Extracto
Objetivo del estudio
Para evaluar la frecuencia de MRE11 /RAD50 /NBS1 (MRN) -complex la pérdida de expresión de la proteína en el cáncer de endometrio (CE) y para determinar si la pérdida de MRE11 hace que las células cancerosas sensibles a la poli (ADP-ribosa) polimerasa (PARP) de tratamiento inhibidora de.
Métodos
expresión
MRN fue examinado en 521 muestras de carcinomas de endometrio y en la celda 10 cáncer líneas. Un punto de acceso mutación putativa en forma de un alelo poli intrónica (T) en MRE11 se secuenció en casos seleccionados (n = 26). La sensibilidad a la PARP-inhibidor, BMN673 fue probada en ensayos de formación de colonia antes y después de silenciamiento MRE11 usando siRNA. la reparación del ADN (HR) La recombinación homóloga se evaluó mediante un ensayo de formación de focos RAD51 en el tratamiento de irradiación y de drogas.
Resultados
La pérdida de proteínas MRE11 se encontró en el 30,7% de los tumores de la CE y asoció significativamente con pérdida de RAD50, NBS1 y expresión de proteínas de reparación de genes. Una línea de células de endometrio mostró una expresión MRE11 marcadamente reducida debido a una mutación homocigota poli (T) de MRE11, exhibiendo de ese modo un aumento de la sensibilidad a BMN673. el agotamiento MRE11 sensibiliza MRE11 líneas celulares que expresan la CE al tratamiento con BMN673. El aumento de la sensibilidad a la inhibición de PARP-correlaciona con la formación de focos RAD51 reducida a la radiación ionizante en las células MRE11-agotado.
Conclusión
pérdida de la proteína MRE11 predice la sensibilidad a la sensibilidad PARP-inhibidor in vitro, definiéndola como un gen sintético letal adicional PARP. La alta incidencia de la pérdida de MRE11 en ECs puede ser potencialmente explotados para la terapia de PARP-inhibidor. Por otra parte, la expresión de proteínas mediante inmunohistoquímica MRE11 podría ser investigado como un biomarcador predictivo para el tratamiento inhibidor de PARP-
Visto:. Koppensteiner R, Samartzis EP, Noske A, von Teichman A, Dedes I, Gwerder M, et al. (2014) Efecto de MRE11 Pérdida en PARP-Inhibidor de la sensibilidad en el cáncer endometrial
in vitro
. PLoS ONE 9 (6): e100041. doi: 10.1371 /journal.pone.0100041
Editor: Sue Cotterill, Universidad de St. Georges de Londres, Reino Unido
Recibido: 10 de noviembre de 2013; Aceptado: 21 de mayo de 2014; Publicado: 13 Junio 2014
Derechos de Autor © 2014 Koppensteiner et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio fue financiado en parte por la Fundación Julius Müller y Liga cáncer Zúrich. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de endometrio (CE) es el cuarto cáncer más común entre las mujeres. La mayoría de los centros son diagnosticados en etapa temprana y se asocian con un pronóstico muy favorable en general [1]. Las opciones de tratamiento, sin embargo, por avanzado, recurrente o metastásico EC, son limitados y consisten principalmente en la quimioterapia citotóxica [1]. tratamientos dirigidos posibles en las investigaciones clínicas, pero aún no se han incorporado en el uso clínico de rutina [2].
EC es una enfermedad heterogénea con histológico distinto y características moleculares [2]. Hasta ahora, la CE se han clasificado en tipos I y II. Esto se basa en las diferentes propiedades histológicas (endometrioide frente a no endometrioide) y en el pronóstico clínico (favorable vs. pobres) [2], [3]. Además, las alteraciones moleculares distintas se producen preferentemente en cualquiera de los tipos I o de tipo II CE (revisado en [2]). Mientras que los tumores de tipo I se caracterizan por la inestabilidad de microsatélites (MSI) y polymutations en diferentes tipos de genes, casi todos los tumores de tipo II albergan mutaciones del gen supresor de tumores
TP53
[4]. Recientemente, subgrupos moleculares novedosas se han descrito de una manera similar a la del cáncer de mama [5]. Con base en su perfil de mutación y el número de copias cambia EC se clasifican en:. La ultramutated, el hypermuted, el número de copia bajo y el alto número de copias de subgrupos [5]
El subgrupo hypermutated incluye mayormente endometrioide CE, toda la inestabilidad de microsatélites la acogida (MSI). Estos tumores son conocidos para desarrollar mutaciones en varios otros genes (genoma hypermutated), sino también los que participan en el doble maquinaria de reparación del ADN capítulo romper (OSD) [6]. Una de la mutación recurrente más común se encuentra en el
gen MRE11
, cuyo producto es una parte de la MRE11-RAD50-NBS1 (MRN) - complejo que está implicado en la detección y reparación de ADN de doble hebra se rompe (DSBs) [7], [8].
MRE11
mutaciones en la línea germinal que causan un fenotipo letal en ratones [9] se encuentran raramente en los seres humanos y conducen a un trastorno de la ataxia telangiectasia (ATLD) [10]. Las mutaciones somáticas en
MRE11
, sin embargo, se detectan con frecuencia en los cánceres colorrectales con MSI y también se han sugerido para MSI-positivo ECs [11]. Las mutaciones de la secuencia intrónica poli (T) de
MRE11
entre los exones 4 y 5 son sucesos frecuentes en MSI positiva colorrectal und EC [11], [12]. En el asunto CE, MSI está presente en más del 20% de los tumores y es causada principalmente por el silenciamiento epigenético del gen MMR
MLH1
[13]. Esto conduce a cambios en el número de repeticiones de nucleótidos que se encuentran en los elementos codificantes y no codificantes de muchos genes, tales como
MRE11
[14].
letalidad sintética se produce cuando dos mutaciones que ocurren de forma individual no tienen efecto sobre la viabilidad celular, pero causar la muerte celular en combinación [15], [16]. La inhibición de un gen letal pareja sintético en células de cáncer que presenta una mutación letal sintético puede probar una estrategia atractiva para desarrollar fármacos específicos contra el cáncer con efectos secundarios mínimos en el tejido sano. Estudios recientes han revelado que los cánceres con pérdida de la función de
BRCA2
muestran exquisita sensibilidad a la poli (ADP-ribosa) polimerasa (PARP) -inhibitors [17], [18] BRCA1 o
. Dado que MRE11 participa en la reparación de DSB de ADN a través de la MRN-complejo, pérdida de la función de este complejo a través de mutaciones inactivantes podría conducir a la sensibilidad a los inhibidores de PARP-[19]. PARP1, una enzima de reparación del ADN, ha sido implicado en la reparación de DSBs. la inhibición de PARP conduce a la apoptosis o senescencia en células en las que se deteriora la reparación del ADN mediante recombinación homóloga (HR) (letalidad sintética). Para este estudio se utilizó un potente inhibidor selectivo PARP1-BMN673, que ha mostrado resultados muy alentadores en fase I /II de ensayos [20].
Aquí mostramos que MRN es frecuentemente pierde en la CE, lo que conduce a una mayor sensibilidad inhibidor de PARP. Esto puede ser explotado para el tratamiento de pacientes con pérdida de la acogida CE del MRN-complejo. El objetivo de este estudio es mostrar la frecuencia de pérdida de MRE11 y MRN-complejo en el CE y si esto conduce a una mayor sensibilidad a los inhibidores de PARP-explotación de
MRE11
como un gen sintético letal potencial.
Materiales y Métodos
microarrays de tejidos
microarrays de tejidos (TMA) con carcinomas de endometrio fijados en formalina y embebidos en parafina se construyeron anteriormente [21]. Dos cohortes de los Institutos de Patología Quirúrgica, Universidad de Hospitales de Basilea y Zurich (Suiza) que contienen 339 (Basilea-TMA) y 182 (Zurich-TMA) muestras de cáncer fueron incluidos en este estudio. Características clínicas y patológicas fueron tomados de las bases de datos clínicos y registros de patología. secciones de hematoxilina y eosina de rutina se realizaron para evaluación histopatológica. La etapa de los tumores se evaluó de acuerdo con la Federación Internacional de Ginecología y Obstetricia (FIGO) y el sistema de estadificación TNM. subtipo histológico y el grado tumoral se define de acuerdo a la clasificación de la OMS son conocidos 2003. Los datos de seguimiento de 480 pacientes. El tiempo medio de seguimiento fue de 31,5 meses (rango, 1-184) para la cohorte de Basilea, y 45 meses (rango, 1-124) para la cohorte de Zúrich. Los pacientes con enfermedad localizada fueron tratadas mediante histerectomía y salpingectomía bilateral (con o sin linfadenectomía pélvica y para-aórtica). la terapia de radiación dentro de la vagina se administró después de la operación cuando la invasión del miometrio o el grado del tumor 3 era evidente. El estudio fue aprobado por ambas cohortes por el comité de ética científica local (KEK-ZH-NR: 2010 a 0358). Las características basales de los pacientes con EC se resumen en la Tabla 1.
La inmunohistoquímica
Después de la recuperación de antígenos, los portaobjetos se incubaron con los anticuerpos siguientes: MRE11 (clon 31H4, la señalización celular, sin . 4847, 1:500), RAD50 (13B3 /2C6, Abcam limitada, no. ab89, 1:500), NBS1 (señalización celular, núm. 3002, 1:50), MLH1 (G168-15, PharMingen, Becton Dickinson , 1:100), MSH2 (25D12, Novocastra Lab. Ltd, 1:100), PMS2 (A16-4, PharMingen, Becton Dickinson, 1:300), y MSH6 (44, BD Biosciences, 1:500). Después de la incubación durante 1 hora a temperatura ambiente, la tinción de MRE11, RAD50, y NBS1 se llevó a cabo adicionalmente con el sistema automatizado Ventana Benchmark (Ventana Medical Systems, USA) utilizando reactivos Ventana así como kit de detección de UltraMap DAB. Los anticuerpos contra las proteínas de reparación de genes se incubaron durante 30 minutos y el procedimiento de tinción se llevó a cabo con el sistema de unión Leica automatizada usando Kit Bond Polymer Refinar detección (Leica Biosystems). El análisis de la expresión fue realizado por dos patólogos (AN, KI). La inmunorreactividad nuclear de MRE11, RAD50, y NBS1 se puntuó como: negativo (0), débil (1), moderada (2) y fuerte (3). La expresión de la proteína de los genes de reparación de genes se consideró como positivo cuando la tinción nuclear fue evidente. Se utilizaron células del estroma que muestran tinción nuclear como control positivo.
líneas celulares de cáncer y condiciones de cultivo
Las líneas celulares CEE HEC-108 [22] y HEC-116 [22] se cultivaron en MEM, HEC 1A (ATCC) en McCoy, EFE-184 (DSMZ) en RPMI, AN3CA (ATCC) en DMEM, ARC-II [23] en DMEM, SNG-II [24] en DMEM, ECC-1 [25] en RPMI 1640, y eran un regalo de Uwe Schirmer, DKFZ. HEC6-ST3 [22], que se cultiva en MEM, y la demandante (ATCC), cultivadas en DMEM /F-12, fueron un regalo de Jaqueline Galeas, UCSF. Los medios se complementaron con 10% (medio de ECC-1 con 5%) (v /v) de suero bovino fetal y con penicilina (100 U /ml) /estreptomicina (60 mg /ml) o antibiótico-antimicótico, y mantenidos a 37 ° C en una atmósfera humidificada a 5% de CO2. Todo el material de cultivo celular fue adquirido de Gibco por Life Technologies.
inmunotransferencia
extractos de proteínas de células enteras se prepararon a partir de células lisadas con un tampón de lisis SDS. Western Blot se realizó con anticuerpos primarios contra MRE11 (D151, regalo de Steve Jackson, Cambridge), RAD51 (anticuerpo policlonal de conejo, Santa Cruz Biotechnology), NBS1 (anticuerpo monoclonal de ratón, GeneTex), beta-tubulina (anticuerpo monoclonal de ratón, Sigma) . La incubación con el anticuerpo primario fue seguido de incubación con un anticuerpo secundario conjugado con HRP (anti-ratón y HRP anti-conejo de Sigma, anti-oveja HRP de SantaCruz) y detección quimioluminiscente de las proteínas (Amersham).
MRE11 análisis de mutaciones
Trece MRE11 inmunohistoquímica (IHC) muestras negativas positivas IHC y 13 fueron elegidos entre la cohorte de Zurich por
MRE11
análisis de la mutación. Tres cilindros de tejido (diámetro 0,6 mm) se perforaron a partir de cada bloque de parafina para la extracción de ADN. El ADN genómico fue extraído utilizando el DNeasy Blood & amp; Tissue Kit (Qiagen, Hilden, Alemania). Las concentraciones de los ácidos nucleicos obtenidos se midieron usando el Nanodrop (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EE.UU.). PCR se realizó como se ha descrito previamente (Grannini et al., 2002) con una ligera modificación. Sólo 50 ng de ADN genómico se amplificó por PCR. La secuenciación del ADN se llevó a cabo utilizando el Kit de Secuenciación de Ciclo v1.1 BigDye Terminator (Applied Biosystems). Las secuencias obtenidas fueron analizadas por mutaciones en el poli (T) de la región 11 de repetición dentro de la humana
MRE11
intrón 4 (Tabla 2).
ensayos de formación de colonias
ensayos de supervivencia a largo plazo se realizaron como se describe anteriormente [26]. En resumen, las células fueron sembradas en placas de seis pocillos por triplicado a una concentración de 300-2000 células por pocillo y se trataron con el inhibidor de la después de 24 horas, siendo continuamente expuesta a la droga (10-11 a 10-6 M) disuelto en sulfóxido de dimetilo (DMSO) (control: DMSO). Medios de Comunicación y la droga fueron reemplazados cada 3 a 5 días. Después de 10 a 15 días, las células se fijaron con TCA 10% y se tiñeron con sulforrodamina B (SRB) (Sigma) y un ensayo colorimétrico se realizó tal como se describe anteriormente [26]. El inhibidor de PARP BMN673 fue un regalo de Biomarin Pharmaceuticals, EE.UU.. Mirin se adquirió de Calbiochem.
siRNA y transfecciones
Para derribar humana
MRE11
hemos utilizado tres diferentes siRNAs (Microsynth, Suiza) utilizando RNAimax (Gibco por Life Technologies) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Las secuencias diana (sentido) fueron: GCUAAUGACUCUGAUGAUATT [27], GAGCAUAACUCCAUAAGUATT [28], y GAUGCCAUUGAGGAAUUAGTT [29]. Como control, las células fueron transfectadas con siRNA contra luciferasa (sentido): CGUACGCGGAAUACUUCGATT. Las células fueron sembradas 48 horas después de la transfección y el tratamiento se inició 72 horas después de la transfección (inhibidor de PARP, irradiación).
Análisis de focos Rad51 Formación
focos nucleares RAD51 se visualizaron y cuantificaron como se describe anteriormente [26 ] y se utiliza como marcadores sustitutos para la inducción de ADN DSBs y la reparación del ADN HR competente, respectivamente. En resumen, las células se cultivaron en cubreobjetos (12 mm, Thermo Scientific) y se expusieron a 10 Gy de IR. Después de la recuperación de 4-6 horas, las células se fijaron, se permeabilizaron y se inmunotiñeron con anticuerpos primarios contra RAD51 (anticuerpo policlonal de conejo, Santa Cruz) y se detectaron con harina alexa 488 (Invitrogen). Los núcleos se contratiñeron con 4 ', 6-diamidino-2-fenilindol (DAPI). La presencia de focos RAD51 fue evaluada en un mínimo de 100 células en tres experimentos independientes con un microscopio invertido de fluorescencia automatizado (LEICA-DMI6000 B).
Análisis estadístico
La evaluación estadística se realizó con el software SPSS versión 21.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, EE.UU.). Los datos de puntuación de MRE11, RAD50, y NBS1 se dicotomizadas en "negativo" (sin expresión) y (expresión débil, moderado o fuerte) "positiva". La significación estadística de la asociación entre estas moléculas, y de la expresión de la proteína de reparación de genes, así como parámetros clínico fue evaluada por Chi
2 test de tendencias y la prueba exacta de Fisher. Además, se utilizó la correlación de Spearman para evaluar la asociación entre MRE11, RAD50, NBS1, y las proteínas de reparación de genes. La probabilidad de supervivencia global como una función del tiempo se determinó por el método de Kaplan-Meier. Las diferencias en las curvas de supervivencia se compararon mediante la prueba de log-rank. curvas de sensibilidad se calculan en GraphPad Prism versión 6 (GraphPad Software Inc., La Jolla, EE.UU.) y las diferencias estadísticas entre los valores de IC50 fueron evaluados mediante pruebas F. En general, los valores de p menores de 0,05 se consideraron significativos.
Resultados
Expresión MRN-complejo y la asociación con la falta de coincidencia de estado de proteínas de reparación y Clinicopathological Factores
El análisis inmunohistoquímico de MRE11 , RAD50, y NBS1 tuvo éxito en 456, 466, y 458 carcinomas endometriales, respectivamente, debido a la falta de tejido tumoral en algunos puntos de TMA. Todas las moléculas mostraron un patrón de tinción nuclear. Entre los 521 pacientes carcinomas endometriales 30,7% (132/430) mostró una pérdida completa de MRE11 (Fig. 1A, y la Tabla 1). la pérdida de expresión de MRE11 correlacionó significativamente con la pérdida de proteínas de los otros miembros de NRM-RAD50 complejos y NBS1. La pérdida de cualquier proteína MRN-complejo también se asoció significativamente con la expresión de la proteína de reparación de genes, así como con la FIGO etapa y el grado histológico (Tabla 3). En el análisis de Kaplan-Meier, estadio FIGO, subtipo histológico, la clasificación y la edad del paciente eran factores pronósticos (log rank, p-valor & lt; 0,0001 para todos los parámetros). Sin embargo, la expresión de proteínas de MRE11 (rango, p = 0,867 log), Rad50 (log rank, p = 0,986) y NBS1 (log rank, p = 0,991) no se asoció con la supervivencia global. Por otra parte, la secuenciación de la poli (T) 11 alelo de
MRE11
en el ADN genómico de tumores CE (n = 26; Tabla 2) mostró que las mutaciones fueron más frecuentes en los tumores con pérdida de MRE11 que en los que expresan MRE11 , pero el estado de la mutación no fue altamente predictivo para el estado de la proteína de MRE11
a, negativo (pérdida completa de la expresión de la proteína MRE11).; B, + (expresión nuclear débil); C, ++ (expresión nuclear intermedio); D, +++ (fuerte expresión nuclear).
Pérdida de MRE11 está asociada con una alta sensibilidad a la inhibición de PARP
Entre un panel de líneas celulares de la CE, exhibió AN3CA la pérdida de proteínas MRE11 casi completa así como los niveles marcadamente reducidos de RAD50 y NBS1 (Fig. 2A). La secuenciación de la región intrónica de MRE11 en esta línea celular confirmó la poli anteriormente descrito homocigotos (T) 9 mutación en AN3CA (Fig. 2B) [11]. Tras el tratamiento con inhibidor de PARP-BMN673, AN3CA muestra la sensibilidad más alta entre el panel de líneas celulares de cáncer endometrial probado (Fig. 3C).
A, inmunotransferencia de tipo Western que demuestra la expresión de estado MRE11, NBS1 y RAD50 en 10 líneas celulares de carcinoma de endometrio. Sólo la línea celular AN3CA alberga una mutación de MRE11, que conduce a una expresión reducida drásticamente de MRE11. Tubulina se utilizó como control de carga. B, ensayos de formación de colonias que demuestran la sensibilidad al inhibidor de PARP (BMN673) en 10 líneas celulares de carcinoma de endometrio: todas las líneas celulares se trataron por triplicado durante 14 días. Survival está representado en porcentaje del control (DMSO tratada). Las colonias de células se cuantificaron utilizando un método colorimétrico (SRB).
A, la eficiencia de siRNAs en diferentes puntos temporales después de la transfección se muestran por el Western Blot. B, ensayo de sensibilidad (colorimétrico con SRB): todas las líneas celulares se trataron con inhibidor de PARP (BMN673) por triplicado durante 14 días. Survival está representado en porcentaje del control (DMSO tratada). Tumbar de MRE11 con tres conjuntos diferentes de siRNAs conducen a una mayor sensibilidad hacia la inhibición de PARP en las líneas de endometrio de células de carcinoma HEC1A (aumento de 8 veces, p & lt; 0,0001) y HEC-116 (aumento de 6 veces, p = 0,0006). C, las líneas celulares se trataron con los mirin MRE11-inhibidor a una concentración final de 30 mM por triplicado durante 10 días. La supervivencia se evaluó mediante un ensayo de sensibilidad colorimétrico (SRB) y se muestra en porcentaje del control (DMSO tratada). El tratamiento con el inhibidor de MRE11-mirin conducen a una mayor sensibilidad a la inhibición de PARP tanto, HEC1A (aumento de 2,6 veces, p = 0,001) y HEC-116 (incremento de 17 veces, p & lt; 0,0001) guía empresas
de la precipitación y la inhibición de la MRE11 sensibiliza a las células a BMN673 debido a la alteración de HR
Dado que la pérdida de expresión MRE11 AN3CA se asoció con una sensibilidad significativa a la inhibición de PARP, nos preguntamos si el agotamiento de MRE11 de siRNA llevaría general a un aumento de la sensibilidad a la PARP-inhibidor BMN673. Para probar esta se utilizó un panel de líneas celulares de la CE que expresaban niveles normales de MRE11 (Fig. 2A) y también eran resistentes a la inhibición de PARP (Fig. 2C). La eficacia del tratamiento siRNA se evaluó por transferencia Western. En ambas líneas celulares, la transfección con siRNA MRE11 agota de manera eficiente MRE11 endógeno (Fig. 3A). El próximo evaluó la sensibilidad inhibidor de PARP en las células MRE11 empobrecida por la formación de colonias. Tras el agotamiento de MRE11, observamos consistentemente una disminución significativa de la viabilidad celular en presencia de BMN673 (Fig. 3B). Con el fin de probar si se requiere la actividad nucleasa MRE11 para resistencia a los inhibidores de PARP, cultivamos dos líneas celulares en presencia del inhibidor de mirin MRE11 y los trató con BMN673 (Fig. 3C). En ambos casos, el mirin tuvo un impacto negativo sobre la viabilidad celular en respuesta a la inhibición de PARP, lo que sugiere fuertemente que se requiere la actividad nucleasa MRE11 de resistencia a los inhibidores de PARP. Para confirmar que derribo de MRE11 conduce a problemas de recursos humanos, a fin de determinar la capacidad de las células para formar focos RAD51 en respuesta a la radiación ionizante (IR) (ver Fig. 4A). De hecho, al silenciamiento de
MRE11,
menos focos RAD51 por célula se pudo observar (Fig. 4B). La línea celular pancreática Capan-1 conocido por ser HR-deficiente debido a una mutación de
BRCA2
sirvió como control (datos no mostrados).
núcleos A, que muestra imágenes de inmunofluorescencia teñidos con DAPI (azul) y focos RAD51 (verde) en campos representativos de HEC-1A y HEC-116 células de carcinoma de endometrio. Ambos MRE11 líneas celulares que expresan de tipo salvaje fueron tratados con tres diferentes conjuntos de siRNAs para MRE11 o con siRNA de luciferasa (siLUC) como control. Las células transfectadas se expusieron a 10 Gy de irradiación o no expuestos, como se indica. B, RAD51 formación de focos se muestra como porcentaje de células positivas RAD51 focos (más de 5 focos por célula se evaluaron como positivos) sin tratamiento y 6 horas después de 10 Gy de irradiación. Un mínimo de 100 células se contó para determinar RAD51 focos frecuencia de la formación en tres experimentos independientes. ** P≤0.01, *** p≤0.001.
Discusión
Este es el primer informe para demostrar que no sólo la expresión de la proteína de MRE11 sino también la expresión de la otros miembros de la MRN-complejo, RAD50 y NBS1, se pierden en una proporción sustancial de la EC. Asimismo, se observó una asociación significativa entre la pérdida de proteínas de todos los miembros de MRN, así como el estado de la proteína de reparación de genes en este gran conjunto de datos. Expresión de proteínas de la MRN-complejo aún no ha sido estudiado en los tumores de la CE. En el cáncer de vejiga, MRE11 se ha demostrado que exhiben propiedades de predicción para el tratamiento de radioterapia [30]. Por otra parte, la pérdida completa de MRN-compleja en los cánceres colorrectales MSI positivos es un evento frecuente [31], mientras que la pérdida de MRE11 en tumores de mama se encuentra sólo en el 9% de los casos [32].
A pesar de una clara correlación entre el estado mutacional y la pérdida de expresión de la proteína no se pudo encontrar en este estudio, es notable que una alta correlación de la pérdida de proteínas de todos los miembros de MRN, así como el estado de MSI se ha encontrado en este gran conjunto de datos. resultados de confusión en el estado mutacional de la (11) alelo MRE11 poliT pueden estar relacionadas con dificultades conocidas en la secuenciación del alelo MRE11 poliT (11) debido a mispairing de la enzima de la polimerasa [33].
Un estudio previo alta frecuencia revelada de alteraciones de genes de reparación del OSD en MSI positiva EC, donde MRE11 y RAD50 exhibieron heterocigotos y homocigotos mutaciones en el 51% y 17%, respectivamente, sin examinar el impacto de la pérdida de las proteínas [6]. Las mutaciones del MRE11 poliT (11) alelo son mutaciones predominantemente heterocigotos y se ha sugerido que sólo aquellos con mutaciones de dos y más nucleótidos, así como mutaciones homocigotas tienen un impacto funcional en términos de pérdida de la función [11], [12] , [34], [35]. En este informe, no podemos confirmar la alta frecuencia de mutaciones intrónicas pero proporcionan evidencia de que la proteína MRE11 se pierde en una proporción sustancial de los EC. Recientemente, se ha demostrado que toda la secuencia exón del MRE11 reveló mutaciones en 1,9% (2 de 107) de los tumores de la CE dentro de los exones [36]. Sin embargo, no se han evaluado las mutaciones intrónicas, para explicar por qué la frecuencia de
MRE11
mutaciones se informó a ser baja, no sólo en el estudio de Price et al. [36], sino también en un reciente uno por La Red de Investigación Atlas del Genoma del Cáncer [5].
Los inhibidores de PARP han mostrado una notable sensibilidad en modelos de tumores BRCA1 /2-deficientes
in vitro, así
como en ensayos clínicos con portadores de
BRCA1 /2
mutaciones de la línea germinal. Otra prueba en evolución, sin embargo, sugiere la posibilidad de ampliar el alcance de la actividad del inhibidor de PARP [16]. De hecho, para la CE que hemos propuesto anteriormente la pérdida de expresión de PTEN como un biomarcador potencial para el tratamiento con inhibidores de PARP-basados en los datos preclínicos [26], así como en la presentación de un caso clínico [37]. Sin embargo, otros estudios han cuestionado el papel de
PTEN Hoteles en recursos humanos, lo que sugiere que esto podría ser un fenómeno específico de la línea celular [38], [39]. Sin embargo, el mecanismo exacto de la participación de los
PTEN Hoteles en la reparación del ADN de recursos humanos aún no se ha dilucidado.
La pérdida de expresión MRE11 ha sugerido para sensibilizar colorrectal [35], [38], [ ,,,0],40], de mama [41] y [42 líneas] celulares de cáncer hematológicos a PARP-inhibidores debido a la alteración de la reparación del ADN HR. Nuestro informe sugiere, por primera vez, el uso potencial de los inhibidores de PARP en el tratamiento de cáncer de endometrio basado en hallazgos preclínicos. Cada vez hay más pruebas de que los pacientes que sufren de cáncer de endometrio y que no expresan MRE11 podrían ser tratados con BMN673. Esto apoya el uso de MRE11 como un biomarcador predictivo para el tratamiento de la PARP.
En conclusión, este estudio muestra que i) la pérdida completa del complejo MRN es un evento frecuente en la CE, ii) la pérdida de expresión, así MRE11 como el silenciamiento de genes y la inhibición farmacológica de la actividad nucleasa conduce a sensibilidad a la inhibición de PARP-
in vitro
, y iii) pérdida de MRE11 está asociado con la reparación del ADN HR deficiente demostrado tras la irradiación. Sobre la base de estos resultados, proponemos que la expresión MRE11 puede ser utilizado como un biomarcador predictivo potencial para la efectividad del tratamiento inhibidor de PARP en los cánceres de endometrio con MSI.
Reconocimientos
Agradecemos Martina Storz, André Fitsche y Sonja Brun-Schmid por su excelente asistencia técnica, y Markus Rechsteiner útil para los debates. Agradecemos a Steve Jackson para proporcionar reactivos publicados y Biomarin Pharmaceuticals por el don de su inhibidor de PARP-BMN673.