Extracto
El cáncer de próstata es el cáncer más común en los hombres, y la mayoría de los pacientes que tienen enfermedad localizada en el momento del diagnóstico. Sin embargo, el 4% ya se presentan con enfermedad metastásica. transición epitelial-mesenquimal es un proceso fundamental en la carcinogénesis que se ha demostrado estar involucrados en la progresión del cáncer de próstata. El acto central de la transición epitelio-mesenquimal es la represión de la E-cadherina por factores de transcripción, pero el proceso también está regulada por microRNAs. El objetivo de este estudio fue analizar la expresión de genes y microARN implicado en la transición epitelio-mesénquima en el cáncer de próstata localizado y líneas celulares de cáncer de próstata metastásico y se correlacionan con los hallazgos clínico-patológicos. Se estudiaron 51 muestras de tejido fresco congelado a partir de pacientes con cáncer de próstata (CaP) localizado tratados con prostatectomía radical y tres líneas celulares de cáncer de próstata metastásico (LNCaP, DU145, PC3). La expresión de 10 genes y 18 miRNAs fueron evaluados por PCR en tiempo real. Los pacientes fueron divididos en grupos de acuerdo a la puntuación de Gleason, estadio patológico, PSA preoperatorio, la recurrencia bioquímica, y el grupo de riesgo para la correlación con los hallazgos clínico-patológicos. La mayoría de los casos CaP localizado mostró un fenotipo epitelial, con una sobre expresión de E-cadherina y la disminución en la expresión de los marcadores mesenquimales. Los genes miARN-200 miembros de la familia y miRNAs 203, 205, 183, 373, y 21 se sobreexpresa, mientras que los miRNAs 9, 495, 29b, y 1 se underexpressed. bajos niveles de expresión de miRNAs 200b, 30a, y 1 se asociaron significativamente con el estadio patológico. Bajo la expresión de miR-200b también se asoció con una puntuación de Gleason ≥8 y la supervivencia libre de recidiva bioquímica más corto. Además, se observaron niveles bajos de expresión de los niveles de miR-30a y alta expresión de vimentina y TWIST1 en el grupo de alto riesgo. En comparación con el tumor primario, las líneas de células metastásicas mostraron significativamente más altos niveles de expresión de miR-183 y TWIST1. En resumen, los miRNAs 200b, 30a, 1, y 183 y los genes TWIST1 y vimentina podrían desempeñar un papel importante en la progresión del cáncer de próstata y eventualmente pueden llegar a ser importantes marcadores de pronóstico
Visto:. Katz B, Reis ST, Viana NI, Morais DR, Moura CM, Dip N, et al. (2014) Estudio de Factibilidad de la expresión de genes y microARN relacionados con la transición epitelio-mesénquima en el cáncer de próstata. PLoS ONE 9 (11): e113700. doi: 10.1371 /journal.pone.0113700
Editor: Aamir Ahmad, Escuela de Medicina de la Universidad Estatal de Wayne, Estados Unidos de América
Recibido: 21 de julio de 2014; Aceptado: 28 Octubre 2014; Publicado: 19 Noviembre 2014
Derechos de Autor © 2014 Katz et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. La autores confirman que todos los datos que se basan los resultados son totalmente disponible sin restricciones. Todos los datos relevantes se encuentran dentro del apoyo de sus archivos de información en papel y
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por la FAPESP (Fundación de Amparo a Pesquisa do Estado de Sao Paulo) bajo el protocolo número 2012 /50094-9. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de próstata (CaP) es uno de los tumores más frecuentes en los hombres, y es responsable de 29% de todos los nuevos diagnósticos de cáncer [1]. Después de la aprobación de la prueba de PSA, la mayoría de los pacientes se presentan con CaP localizado, pero el 4% ya tienen enfermedad metastásica en el momento del diagnóstico [1]. En la actualidad, las características clínico-patológicas tales como puesta en escena, la puntuación de Gleason (GS), y los niveles de PSA son buenos marcadores de pronóstico [2] y se utilizan para tomar decisiones de tratamiento; sin embargo, no son suficientemente precisos para distinguir entre los tumores que permanecerán indolente y las que más tarde progresará a ser metastásico. De hecho, las características biológicas únicas y las bases genéticas heterogéneas de CaP [3] pueden limitar la eficacia de los parámetros clínico convencionales como marcadores predictivos. Por estas razones, los biomarcadores moleculares se han investigado cada vez más para ayudar a entender y predecir el comportamiento del cáncer.
El epitelio-a-mesenquimal transición (EMT) es un proceso biológico inversa que juega un papel en la invasión y metástasis durante la carcinogénesis. adhesión célula-célula epitelial se reduce, y las células adquieren un fenotipo fibroblástico muy móviles en forma de huso y una mayor capacidad para la migración y la invasión [4]. La característica principal de la EMT es el silenciamiento transcripcional de la E-cadherina [5], [6], que es controlada por los reguladores de la transcripción
ZEB1
,
ZEB2
,
Snai1
(Caracol),
SNAI2 gratis (Slug), y
TWIST1
[5], [7], [8]. Además, también existe regulación al alza de los marcadores mesenquimales, como la vimentina y N-cadherina, un proceso que se conoce como conmutación de cadherina [9].
Las funciones de los genes relacionados con la EMT en el CP no se conocen con exactitud, y los estudios anteriores describen la pérdida de e-cadherina [10] seguido por un aumento de la expresión de cadherina N, cadherina-11 y vimentina [9] en el análisis de inmunohistoquímica. Los niveles de expresión de
ZEB1
, un regulador crucial de la EMT en el CP, están relacionados con la GS [11], y Behnsawy et al propusieron el uso de perfiles de expresión génica de la EMT como marcadores de recurrencia bioquímica tras prostatectomía radical [ ,,,0],12].
los microARN (miRNA), una nueva clase de no codificante, ARN regulador, se ha demostrado que participar en muchos procesos relacionados con el desarrollo y progresión del cáncer, incluyendo EMT [13]. Una de las principales miRNAs implicados en EMT es la familia miR-200, que es un potente inductor de la diferenciación epitelial. Este grupo comprende el miR-200a, miR-200b, miR-429, miR-200c, y miR-141, que se generan a partir de dos transcripciones. Las tres primeras se derivan del cromosoma 1, mientras que los dos últimos se deriva del cromosoma 12. Los miembros de este grupo están altamente relacionados en secuencia, lo que indica que probablemente se dirigen a un complemento similar de ARN mensajeros [14].
Entre los objetivos de la familia miR-200 son ZEB1 y ZEB2 [15] - [17]. miR-200 miembros inhiben la expresión de ZEB a nivel post-transcripcional mediante la unión a sitios diana altamente conservadas en sus 3'UTRs [18], [19]. Curiosamente, el miR-200 miembros son objetivos de la transcripción de
ZEB1
y
ZEB2
. El enlace funcional estrecha entre los factores ZEB y la familia miR-200 en un bucle de doble retroalimentación negativa es conocida como el bucle ZEB /miR-200 evaluación [18], en el que la activación de un grupo afecta negativamente a la expresión del otro grupo. Dependiendo de las señales extracelulares, este bucle puede cambiar de un lado a otro lado y estabilizar ya sea el epitelial o fenotipo mesenquimal. Otros miRNAs también se han demostrado para participar en la EMT, la orientación
Snai1 gratis (miR-29b, miR-30a, miR-34a) [20], [21], y
SNAI2 gratis (MIR -34a, miR-1, miR-200b) [22], [23]. Sin embargo, pocos estudios han evaluado miRNAs implicados en la EMT en el CaP.
Nuestro objetivo es descifrar el papel de los genes miARN y relacionados con la EMT en el CP para identificar un perfil que define el comportamiento del CP.
materiales y Métodos
selección de pacientes
se seleccionaron Cincuenta y un pacientes que habían localizado el cáncer de próstata clínicamente y sometidos a prostatectomía radical entre 2000 y 2002. Todos los pacientes fueron tratados por el mismo cirujano (MS), y todas las muestras patológicas se analizaron por la misma uropathologist (KRML). Los pacientes fueron seguidos durante un período de tiempo media de 63.06 meses
El grupo control estaba formado por diez muestras de pacientes que se sometieron a cirugía para la hiperplasia benigna de próstata, y tenía volumen de la próstata. & Lt; 50 cm
3 de ultrasonido, los niveles de PSA. & lt; 2,5 ng /ml, y ninguna malignidad en la pieza anatomopatológica
muestras de tejido de la próstata
Todas las muestras de CaP fresco congelado se obtuvieron de nuestro banco biológico de próstata, y Escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los pacientes. Este estudio fue aprobado por el Consejo de Ética Institucional (CAPPesq - Comissão de Ética para Análise de Projetos de Pesquisa) con el número 5907. Los tumores fresco congelado originó a partir de piezas de prostatectomía radical, y de 1 cm
3 fragmento fue aislado del área sospechosa e inmediatamente se congelaron a -80 ° C. El tejido restante se fijó en formalina al 10%, habitualmente procesa, y se tiñeron con hematoxilina y eosina para el examen histológico. Las muestras se revisaron posteriormente y se clasificaron utilizando el sistema de clasificación de Gleason modificada [24], y se determinó la siguiente etapa TNM 2010.
Las líneas celulares
El cáncer de próstata líneas celulares LNCaP, DU145, y PC3 se obtuvieron de la American Type Culture Collection (ATCC). LNCaP, DU145 y PC3 se mantuvieron en RPMI, DMEM, y los medios de MEM (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA), respectivamente. Todos los medios se complementaron con suero bovino fetal al 10% y a /solución antimicótica 1% de antibiótico (Sigma, St. Louis, MO, EE.UU.), y se incubaron los cultivos a 37 ° C en una atmósfera de 5% de CO
2 .
ARN y el aislamiento y la amplificación de los genes miARN
Tanto el ARN y miARN fueron aisladas de tejidos de la próstata y líneas celulares usando el kit Ambion mirVana (Austin, TX, EE.UU.) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Se generó ADNc a partir de ARN y miARN utilizando un kit de ARN TaqMan transcripción reversa TaqMan y microARN transcripción reversa Kit, respectivamente. Para la amplificación de genes y los genes miARN, un kit TaqMan reactivo se utiliza con el sistema 7500 Fast Real-Time PCR (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.). Las reacciones se realizaron por duplicado, y
B2M gratis (β-2-microglobulina) y NUR-48 se utilizaron como controles endógenos para los genes y miRNAs, respectivamente.
y expresión de genes miARN niveles eran obtenido por la cuantificación relativa utilizando el método 2
-ΔΔct. La fórmula empleada es ΔΔCT = DCT
1- DCT
2, donde DCT
1 = CT del objetivo (muestra de tumor) - computarizada de la media del control endógeno (muestra de tumor), y DCT
2 = CT de la media de los controles normales (tejido prostático benigno) - CT de la media del control endógeno (tejido benigno de la próstata). Para la evaluación de las líneas de células metastásicas, el "control" (DCT
2) se consideró que los tumores pT2. El resultado final se obtuvo mediante la aplicación del método 2
-ΔΔct. Hallazgos mayor o menor que 1 se consideraron para indicar la sobreexpresión o subexpresión, respectivamente. Todos los valores se normalizaron con respecto a los valores normales de control, que se representa como un valor de 1.
Gene y miARN selección
La elección de miRNAs y los genes evaluados en este estudio se basó en su papel en el proceso de EMT en varios tipos de cáncer. Se realizó una búsqueda bibliográfica a través de PubMed y Web of Science uso de los términos "transición epitelio-mesenquimal", "cáncer" y "miARN". En base a los datos publicados en la literatura, se seleccionaron 18 miRNAs que dirigen los genes más importantes que intervienen en la EMT. Los datos se presentan en la Tabla 1.
Análisis estadístico
Para comparar las características clinicopatológicas entre los pacientes con CaP localizado, los pacientes fueron divididos en grupos basados en sus GS (GS ≤6 vs GS ≥8), el estadio patológico (pT2 vs pT3), PSA pre-operatorio (& lt; 10 vs ≥10 ng /ml), y la ausencia o presencia de la recurrencia bioquímica, definida como PSA ≥0,02 ng /mL. Los pacientes también fueron clasificados en grupos de bajo riesgo y de alto riesgo de la enfermedad de acuerdo con la presencia de cualquier característica desfavorable. En este escenario, los valores de expresión en el tejido tumoral se compararon con los en el tejido prostático benigno.
Para la evaluación de los tumores metastásicos, se analizaron juntos tres líneas celulares de CaP metastásico y designado como el grupo metastásico. Los niveles de expresión de los genes miARN y entre el grupo de células y tumores pT3 se compararon en relación con los tumores pT2, que se consideraban el grupo de "control". La razón era que el estadio patológico podría representar una evidencia práctica de la EMT, y mediante el uso de este método, se podría evaluar qué marcadores de EMT están involucrados en la progresión de un tumor localizado a la metástasis.
La U de Mann-Whitney y T pruebas se utilizaron para comparar las GS, el estadio patológico, los niveles de PSA preoperatorios, recurrencia bioquímica, y grupos de riesgo. La distribución de los genes y los niveles de expresión de los genes miARN fue sesgada, y los datos fueron log-transformados para su análisis. Las curvas de Kaplan-Meier se construyeron para analizar la supervivencia libre de recidiva bioquímica. La significación estadística para todas las pruebas, según se evaluó mediante el cálculo de dos lados
P
-valores, se fijó en. & Lt; 0,05
Resultados
Los datos del paciente
La edad media de los pacientes fue de 65 años. La media y la mediana de GS fueron 7,3 y 7, respectivamente. Veintidós pacientes (43%) fueron el estadio pT2, y 29 (57%) pacientes eran pT3 etapa. Diecisiete (33%) pacientes tuvieron recurrencia bioquímica en un período de seguimiento promedio de 63.06 meses. Los datos se ilustran en la Tabla 2.
miARN y perfiles de expresión génica en el CaP localizado
miRNAs 200a, 200b, 200c, 429, 141, 205, 203, 21, 183, y 373 se sobreexpresa en 35 (69%), 47 (92%), 38 (74%), 39 (77%), 42 (82%), 44 (86%), 38 (74%), 51 (100 %), 38 (74%), y 33 (64% de las muestras), respectivamente. miRNAs 1, 29b, 9, y 495 fueron underexpressed en 41 (80%), 41 (80%), 36 (71%), y 42 (82%) muestras, respectivamente. miRNAs 34a, 155, 30a y 10b mostró un patrón variable de expresión: el miR-34a y miR-155 se infraexpresados en el 55% y el 57% de las muestras, respectivamente, y miR-30a y miR-10b se sobreexpresa en el 51% de las muestras (Tabla S1 en el archivo S1).
E-cadherina se sobreexpresa en 50 casos (98%). Los genes de N-cadherina,
TGFB1
, y
ZEB1
fueron underexpressed en 36 (71%) pacientes, mientras que
SNAI2 Opiniones y vimentina fueron underexpressed en 42 (82%) y 41 (80%) pacientes, respectivamente.
ZEB2
,
Snai1
, y
PDGFD
mostraron patrones variables de expresión. Por otro lado,
TWIST1
era el único gen EMT inducida que mostró sobreexpresión en la mayoría de casos (73%) (Tabla S1 S1 en File).
miRNAs y los genes asociados con características clinicopatológicas
las Tablas 3 y 4 ilustran los datos con respecto a la expresión de genes miARN y en relación con las características clínico-patológicas, respectivamente. Los bajos niveles de miR-200b, miR-30a y miR-1 se asociaron con enfermedad pT3. De los 18 miRNAs estudiados, tres fueron infraexpresados significativamente en la enfermedad pT3 (miR-200b - 7,73 vs 23,86,
P
= 0,02; miR-30a - 1,73 vs 3,79,
P = 0,048
; y miR-1 - 0,72 vs 1,97,
P
= 0,04). Sin embargo, con respecto a los genes, no pudimos encontrar ninguna asociación entre la expresión y el estadio patológico.
Se evaluó la asociación de GS con los miRNAs excluyendo GS 7 debido a su comportamiento incierto. Quince pacientes (29%) tuvieron una SG ≤6 y 23 (45%) tuvieron una SG ≥8. Hemos encontrado que la expresión de miR-200b fue significativamente menor en los pacientes con un GS ≥8 en comparación con los pacientes con un GS ≤6 (6,94 vs 18,67,
P = 0,035
). No se encontró asociación entre GS y los otros miRNAs y los genes
.
Cuando los pacientes se agruparon de acuerdo con bajo riesgo y enfermedad de alto riesgo, la enfermedad de alto riesgo tenían niveles significativamente más bajos de miR-30a (1,70 vs 6,37,
P = 0,039
). También los niveles altos de vimentina y
TWIST1
se asociaron significativamente con enfermedad de alto riesgo (0,27 vs 0,90,
P = 0,017
; 1,81 vs 8,89,
P = 0,018
) .
Debido a la asociación significativa entre miRNAs 200b, 30a, y 1 con el estadio patológico y su potencial como marcadores de pronóstico, se realizó un análisis de supervivencia. El análisis de Kaplan-Meier reveló que los pacientes con niveles más bajos de miR-200b tuvieron una supervivencia libre de recidiva bioquímica significativamente más corto (
P = 0,049
) (Figura 1).
Los pacientes con expresión de miR-200b ≤14.690 niveles mostraron supervivencia libre de recidiva bioquímica significativamente más corto.
por otra parte, el miR-183 y
TWIST1
niveles de expresión fueron significativamente mayores en las líneas celulares de CaP metastásico en comparación con los niveles en los pacientes con la enfermedad pT3 y los tumores de alto grado (Tabla S2 en archivo S1). En líneas celulares, los niveles de miR-183 y TWIST1 fueron 2,64 y 3,54, respectivamente, mientras que en los tumores pT3, sus niveles fueron 40.41 y 14.45, respectivamente (
P = 0,009
y
P =
0,049, respectivamente).
Discusión
la importancia de la EMT en la carcinogénesis ha sido ampliamente estudiado en los últimos años, y ahora es considerado uno de los principales mecanismos responsables de la progresión tumoral y diseminación metastásica. Nuestro estudio tuvo como objetivo evaluar la importancia de los patrones de expresión de miRNAs y múltiples genes implicados en la EMT en muestras clínicas de cáncer de próstata localizado y en líneas de células metastásicas. Nuestros resultados se resumen en la Figura 2, que muestra los principales miRNAs y genes implicados en la EMT en la progresión del CaP y su posible mecanismo de acción.
Los niveles de expresión de miRNAs 200b, 30a y 1 disminuye cuando el tumor adquiere características de alta calidad, mientras que los niveles de expresión de incremento TWIST1 y vimentina. Cuando el tumor se vuelve metastásico, se observa un aumento en los niveles de expresión de miR-183 y TWIST1. Las líneas de puntos indican los genes en estos miRNAs o genes pueden actuar, en base a los datos publicados anteriormente.
BR
= Bioquímica recurrencia.
Hemos demostrado que el miR-200b, miR-30a y miR-1 fueron significativamente underexpressed en los tumores no órgano-confinados y podrían constituir interesante factores pronósticos. Un estudio reciente apoya nuestros hallazgos al demostrar que miR-200b y miR-1 inducen la transición mesenquimal-epitelial (MET) en células de ratón y PCA humana y son reguladores importantes en la tumorigénesis de próstata y la progresión del tumor [23].
miR-200b se sobreexpresa en las muestras de CaP, y este hallazgo está de acuerdo con estudios previos sobre el CP [25], [26]. Los miembros de la familia miR-200 miRNAs son los más importantes que intervienen en la EMT [27], y los estudios en células de CaP han demostrado que el miR-200b inhibe la EMT, el crecimiento y la metástasis [23], [28]. Nuestra hipótesis es que el miR-200b tiene el mayor potencial para convertirse en un marcador pronóstico debido a una menor expresión de miR-200b se asoció significativamente con un GS alto, enfermedad pT3, y la supervivencia libre de recidiva bioquímica más corto. El papel de miR-200b se ha descrito en otros tumores, y su regulación a la baja se relaciona a la etapa avanzada de la enfermedad [29] y la supervivencia global más corta [30] - [32]. Al igual que en nuestros hallazgos, Barron et al encontró que los niveles de miR-200a se redujeron en pacientes que recayeron mediante el estudio de la expresión de miR-200a en el tejido incluido en parafina y fijado en formalina de pacientes con enfermedad pT3 [33], que confirma el potencial de miR-200 la familia como un marcador de recurrencia bioquímica.
los estudios previos indican que la regulación a la baja de miR-200 puede contribuir a la progresión del CaP [15] [34]. Xu et al observaron una reducción del 80% en los niveles de miR-200b en las células LNCaP castrados químicamente mediante secuenciación de ARN [35]. La evidencia emergente apoya la participación de los procesos de EMT en la desregulación de la señalización eje de andrógenos, pero los datos siguen siendo controvertido. Zhu y Kyprianou observaron que los andrógenos inducen patrones independientemente EMT dentro de las células de cáncer de próstata, lo que resulta en cambios sustanciales en la invasión celular y la motilidad [36]. El receptor de andrógenos activado (AR) ha demostrado recientemente promover la activación EMT través de la supresión de la expresión de E-cadherina dentro de las células de cáncer de mama [37]. Por otra parte, Sun et al encontró que la privación de andrógenos causa EMT en vivo y la adquisición de características mesenquimales [38].
Este es el segundo estudio relacionado miR-1 y el pronóstico en el CaP. Hudson et al encontrado previamente que reducen los niveles de expresión de miR-1 se asociaron con recurrencia bioquímica anterior en el CaP [39]. Ahora demostramos que miR-1 se downregulated en el tumor primario en comparación con tejido benigno de la próstata, y se redujo significativamente en enfermedad confinada no órgano. Se cree que la regulación de miR-1 Slug [23], a través de la metilación de histonas y acetilación [39] y que tiene también como objetivo genes relacionados con la proliferación, la migración y la invasión [40] juega un papel importante en EMT en CaP.
los datos sobre el papel de miR-30a en el CaP son escasos y contradictorios. En nuestro estudio, el miR-30a mostró un patrón variable de expresión. miR-30a se describió como siendo regulado por disminución en el estudio realizado por Porkka et al [41], mientras que Carlsson et al informaron de la regulación al alza de este miARN [42]. Recientemente, Kao et al demostraron que el gen relacionado con ETS-(
ERG
), que es el oncogén más frecuentemente sobreexpresado en CaP, es un objetivo directo de miR-30 y que la sobreexpresión de miR-30 en células de CaP suprime los fenotipos de EMT e inhibe la migración celular y la invasión [43]. miR-30 de la familia también inhibe la migración celular, invasión y metástasis
in vitro Hoteles en otros tumores, como el de pulmón, de mama y el cáncer hepatocelular [21], [44] - [46], por la orientación
Snai1
[21], [44] y vimentina [45], [46]. En este estudio, la relación observada entre la disminución de la expresión de miR-30, el estadio patológico avanzada y enfermedad de alto riesgo confirma el miR-30 como un supresor de tumores de miARN en el CaP. Cheng et al observaron que los niveles bajos de miR-30a eran predictores de escenario y de los ganglios linfáticos metástasis avanzada en el cáncer de mama invasivo [45]. Wang et al mostraron que los bajos niveles de expresión de miR-30a se asociaron significativamente con una mayor incidencia de trombosis tumoral de la vena porta en el carcinoma hepatocelular [46].
En cuanto a los genes, hemos observado la sobreexpresión de E-cadherina en prácticamente todos los casos, y la mayoría de los marcadores mesenquimales, incluyendo N-cadherina,
TGFB1
,
ZEB1
, vimentina, y
SNAI2
, fueron regulados a la baja. Este perfil de expresión génica sugiere fuertemente que CaP localizado mantiene el fenotipo epitelial pesar de la diferenciación del tumor y el estadio cada vez mayor. Sin embargo,
TWIST1
se sobreexpresa en el 73% de los casos.
TWIST1
es un factor de transcripción hélice-bucle-hélice que activa EMT través de la inhibición indirecta de la E-cadherina [47].
TWIST1
se ha demostrado que se sobreexpresa en CaP en los ensayos de inmunohistoquímica y correlacionar positivamente con la GS [48], [49]. Es interesante que un gen con tal importancia en la EMT y con valor pronóstico en el CaP se sobreexpresa en tumores localizados. La sobreexpresión temprana de
TWIST1
puede atribuirse a su regulación por el
Nkx3-1
de genes [50], un supresor de tumor que resultó ser underexpressed en las primeras etapas de CaP [51 ], [52]. Sin embargo, a principios de la regulación positiva
TWIST1
no parece ser suficiente para iniciar el proceso de EMT. De acuerdo con Casas et al,
TWIST1
induce
SNAI2
para promover la EMT [53], pero el agotamiento de los
SNAI2
bloquea completamente la capacidad de los
TWIST1
para suprimir e-cadherina e inducir la EMT.
Hemos demostrado que los altos niveles de
TWIST1
, así como la vimentina, están asociados significativamente con los pacientes en el grupo de alto riesgo y
TWIST1
también fueron significativamente mayores en las líneas de células metastásicas. En un estudio reciente, Behnsawy et al [12] mostró que los niveles elevados de expresión de
TWIST1 Opiniones y vimentina evaluada por inmunohistoquímica es un factor independiente relacionado con la supervivencia libre de recidiva bioquímica más corto, lo que sugiere que estos genes podrían ser marcadores potenciales de recurrencia bioquímica después de la prostatectomía radical.
TWIST1
parece desempeñar un papel en diversas etapas de la EMT, y su papel en la progresión del CaP [49]. En el estudio de Kwok et al,
TWIST1
expresión fue mayor en los tejidos derivados de las lesiones metastásicas de los huesos y los ganglios linfáticos [48]. El papel de los
TWIST1
en este paso después de la EMT podría explicarse por la activación de su objetivo, el miR-10b. miR-10b no sólo reprime E-cadherina [54] sino que también inhibe la traducción de la proteína HOXD10, lo que permite la expresión del producto del gen pro-metastásico,
RHOC
[55].
también hemos observado que los niveles de expresión de miR-183 fueron significativamente mayores en el grupo metastásico. Ueno et al observaron que los altos niveles de expresión de miR-183 se asociaron significativamente con un mayor PSA, estadio superior y la supervivencia general más corta después de la prostatectomía radical, pero su comportamiento en el CaP es absolutamente polémica alguna mostrando que el miR-183 promueve la migración y la invasión [56] - [58], mientras que otros indican que inhibe la migración, invasión y metástasis [59] - [61]. Se han propuesto algunos objetivos de miR-183,
DKK3
,
SMAD4
[56],
EGR1
y
PTEN
[57], lo que resulta miR-183 un contexto miARN dependientes. En base a los resultados y de acuerdo con estudios previos en la literatura, creemos que el miR-183 actúa como un oncomiR en el CaP, y el mecanismo podría implicar
PTEN
que está relacionado con la progresión de CaP y el desarrollo de metástasis [62 ]. Ding et al también mostró que concomitante
PTEN
y
SMAD4
inactivación en el epitelio de la próstata es capaz de producir un fenotipo completamente penetrante invasivo y metastásico CaP en ratones [63].
en conclusión, es importante comprender que la progresión influencias EMT tumor en diferentes pasos a través de varios marcadores. A continuación, describimos un estudio exhaustivo de miRNAs y los genes relacionados con la EMT en el CaP y se encontró que los niveles de expresión de miR-200b, miR-30a, miR-1,
TWIST1 Opiniones y vimentina se podrían utilizar en la toma de haciendo los procesos relacionados con los tratamientos primarios o adyuvantes en el futuro.
Apoyo a la Información
archivo S1.
archivo combinado de apoyo mesas. Tabla S1: Los niveles de expresión de miRNAs y genes de cada caso en relación con muestras de HPB. Tabla S2: Los niveles de expresión de miRNAs y los genes en los tumores pT3 y en líneas celulares (en relación con los tumores pT2)
doi: 10.1371 /journal.pone.0113700.s001 gratis (DOCX)