Extracto
Antecedentes
El hígado es el órgano diana más común en la metástasis de cáncer colorrectal (CCR). metástasis hepáticas sincrónicas pueden conferir un pronóstico más pobre que las metástasis metacrónicas, y las alteraciones genéticas y una respuesta inflamatoria también se han asociado con un mal pronóstico en los casos de una metástasis hepática por CRC. Sin embargo, pocos estudios han examinado la relación entre
KRAS
mutaciones y el estado inflamatorio en el CCR, especialmente con respecto a las metástasis hepáticas.
Métodos
El efecto del mitógeno activada activado vía de la proteína quinasa y otra proteína implicada en la inflamación, la proteína C-reactiva, en las metástasis de hígado se examinaron. El objetivo fue determinar el impacto de la rs7553007
CRP
específicos de polimorfismo de un solo nucleótido (SNP) en la metástasis de hígado en la supervivencia CRC-específica (CSS) de los pacientes después metastasectomıa hepática colorrectal.
Resultados
no se encontraron diferencias significativas en la distribución de genotipos y frecuencias de alelos en el
CRP
rs7553007 SNP entre los pacientes con CCR con metástasis en el hígado y el grupo control. CSS tasas eran bajas en el subgrupo de pacientes con metástasis sincrónica con la A-alelo (A /A y A /G) en rs7553007 o mutado
KRAS
/
BRAF Hoteles en muestras de hígado metastásico. Por otra parte, el
CRP
rs7553007 SNP (hazard ratio [HR] = 1,101; 95% intervalo de confianza [IC] = 1,011 a 1,200;
P = 0,027
) y
KRAS /BRAF
mutaciones (HR = 2,377; IC del 95% = 1,293-4,368;
P
= 0,005) permanecieron predictivo para el CSS de los pacientes con CCR con metástasis hepáticas sincrónicas en el análisis multivariante
Conclusiones.
Tanto el
CRP
rs7553007 SNP y
KRAS /BRAF
mutaciones eran factores pronósticos independientes para pacientes con CCR con metástasis hepáticas sincrónicas
Visto: CJ Huang. , Teng HW, Chien CC, Lin JK, Yang SH (2013) Significado pronóstico de polimorfismo de la proteína C reactiva y
KRAS /BRAF Hoteles en síncrono hígado metástasis de cáncer colorrectal. PLoS ONE 8 (6): e65117. doi: 10.1371 /journal.pone.0065117
Editor: Kjetil Tasken, Universidad de Oslo, Noruega
Recibido: Diciembre 10, 2012; Aceptado: 22 de abril de 2013; Publicado: Junio del 3, 2013
Derechos de Autor © 2013 Huang et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo contó con el apoyo de las subvenciones (V98C1-152, V99C1-109, y V100C-170) de Taipei el hospital general de Veteranos. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
la metástasis comprende una compleja serie de pasos en los que las células cancerosas permanecen en el lugar del tumor original y migran a un órgano distante. Diferentes conjuntos de genes con expresiones alteradas pueden determinar diferentes objetivos de órganos, junto con el microambiente metastásico [1]. En el cáncer colorrectal (CRC), el hígado es el órgano diana más común de metástasis [2], [3]. Clínicamente, aproximadamente 25% de los pacientes con CCR presentan metástasis hepáticas sincrónicas en el momento del diagnóstico, y otros pacientes con enfermedad avanzada a desarrollar metástasis en el hígado dentro de los 3 años de tratamiento [3], [4]. metástasis sincrónicas, sin embargo, pueden conferir un pronóstico más pobre que las metástasis metacrónicas [4]. Recientemente, se encontraron heterogeneidad genética que se asocia con la progresión de la metástasis hepática [1], [5], y también se encontró el pronóstico de hígado metastásico CRC estar relacionados con estas alteraciones genéticas [6], [7].
la activación de la proteína activada por mitógenos (MAP) quinasa vía de señalización, especialmente a través de mutaciones de
v-Ki-ras2 Kirsten sarcoma de rata viral oncogén homólogo gratis (
KRAS
) y
v-Raf sarcoma murino viral oncogén homólogo B1 gratis (
BRAF
), es un paso clave en el desarrollo de CCR [8]. El
BRAF
mutación se ha demostrado que es un biomarcador pronóstico independiente para metastasectomıa hepática colorrectal [6], y
KRAS
mutaciones adquiridas durante la progresión del CCR metastásico también tienen implicaciones para la terapia y el pronóstico [ ,,,0],9]. Esta vía de señalización también está implicada en procesos inflamatorios [10]. proteína C reactiva (PCR) es un componente de la vía inflamatoria que se eleva drásticamente durante los procesos inflamatorios y es un biomarcador útil para el pronóstico de los pacientes con CRC [11], [12]. La importancia clínica de esta proteína también se exploró con respecto a ciertos polimorfismos del
CRP
locus genético [13] - [15]. Se encontraron varias
CRP
polimorfismos de nucleótido único (SNP) que se asocia con el riesgo de desarrollar CCR y la supervivencia de los pacientes con esta enfermedad maligna [16]. Sin embargo, si la PCR es meramente un marcador de la inflamación subyacente o tiene una relación causal con el hígado CCR metastásico sigue siendo incierto. Por lo tanto, aún se necesitan estudios sobre el papel de los moduladores relacionadas con inflamación en CRC invasión y metástasis.
A continuación, nos centramos en el papel de la vía de la MAP quinasa activada y la PCR proteína relacionada con la inflamación en las metástasis hepáticas de pacientes con CCR. El objetivo
CRP
rs7553007 SNP en estos pacientes metastásicos se analizó debido a su fuerte asociación con los niveles de PCR, que se había informado anteriormente en la enfermedad coronaria [15]. Hemos estudiado la importancia tanto de un SNP específico de
CRP
y las mutaciones en
KRAS
/
BRAF Hoteles en metástasis hepáticas con respecto a la supervivencia CRC-específica (CSS) de los pacientes después de metastasectomıa hepática colorrectal.
Materiales y Métodos
Las muestras y los datos clínicos
Entre enero de 2000 enero de 2010, 228 pacientes con metástasis hepáticas de cáncer colorrectal (142 pacientes con síncrono la enfermedad y 86 pacientes con enfermedad metacrónico) fueron sometidos a resección hepática con intención curativa en Taipei el hospital general de Veteranos, Taiwán. estadio de la enfermedad se evaluó de acuerdo con el American Joint Committee on sistema de estadificación del cáncer, sexta edición. estadiaje clínico-patológico y el curso clínico se determinaron mediante la revisión de una base de datos que contiene información detallada. ADN no controla CRC a partir de muestras de sangre (79 hombres y 70 pacientes de sexo femenino; rango de edad, 50-80 años) fueron adquiridos de la célula Taiwán chinos Han y Genoma Banco. El protocolo de estudio fue revisado y aprobado por la Junta de Revisión Institucional de la Taipei el Hospital General de Veteranos. Todos los participantes proporcionaron su consentimiento informado para participar en este estudio escritos. La información clínica, incluyendo la edad, el sexo, el tamaño del tumor con metástasis al hígado, ganglio metástasis tumoral etapa (TNM), y los datos de seguimiento clínico, se registró prospectivamente (Tabla 1). tomografía computarizada abdominal se realiza de forma rutinaria para monitorizar la presencia de metástasis. Además del examen de seguimiento programada dentro de los 6 meses, los pacientes fueron seguidos en intervalos de 3 meses hasta los 2 años, y luego cada 6 meses durante 5 años, y posteriormente cada año.
tejido ADN genómico Adquisición
Para la determinación de la
CRP
rs7553007 SNP, se adquirieron muestras de ADN archivados de nuestro estudio previo de las muestras de metástasis hepáticas 228 [6]. Todas las muestras de metástasis hepáticas fueron disecados por un experimentado patólogo del cáncer gastrointestinal, y se extrajo el ADN genómico como se describe anteriormente [6]. La concentración y la pureza de los extractos fueron re-evaluados utilizando un espectrofotómetro NanoDrop (NanoDrop Technologies, DE, EE.UU.).
Evaluación de la
CRP
rs7553007 SNP y
KRAS
y
Las mutaciones de BRAF
Los
CRP
rs7553007 SNP se detectó utilizando un TaqMan SNP genotipificación de ensayo (ensayo ID: C_26627342_10) en un sistema de PCR en tiempo real 7300 (Applied Biosystems , EE.UU.), de acuerdo con las instrucciones del fabricante [17]. Sin embargo, esto no era posible para algunas muestras, y en estos casos, el SNP se evaluó mediante la secuenciación utilizando los cebadores listados en la Tabla S1 y un terminador BigDye (versión 3.1) kit de secuenciación de ciclo (Applied Biosystems) en un sistema de electroforesis capilar ABI 3100 (Applied Biosystems). El
KRAS
/
secuencias de 217 muestras de hígado metastásico fueron obtenidos del informe anterior, pero los datos de las otras 11 muestras BRAF
faltaba (Tabla 1) [6].
análisis estadísticos
las frecuencias alélicas y genotípicas de los 228 pacientes con CCR y 149 sujetos de control se compararon mediante la prueba de chi-cuadrado. Se analizaron los datos clínicos y pronósticos de los 228 pacientes con metástasis hepáticas de cáncer colorrectal. El análisis de CSS medidos a partir de la fecha de la cirugía a la fecha de la muerte por CCR se realizó mediante la prueba de supervivencia de Kaplan-Meier, y la significación se evaluó mediante la prueba de log-rank. regresión de Cox se utilizó para evaluar el valor pronóstico de la categoría de riesgo en los análisis univariados y multivariados. Para esto último, se utilizó un procedimiento por pasos hacia atrás para seleccionar las variables que fueron factores pronósticos independientes. Las variables con un correspondiente
P
valor de & gt; 0,2 se retiraron del modelo. Significación se fijó en
P
. & Lt; 0,05 (SPSS para Windows versión 13.0)
Resultados
Relación entre los
CRP
SNP rs7553007 y de supervivencia CRC en pacientes con metástasis hepáticas
La tasa de CSS después metastasectomıa hepática colorrectal fue significativamente menor en los pacientes con metástasis sincrónica (n = 142) que en los pacientes con metástasis metacrónicas (n = 86) (
P
= 0,018, prueba de log-rank) (Figura 1). Las frecuencias de los alelos y genotipo en rs7553007 no fueron significativamente diferentes entre los sujetos de control y el hígado muestras metastásicas de pacientes con metástasis tanto sincrónica y metacrónico (Tabla 2). Las frecuencias de la A-alelo eran 57,0% para los 149 sujetos de control y 55,5% en los pacientes con metástasis hepáticas 228 (53,2% para los pacientes de metástasis sincrónicas y 59,3% para los pacientes de metástasis metacrónicas).
colorrectal cáncer-específica se predijo la supervivencia para los pacientes con síncrono (n = 142) y metacrónico (n = 86) la metástasis mediante la prueba de supervivencia de Kaplan-Meier. La prueba de log-rank reveló una diferencia estadísticamente significativa entre las tasas de supervivencia.
Entre los 142 pacientes con metástasis sincrónica, el subgrupo de pacientes con el alelo A-(A /A y A /G) en rs7553007 de especímenes metastáticos del hígado (n = 111) tenía una tasa de CSS más bajo que el subgrupo de pacientes sin el alelo a-(G /G) (n = 31) (Figura 2A). Curiosamente, esta diferencia significativa en la CSS no fue observada para los 86 pacientes con metástasis metacrónico (Figura 2B).
El cáncer colorrectal (CCR) de supervivencia se predijo específico de los pacientes con síncrono (A) y metacrónico (B) metástasis. Se utilizó la prueba de supervivencia de Kaplan-Meier para analizar la supervivencia CRC-específica en pacientes con síncrono (n = 31 para G /G; n = 111 para A /A o A /G) y metacrónico (n = 14 para G /G; n = 72 para /G metástasis a) a /a o. La prueba de log-rank reveló una diferencia estadísticamente significativa entre las tasas de supervivencia para las metástasis sincrónicas.
Relación entre el
BRAF
y
KRAS
Las mutaciones y de supervivencia en el CCR los pacientes con metástasis hepáticas
Se estudiaron las alteraciones genéticas en las muestras de hígado metastásico recogidos. Los datos sobre mutado
BRAF
y
KRAS Hoteles en muestras de hígado metastásico de 217 de nuestros pacientes (136 con sincrónica y 81 con metástasis hepáticas metacrónicas) estaban disponibles en nuestro informe anterior [6]. El hallazgo más importante fue que los pacientes con metástasis hepáticas sincrónicas que tenía un
BRAF
o
KRAS mutación
tenido un CSS significativamente más bajos que los de tipo salvaje
BRAF
y
KRAS gratis (Figura 3A). Por el contrario, el estado mutacional de
BRAF
y
KRAS
no tenía ninguna asociación significativa con el pronóstico en pacientes con metástasis hepáticas metacrónico (Figura 3B)
El cáncer colorrectal (CCR). - supervivencia específica se predijo para los pacientes con síncrono (a) y metástasis metacrónicas (B). Se utilizó la prueba de supervivencia de Kaplan-Meier para analizar la supervivencia CRC-específica en pacientes con síncrono (n = 75 para los de tipo salvaje
KRAS
/
BRAF
; n = 61 para los mutantes) y metacrónico (n = 50 para los de tipo salvaje
KRAS
/
BRAF
; n = 31 para los mutantes) metástasis. La prueba de log-rank reveló una diferencia estadísticamente significativa entre las tasas de supervivencia para las metástasis sincrónicas.
Cox univariante y multivariante análisis de CSS en pacientes con CRC síncrono Hígado Metástasis
de regresión de Cox univariante análisis (Tabla 3) reveló que el
CRP
SNP rs7553007 genotipo (hazard ratio [HR] = 1,092; 95% intervalo de confianza [IC] = 1,008 a 1,183;
P = 0,030
) y
KRAS
o
BRAF mutaciones
(HR = 2,174; IC del 95% = 1,199-3,942;
P = 0,011
) se asociaron significativamente con CSS en pacientes con CCR sincrónico con el hígado metástasis. Sin embargo, ninguno de los factores enumerados en la Tabla 3 son predictivos de la CSS en pacientes con metástasis metacrónico. Las variables significativas en el análisis univariado fueron incluidos en el análisis multivariante (tabla 4), y se utilizó una selección por pasos hacia atrás para predictores significativos. Los resultados mostraron que la presencia del alelo A-a
CRP
rs7553007 SNP (HR = 1,101; IC del 95% = 1,011-1,200;
P = 0,027
) y
KRAS /BRAF mutaciones
(HR = 2,377; IC del 95% = 1,293-4,368;
P
= 0,005) fueron factores pronósticos independientes en pacientes con CCR con metástasis hepáticas sincrónicas
Discusión
Como era de esperar, el pronóstico de los pacientes con CCR con metástasis hepáticas sincrónicas fue en general peor que la de los pacientes con metástasis hepáticas metacrónico. La presencia sincrónica de los tumores colorrectales primarios y metástasis hepática podría indicar un estado de enfermedad más difundida y se asoció con una supervivencia libre de enfermedad más corta que la metástasis metacrónico [18]. Ishizuka et al. informó además que la respuesta inflamatoria sistémica reflejada por CRP en suero preoperatorio se correlaciona con la evolución de la enfermedad en estos pacientes metastásicos del hígado [19]. Por lo tanto suponemos que la metástasis hepática sincrónica se correlaciona con el estado de inflamación sistémica más fuerte.
Para mejorar la eficacia terapéutica, el tratamiento de los pacientes con CCR con metástasis hepáticas sincrónicas o metacrónicas es individualizado de acuerdo a las necesidades de cada paciente [20]. Por tanto, es importante comprender los factores que influyen en el resultado después de la resección de metástasis hepáticas [21].
Tanto
CRP
SNPs y los niveles de PCR han sido ampliamente estudiados en la enfermedad cardíaca coronaria (CHD) [ ,,,0],22], [23]. Del mismo modo, la PCR se ha demostrado que se asocia con el riesgo de neoplasia colorrectal [16], [24]. Sin embargo, las conclusiones con respecto a la relación de
CRP
variantes genéticas y los niveles de PCR con el riesgo de enfermedad han sido contradictorios en los últimos informes [15], [23]. Elliott et al. encontrado que la presencia del alelo A-a
CRP
rs7553007 SNP se asoció con bajos niveles de CRP, pero no con riesgo de cardiopatía coronaria [15]. En el presente estudio, se encontró que los pacientes con CCR con metástasis hepáticas sincrónicas que alberga la A-alelo tenían un mal pronóstico significativamente. Este hallazgo es algo diferente de el efecto esperado de la A-alelo, basado en el estudio por Elliott et al. Estos resultados contradictorios pueden ser el resultado de diferencias tanto en el origen étnico de los pacientes y el tipo de enfermedad. La mayoría de los participantes en el estudio de Elliott eran europeos. Tal como se recoge en la Tabla S2 (datos de la base de datos NCBI SNP: www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp_ref.cgi?rs=7553007), la A-alelo es menos común en Europa (33,6%) y poblaciones africanas (19,9%) que en las poblaciones de Asia (más del 50%), y ciertas subpoblaciones tienen frecuencias aún más altas, incluida la población china Han en Beijing (55,6%) y la población japonesa en Tokio (73,3%). Los diferentes resultados también pueden ser explicados por las respuestas inflamatorias complejas. Si la PCR es meramente un marcador de la inflamación subyacente o tiene una relación causal con el hígado CCR metastásico sigue siendo incierto. Una respuesta inflamatoria asociada con
KRAS
/
BRAF mutaciones
ha sido reportado en muchos cánceres humanos, incluyendo CRC [25] - [28]. En la vía de la MAP quinasa,
KRAS
/
BRAF
mutaciones se producen de una manera mutuamente excluyentes [29] - [31]. Un estudio previo mostró que http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/ijc.25042/full - bib4#bib4
BRAF
mutaciones se asociaron con la ausencia de inflamación linfocítica peritumoral y un mal pronóstico [ ,,,0],28].
de acuerdo con las conclusiones de estudios anteriores, se propone que algunas de las respuestas inflamatorias crean un ambiente que fomenta el crecimiento de células tumorales, invasión, y la difusión [32]. Por lo tanto, una respuesta inflamatoria causada por un
KRAS
cierta mutación y
CRP
genotipos pueden agravar las metástasis hepáticas de cáncer colorrectal. En este estudio, hemos demostrado que la presencia de la
CRP
rs7553007 SNP (A-alelo) en tumores metastásicos del hígado fue un factor de riesgo significativo para un mal pronóstico en pacientes con CCR con metástasis hepáticas sincrónicas, pero no en pacientes con metástasis hepáticas metacrónicas. La diferencia en la supervivencia entre los pacientes con metástasis hepáticas sincrónicas y metacrónicas También se ha informado en varios otros estudios. [4], [33], [34].
Como se discutió por Nordlinger et al., Perioperatoria quimioterapia más la resección hepática se ha demostrado que es mejor que la resección hepática por sí sola [35]. En nuestro estudio, ni tampoco neoadyuvante quimioterapia adyuvante tuvo efecto sobre la supervivencia de los pacientes con metástasis sincrónica. Esto podría ser causado por los regímenes heterogéneos de quimioterapia más objetivo adoptadas para nuestros pacientes. Sólo los pacientes con metástasis metacrónico tuvieron significativamente beneficioso sobre la supervivencia de recibir quimioterapia adyuvante. En él se destacan no sólo la aparente beneficio de la quimioterapia para el grupo metacrónico, sino también la diferente naturaleza entre estos dos grupos.
Para nuestro conocimiento, este es el primer estudio que muestra una asociación entre la específica
CRP
rs7553007 SNP y el pronóstico de la CRC. CRP es un componente de la vía inflamatoria que se eleva dramáticamente durante la inflamación, y un alto nivel de CRP se ha demostrado que se asocia con una pobre supervivencia [11], [36]. A pesar de que no tienen datos sobre los niveles de PCR para los pacientes incluidos en este estudio, el
CRP
rs7553007 SNP fue de importancia clínica. De acuerdo con los resultados de genotipado, las proporciones de la A-alelo de la
CRP
rs7553007 SNP son similares en los sujetos control y pacientes con CCR con metástasis en el hígado, como es el caso en otras series de Asia [15].
En conclusión, nuestros resultados sugieren que tanto la presencia del alelo A-del
CRP
rs7553007 SNP y
KRAS
/
BRAF
mutaciones son importantes factores pronósticos para los pacientes de CRC con metástasis hepáticas sincrónicas. La naturaleza de las respuestas inflamatorias afectadas por el
CRP
SNP y específico
KRAS
/
BRAF mutaciones
debería estudiarse más.
Apoyo a la Información
Tabla S1.
Primer secuencias de PCR para determinar rs7553007 SNP
doi:. 10.1371 /journal.pone.0065117.s001 gratis (DOC) sobre Table S2. las frecuencias alélicas de
rs7553007 SNP PCR en diferentes poblaciones
doi: 10.1371. /journal.pone.0065117.s002 gratis (DOC)
Reconocimientos
Los autores desean agradecer a la doctora Anna Fen-Yau Li por su excelente apoyo en la patología. Los autores también agradecen al Instituto de Ciencias Biomédicas, Core Clinical Nacional y Centro Nacional de Genotipado, Academia Sinica para proporcionar control de ADN no-CRC de la célula china de Taiwán Han y Genoma Banco.