Extracto
apurinic /endonucleasa de 1 (APE1), que tiene la doble función de tanto la reparación del ADN y la actividad redox, se ha informado que ser altamente expresado en el cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) apyrimidinic, y esto parece ser una característica relacionada con la resistencia a la quimioterapia. En este estudio, hemos identificado autoanticuerpos séricos Ape1 (APE1-OAA) en pacientes con CPNM y controles sanos mediante inmunotransferencia y se investigó la expresión de Ape1-AAbs mediante ELISA indirecto a partir del suero de 292 pacientes con CPNM y 300 controles sanos. Además, alteraciones en los niveles séricos APE1-OAA de 91 pacientes fueron controlados antes y después de la quimioterapia. Nuestros resultados mostraron que el suero Ape1-AAbs se puede detectar tanto en pacientes con CPNM y controles sanos. Suero Ape1-AAbs fueron significativamente más altos que los de los controles sanos y estrechamente relacionado con los niveles de antígeno Ape1 tanto en los tejidos tumorales y la sangre periférica. Por otra parte, el cambio en los niveles de suero Ape1-AAbs en NSCLC está estrechamente asociada con la respuesta a la quimioterapia. Estos resultados sugieren que APE1-AAbs es un marcador tumoral potencial y predictor de eficacia terapéutica en NSCLC
Visto:. Dai N, Cao X-J, Li M-X, Qing Y, Liao L, Lu X-F, et al. (2013) Suero APE1 autoanticuerpos: Un posible tumor nuevo marcador y predictor de eficacia quimioterapéutico en células no pequeñas de cáncer de pulmón. PLoS ONE 8 (3): e58001. doi: 10.1371 /journal.pone.0058001
Editor: Hiromu Suzuki, de la Universidad Médica de Sapporo, Japón
Recibido: 6 de Noviembre de 2012; Aceptado 29 de enero de 2013; Publicado: 5 Marzo 2013
Derechos de Autor © 2013 Dai et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Nº 30872975 y Nº 81001000). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
Con su creciente incidencia y la mortalidad, el cáncer de pulmón se ha convertido en la principal causa de muertes por cáncer y un problema clínico difícil en todo el mundo [1], [2]. cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) es el principal tipo de cáncer de pulmón, que a menudo se diagnostica en una etapa avanzada de modo que los pacientes tienen pocas posibilidades de tratamiento eficaz y curativo, y esto se manifiesta con tasas de supervivencia a 5 años de & lt; 15 % [3].
la detección de biomarcadores tempranos de NSCLC, el desarrollo de factores predictivos de eficacia terapéutica, y nuevas drogas son factores vitales en la mejora tanto el pronóstico y la supervivencia de los pacientes [4], [5]. Sin embargo, los presentes y los biomarcadores predictivos para NSCLC aún carecen de sensibilidad y especificidad adecuadas [6]. El antígeno carcinoembrionario es uno de los marcadores tumorales más estudiados ampliamente en NSCLC, con una sensibilidad de sólo aproximadamente el 40% [7]. Algunos de los nuevos candidatos marcadores séricos tales como el factor de crecimiento endotelial vascular, factor de células madre, las citoquinas angiogénicas, y factor de crecimiento de hepatocitos /factor de dispersión pueden ser potencialmente importante, pero la mayoría de ellos no han sido establecidas para ser indicadores pronósticos clínicos independientes [8]. Por lo tanto, se requieren más estudios para descubrir nuevos biomarcadores para ayudar en la selección de NSCLC, lo que mejorará en gran medida el resultado terapéutico de esta enfermedad maligna [9].
Los anticuerpos circulantes contra antígenos asociados a tumores (TAA) son una clase de nuevos biomarcadores séricos que muestra propiedades muy interesantes, sobre todo en el diagnóstico precoz de los cánceres. Los autoanticuerpos están presentes en el suero de pacientes en una etapa temprana, cuando los tumores no pueden ser detectados clínicamente, incluso antes de TAA pueden ser detectados [10], [11]. La persistencia y estabilidad de autoanticuerpos séricos son principales ventajas sobre otros biomarcadores de suero utilizados en la actualidad [12]. Ellos muestran una mayor vida útil (t
medio entre 7 y 30 días) en el suero en comparación con los AAT, son muy estables en sangre, y no están sujetos a la proteólisis como otros polipéptidos [13], [14]. Por otra parte, las moléculas como bioquímicamente bien conocidos, los anticuerpos pueden ser detectados por muchos reactivos y técnicas disponibles tanto sencilla y barata. En los últimos años, un aumento de artículos han demostrado que el control de las personas en mayor riesgo de cáncer de la presencia de autoanticuerpos en suero puede permitir la detección y /o pronóstico temprano en diferentes tipos de cáncer, incluyendo NSCLC [15] - [19]. Los autoanticuerpos contra p53, NY-ESO-1, survivin y la jaula se han demostrado para ser biomarcadores de diagnóstico para los pacientes de cáncer de pulmón [20] - [22]
apurinic /endonucleasa apyrimidinic 1 (APE1), que tiene la. doble función de la actividad tanto de reducción-oxidación (redox) y la reparación del ADN, es la principal AP endonucleasa de la vía de reparación por escisión de base. Desempeña un papel importante en la progresión del NSCLC, así como el mantenimiento de la estabilidad del genoma [23]. La expresión elevada y ectópica de APE1 en los tejidos tumorales está estrechamente vinculado con mal pronóstico y la quimio y la radio-resistencia en NSCLC [24] - [26]. Recientemente, Katsumata et al identificó por primera vez autoanticuerpos Ape1 (APE1-OAA) en el suero de pacientes con lupus eritematoso sistémico [27], pero tenemos poco conocimiento sobre Ape1-AAbs en NSCLC. Postulamos que anormalmente abundantes o ectópica de proteínas APE1 partir de tejidos tumorales puede entrar en el suero y que Ape1-AAbs puede ser detectado en la sangre periférica de los pacientes con CPNM.
En este estudio, hemos detectado APE1-AAbs utilizando tanto inmunotransferencia y análisis ELISA, a continuación, investigaron la correlación entre Ape1-AAbs, antígeno APE1 suero y la expresión de la proteína APE1 en los tejidos tumorales. Además, se evaluó APE1-AAbs valor diagnóstico y la correlación con la eficacia terapéutica en pacientes con NSCLC. Para nuestro conocimiento, este es el primer informe que identifica el suero Ape1-AAbs en el cáncer de pulmón.
Materiales y Métodos
Los pacientes
Este estudio fue aprobado por el Comité de Ética e Investigación de la Facultad de Medicina de Daping, Tercera Universidad médica Militar, china y consentimiento informado por escrito se obtuvo de todos los pacientes y controles sanos. Las muestras de suero se obtuvieron de 292 pacientes con CPNM y 300 controles sanos a partir de enero de 2007 a junio de 2008. Las características demográficas y las características clínicas de los grupos estudiados se ilustran en la Tabla 1. El noventa y un pacientes que recibieron dos ciclos de régimen que contiene platino se controlaron antes y después de la quimioterapia. La evaluación histopatológica se llevó a cabo por separado por dos patólogos, y luego un consenso se hizo en las evaluaciones discordantes. El sistema de clasificación se llevó a cabo según la clasificación AJCC 2003. La eficacia terapéutica se define por criterios de evaluación de respuesta en tumores sólidos, que clasifican la respuesta en cuatro categorías: respuesta completa (RC), respuesta parcial (RP), enfermedad estable (SD) y enfermedad progresiva (PD). Para el análisis de datos, CR y PR se combinaron como respondedores que eran sensibles a la quimioterapia, mientras que SD y PD se agruparon como no respondedores. Los pacientes fueron excluidos si tenían trastornos inmunológicos, la evidencia de aguda o reciente (& lt; 2 meses). Infección, trauma mayor reciente, cirugía o tratamiento con agentes inmunosupresores
Suero Colección
muestras de sangre periférica se obtuvieron a partir de los controles sanos y de los pacientes después del diagnóstico, pero antes de cualquier operación. Para los 91 pacientes con CPNM tratados con dos ciclos de quimioterapia con platino-contenido, las muestras de suero se obtuvieron antes de la quimioterapia y un mes después de la quimioterapia. Las muestras de sangre entera se centrifugaron inmediatamente a 3000 rpm durante 15 minutos y el sobrenadante se almacena a -80 ° C hasta su uso.
Cell Cultura
células de adenocarcinoma de pulmón humano (A549) fueron adquiridos de American Type Culture Collection (Manassas, VA, EE.UU.) y se cultivaron en RPMI 1640 (Hyclone, Logan, UT, EE.UU.) suplementado con 10% de suero fetal bovino, 100 unidades /ml de penicilina y 100 mg /ml de estreptomicina. Las células fueron cultivadas en 5% de CO2 a 37 ° C.
Los análisis Dot Blot y Western Blot
La proteína de fusión APE1 de larga duración [con hexahistidina (Su) etiqueta, construido y purificados en nuestro laboratorio] estaba salpicada sobre una membrana de NC. La membrana se bloqueó durante 2 horas a 37 ° C con tampón de bloqueo (5% de BSA en TBST). La membrana se incubó a 4 ° C durante la noche con suero de pacientes y controles sanos diluidas 1:500 en tampón de bloqueo. Después de lavar con TBST, la membrana se incubó durante 1 h a 37 ° C con anti-IgG humana (dilución 1:10000, Sigma, EE.UU.) de cabra marcado con HRP.
Las expresiones de suero APE1-Abbs eran analizaron mediante análisis de Western blot [27]. La proteína extraída de células A549 y su APE1-proteína de fusión se separó por 10% SDS-PAGE y luego se transfiere a una membrana de NC. La membrana se bloqueó durante 2 horas a 37 ° C con tampón de bloqueo. La membrana se incubó a 4 ° C durante la noche con anticuerpo monoclonal anti-humano APE1 (1:5000 dilución) y el suero de pacientes con cáncer de pulmón y los controles sanos (1:500 dilución). La membrana se incubó durante 1 h a 37 ° C con anticuerpo de cabra marcado con HRP anti-IgG de ratón (dilución 1:10000) e IgG de cabra marcado con HRP anti-humana (1:10000 dilución).
enzima ensayo inmunoenzimático (ELISA)
ELISA indirecto se utiliza para detectar el suero Ape1-AAbs y llevó a cabo de la siguiente manera: (1) Las placas de microtitulación (450~500 ng /cm
2, 8 y 12 × tiras , Costar Biosciences Inc, EE.UU.) se recubrieron con 100 l APE1 Su-proteína de fusión se diluyeron con tampón de recubrimiento (/L de tampón carbonato de 0,1 moles, pH 9,6) a 1,0 mg /ml y se incubó a 4 ° C durante la noche; (2) Las placas se lavaron tres veces usando tampón de lavado (0,05% PBST), 300 l /pocillo, a continuación, los sitios no específicos en los pocillos se bloquearon con 200 l tampón de bloqueo (BSA al 5% en PBS) se incubaron durante 2 h a 37 ° C; (3) Después de tres lavados, 100 l /pocillo de muestras de suero diluidas 1:300 se incubaron durante 1 h a 37 ° C, PBS se usó como el control de la calibración; (4) Los compuestos no unidos se lavaron de distancia, 100 l /pocillo de cabra marcado con HRP anti-humano IgG (concentración de trabajo recomiendan dilución 1:50000) se incubaron durante 45 min a 37 ° C; (5) Después de lavar seis veces, 100 l /pocillo de TMB (Pierce, EE.UU.) solución de substrato se incubó durante 10 min a 37 ° C; (6) La reacción enzimática se detuvo por 2 mol /L H
2SO
4 (50 l /pocillo) y después la densidad óptica (DO) se midió por espectrofotometría de microplacas a longitud de onda de referencia (450 nm). Todas las muestras se ensayaron dos veces en dos placas separadas
mejorada intercalando ELISA se utilizó para detectar antígeno APE1 suero y lleva a cabo como sigue:. (1) Las placas de microtitulación se recubrieron con anticuerpo monoclonal de ratón 100 APE1 l anti-humana ( 1:40000 dilución) se incubaron a 4 ° C durante la noche; (2) los pocillos se bloquearon durante 2 horas a 37 ° C; (3) 100 l /pocillo de muestras de suero se incubaron durante 1 h a 37 ° C, PBS se usó como el control de la calibración; (4) 100 conejo l de anticuerpo anti-humano policlonal de APE1 (1:5000 dilución) se incubaron durante 1 h a 37 ° C; (5) 100 l /pocillo de cabra marcado con HRP IgG anti-conejo (1:5000 dilución) se incubaron durante 45 min a 37 ° C; (6) Después de lavar seis veces, 100 l /pocillo de solución de sustrato TMB se incubó durante 10 min a 37 ° C y se detuvo por 2 mol /LH
2SO
4, la densidad óptica (DO) se midió mediante microplacas espectrofotometría a la longitud de onda de referencia (450 nm). Todas las muestras se ensayaron dos veces en dos placas separadas.
APE1 inmunohistoquímica y la puntuación de
La expresión de la proteína APE1 de los pacientes con CPNM se analizaron mediante inmunohistoquímica. Los portaobjetos se corta a 4 micras secciones y se incubó con anticuerpo monoclonal de ratón APE1 anti-humana (1:2000 dilución). diagnóstico histológico de cada muestra fue confirmado por un patólogo como los estudios previamente con APE1 [26]. Anotados por el porcentaje de tinción de células y la intensidad de tinción como estudios previos [28], [29], los tejidos se clasifican en cuatro categorías: 0, 1, 2 y 3 correspondientes a la expresión negativa, débil, moderada y fuerte. La puntuación y la puntuación de 0 1 fueron considerados una expresión baja, mientras que la puntuación y la puntuación 2 3 fueron considerados de alta expresión.
Análisis estadísticos
Los datos se expresaron como mediana o media ± desviación estándar (DE) . Asociaciones entre las características clínicas y los autoanticuerpos Ape1 o antígenos fueron evaluados por
t-test
, ensayo y análisis unidireccional independiente chi-cuadrada de la varianza. La asociación se evaluó mediante el funcionamiento del receptor curva característica (ROC) se utilizó para evaluar la sensibilidad y especificidad. la fuerza de correlación se evaluó mediante la prueba de correlación de Spearman. Se analizaron las asociaciones entre los niveles APE1-AAbs de pre- y post-quimioterapia por emparejado
t-test
. En todos los cálculos,
p Hotel & lt; 0,05 fue considerado estadísticamente significativo. Todos los procedimientos estadísticos se realizaron utilizando el software GraphPad Prism, versión 5.0 y el software SPSS, versión 13.0 para Windows.
Resultados
Identificación de suero Ape1-AAbs en controles sanos y pacientes con CPNM
Uso de muestras de suero para transferencia de puntos y el perno Western análisis, encontramos que en ambos pacientes con CPNM y controles sanos, los autoanticuerpos en el suero reconocido purificado APE1-His proteína de fusión y la proteína APE1 en A549 lisis de células enteras (Fig. 1A y 1B ). Además, el punto y banda inmunorreactiva señales procedentes de pacientes con CPNM eran más fuertes que los controles sanos. Estos resultados sugieren que Ape1-AAbs se puede detectar en el suero de ambos pacientes con CPNM y controles sanos.
A, los resultados representativos de la detección de los sueros Ape1-AAbs por ensayo de transferencia de puntos. Carriles 1~5: suero de los sujetos sanos. Carriles 6~10: suero de pacientes con CPNM. B, suero Ape1-AAbs de pacientes sanos y con CPNM fueron detectados por Western blot. Carril M, la proteína de los marcadores de peso molecular; APE1, proteína de fusión APE1 con cola de His; A549, la proteína celular total extraído de células A549; Anti-His, la proteína de fusión APE1 detectado por su anticuerpo.
La distribución de Ape1-AAbs en el suero de controles sanos y pacientes con CPNM
De acuerdo con las características demográficas y las características clínicas de pacientes con CPNM y controles sanos (que se describe en la Tabla 1), no hubo diferencia estadística en la distribución de la edad, sexo y tabaquismo entre los dos grupos. método ELISA indirecto se construyó (descrito en la Fig. S1) y se utiliza para detectar la prevalencia de autoanticuerpos séricos contra APE1. Entre 292 pacientes con CPNM, la media con desviación estándar de concentración APE1-AAbs era 0,79 ± 0,40 (OD
450), que fue significativamente mayor que 0,47 ± 0,22 (OD
450) en los controles sanos (
p
= 0,000,
t-test
) (Fig. 2). Los niveles de Ape1-AAbs mostraron una distribución normal.
Entre los 292 pacientes con CPNM, la media con desviación estándar de concentración APE1-AAbs fue de 0,79 ± 0,40 (OD
450), que fue significativamente mayor que 0,47 ± 0,22 (OD
450) en voluntarios sanos (
p = 0,000
,
t-test
).
también se investigó la relación entre APE1- AAbs y las características clínicas. Entre 300 controles sanos, la media con desviación estándar de concentración APE1-AAbs de los fumadores sanos fue de 0,47 ± 0,01 (OD
450), que hubo diferencias significativas con los no fumadores de los controles sanos (0,48 ± 0,003, OD
450) (
p = 0,679
,
t-test
). Estos resultados sugieren que los niveles séricos APE1-OAA parecían no responder a la condición de fumador. Por otra parte, los resultados revelaron que el suero Ape1-AAbs de pacientes con NSCLC no se correlacionó con los parámetros clínicos como el género, las diferentes etapas TNM y tipos histopatológicos, incluyendo el tabaquismo, como se muestra en la Tabla 2 (
p Hotel & gt; 0,05) . Aunque los pacientes en estadio IV tuvieron una mayor tasa APE1-AAbs positivo (71/172, 41,28%) que en la etapa III (27/81, 33,33%), la diferencia no fue estadísticamente significativa ((
p & gt
; 0,05) guía empresas
el valor diagnóstico de Ape1-AAbs en NSCLC
además, exploramos el valor diagnóstico potencial de Ape1-AAbs en CPNM Basado en el principio de valor de corte [.. ,,,0],30], el nivel de corte de APE1-AAbs se calculó como la media + 2 desviaciones estándar (0,47 + 2 x 0,22 = 0,91) de 300 muestras de suero de controles sanos. Por lo tanto, 113 (38.70%) pacientes con CPNM, frente al 8 (2,67%) saludable controles, se definieron como APE1-AAbs positivo, lo que indica que la diferencia entre los dos grupos fue significativa (
p = 0,000
,
chi-cuadrado
prueba).
el rendimiento de todas las muestras de suero se resumió con una curva ROC. el rendimiento predictivo de nivel APE1-AAbs se determinó mediante el trazado de la sensibilidad (verdaderos positivos) frente a 1-especificidad valores (falsos positivos). Para cada posible punto de corte, la sensibilidad resultante y la especificidad se indica como un punto en la gráfica. El área bajo la curva (AUC) fue 0,745 (Fig. 3), lo que sugiere que la APE1-AAbs era significativo como un biomarcador de diagnóstico potencial.
Las concentraciones séricas de los niveles APE1-OAA entre 292 pacientes con CPNM y 300 sanos los controles fueron determinados por ELISA. Los potenciales de diagnóstico de APE1-AAbs se evaluaron mediante curvas ROC. El valor AUC fue 0,745.
Análisis de correlación entre Ape1-AAbs, Suero APE1 de Antígenos y APE1 Expresión de proteínas en los tejidos de NSCLC
Teniendo en cuenta que para la respuesta APE1-AAbs ocurra, el APE1 antígeno necesita ser detectada para mostrar su relación. Un total de 42 tejidos de NSCLC se investigó la expresión de la proteína APE1 mediante inmunohistoquímica. APE1 se observó tinción tres localizaciones subcelulares en los tejidos tumorales: el núcleo (8/42, 19,05%), el citoplasma (3/42, 7,14%) y tanto en el núcleo como en el citoplasma (31/42, 73,81%) como se muestra en la figura . 4 y en la Tabla S1. Los niveles séricos APE1-AAbs de expresión grupo núcleo se hallaron diferencias estadísticas con el grupo de la expresión ectópica (incluyendo expresssion citoplasma y núcleo /citoplasma co-expresión) (
p = 0,610
, que se muestra en la Tabla S1). Seis casos de NSCLC (15%) mostraron una fuerte expresión APE1, 20 casos (50%) y 12 casos (30%) mostraron una expresión moderada y débil, respectivamente. La expresión de alto APE1 (puntuación de 2 y 3) y una baja expresión (puntuación de 0 y 1) en los tejidos de NSCLC, se mostró ninguna diferencia significativa entre la edad, el sexo, el tabaquismo, el tipo histológico y las etapas de la RGT (
p Hotel & gt; 0,05,
chi-cuadrado
prueba, que se muestra en la Tabla S2), que eran los mismos que los anteriormente Comentarios [24], [31]. Curiosamente, se encontró una correlación positiva entre el suero Ape1-AAbs y expresión de proteínas APE1 en los tejidos de NSCLC, siendo estadísticamente significativa (
p
& lt; 0,001, Spearman) y con el coeficiente de correlación & gt; 0,50, como se muestra en la Tabla S1.
Representante APE1 inmunotinción de tejidos de NSCLC. APE1 se observó tinción tres localizaciones subcelulares en los tejidos tumorales: el núcleo, el citoplasma y tanto en el núcleo y el citoplasma. Las muestras se puntuaron como sigue: 0, ausencia o porcentaje de células positivas a menos de 25%; 1 porcentaje, positivo celular entre 25% y 50%; 2, el porcentaje de células positivas entre 50% y 75%; 3, el porcentaje de células positivas más than75%.
Además, se analizó el antígeno APE1 suero en 137 pacientes con CPNM que habían sido probados para APE1-AAbs usando mejorado ensayo ELISA sandwich. La media con desviación estándar de la concentración de antígeno APE1 suero fue 0,73 ± 0,41 (OD
450), y no hubo una diferencia significativa entre el antígeno de suero APE1 y las características clínicas (
p
& gt; 0,05, muestran en la Tabla S3 ). Como era de esperar, encontramos antígeno APE1 y Ape1-AAbs en sangre periférica también se correlacionaron positivamente, con el coeficiente de correlación es & gt; 0,50 y estadísticamente significativa (p & lt; 0,001, Spearman). Estos hallazgos sugieren que las expresiones de autoanticuerpos Ape1 estaban estrechamente relacionados con los niveles de antígeno Ape1.
Aumento de suero Ape1-AAbs entre pre- y post-quimioterapia se asocia con la eficacia terapéutica
Para determinar la correlación entre el nivel sérico APE1-aAbs y la respuesta terapéutica, los niveles APE1-OAA entre antes y después de la quimioterapia se analizaron en 91 pacientes con CPNM que recibieron 2 ciclos de tratamiento basado en platino. En general, concentraciones de APE1-AAbs aumentó significativamente después de la quimioterapia (
p
= 0,008) (Fig. 5A). Entre los 91 pacientes, 11 (12,09%) pacientes alcanzaron PD, 38 (41,76%) pacientes alcanzaron SD, 30 (32,97%) pacientes alcanzados PR, y 12 (13,19%) pacientes alcanzaron CR. suero pre-quimioterapia Ape1-AAbs de pacientes que eran sensibles a la quimioterapia fue significativamente menor que la de los no respondedores (
p
= 0,000) (Fig. 5B). Suero Ape1-AAbs de respondedores después de la quimioterapia se incrementaron significativamente (
p
= 0,000), mientras que Ape1-AAbs de los no respondedores no cambió significativamente (
p = 0,393
), como se muestra en Higo. 5 y en la Tabla 3.
El nivel APE1-AAbs suero fue mucho mayor en el grupo de respuesta a la quimioterapia pobres que en el buen grupo de respuesta (
p
= 0,000). Hubo una diferencia significativa en el grupo con buena respuesta a la quimioterapia basada en platino antes y después de la quimioterapia (
p
& lt; 0,001), mientras que no hubo diferencias en el grupo con mala respuesta a la quimioterapia basada en platino antes y después de quimioterapia (
p = 0,393
). * Antes de la quimioterapia contra después de la quimioterapia (
p Hotel & lt; 0,001).
se obtuvieron p
valor después de comparar los niveles APE1-AAbs de la quimioterapia previa y posterior, según lo determinado por emparejado
t-test
.
Discusión
Los estudios experimentales han demostrado que los autoanticuerpos son posibles biomarcadores para el diagnóstico precoz del cáncer y factores predictivos de respuesta al tratamiento. Sin embargo, debido a autoanticuerpos son parte de la respuesta inmune normal, autoanticuerpos candidatos para la detección temprana del cáncer y el pronóstico de los cánceres debe estar contra antígenos relacionados oncogénicos. En este sentido, autoanticuerpos frente a proteínas de reparación de ADN son candidatos prometedores. proteínas de reparación del ADN desempeñan papeles críticos no sólo en el mantenimiento de la estabilidad genómica, pero también en la progresión de cáncer de pulmón [32], [33]. Ambos antígenos y los anticuerpos contra antígenos implicados en las vías de reparación del ADN, tales como p53 [34] - [36] y Ku [37] - [39], se han destacado como factores implicados en la tumorigénesis y como biomarcadores en el cáncer de pulmón, cáncer de mama, y leucemia.
Como una de las proteínas de reparación del ADN, APE1 también juega un papel importante en la supervivencia celular, y su alta expresión está correlacionada con las características del tumor [40], [41]. Tener la doble función de tanto la reparación del ADN y la actividad redox, que no sólo es responsable de la reparación de los sitios de ADN AP causadas por daño oxidativo y de alquilación a fin de mantener la integridad genómica [42], pero también funciona como un factor redox regulación de la actividad de unión al ADN de factores de transcripción tales como p53, NF-kB y AP-1 que juegan un papel crucial en la supresión de la carcinogénesis y la progresión tumoral [43], [44]. El uso de RT-PCR y tinción inmunohistoquímica, estudios previos han demostrado que los cambios en los niveles de expresión Ape1 y /o patrones en los tejidos de NSCLC y la sangre periférica se produjo en los primeros tiempos de la tumorigénesis y estaban estrechamente relacionados con el desarrollo de tumores, el progreso y pronóstico desfavorable [31 ], [45], [46]. Estos estudios sugieren que el antígeno APE1 podría ser un candidato para la detección, el diagnóstico temprano auxiliar, y la evaluación pronóstica y predictiva en muchos tejidos de cáncer incluyendo NSCLC [47], [48]. El presente estudio valida un ensayo para la detección de autoanticuerpos Ape1 tanto en la sangre periférica de pacientes con CPNM, así como controles sanos. El uso de inmunotransferencia y análisis de ensayo ELISA, se demostró que APE1 es un antígeno autoinmune específica que estimula a los organismos para generar anticuerpos anti-Ape1. asociaciones estadísticamente significativas entre Ape1-AAbs y CPNM se demuestran por primera vez.
El mecanismo de cómo la proteína APE1 desencadena la respuesta inmune todavía no está del todo claro. Suponemos que el posible mecanismo es la siguiente: la mayoría de los tejidos tumorales tienen APE1 sobre-expresión y translocación. La multiplicación de células tumorales es excesivamente rápida. Con apoptosis de las células espontáneamente continua y necrosis, un gran número de proteínas celulares se liberan en la sangre y no se puede quitar oportuna. El sistema inmune detecta las proteínas celulares que se sobreexpresan en la carcinogénesis, translocalization citoplasmática, la estabilización desregulada, y la mutación o la degradación alterado y, posteriormente, produce autoanticuerpos en respuesta a la presencia de estos antígenos aberrantes [49]. Por lo tanto, tratamos de verificar si varios expresión localización APE1 podría contribuir a la generación de APE1-AAbs, pero el resultado mostró que los niveles de suero Ape1-AAbs entre el grupo expresión núcleo y el grupo de la expresión ectópica hubo diferencias (
p
= 0,610). Este resultado debe ser investigado en un tamaño de muestra más grande en el futuro. Teniendo en cuenta que la carga tumoral podría inducir a un alto nivel de APE1-AAbs, también vamos a investigar los Ape1-AAbs antes y después de la cirugía en nuestros estudios adicionales para probar esta hipótesis.
En nuestro estudio, la presencia de APE1- AAbs mostraron la posibilidad de su uso como un biomarcador para el NSCLC. El hallazgo de expresión APE1-AAbs en el suero de 38,70% (113/292) de los pacientes con CPNM fue estadísticamente significativamente mayor que la de los controles sanos (2,67%, 8/300) (
p
= 0,000). El valor del área bajo la curva ROC de APE1-AAbs era 0.745, significativo para un modelo predictivo, ya que en la detección ELISA, un valor de AUC de 0.7~0.9 (70% ~ 90%) indica asociación moderada entre la predicción y el resultado real [ ,,,0],50]. Por otra parte, la APE1-AAbs demostró que se correlaciona bien con los niveles de antígeno Ape1 tanto en los tejidos de NSCLC y la sangre periférica en el presente estudio. Hemos tomado nota de que la correlación entre la expresión APE1 mRNA en tejidos de NSCLC, tejidos normales y la sangre se había demostrado que se correlaciona de manera significativa, lo que sugiere que la medición de los niveles de mRNA de APE1 en muestras de sangre periférica podría en lugar de muestras de tejido para determinar los factores pronósticos y predictivos en NSCLC [31]. De este modo podríamos permitir poner a prueba simplemente con Ape1-AAbs en muestras de sangre periférica en lugar de muestras de tejido para determinar el diagnóstico y el pronóstico en pacientes con CPNM factores
.
Sin embargo, aunque prometedores, estos nuevos hallazgos requieren más investigación e interpretación cuidadosa con el fin de llegar a conclusiones decisivas debido a la diferencia de los niveles séricos APE1-OAA entre CPCNP y controles sanos no era muy alta. Las variaciones de Ape1-AAbs en la población de estudio son extremadamente altos, aunque los niveles de suero Ape1-AAbs mostraron una distribución normal. Las razones de ello no están claras, pero pueden estar relacionados con la selección de pacientes, las diferencias en la detección de epítopo, o de las limitaciones de la matriz y la naturaleza de las respuestas de autoanticuerpos en cáncer. Vale la pena mencionar que Ape1-AAbs en varios tipos de cáncer, incluyendo muestras más amplias de cáncer de pulmón, necesita ser verificado con el fin de establecer la importancia clínica de los anticuerpos anti-Ape1. Otros estudios sobre si APE1-AAbs tiene eficacia diagnóstica o puede combinarse útilmente con otros marcadores tumorales se resume en nuestro próximo estudio.
Histología es un indicador básico de diagnóstico en pacientes con NSCLC [51]. Como un fenotipo, que puede ser más reproducible y consistente en comparación a la información sobre los hábitos de fumar, sobre todo en este tipo de estudio retrospectivo [23]. Mitsudomi
et al
informó que los autoanticuerpos p53 fueron significativamente más frecuentes en los pacientes con carcinoma de células escamosas (27%) que en aquellos con adenocarcinoma (15%) (
p
= 0,05), mientras que hay también hubo una diferencia estadísticamente significativa en la incidencia de autoanticuerpos p53 entre el grupo de enfermedad temprana (etapa I y II) (14%) y el grupo de enfermedad avanzada (etapa IIIa~IV, 30%) (
p = 0
0,0079) [52]. Villin1 y CK18 autoanticuerpos se considera que son marcadores útiles en el adenocarcinoma de pulmón [53]. Por lo tanto, se determinó la relación entre los niveles de APE1-AAbs y histotype cáncer de pulmón. Se encontró que el nivel de suero APE1-AAbs no se correlacionó con los tipos histopatológicos (carcinoma de células escamosas o adenocarcinoma) y diferentes estadios TNM o parámetros clínicos como la condición de género y el tabaquismo. Estos datos fueron similares a los estudios anteriores de proteína APE1 en tejidos de cáncer de pulmón [31], [54].
alta expresión de la proteína APE1 se ha informado a asociarse estrechamente con la resistencia a cisplatino en el cáncer de ovario [29], de la cabeza y cuello cáncer de células escamosas [31], y NSCLC [26]. Los datos de este manuscrito confirman aún más esta relación entre APE1 y quimio-resistencia basada en platino. Antes de la quimioterapia, se observó que los niveles de APE1-AAbs de los grupos CR + PR que eran sensibles al tratamiento a base de platino fueron significativamente menores que la de los grupos SD + PD que eran resistentes a la quimioterapia (
p =
0,000). Por otra parte, los niveles de APE1-OAA se incrementaron significativamente después de la quimioterapia, especialmente en el grupo de respuesta positiva (
p
= 0,000). Hasta la fecha, el mecanismo de APE1 implicados en la resistencia a la quimioterapia basada en platino sigue siendo poco clara. Chattopadhyay
et al
mostró que acetilada APE1 podría interactuar de manera estable con Y-box-proteína de unión 1 y mejorar su unión al elemento de Y-caja conduce a la activación del gen de resistencia a múltiples fármacos MDR1 [55]. Wu
et al
informó que citoplásmica APE1 podría mejorar malignidad del tumor de pulmón a través de la activación de NF-kappa B, lo que sugiere que la combinación de cisplatino con inhibidores redox específicos podría mejorar la respuesta de quimioterapia [56]. Suponemos que los reactivos de platino pueden matar células de cáncer de pulmón, inducir la necrosis celular, la liberación de proteínas APE1 de la carga tumoral con el medio ambiente extracelular y la circulación, y, posteriormente, provocar la respuesta inmune a desarrollar APE1-AAbs. En teoría, los pacientes resistentes a la quimioterapia tendrán menos células tumorales muerte después del tratamiento, liberar menos antígeno APE1 en la sangre e inducir a un menor aumento de suero Ape1-AAbs. Por el contrario, los pacientes que son sensibles a la quimioterapia basada en platino deben contener más Ape1-AAbs en la sangre periférica después del tratamiento. Por otra parte, antes de la quimioterapia, los pacientes tienen más Ape1-AAbs en su sangre periférica que indican que más proteína APE1 está presente en los tejidos tumorales en comparación con el tejido normal, lo que conduce a la resistencia al tratamiento basado en platino. Nuestros datos solo verifican estos puntos. Por lo tanto, creemos que los Ape1-AAbs se puede utilizar para predecir la respuesta a la quimioterapia en NSCLC antes y después del tratamiento a base de platino.
En conclusión, hemos identificado que los autoanticuerpos contra la proteína APE1 estuvo presente en el suero tanto de cáncer de pulmón pacientes y controles sanos.