Extracto
polisacaropéptido (PSP), a partir de
Coriolus versicolor
, se ha utilizado ampliamente como un adyuvante a la quimioterapia con demostrada anti-tumor y los efectos inmunomoduladores amplios. Si bien el mecanismo de acción de PSP sigue siendo desconocida, su potencial inmunomodulador mejorado con goma arábiga es de gran interés. goma de acacia, que también contiene polisacáridos y glicoproteínas, se ha demostrado que se inmunopotenciadora. Para dilucidar si PSP activa directamente las respuestas de células B T-dependientes de las células
in vivo
, se utilizó un sistema de hapteno bien establecida (gamma globulina nitrofenil-pollo (NP-CGG)). 6 semanas de ratones C57BL /6 macho se inmunizaron con 50 g de NP
25-CGG alumbre precipitado por vía intraperitoneal. Los ratones se gavaged diario con 50 mg /kg PSP en un vehículo que contiene goma de acacia y se sacrificaron en los días 0, 4, 7, 10, 14 y 21. ELISA se utilizó para medir el Número total y relativo-hapteno específico anti-NP IgA, IgM y los niveles de IgG Titre en comparación con los controles. Se encontró que PSP, combinado con goma de acacia, un aumento significativo de los niveles de IgG Titre totales al día 4 (P & lt; 0,05), disminución de los niveles de título de IgM en los días 4 y 21 (P & lt; 0,05) sin alteraciones observadas en el título de IgA o IgE los niveles en cualquiera de los puntos de tiempo medidos. Nuestros resultados sugieren que mientras que PSP combinado con goma de acacia parece ejercer efectos inmunológicos débiles a través de las respuestas de células B dependientes de células T específica, es probable que ser amplia y no específica que apoya la literatura actual sobre PSP. Se presenta por primera vez que la aplicación de un sistema de hapteno-portador bien establecido que puede ser utilizado para caracterizar y delimitar las respuestas de células B dependientes de células T específica de potencial inmunomoduladores a base de glicoproteína hierbas medicinales combinaciones
in vivo
Visto:. Sekhon BK, Roubin RH, Li Y, PB Devi, Nammi S, Ventilador K, et al. (2016) Evaluación de las glicoproteínas inmunomoduladora seleccionada como complemento de la inmunoterapia del cáncer. PLoS ONE 11 (1): e0146881. doi: 10.1371 /journal.pone.0146881
Editor: Valerie A. Ferro, Universidad de Strathclyde, Reino Unido
Recibido: 12 Agosto, 2015; Aceptado: 24 Deciembre 2015; Publicado: 22 Enero 2016
Derechos de Autor © 2016 Sekhon et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. Todo relevante los datos están dentro del papel
Financiación: Este trabajo fue apoyado por el Instituto del cáncer de NSW:. DMS; Instituto Nacional de Medicinas Complementarias. Los proveedores de fondos no tiene función alguna en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
Evadir destrucción inmunológica se ha considerado como una característica emergente de cáncer [1]. En particular, la ausencia de antígenos de cáncer fuertes, pérdida de MHC de clase I, o moléculas estimuladoras y o coestimuladoras puede dar como resultado el fracaso de reconocimiento de células T, la presentación de antígenos y la eliminación de tumores [2,3]. Los efectos secundarios asociados con los lugares de quimioterapia carga adicional a la capacidad del huésped para montar una respuesta inmune eficaz contra los antígenos y el sistema inmune comprometido, por tanto, es vulnerable a las infecciones potencialmente mortales [4]. Los intentos de focalización y la estimulación de la respuesta inmune del huésped suprimido contra tales ataques se ha tenido un éxito en la entrega de terapias eficaces. Aunque diversos enfoques inmunoterapéuticos como la vacunación de células dendríticas poseen baja toxicidad, por desgracia, rara vez exceden una tasa de respuesta tumoral clínica objetiva de 15% [5]. Las terapias como los linfocitos infiltrantes de tumor protocolos (TIL) se han evaluado recientemente en un análisis combinado reportar una tasa de respuesta completa del 20% con una tasa global de respuesta objetiva del 70% en pacientes con melanoma [6]. terapias de citoquinas, en particular, la administración sistémica de IL-12 se han asociado con efectos secundarios graves y un índice terapéutico muy estrecho [7]. unos resultados alentadores tales ensayos clínicos que administran la IL-12 en pacientes con cáncer han mostrado [7]. Sin embargo, la inmunoterapia con otras interleucinas tales como una alta dosis de IL-2 sigue siendo un tratamiento efectivo para los últimos 20 años en pacientes con carcinoma de células renales metastásico, que confiere respuestas duraderas completas bien documentados en el 10-15% de los pacientes seleccionados [8] . terapias de anticuerpos mediada tales como el desarrollo de anticuerpos monoclonales se han utilizado para dirigir con éxito diversos receptores, incluyendo VEGF, EGFR, Her-2 ejerciendo diversos efectos en diferentes tipos de cáncer que resultan en la supervivencia prolongada [9]. En particular, el desarrollo de la ipilimumab anticuerpo IgG1 monoclonal completamente humanizado se dirige a la de linfocitos T citotóxicos antígeno-4 (CTLA-4) en la superficie de células T auxiliares inhibiendo con ello el desarrollo de tolerancia inmune. Ipilimumab está aprobado por la FDA para el tratamiento del melanoma [10]. Más recientemente, el descubrimiento de MDX-1106 (nivolumab), una cocina totalmente humanizados objetivos inhibidores de IgG4 puesto de control programadas muerte 1 (PD-1) que ejerce efectos inmunosupresores en las células T que impiden la tolerancia. Las fases I y II de los estudios se han llevado a cabo en varios tipos de cáncer, que muestra respuestas tumorales objetivas y la mejora de la supervivencia global de los pacientes con melanoma avanzado [11]. Como resultado, nivolumab ha sido aprobado por la FDA para el tratamiento de pacientes con melanoma no resecable o metastásico que ya no responden a otras drogas, y los pacientes con escamosas cáncer no microcítico de pulmón de células metastásico (CPNM) con la progresión a partir del basada en platino quimioterapia. El objetivo es desarrollar y combinar diversas estrategias terapéuticas y que proporcionan efectos de amplio espectro con potencialmente menos toxicidad y reducir al mínimo la resistencia, lo que mejora los resultados del tratamiento para las personas con cáncer. La talidomida es un tal medicamento que se usa para la gestión eficaz del mieloma múltiple, que poseen efectos complejos, pero multifacéticos que incluyen potente actividad citotóxica y inmunomoduladoras [12]. En particular, la talidomida tiene la capacidad de estimular el pronóstico importantes respuestas de células T citotóxicas en pacientes con mieloma múltiple [13] y la macroglobulinemia de Waldenström [14].
Numerosas intervenciones nutricionales han demostrado potencial en la modulación de la respuesta inmune dsyregulated. En particular, los derivados de hongos han sido bien estudiado y se sabe que poseen efectos inmunoestimulantes, pero clara evidencia de su capacidad para aumentar las respuestas inmunológicas contra antígenos específicos está emergiendo lentamente [15]. polisacáridos unidos a proteínas o polysaccharopeptides (PSP), son una clase de compuestos que se encuentran en abundancia en ciertos hongos y han sido ampliamente utilizados como modificadores de la respuesta biológica (BRM) en el Este de Asia [16]. PSP deriva de
Coriolus versicolor
ha sido reportado para mejorar el sistema inmune, y es un potente inmunomodulador contra el cáncer y las infecciones [17-19]. efectos inmunoestimulantes de PSP incluyen la elevación de las citoquinas pro-inflamatorias tales como γ interferón (IFN-gamma), interleuquinas tales como IL-2; actividad natural killer (NK) de células, la activación del complemento (C3), y la proliferación de células T [20]. Es importante destacar que ya se ha informado de que PSP regula al alza el porcentaje de monocitos pero no alteró subconjuntos de células T, células NK o células B [21]. En particular, no se encontraron diferencias significativas en la proporción de CD4 /8 después del tratamiento PSP [21]. Este hallazgo apoya estudios clínicos que han informado de ningún cambio significativo en la relación CD4 /8 después del tratamiento PSP [22,23]. Si bien nuestro estudio anterior en PSP se llevó a cabo in vitro, no tuvo en cuenta los problemas de biodisponibilidad o sus efectos sobre el metabolismo del hígado. Es plausible que los resultados de las células T negativas pueden ser atribuibles a la ausencia de una tríada inmune completamente intacta de DC, T y células B. Un estudio confirmatorio utilizando animales es por lo tanto crucial y el tema de este estudio.
En las respuestas de anticuerpos de células B dependientes de células T, un antígeno absorbido por CC o macrófagos se presentan a Naïve células T colaboradoras donde cognado se puede producir la interacción entre las células B. La célula B con la misma especificidad que una célula T particular, envuelve y digiere el antígeno y muestra los fragmentos antigénicos unidos a sus moléculas de MHC II único en su superficie para su posterior presentación. Una de las células T a juego maduro interactúa con la célula B y secreta citoquinas que conducen a la división celular de las células B y producción de anticuerpos. Este proceso puede conducir a la producción de las células B de memoria (Figura 1).
Curiosamente, muchos de los datos (incluyendo el nuestro) sugieren un aumento de los niveles de citoquinas y subconjuntos inmunológicos conferida por la PSP de no actividades específicamente relacionadas pero de amplio alcance. Ya sea PSP ejerce respuestas de anticuerpos de células B dependientes de células T, o respuestas de anticuerpos de células B independientes de células T no se ha dilucidado, en parte debido a la falta de ensayos apropiados, incluyendo modelos animales. Un intento de evaluar efectos adyuvantes de la vacunación con las hierbas medicinales a base de glicoproteína con potencial inmunomodulador (particularmente
astrágalo Opiniones y PSP de
Coriolus versicolor
) emparejado con conjugados KLH se han realizado [24,25] . Aunque este estudio fue capaz de demostrar efectos adyuvantes significativos con estos medicamentos a base de hierbas, los modelos KLH presentan una serie de limitaciones. En primer lugar la respuesta de células B a la proteína KLH complejo es una respuesta policlonal en relación con un amplio repertorio de epítopos antigénicos que hacen la determinación de las respuestas específicas, tales como las respuestas dependientes de células B de células T imposibles. En segundo lugar esta respuesta de células B dependiente de células T en el modelo KLH se extiende por una duración prolongada que hace difícil diferenciar entre los efectos directos e indirectos. Los efectos adyuvantes de la vacunación con las hierbas medicinales a base de glicoproteína en este estudio KLH es probable que ser amplia y no específica. Por lo tanto las direcciones de modelo NP-CGG tanto estas limitaciones del modelo KLH en ser capaz de determinar dependientes de células B de células T efectos adyuvantes directas y específicas de inmunomoduladores hierbas medicinales combinados con agentes inmunopotenciadores. Con el fin de maximizar la respuesta inmune del bazo, NP-CGG se administró a través de la inyección i.p. ruta. Como se trata de un estudio sobre el mecanismo para confirmar la inmunidad adaptativa, no hay eventual aplicación clínica para el modelo NP-CGG a través de la vía intraperitoneal ruta misma. Mediante la medición de las respuestas anti-NP específicos en diferentes puntos de tiempo, una respuesta de células B de células T dependiente de síncrono puede describirse claramente.
Se presenta aquí por primera vez que la aplicación de un hapteno bien establecida sistema -carrier NP-CGG para caracterizar y delinear las respuestas inmunológicas de las células B dependientes de células específicas de T en presencia de PSP, un adyuvante usado comúnmente para la inmunoterapia del cáncer. las respuestas de anticuerpos de células B dependiente de células T en particular, tienen un enorme potencial para conferir inmunidad adaptativa frente a antígenos de cáncer (mayor avidez) [26-28]. Por lo tanto la capacidad de PSP para ejercer las respuestas de células T dependientes
in vivo
por lo tanto, es altamente deseable y se ha investigado en este estudio.
La hipótesis de que en el modelo NP-CGG, PSP ejerce su inmunológica efectos a través de las interacciones de células B dependientes de células T mediante la alteración de la posterior inmunoglobulina (Ig) de clase de isotipo así la cantidad de Ig en los animales inicialmente impugnados por NP-CGG y posteriormente dados de PSP.
Aunque es bien estableció que en este modelo la producción de anticuerpos pico de clases específicas se produce en los puntos de tiempo específicos (IgM = día 10, IgG = día 14, IgA = día 18 [29]), cualquier aumento de PSP se puede determinar fácilmente. Se ha demostrado previamente que las respuestas primarias contra NP, existe una fase de latencia inicial de 3-4 días de cebado de células T [30]. A continuación, las células B NP-específicos serán reclutados en las respuestas de anticuerpos del bazo, activan y crecen de manera exponencial. Estos clones de células B a continuación, o bien se convierten en plasmablastos de corta duración en los focos extrafollicular, o migran hacia los folículos donde se forman las células de plasma germinal centro de larga vida. No sólo los ciclos de vida de las células plasmáticas de estas dos fuentes diferentes, se han encontrado las células plasmáticas de centro-derivado germinales ser de afinidades mucho más altas hacia el inmunógeno específico [30]. Esta mejora de cegamiento antígeno-anticuerpo tendrá un papel importante para las funciones efectoras eficientes de células B, y las implicaciones de este modo clínicamente relevantes. El objetivo del estudio fue determinar las respuestas de anticuerpos en diversos puntos de tiempo y evaluar la clase de inmunoglobulina que producían. Nuestro estudio nos permite dilucidar el mecanismo de acción de un medicamento a base de hierbas clínicamente útil como un adjunto a la gestión de cáncer. Acacia es un inmunopotenciador bien conocido, donde los estudios han demostrado que la goma de acacia puede activar las células dendríticas [31], confieren inmunidad innata y adaptativa (Strobel y Ferguson, 1982) [32], así como ejercer efectos antiparasitarios
In
vivo [33]. Además, Strobel y otros (1986) encontraron posteriormente que la goma de acacia se puede utilizar para inducir la tolerancia oral en función del modelo utilizado [34]. En nuestro estudio, la goma arábiga se utilizó como un inmunopotenciador para explorar los efectos combinados con PSP para determinar si las respuestas dependientes de células B de células T se han mejorado en comparación con la goma arábiga solo
Materiales y Métodos
Animales y dieta
5 semanas de edad C57BL /6 ratones machos se obtuvieron de El Centro de recursos Animales (Canning Vale, Australia) y se mantuvieron en una instalación libre de patógenos específicos con los alimentos irradiados y agua ad libitum.
Todos los procedimientos con animales se llevaron a cabo en estricta conformidad con las recomendaciones de los procedimientos operativos estándar de laboratorio Servicios para animales y políticas desarrolladas por la Universidad de Sydney. El protocolo fue aprobado por el Comité de Ética Animal de la Universidad de Sydney (Número de Registro: L24 /2-2007 /1/4484). Consulte el diagrama de flujo en la figura 2. Todos los ratones fueron monitorizados regularmente y sobre todo después de la inmunización y el gavage para cualquier problema de salud adversos y gestionado en consecuencia. Los métodos apropiados para la eutanasia se llevaron a cabo.
5 semanas se les permitió ratones viejos para aclimatarse durante una semana, inmunizados con NP
25-CGG a las 6 semanas, grupos de ratones fueron luego alimentado a la fuerza diariamente con PSP, acacia o MQ para un máximo de 21 días y se sacrificaron a diversos puntos de tiempo (días 0, 4, 7, 10, 14 y 21).
Inmunización y el antígeno
4-hidroxi- 3-nitrofenilacetilo (NP) hapteno conjugado con globulina γ pollo (CGG) (NP
25-CGG; Biosearch Technologies, Novato, CA) se precipitó en alumbre [35]. 6 semanas de edad se inmunizaron ratones con 50 g precipitado de alumbre (en 200 l de PBS) i.p. inyectado al inicio del estudio (día 0) y luego se dividieron en 4 grupos: NPCGG = sin control de sonda o de control sin tratamiento, control de MQ = vehículo de agua MQ, acacia = goma de acacia, PSP PSP =
tratada
PSP y suero colección
polisacaropéptido (PSP) derivado del chino
Cov-1 | cepa de
se obtuvo Coriolus versicolor gratis (Winsor Salud Products Ltd, Hong Kong) y se describe anteriormente [21]. PSP se suspendió en 5% de goma de acacia en agua esterilizada MQ (Sigma, St. Louis, MO, EE.UU.) en una concentración final de 5 mg /ml. 50 mg /kg (200 l) de PSP se administró diariamente a los ratones en el grupo de tratamiento mediante sonda oral (PSP) y se detuvo después de 21 días. Desde la goma de acacia era la línea de base potencial inmunomodulador para el estudio, PSP se administró junto con la goma de acacia. se espera que cualquier potenciales efectos inmunomoduladores de PSP para ser mayores que las de la goma de acacia. Los ratones restantes fueron controles y goma de acacia administrada (acacia), agua MQ (MQ), o ninguna alimentación forzada (NP-CGG). PSP no se administró a los ratones en el grupo de MQ
Grupos de 6 ratones fueron sacrificados a continuación secuencialmente al inicio del estudio (día 0).; 4, 7, 10, 14 y 21 días después de la inmunización. PSP y acacia tratados se sacrificaron los ratones en los días 4, 7, 10, 14 y 21; mientras que los ratones tratados MQ y NP-CGG fueron sacrificados a día 10 y 21. El suero se recogió en todos estos puntos de tiempo.
Conjugación del éster de succinimida NP a los portadores de proteína
Utilizando el método por Lalor [36] el éster de succinimida de NP (4-hidroxi-5-yodo-3-nitrofenil) caproato-O-succinimida (NIP-OSu) (Biosearch Technologies, Novato, CA, EE.UU.) se conjugó con albúmina de suero bovino (BSA; Sigma) produciendo una relación de sustitución aproximado de NP
2-BSA y NP
18-BSA, respectivamente
la detección de anticuerpos en el suero NP-específica por ELISA
suero NP-específica. IgM, IgG, IgA e IgE se cuantificaron por ELISA en diversos puntos temporales. Para determinar si PSP fue capaz de aumentar la respuesta predominantemente temprana de anticuerpos IgM para NP-CGG que alcanza el máximo en el día 10, que mide los niveles de suero de los ratones a los 0, 4, 7, 10, 14 y 21 días después de la inmunización. Del mismo modo para evaluar los cambios en las respuestas de IgA contra la NP-CGG que culmina en el día 18, que mide los niveles de título del suero de los ratones a los 0, 10, 14 y 21 días después de la inmunización. Para examinar si PSP tiene el potencial de aumentar las respuestas inmunológicas a largo plazo que se producen enviar 14 días de la inmunización, se midió una alta afinidad y las respuestas de anticuerpos IgG totales a NP-CGG por ELISA directo utilizando NP
2-BSA y NP
18-BSA, respectivamente, como la proteína de recubrimiento. El suero se determinaron a las 0, 4, 7, 10, 14 y 21 días después de la inmunización en NP
25-CGG. Para descartar la existencia de posibles respuestas inflamatorias o alérgicas que pueden haber ocurrido en respuesta a la administración de PSP durante un período prolongado de tiempo, se midieron los niveles de título de IgE 7 días después de la inmunización. Brevemente placas de 96 pocillos se recubrieron con 100 l de 5μg /ml NP
2-BSA o NP
18-BSA en tampón 0,5 M de carbonato (pH 9,6) a 4 ° C durante la noche y se bloquearon con 1% de BSA en PBS. Después de cuatro lavados con PBS que contiene 0,05% de Tween 20 (Santa Cruz Biotechnology, CA, EE.UU.), se añadieron muestras de suero diluidas en serie a cada pocillo por duplicado y se incubaron durante 1 h a 37 ° C en una caja humidificada. Después del lavado, cabra conjugado con biotina anti-ratón IgM, IgG, IgA (Caltag Laboratories) o IgE diluciones (Southern Biotech) que van desde 1: se añadieron 10000 y se incubaron durante 1 hora a 37 ° C en una caja humidificada: 3000 a la 1 . actividad SA-HRP se visualizó usando O-fenilendiamina (OPD; Sigma). Después del desarrollo de la reacción de color se detuvo con 50 l de 20% H
2SO
4 y las densidades ópticas se determinaron a 492 nm usando un lector de placas Polarstar (BMG Labtech, Australia). sueros control positivo se incluyeron de manera que se podían producir curvas de calibración estándar para la determinación de los títulos de anticuerpos relativos.
El análisis estadístico
Los análisis estadísticos se realizaron con el no paramétrico de Kruskall-Wallis o
post-hoc
prueba de Mann-Whitney cuando sea apropiado. La significación estadística se logra cuando p & lt; 0,05 en comparación con los grupos de control.
Resultados
Acacia y PSP no tienen efecto sobre el peso corporal y el bazo
Como PSP y Acacia se conocen tanto como inmunopotenciadores, se es plausible que las respuestas inmunes mejoradas causadas por estos agentes en el modelo NP-CGG es probable que ocurran en el bazo y reflejarse en cambios en el peso del bazo. El peso corporal se evaluó también para corresponder con los cambios en el peso del bazo y descartar cualquier efecto adverso de PSP y acacia que por el contrario se pueden ver en una disminución en el peso corporal. no se encontró ninguna variación significativa en el peso corporal de los ratones antes o durante la inmunización (Tabla 1). Tampoco hubo variación significativa en el peso corporal de los ratones en grupos o entre en diferentes puntos temporales, excepto en el día 21, en donde NPCGG y MQ (P & lt; 0,05) significativamente fueron más altas con ACACIA (Tabla 2). Hay una tendencia al aumento de peso del bazo visto desde 7-14 días en el grupo ACACIA aunque este aumento no alcanzó significación estadística. En general, no hubo variación significativa en el peso del bazo en la muerte entre los grupos (Tabla 3).
PSP disminuye los niveles de NP-específicos título de IgM en los días 4 y 21
se evaluó los niveles de título de IgM, ya que son el primer anticuerpo que se produce por las células B frente a un antígeno en ratones y seres humanos por igual y son especialmente potente en la activación del sistema del complemento. los niveles de título de IgM fueron evaluados en cada punto de tiempo (días 4, 7, 10, 14 y 21) con el fin de determinar si PSP combina con Acacia podría aumentar el nivel conocido título de IgM según el modelo NP-CGG. En este modelo es de esperar que el nivel de título de IgM a pico en el día 10. Cualquier desviación, tales como un cambio en este pico o cambios anteriores o posteriores se reflejarán en que esto ocurra en diferentes puntos de tiempo máximo. Curiosamente, encontramos una disminución significativa en el suero NP específico IgM niveles Titre en los ratones tratados con PSP en días 4 y 21 (Fig 3B y 3F) en comparación con los tratados con el ACACIA (P & lt; 0,05). En contraste, se encontró un aumento significativo en el grupo de ACACIA en comparación con el grupo de control NP-CGG (P & lt; 0,05) en el día 21 (Fig 3F). El grupo MQ mostró un ligero aumento en los niveles de título de IgM específicas de NP en suero en el día 10, que es más evidente en el día 21 (Fig 3D y 3F), aunque no fueron significativamente diferentes de cualquiera de los otros grupos. No hubo diferencias significativas en los niveles de título de IgM específicos NP a los 7, 10 o 14 días después de la inmunización en los grupos de PSP o acacia, ni en el MQ o grupos NP-CGG control (P & gt; 0,05) (Figura 3C-3E).
C57BL /6 ratones fueron inmunizados con NP
se recogieron 25CGG y suero en los días 0, 4, 7, 10, 14 y 21. Los títulos de NP-IgM específicos se midieron dos veces a partir de diluciones seriadas ( 1 /40-1 /80) muestras de suero por ELISA. ACACIA aumentó significativamente las respuestas NP-IgM específica en el día 21 en comparación con NP-CGG solo. Los datos se muestran como la media de dos experimentos independientes con 5-6 ratones por grupo. * P & lt; 0.05.
PSP aumenta los niveles de NP-específicos de clase IgG en el día 4
Se evaluaron los niveles de IgG como ya que siguen la producción de IgM e IgA aunque más potente en largo plazo secundaria inmunológico respuestas, los niveles de título de IgG fueron evaluados en cada punto de tiempo (días 4, 7, 10, 14 y 21) con el fin de determinar si PSP combina con Acacia podría aumentar el nivel de título de IgG conocido como por el modelo NP-CGG. En este modelo es de esperar que el nivel de título de IgG a pico en el día 14. Cualquier desviación, tales como un cambio en este pico o cambios anteriores o posteriores se reflejarán en que esto ocurra en diferentes puntos de tiempo máximo. Hemos encontrado un aumento significativo en la baja afinidad NP-específico IgG niveles título del suero en ratones tratados con PSP en día 4 en comparación con ACACIA (P & lt; 0,05) como se ve en la figura 4. Este aumento en el nivel de título en el día 4 se produce mucho antes que lo esperado. La relación entre la expresión de la afinidad total alto a la baja afinidad respuesta NP-específico IgG de anticuerpos fue significativa para acacia en día 4 (P = 0,008) en comparación con PSP (Fig 4). El grupo MQ mostró un ligero aumento en los niveles título del suero NP específico de IgG en el día 10, que es más evidente en el día 21 (Fig 4D y 4F), tanto para la alta afinidad total y de baja afinidad respuestas a pesar de que no fueron significativamente diferentes de cualquiera de las otros grupos.
la expresión de la alta afinidad total y baja afinidad NP-específicos títulos de IgG se midieron a partir de dos veces las muestras de suero diluidas en serie (de 1 /40-1 /80 para el día 4 a 1 /8000- 1/10000 para el día 10 en adelante) usando NP
2-por BSA (NP
2) y NP
18 por BSA (NP
18), respectivamente, por ELISA. La baja afinidad de anticuerpos IgG respuestas NP-específicos para ACACIA fueron significativas al día 4, pero en ningún otro punto de tiempo (días 7, 10, 14 o 21) en comparación con PSP. La relación entre la expresión de alta afinidad total y de baja afinidad NP-específicos respuestas de IgG fue significativa para acacia en día 4 en comparación con PSP. NP
2 la línea de base muy bajos (datos no mostrados). Los datos se muestran como la media de dos experimentos independientes con 5-6 ratones por grupo. * P & lt; 0.05.
En general, no se encontraron diferencias significativas en la expresión del total de los niveles séricos de IgG de alta afinidad o baja afinidad NP-específicos a NP-CGG en cualquiera de los otros puntos de tiempo o grupos (P & gt; 0,05).
PSP no altera NP-específica niveles de IgA titre
se evaluaron los niveles de IgA titre ya que son el primer nivel de defensa que actúa como un anticuerpo neutralizante contra los antígenos invasores a través de la mucosa. titre niveles de IgA fueron evaluados en cada punto de tiempo (días 4, 7, 10, 14 y 21) con el fin de determinar si se combina con PSP Acacia podría aumentar el nivel de IgA título conocido según el modelo NP-CGG. En este modelo es de esperar que el nivel de IgA título a pico en el día 18. Cualquier desviación, tales como un cambio en este pico o cambios anteriores o posteriores se reflejarán en que esto ocurra en diferentes puntos de tiempo máximo. Como tal, no se encontraron diferencias significativas en los niveles séricos específicos NP-IgA en cualquiera de los puntos de tiempo investigados ni en ninguno de los grupos (P & gt; 0,05) (Fig. 5)
Después de NP CGG inmunización no se observaron cambios en las respuestas de anticuerpos de IgA en cualquier punto de tiempo (días 0, 10, 14 o 21) para PSP o acacia. NP títulos de IgA específicas se midieron a partir de dos veces las muestras de suero diluidas en serie (1 /50-1 /100) por ELISA. Los datos se muestran como la media de dos experimentos independientes con 5-6 ratones por grupo.
PSP no altera los niveles de NP-específicos título de IgE
Se evaluaron los niveles de título de IgE para gobernar determinar si PSP es capaz de inducir efectos alergénicos en este modelo ya que la unión al antígeno puede desencadenar los mastocitos para liberar mediadores químicos tales como histamina que inducen inmunidad anti-parásito y alergia. No se encontró ningún cambio significativo en los niveles de IgE en los días 10, 14 o 21 en el grupo tratado PSP en comparación con el valor basal (grupo NP-CGG en el día 0 después de la inmunización) (P & gt; 0,05) como se ve en la figura 6. Es poco probable que PSP ejerce respuestas alérgicas en este modelo
.
Después de NP-CGG inmunización no se observaron cambios en las respuestas de anticuerpos IgE en cualquier punto de tiempo (días 4, 7, 10, 14 o 21) para PSP NP-específica títulos de IgE se midieron a partir de dos veces las muestras de suero diluidas en serie (1 /5-1 /20) por ELISA. Los datos se muestran como la media de dos experimentos independientes con 5-6 ratones por grupo.
Discusión
vigilancia inmunológica El cáncer se produce cuando los procesos de comprobación del sistema inmunológico están deteriorados, lo que resulta en una incapacidad para identificar correctamente, efectivamente atacar y destruir las células cancerosas que pueden conducir al crecimiento tumoral y la metástasis. Más recientemente, "inmunoedición cáncer" se ha utilizado para describir este proceso dinámico de eliminación, el equilibrio y escapar [37]. Mientras que la inmunoterapia es un enfoque específico para abordar sonido y aumentar cada uno de estos procesos, el uso de hierbas medicinales ofrece una gran promesa. Polysaccharopeptides como PSK y PSP derivados de la seta
Coriolus versicolor
han sido bien estudiados y que pretendía mejorar el sistema inmunológico con amplias actividades contra el cáncer que van, que confiere una ventaja de supervivencia en pacientes con cáncer [38]. PSK (también conocido como Krestin) se ha utilizado en Japón como un adyuvante a los tratamientos convencionales contra el cáncer desde 1977 [39].
Del mismo modo, PSP se ha utilizado como un potenciador inmunológico en China y ha sido objeto de 30 años de investigación; Sin embargo a pesar extensa
in vitro
,
in vivo
y los estudios clínicos, el mecanismo inmunológico específico de acción aún no ha sido claramente identificado. Somos los primeros en informar la aplicación de una bien establecida
in vivo
modelo NP-CGG a base de hierbas medicamentos con potencial inmunoterapéutico. Nos informan de que PSP no ejerce efectos inmunológicos específicos a través de las respuestas de células B dependientes de células T. Esto se puede ver en la ausencia de cualquier cambio significativo en los distintos anti-NP-inmunoglobulinas las pruebas, incluyendo IgM, IgG, IgA o IgE (figuras 3-6). Aunque se observó una disminución estadísticamente significativa en el nivel de título de IgM específica en suero en ratones tratados PSP en los días 4 y 21 (Fig 3B y 3F) en comparación con los tratados con ACACIA (P & lt; 0,05), estos resultados aunque pequeñas son indicativos de una tendencia. Además, se observó un aumento significativo en el nivel total título del suero IgG en ratones tratados con PSP el día 4 en comparación con ACACIA (P & lt; 0,05) como se ve en la figura 4. En términos de la mecánica conocidos del modelo NP-CGG, respuestas de IgG es probable que ocurran en el día 14 en adelante [30], estos primeros cambios observados son pequeños pero más bajo de lo esperado. Mientras PSP no alteró significativamente los niveles de título de IgE en ratones tratados con PSP (Fig 6), es poco probable que PSP contribuye a respuestas alérgicas. En este estudio hemos demostrado una tendencia constante aumentando en todas las clases de Ig, excepto IgE, para NP-CGG por PSP. Esto es consistente con el cambio de isotipo IgM a IgG. respuestas de IgA entrega con el tiempo como se esperaba debido a la tolerancia de la mucosa causada por la estimulación constante de gavage. Por lo tanto, PSP produce pequeños efectos en la célula T respuestas de células B dependientes
in vivo
. Hay una tendencia al aumento de peso del bazo visto desde los días 7-14 en el peso grupo de acacia con la correspondiente disminución en el peso corporal, aunque este aumento no alcanzó significación estadística. Además, no se observaron alteraciones significativas en el peso corporal o en el bazo en ninguno de los grupos medidos debido a la adición de PSP (Tablas 2 y 3) o reacciones adversas asociadas con la inmunización. El aumento de los pesos corporales dentro de los grupos eran como se esperaba.
Curiosamente, los efectos de la goma de acacia en las respuestas dependientes de células T son de importancia. En contraste con PSP, encontramos un aumento significativo en el nivel de título de IgM en el grupo ACACIA comparación con el grupo NP-CGG (P & lt; 0,05) en el día 21 (Fig 3F), que es más tarde de lo esperado como IgM picos en día 10. Curiosamente, la relación entre la expresión de la alta afinidad total y la respuesta de anticuerpos IgG--NP específico de baja afinidad fue significativa para acacia en día 4 (P = 0,008) en comparación con PSP (Fig 4), también se produce antes de lo esperado. Había un pequeño pero no significativo aumento en el suero NP IgM e IgG específicas título niveles de MQ, especialmente en el día 21, que pueden debido a la mayor variación de las respuestas individuales observadas en dicho grupo (p & gt; 0,05). Además, no se encontraron diferencias significativas en la expresión de la afinidad alta o baja afinidad total de los niveles séricos de IgG para NP-CGG en cualquiera de los otros puntos de tiempo o grupos (P & gt; 0,05). Si bien estos resultados sugieren que ACACIA podría influir en las respuestas de células B dependientes de células T, las veces las diferencias son pequeñas y necesitan ser confirmados. Los estudios han demostrado que la goma de acacia puede activar las células dendríticas [31], confieren inmunidad innata y adaptativa, así como ejercer efectos anti-parasitarias
in vivo
.