Extracto
Antecedentes
invasión y metástasis de linfoma T 1 (Tiam1) es un potencial modificador de desarrollo y progresión tumoral. Nuestro estudio anterior in vitro y en ratones nude sugiere un papel de promoción de Tiam1 en la invasión y metástasis de cáncer colorrectal (CRC). En el presente estudio, hemos generado Tiam1 /C1199-CopGFP ratones transgénicos para investigar la tumorigenetic, alteraciones invasivos y metastásicos en el colon y el recto de tipo salvaje y ratones transgénicos Tiam1 bajo 1,2-dimetilhidracina tratamiento (DMH).
Métodos
los ratones transgénicos fueron producidos por el método de microinlectlon pronuclear. Todo el cuerpo de fluorescencia de imágenes (LightTools, Edmonton, Alberta, Canadá), PCR y técnicas de inmunohistoquímica (IHC) se aplican de forma secuencial para identificar los ratones transgénicos. El agente carcinógeno DMH (20 mg /kg) fue utilizado para inducir tumores colorrectales aunque intraperitoneal (ip) una vez a la semana durante 24 semanas a partir de la edad de 4 semanas en ratones transgénicos o no transgénicos. Tiam1
Resultados
Hemos generado con éxito Tiam1 /C1199-CopGFP ratones transgénicos y se indujo tumores primarios en el intestino tanto de tipo salvaje y ratones transgénicos Tiam1 mediante tratamiento DMH. Además, los ratones transgénicos Tiam1 desarrollado más grande y más agresiva neoplasia que los ratones de tipo salvaje. Por otra parte, la tinción inmunohistoquímica reveló que la regulación positiva de Tiam1 se correlacionó con el aumento de la expresión de β-catenina y vimentina, y la regulación a la baja de E-cadherina en estos ratones.
Conclusiones
Nuestro estudio ha proporcionado in vivo evidencia de apoyo que Tiam1 promueve la invasión y la metástasis de CRC, más probablemente a través de la activación de la vía de señalización Wnt /β-catenina, en un modelo de ratón transgénico Tiam1
Visto:. Yu LN, Zhang QL, Li X, X Hua , Cui YM, NJ Zhang, et al. (2013) Ratones Tiam1 transgénicas muestran Aumento posible tumor invasivo y metastásico del cáncer colorrectal después del tratamiento de 1,2-dimetilhidrazina. PLoS ONE 8 (9): e73077. doi: 10.1371 /journal.pone.0073077
Editor: Xin-Yuan Guan, la Universidad de Hong Kong, China
Recibido: 21 de junio de 2013; Aceptado: 14 Julio 2013; Publicado: 12 de septiembre 2013
Derechos de Autor © 2013 Yu et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por la Fundación de Ciencias Naturales de China (nn: 81001111, 81071735, 30901791) y la Fundación de Ciencias Naturales de la provincia de Guangdong (S2011040003696) .Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación de el manuscrito
Conflicto de intereses:. los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer colorrectal (CCR) contribuye el tercer tipo más cáncer en el mundo occidental. . Recurrencia y metástasis son las principales causas de muerte de CRC. Alrededor del 50 por ciento de los pacientes con CRC se morir debido a complicaciones de la metástasis. Aunque las investigaciones han identificado varios genes que son responsables para el desarrollo de CRC, los eventos moleculares que están implicados en los complejos procesos de CRC metástasis permanecen en gran parte desconocida.
invasión T linfoma y metástasis 1 (Tiam1), un nucleótido guanina factor de intercambio que activa selectivamente la Rho GTPasa Rac-como, se identificó originalmente como una invasión de inducción de genes y la metástasis que inducen en las células de linfoma T [1]. Tiam1 es un modificador de potencial de la iniciación del tumor y la progresión. Se demostró estar implicado en Rac-regulación de la polimerización de actina, adhesión celular y la motilidad, supervivencia celular y la progresión del ciclo celular [2], [3]. Sin embargo, las investigaciones han sugerido que Tiam1 tiene efectos opuestos sobre diferentes tipos de cáncer. Algunos estudios han demostrado que la regulación positiva de Tiam1 se correlaciona con el comportamiento agresivo del cáncer humano y los pobres resultados clínicos de los pacientes en varios tipos de tumores malignos, tales como cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de próstata, cáncer de hígado, carcinoma nasofaríngeo, así como escamosas de esófago carcinoma de células (CECA) [4], [5], [6], [7], [8], [9]. Mientras que, por el contrario, Tiam1 potencia la adhesión célula-célula homotípica e inhibe la invasión de células de carcinoma de células renales [10]. Además, Tiam1 juega un papel invasión-supresor en células Madin-Darby de riñón canino (MDCK) [11]. Un Tiam1 ratón knock-out es relativamente resistentes a la inducción química de tumores de la piel [12]. En la piel humana mediante ingeniería tisular, el agotamiento Tiam1 en fibroblastos dérmicos condujo a una mayor invasividad de los queratinocitos epidérmicos con características premalignas [13].
Nuestro estudio anterior demostró que Tiam1 se reguló en los tejidos CRC y alto nivel de expresión de Tiam1 se estrechamente asociado con un potencial agresivo y metastásico en CRC. El silenciamiento de Tiam1 en líneas celulares de CRC como resultado la inhibición de la migración celular y la invasión in vitro, y la metástasis en ratones desnudos [9]. Con el fin de comprender mejor el papel y el mecanismo de Tiam1 en la progresión de CRC, hemos generado ratones transgénicos pCDFl-Tiaml-copGFP y se investigó la influencia de Tiaml en el desarrollo de carcinomas en el colon y el recto que fueron inducidos por el carcinógeno químico (DMH ), en combinación con la observación histológica de invasión local y metástasis a distancia.
Materiales y Métodos
Ética declaración
Este estudio se llevó a cabo en estricta conformidad con las recomendaciones de la Guía para el Cuidado y uso de Animales de laboratorio de los Institutos nacionales de Salud. El protocolo fue aprobado por el Comité de Ética del Experimentación Animal de la Universidad Médica del Sur (Número de Permiso: scxK2007 - 0005). Toda la cirugía se realizó bajo anestesia con pentobarbital sódico, y se hicieron todos los esfuerzos para minimizar el sufrimiento.
Generación de ratones transgénicos Tiam1 /C1199-CopGFP
El ADNc de longitud completa de Tiam1 de C1199 se clonó en el lentivirus vector pCDF1-CopGFP. Los ratones transgénicos se produjeron mediante el método de microinlectlon pronuclear. Se emplearon un total de 60 súper-ovulado y 33 ratones ICR seudo-embarazada en el experimento. Lentivirus que contiene el gen Tiam1 /EGFP se microinyectó en pronúcleos de cada embrión. Los embriones se cultivaron durante 72 h en medio FHM y mórula etapa embriones se transfirieron a los oviductos de 0-5 días post-coito embarazo falso. Los ratones estaban embarazadas y los cachorros fueron entregados en 20-21 días.
Identificación de ratones transgénicos Tiam1 /EGFP
Los ratones normales ICR se utilizaron como control. Todo el cuerpo de fluorescencia de imágenes (LightTools, Edmonton, Alberta, Canadá), PCR y técnicas de inmunohistoquímica (IHC) se aplican de forma secuencial para identificar los ratones transgénicos. Los ratones transgénicos y sus animales de la misma camada no transgénicos fueron genotipo por PCR usando los siguientes cebadores para Tiam1: 5 'AAGACGTACTCAGGCCATGTCC 3' y 5 'GACCCAAATGTCGCAGTCAG 3'. Se preparó ADN genómico a partir de biopsias de cola de ratón. El perfil de temperatura de PCR fue de 94 ° C durante 45 s, 58ºC durante 45 s, y 72 ° C durante 45 s con la extensión del último ciclo durante 10 minutos a 72 ° C. Los productos de PCR se analizaron por electroforesis en gel de agarosa con bromuro de etidio bajo luz UV. El PCR-análisis reveló que 60 de los 124 animales eran transgénicos. IHC se realizó como [9] se describe anteriormente. anticuerpo policlonal de conejo contra Tiam1 (Santa Cruz, CA, EE.UU., dilución 1: 200), ratón anti-β-catenina (BD, MO, 1: 500), ratón anti-E-cadherina (BD, MO, 1: 500) , ratón anti-vimentina (Cell Signaling Technology, PO, 1: 200) se utilizaron
extracción de RNA y PCR con transcripción inversa (RT-PCR)
El ARN total fue extraído utilizando el reactivo Trizol. (Invitrogen) según las instrucciones del fabricante. Los RNAwas pretratados con DNasa y se utilizan para cDNAsynthesis con hexámeros aleatorios. El ARNm de Tiam1 se amplificó por PCR a partir de muestras de ADNc de ratones transgénicos y animales no transgénicos. Los siguientes cebadores se utilizaron para la amplificación de Tiam1: cebador con sentido, 5-AAGACGrACTCAGGCCATGTCC-3; cebador antisentido, 5-GACCCAAATGTCGCAGTCA-3. Gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa se amplificó como un control interno usando el cebador sentido, 5-AATCCCATCACCATCTTCCA-3, y el cebador antisentido, 5-CCTGCTTCACCACCTTCTTG-3. El tamaño adecuado de los productos de PCR se confirmó mediante electroforesis en gel de agarosa.
El tratamiento con DMH
Para investigar el impacto de Tiam1 en el desarrollo del cáncer colorrectal y la progresión, los ratones transgénicos y no transgénicos Tiam1 fueron asignados al azar en dos grupos, respectivamente, tratadas ya sea con DMH (grupos de ensayo) o no (grupos de control). Los grupos de control 1 y 2 fueron dados 0,1 ml de PBS i.p. una vez por semana durante 10 semanas. Grupos de ensayo se les dio el agente carcinógeno DMH (20 mg /kg) a través intraperitoneal (i.p.) las inyecciones una vez a la semana durante 24 semanas desde la edad de 4 semanas en ratones transgénicos o no transgénicos Tiam1. Todos los ratones tuvieron acceso libre al agua del grifo y una dieta estándar. Todos los animales fueron observados diariamente para detectar signos clínicos de enfermedad.
Resultados
Generación e identificación de los ratones transgénicos Tiam1 /EGFP
Un total de 823 huevos se obtuvieron de 60 ratones súper-ovulado. El Tiam1-EGFP recombina lentivirus se microinyectó en el espacio perivitelino de 628 huevos, que a continuación se transfirieron a 33 ratones ICR pseudo embarazada. 21 de los 33 ratones pseudopregnant se impregnaron. nacieron 67 ratones transgénicos potenciales Tiam1 /EGFP. Cinco ratones positivos Tiam1-EGFP transgénicos, identificados como F0-17 (♂), F0-36 (♀), F0-48 (♂), F0-52 (♀) y F0-61 (♀), fueron generados por el pro técnica de microinyección NUCLEAR. Un total de 44 F1 positivo (Figura S1) y 146 ratones transgénicos positivos F2 Tiam1 fueron generados por F0-36 (♀) y F0-48 (♂). Todas las secuencias de genes de PCR Tiam1 positivos fueron emparejados a la secuencia del gen Tiam1 que está disponible de NCBI (datos no mostrados).
La imagen de fluorescencia de todo el organismo mostró una fuerte señal de GFP en los órganos de la Tiam1 homocigotos F1 /ratones transgénicos EGFP, incluyendo colon, estómago, pulmón, riñón y tesis (Figura 1A). sección congelada de estos órganos de ratones transgénicos EGFP también muestran fuerte signa GFP (Figura 1B). Sin embargo, no se observó señal o única señal débil en los ratones de tipo salvaje (Figura 1A y 1B). El análisis inmunohistoquímico utilizando anticuerpos Tiam1 un conejo anti-humano confirmó que la proteína Tiam1 humano se expresa fuertemente en el colon de ratones transgénicos Tiam1, mientras que sólo se detectó débilmente en los ratones de tipo salvaje (Figura 1C).
( a y B) Observación de la expresión de EGFP y Tiam1 en differente órganos (a) y las correspondientes secciones congeladas (B) de la transgénico pCDFl-Tiaml-copGFP (TG) ratones y ratones de tipo salvaje (WT) por un sistema de imágenes de fluorescencia del cuerpo entero . (C) Detección de la proteína Tiaml en el colon de los ratones transgénicos pCDFl-Tiaml-copGFP y ratones de tipo salvaje a través de la tinción inmunohistoquímica. (D) Detección de Tiaml mRNA en el colon de 10 ratones transgénicos pCDFl-Tiaml-copGFP y 1 ratones de tipo salvaje a través de RT-PCR.
La expresión de mRNA Tiam1 humano en el colon se analizó por RT-PCR y sólo se pudo detectar en ratones transgénicos Tiam1 con β-actina se usa como control de la expresión (Figura 1D). El tratamiento con DMH no indujo la expresión de endógeno Tiam1 en el nivel de mRNA, ni en animales transgénicos ni en sus compañeros de camada no transgénicos (datos no mostrados).
Efecto de pCDFl-Tiaml-copGFP en DMH inducida tumorigénesis
se observaron ocho semanas después de DMH-tratamiento, la hiperplasia del tejido linfoide en el mesenterio y la pared intestinal, tanto en pCDFl-Tiaml-copGFP (3/5) y hermanos de camada no transgénicos (2/5). Hyperrugosity en la mucosa colorrectal y engrosamiento del epitelio intestinal se produjo en ambos transgénicos (4/5) y los ratones del grupo de tipo salvaje (3/5) a las 12 semanas después de DMH-tratamiento. 16 semanas más tarde, se observó adenoma colorrectal en tanto transgénicos (2/5) y los ratones del grupo de tipo salvaje (1/5). 20 semanas más tarde, tumor colorrectal se produjo en ambos transgénicos (1/6) y los ratones del grupo de tipo salvaje (1/6) que fue diagnosticado histológicamente como adenocarcinoma colorrectal (Tabla 1). Después de DMH-tratamiento, 21/21 (100%) ratones transgénicos Tiam1 y 18/21 (85,7%) de camada no transgénicos desarrollaron tumores dentro de las 32 semanas (Tabla 1). Figura 2A y 2C muestran el representante macro-lesiones y cambios histológicos (por H & amp; E tinción) se produjo en los ratones de colon en puntos de tiempo correspondiente. Se observó prolapso rectal en el 52,4% (11/21) de Tiam1 ratones transgénicos (Figura 2B).
(A) Los tumores inducidos representativos en tratamiento DMH en el colon y el recto de tipo salvaje (WT) (superior panel) y Tiaml transgénicos (TG) animales (panel inferior) en diferentes puntos temporales. (B) El prolapso rectal (flecha) en un ratón transgénico Tiaml (TG). (C) SE tinción de las lesiones representativas del tumor en el colon y rectal de tipo salvaje (WT) (panel superior) en diferentes puntos temporales.
La gran mayoría de los tumores que se encuentran en el colon se encuentra en 1 a 8 cm del ano (Figura 3A). En ambos genotipos, no se encontraron tumores en el intestino delgado. La incidencia de tumores y el número de tumores por animal no fueron afectados por Tiam1, como se analizaron a las 20 semanas, 24 semanas y 32 semanas después del tratamiento DMH (datos no mostrados). Sin embargo, cuando los volúmenes promedio de tumor se analizaron en 29 tumores seleccionados al azar de cada uno de los dos grupos, se observó un tamaño aumentado de manera significativa del tumor en ratones transgénicos Tiam1 (Figura 3B y Tabla 2) con un volumen medio del tumor (23.260 ± 2.119 mm
3) 4,7 veces mayor (P & lt;. 0,001) que en los ratones de tipo salvaje (4.929 ± 0.580 mm
3)
(a) Distribución de los tumores de colon en ratones después del tratamiento DMH. (B) Comparación del volumen de tumor colorrectal en ratones transgénicos y ratones de tipo salvaje.
Efecto de pCDFl-Tiaml-copGFP en la capacidad invasiva y metastásica de DMH inducida CRC
Para determinar la naturaleza de las masas colorrectales, se examinaron los tumores utilizando métodos histológicos. Por análisis microscópico, en los ratones no transgénicos, la mayoría de los tumores desarrollados en tratamiento DMH muestran lesiones con solamente limitada profundidad de invasión neoplásica. Como se muestra en la Figura 4A-B, el epitelio del colon neoplásico formó una masa de placa-como que era distinta de la mucosa normal adyacente. Las glándulas neoplásicas extienden en ya través de la submucosa, pero no a tope la pared muscular.
tumores (A-B) desarrollados bajo las lesiones mostradas tratamiento DMH con solamente limitada profundidad de invasión neoplásica. Las glándulas neoplásicas extienden en ya través de la submucosa, pero no a tope la pared muscular. (C-F) Tiaml ratones transgénicos contenía tumores más agresivos y se muestra una penetración más profunda de las células neoplásicas en la capa muscular, así como los ganglios linfáticos dentro de la pared del intestino (G-H).
De acuerdo con la mayor volumen de tumor desarrollado bajo tratamiento DMH, los ratones transgénicos Tiaml también contenía tumores más agresivos y se muestra una penetración más profunda de las células neoplásicas en la capa muscular (Figura 4C-F), así como de los ganglios linfáticos dentro de la pared del intestino (Figura 4G-H) , donde formaron glándulas distintas, en comparación con los compañeros de camada no transgénicos. Estos tumores agresivos invadieron libremente a través de todas las capas del intestino formando grandes glándulas de mucina llenas
.
Además de los tumores locales invasión y afectación de los tejidos de los ganglios linfáticos, los ratones transgénicos Tiaml también generó propagado a sitios distantes, incluyendo el peritoneo, hígado y pulmón (Figura 5). Como se resume en la Tabla 1, 52,4% (11/21) de ratones transgénicos Tiaml generado metástasis a distancia 32 semanas después del tratamiento DMH. Sin embargo, no hay lesiones o metástasis micro-metastásicos distantes se encontraron en todos los ratones 21 no transgénica en el mismo punto de tiempo (Tabla 1). Adicionalmente, la infiltración de células tumorales en los vasos pequeños, también se observaron en ratones transgénicos Tiaml, aunque no en los ratones no transgénicos (Figura 5).
activación de la vía β-catenina se asoció con pCDFl -Tiaml-copGFP animales transgénicos
a continuación examinó la expresión de β-catenina, marcadores epiteliales e-cadherina, y el marcador mesenquimal vimentina en los tumores desarrollados en ratones de tipo salvaje. Como se muestra en la Figura 6, el análisis inmunohistoquímico muestra que los tumores formados en el grupo Tiaml transgénicos mostraron una mayor expresión de total y nuclear de β-catenina, y más débil tinción de E-cadherina, mientras más fuerte tinción de vimentina, en comparación con el grupo de tipo salvaje .
Discusión
Tiam1 se sugiere que desempeñan un papel en el desarrollo y progresión de los cánceres humanos. Sobre la base molecular, en estudios in vitro proporcionado información sobre el efecto de Tiam1 la carcinogénesis y la invasión tumoral. Por otra parte, los estudios in vivo mostraron que Tiam1 involucrado en el desarrollo del cáncer y la metástasis en ratones desnudos.
Nuestro estudio anterior ha proporcionado pruebas de que Tiam1 estaba estrechamente correlacionada con el potencial metastático de cáncer colorrectal, y su agotamiento reducido de manera significativa el crecimiento del tumor y capacidad metástasis de las células de CRC [9]. Con el fin de comprender mejor el papel y el mecanismo de Tiam1 en CRC metástasis in vivo, en este estudio, hemos desarrollado ratones pCDFl-Tiaml-copGFP transgénicos y la formación de tumores de colon inducida por el tratamiento de DMH. A través del análisis histológico, se encontró que aunque la incidencia del tumor y el número de tumores por animal no fueron afectados por Tiam1, los volúmenes promedio de tumor se incrementaron significativamente en el grupo Tiam1 transgénicos que en los ratones de tipo salvaje. Además, se encontró que los ratones transgénicos Tiam1-formó tumores más agresivos incluyendo la invasión local y del tejido de los ganglios linfáticos, en comparación con ratones de tipo salvaje. Más importante, los ratones transgénicos Tiaml también genera los tumores que se propagan a sitios distantes, incluyendo el peritoneo, hígado y pulmón, así como la infiltración de células tumorales en los vasos pequeños. Si bien no hay lesiones o metástasis distantes micrometástasis se encontraron en el grupo de tipo salvaje.
dos funciones opuestas de Tiam1 sobre la migración celular, invasión, y la adhesión se apoyan en estudios previos en diferentes contextos celulares. Por un lado, se ha informado de que la presencia de Tiam1 tendía a estar asociado con buen pronóstico en el cáncer gástrico [14]. En las células Madin-Darby de riñón canino (MDCK) y células NIH3T3 transformadas por Ras, Tiam1 induce una transición mesenquimal-epitelial (MET) e inhibe la migración de células a través de la mejora mediada por cadherina adhesión célula-célula [11], [15], [16 ]. En líneas celulares de carcinoma de células renales humanos, Tiam1 inhibe la invasión a través de la regulación positiva inducida por Rac de inhibidor tisular de metaloproteinasas-1 (TIMP-1) y TIMP-2 [10]. Se ha documentado que la señalización de Rac podría antagonizar la actividad de Rho directamente a nivel GTPasa, y el saldo recíproca entre Rac y Rho actividad determina la morfología celular, migratorio y la capacidad invasiva [17]. Por lo tanto, los efectos de inhibición de Tiam1 sobre la migración y la invasión en diferentes contextos pueden ser causadas por la supresión mediada por Rac de la actividad de Rho.
Por otro lado, también hay numerosos informes que apoyaron el papel de Tiam1 en la promoción de transformación maligna, la proliferación tumoral, invasión y metástasis [9], [18], [19], [20], [21]. Tiam1 se ha implicado en la transformación oncogénica de las células NIH3T3 [22]. Además, Tiam1 aumenta la invasión y metástasis en varias líneas celulares de cáncer humano, incluyendo melanoma y cáncer de mama [18], [23]. Por otra parte, nuestro estudio anterior también sugiere un papel importante de Tiam1 en la migración y la metástasis de las células CRC [9]. Nuestro presente estudio proporciona evidencia de que la introducción del gen Tiam1 humano en la línea germinal aumentó significativamente la invasión y metástasis de cáncer colorrectal, mientras que promueve solamente discretamente el desarrollo de tumores colorrectales que se indujeron en tratamiento DMH. Por lo tanto, nuestros datos apoyan principalmente la función de promoción invasivo y metastásico de Tiam1 en CRC. En otro estudio, mediante la comparación de comportamientos biológicos tumorales en APC mutante Min ratones (múltiple neoplasia intestinal) que expresan o que carecen de Tiam1, los autores encontraron que Tiam1 agotamiento causó una mayor invasión de los tumores malignos del intestino delgado, aunque la formación y el crecimiento de pólipos in vivo fueron significativamente reducida [24]. La discrepancia evidente entre nuestros resultados actuales y el estudio anterior podría ser potencialmente atribuible al fondo mutante APC y el tratamiento DMH. Por lo tanto, los diferentes efectos de Tiam1 sobre la migración y la invasión son probable que dependen de diferentes contextos, tales como el tipo de células, sustrato, el estado de transformación, y el estado de activación de las proteínas G pequeñas en diversos tipos de células. Para ilustrar mejor el papel de Tiam1 en la progresión del cáncer y la metástasis, más estudio es imprescindible para mejorar nuestra comprensión de la regulación aguas arriba de Tiam1.
Wnt /β-catenina señalización críticamente regula el desarrollo y progresión de la CRC [25]. localización nuclear de β-catenina es crucial para la activación de la señalización de Wnt canónica. Los miembros de la familia Rho de pequeñas GTPasas, incluyendo RhoA, Rac1, Cdc42 y, se ha demostrado que participar en la actividad de promoción de la señalización de Wnt y controlar la polaridad celular planar en Drosophila [26]. activación Rac1 induce la translocación nuclear de β-catenina [27]. Como un factor de cambio de Rac1 específica, Tiam1 promueve la interacción de Rac1 y β-catenina, y es esencial para la activación mediada por Rac1 de la vía de Wnt canónica [28]. En el presente estudio, hemos demostrado que la introducción de Tiam1 en la línea germinal causó un incremento significativo de la acumulación nuclear de β-catenina, la disminución de la membrana de E-cadherina, y el enriquecimiento de vimentina en los tumores colorrectales con capacidad de más invasiva. Por lo tanto, nuestro estudio proporciona evidencia de que Tiam1 promueve la invasión y la metástasis de CCR, e implica que la vía Wnt /β-catenina se podría involucrar en el efecto de Tiam1 sobre la CRC invasión y metástasis in vivo.
En conclusión, nuestro estudio ha proporcionado pruebas in vivo de apoyo que Tiam1 promueve la invasión y la metástasis de CRC, más probablemente a través de la activación de la vía de señalización Wntβ-catenina. Sin embargo, la vía de señalización de Wnt /β-catenina no podía ser el único mecanismo a través del cual Tiam1 podría promover la progresión del CCR. Se requieren más estudios para establecer la red de regulación de Tiam1 en la progresión del cáncer.
Información de Apoyo
figura S1.
Identificación de ratones transgénicos Tiam1 /EGFP por PCR. Los ratones transgénicos y sus animales de la misma camada no transgénicos fueron genotipo por PCR usando los siguientes cebadores para Tiam1: 5 'AAGACGTACTCAGGCCATGTCC 3' y 5 'GACCCAAATGTCGCAGTCAG 3'. ADN genómico fue preparado a partir de biopsias de cola de ratón-
doi:. 10.1371 /journal.pone.0073077.s001 gratis (TIF)