNCaP es 1,6 veces mayor que la de EpCAM
+ CK
+ CD45
- CTC de cáncer de próstata [39]. También es interesante observar que el tamaño de poro óptimo utilizado en estudios previos para la captura basado filtración de CTC fue 8 micras, que coincide con nuestra diámetro de celda estimada de 7,97 m [21], [22], [29], [40] . las estrategias de filtración de microporos han reportado tan alto como la recuperación de CTC 90% [40], pero tiene relativamente pobre muestra de pureza [41] .El similitud de tamaño entre CRPC CTC examinados en este estudio y los leucocitos, esto puede representar una limitación fundamental de las estrategias basadas en la filtración . Esta limitación se puede superar potencialmente por estrategias de enriquecimiento que combinan CTC enriquecimiento basado en una combinación de tamaño de celda y la deformabilidad [29] - [31].
El diámetro medio de las CTC (7,97 m) fue significativamente menor que cultivaron células cancerosas (13,38 m) (p & lt; 0,001) guía empresas
también consideramos la posibilidad de que nuestros criterios de selección de pacientes (recuento de CTC & gt; 40). pueden haber sesgado por un mayor número de CTC más pequeños. Mientras que los pacientes seleccionados fueron la quimioterapia-negativas, que hubieran participado en una serie de intervenciones terapéuticas y representarían los pacientes en las últimas etapas de la enfermedad. Debido a estas u otras cargas fisiológicas únicas dentro de nuestra cohorte de pacientes, se debe tener precaución en la generalización de estos resultados a todas las CTC CRPC. Sin embargo, se observó ninguna correlación entre el tamaño de células CTC y recuento de células (Tabla S1 y la figura S3) que de otro modo sugieren que la gravedad de la enfermedad afecta el tamaño de la célula. Curiosamente, mientras que otros estudios han reportado un alto grado de heterogeneidad en el tamaño celular CTC [21], [36], [42], [43], nuestra estimación del tamaño basado en el análisis microscópico demostró que la variación inter-individual de la celda de media tamaño era bastante pequeña, que van desde 7,05 m a 8,94 m con una media de 8,04 micras. Además, el criterio aceptado actualmente utilizado por el sistema para validar CellSearch® CTC es que su tamaño debe ser mayor que los leucocitos vecinos [17]. Sin embargo, esta definición del tamaño en gran medida se determina en base a los CTC derivadas de cáncer de mama [44] - [47] que tiene un diámetro medio de células de 13,1 micras [21]. Nuestra observación de que las CTC de pacientes con CRPC son significativamente más pequeños en tamaño (~ 8 micras) sugiere que estos criterios convencionales para la identificación de CTC pueden subestimar el verdadero recuento de CTC.
Del mismo modo, nuestra observación de que el cáncer de próstata EpCAM
+ CTC son sistemáticamente más pequeñas que las células cancerosas cultivadas es potencialmente importante para la etiqueta libre de estrategias de enriquecimiento de CTC emergente. En primer lugar, el enriquecimiento de los CTC basados en el tamaño por sí solo puede tener una eficacia limitada para la captura de los CTC más pequeños que se encuentran en los pacientes CRPC porque no van a ser tan claramente distinguible de los leucocitos del paciente. Mientras que las células de cáncer más grandes se suelen utilizar para demostrar la eficacia de estas técnicas, tales como HeLa (& gt; 20 micras), LNCaP (18 micras), MCF-7 (& gt; 15 micras), MDA-231 (15 micras) [21 ], [48], [49], las células cancerosas cultivadas, tales como células de linfoma de ratón L1210 (10 micras), con un diámetro más pequeño puede representar mejores modelos para el enriquecimiento de CTC [31], [50], [51]. En segundo lugar, la contribución del nucleoplasma a la rigidez de células es 10 veces mayor que el citoplasma [52]; estrategias de enriquecimiento de CTC CTC que captura basada en el tamaño y la capacidad de deformación pueden llegar a ser superiores a los que ese tipo basa en tamaño por sí solo.
celular de la forma
El uso de células cancerosas cultivadas se disparó en la sangre de sana donantes pueden modelar la separación de estas células a partir de células hematológicas que difieren en el tamaño celular, pero el pre-tratamiento común de estas células con tripsina, para disociar los de los matraces de cultivo de tejidos, o procesamiento de la muestra utilizando la estrategia de captura por afinidad CellSearch también puede influir drásticamente la forma de la célula. A través de la comparación de las células cultivadas y tratadas con tripsina, CRPC CTC CTC siguientes CellSearch® enriquecimiento, se evaluó si estas células cultivadas son modelos apropiados para las CTC derivados del paciente. En contraste con las células cultivadas, que eran generalmente de forma redonda, CTC exhibió una variabilidad significativa forma con muchas células que tienen una forma más alargada (Figura 3). Se cuantificó la excentricidad de la forma de la célula utilizando el factor de elongación (EF), que se define como la relación entre los ejes mayor y menor de la elipse que mejor se adapta. Como se muestra en la Figura 4A, CTC fueron significativamente más alargada que las células cancerosas cultivadas con un EF mediana promedio de 1,27 en comparación 1,17 para las células cancerosas cultivadas (p & lt; 0,05). Esta observación es consistente con otros estudios que informan pleomorhpism significativa entre CTC [21], [36], [42], [43]. Una posible causa de la diversidad en la morfología de las células apoptóticas son eventos asociados con la difusión CTC [53]. Sin embargo, los cambios observados en cytomorphological CTC pueden representar cambios funcionales asociados con las interacciones entre CTC y el endotelio o elongación celular asociados con el transporte vascular [54], [55]. Curiosamente, anormalidad citomorfológico de CTC se ha correlacionado con un mal resultado clínico en cáncer de mama metastásico, colorrectal, y cáncer de próstata. [36].
CTC eran notablemente más pequeños que las células cancerosas cultivadas (A-D). las células de cáncer cultivadas eran en su mayoría redondo con celular regular y formas nucleares. El núcleo se centra normalmente y rodeado de citoqueratina (E-L). CTC exhibe formas muy variables, incluyendo redonda (E), ovalada (F), alargado (G-J), y las agrupaciones (L). Las células no redondas y multinucleadas se observan a veces (G-K). La barra amarilla escala es de 5 micras de longitud
A:. Factor de elongación (EF) de los CTC de pacientes con cáncer de próstata en comparación con las células de cáncer de próstata en cultivo. El EF mediana de CTC fue generalmente mayor con una variabilidad inter e intra-paciente. B: citoplasmática Nuclear (N /C) las relaciones de CTC de pacientes con cáncer de próstata en comparación con las células de cáncer de próstata en cultivo. La mediana con cuartiles superior e inferior se muestra para cada muestra. La mediana proporción N /C de CTC fue generalmente mayor con una variabilidad inter e intra-paciente.
Nuclear citoplasmática Relación
El citoplasma nuclear (N /C) se define como la relación de la zona nuclear aparente y el área de la celda aparente con el núcleo resta. En comparación con las células cancerosas cultivadas, se espera que las CTC tener mayor N /C debido a su tamaño más pequeño de células y es probable que el tamaño nuclear más grande debido a las posibles anomalías cromosómicas. Encontramos la mediana N /C para todas las células cancerosas cultivadas para ser 1,12, mientras que la mediana promedio relación N /C de la CTC de los pacientes, enriquecido por el sistema CellSearch® sea 1,43. Esta observación subraya aún más la eficacia potencial de base-deformabilidad enriquecimiento CTC, como el nucleoplasma contribuye 10 veces más a la rigidez de células que lo hace el citoplasma [52]. Además, como se muestra en la Figura 4B, CTC mostraron significativamente mayor variabilidad N /C que las células cancerosas cultivadas. Teniendo en cuenta que la relación N /C de CTC se correlaciona con mal pronóstico de la enfermedad [36], se puede especular que, dentro de esta población heterogénea, hay subpoblaciones de células con mayor potencial metastásico. Si es así, entonces tal vez una medida más relevante del estado de la enfermedad es el recuento de una determinada subpoblación de CTC en lugar de la cuenta de todos los CTC como se usa en la actualidad [9], [56].
encogimiento celular
Una preocupación asociada con la medición de tamaño de las células usando el sistema de CellSearch® es si el almacenamiento de muestras de células en los tubos CellSave® modifica el tamaño de la célula y núcleo. Para investigar, se compararon las células cancerosas cultivadas con púas en la sangre de donantes sanos tratados inmediatamente con las mismas células procesadas después de 48 horas de almacenamiento. Se encontró que el diámetro de las células para disminuir por ~ 6%, mientras que se encontró el diámetro nuclear disminuya en ~ 10% a partir de 0 a 48 horas (Figura 5). Este resultado da una estimación de la variabilidad de los parámetros de la morfología celular de medición resultantes de tiempo de almacenamiento de la muestra, pero no puede explicar las diferencias significativas en la morfología de los CTC y las células de cáncer cultivadas, o la variabilidad encontrada dentro de cada muestra CTC.
R: El diámetro de las células del cáncer de próstata cultivadas disminuyó ~ 6% en promedio. B:. El diámetro nuclear de células de cáncer de próstata cultivadas disminuyó ~ 10% de media
Conclusión
En conclusión, los CTC aislado de pacientes con cáncer de próstata resistente a la castración, utilizando el sistema de CellSearch® , eran de menor tamaño, más alargada en forma, y tenía mayor N /C en comparación con las células cancerosas cultivadas. CTC también mostró significativamente mayor variabilidad en la forma y N /C. Mientras que el sistema sólo captura las células EpCAM alta, imágenes de CTC CellSearch® enumeración están ampliamente disponibles y esta estrategia de análisis podrían aplicarse para identificar rasgos morfológicos característicos de CTC enriquecidos con CellSearch®. Las diferencias morfológicas entre las líneas celulares cultivadas y CTC deben tenerse en cuenta en el diseño y ensayo de dispositivos que aíslan CTC de una manera libre de etiquetas basadas en criterios cytomorphological.
Apoyo a la Información
Figura S1.
captura de pantalla del programa LabView® desarrollado para analizar las imágenes obtenidas del sistema CellSearch®. El programa adquiere las imágenes para cada candidato CTC. Una imagen seleccionado (resaltado en amarillo) se analiza para medir el área en píxeles. Una elipse se ajusta a esta imagen y sobrepuesto en la parte superior de la imagen original para su comprobación. También se muestran los parámetros para los pasos intermedios de procesamiento de imágenes, así como las estadísticas de toda la colección
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figura S2.
Rechazado imágenes de fragmentos de células a partir de la identificación de CTC. Estas imágenes de fragmentos de células aparecieron comúnmente durante el análisis de la imagen y no se incluyeron en las mediciones de recuento o tamaño de celda de CTC. fragmentos típicos de CTC incluyen un núcleo parcialmente cubierta por citoqueratina, o un núcleo completamente separada de citoqueratina. Estos fragmentos probablemente se originaron de las CTC en la apoptosis
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Figura S3. Tamaño de celda
frente al recuento de CTC. No parece haber ninguna correlación entre el tamaño de la celda CTC y el recuento de células de CTC identificados por CellSearch de pacientes con cáncer de próstata resistente a la castración metastásico. El tamaño de las células varió de 6,9 micras a 8,95 micras; mientras que el recuento de CTC varió de 11 a 106. doi: 10.1371
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Tabla S1.
Paciente resumen de información. Todos los pacientes fueron diagnosticados con cáncer de próstata resistente a la castración metastático (mCRPC). No hubo correlación significativa entre el nivel de PSA y el tamaño de los CTC
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