Extracto
El objetivo del presente estudio fue investigar el patrón de expresión y el significado clínico-patológica de MTA3 en pacientes con no pequeñas cáncer de pulmón no microcítico (CPNM). El perfil de expresión de MTA3 en los tejidos de NSCLC y tejidos pulmonares cancerosos adyacentes se detectó mediante inmunohistoquímica. MTA3 se sobreexpresa en 62 de 108 (57,4%) muestras de cáncer de pulmón humano y se correlacionó con p-TNM etapa (p & lt; 0,0001), la metástasis nodal (p = 0,0009) y de mal pronóstico (p & lt; 0,05). Además, el agotamiento de expresión MTA3 con pequeños RNAs de interferencia inhibe el crecimiento celular y la formación de colonias en las líneas celulares de cáncer de pulmón A549 y H157. Además, el agotamiento de MTA3 induce la detención del ciclo celular en la transición G1 /S límite. análisis de transferencia Western reveló que la caída de MTA3 disminuyó los niveles de proteína de la ciclina A, ciclina D1 y p-Rb. Estos resultados indican que MTA3 juega un papel importante en la progresión del NSCLC
Visto:. Li H, Sun L, Xu Y, Li Z, Luo W, Z Tang, et al. (2013) La sobreexpresión de MTA3 correlaciona con la progresión tumoral en células no pequeñas de cáncer de pulmón. PLoS ONE 8 (6): e66679. doi: 10.1371 /journal.pone.0066679
Editor: Rossella Rota, Ospedale Pediatrico Bambino Gesú, Italia |
Recibido: 24 Noviembre 2012; Aceptado: 9 Mayo 2013; Publicado: 19 Junio 2013
Derechos de Autor © 2013 Li et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por becas de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Nº 30.972.967) y el Fondo de Investigación Especializada para el Programa de Doctorado de Educación Superior (Nº 20092104110018) y el Programa de Liaoning talentos excelentes en la Universidad. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de pulmón es una de las principales causas de las muertes relacionadas con el cáncer en todo el mundo y su incidencia va en aumento [1], [2]. La mayoría de los casos diagnosticados de cáncer de pulmón son cánceres de pulmón no microcítico (NSCLC de células). Aunque se han establecido tres modalidades terapéuticas (resección quirúrgica, quimioterapia, y radioterapia), la supervivencia a largo plazo de los pacientes con cáncer de pulmón sigue siendo generalmente pobre [3]. Una variedad de complejos genética, epigenética, y factores microambientales juegan un papel importante en la supervivencia y la colonización de las células tumorales en nuevas ubicaciones [4], [5]. Las mejoras en la comprensión de los procesos moleculares implicados en la carcinogénesis pulmonar ha promovido nuevas opciones de tratamiento con pequeñas moléculas de terapias y vacunas que demuestran el fomento de potencial. La mejor definición de la patogénesis del cáncer de pulmón, biomarcadores útiles y nuevas dianas terapéuticas están exigiendo tareas.
MTA3 se encontró originalmente como un miembro de una familia pequeña proteína (incluyendo MTA1, MTA2 y MTA3), que todos sirven como subunidades de la /NuRD complejo remodelador de la cromatina Mi-2 [6] - [13]. Informes de MTA3 en los cánceres humanos fueron bastante limitados inicialmente. MTA3 se informó a participar en el desarrollo de linfocitos B, en líneas de células de plasmacitoma, la sobreexpresión de BCL6 y MTA3 downregulated genes de diferenciación de células plasmáticas [14]. Desde entonces, sin embargo, la expresión de MTA3 ha encontrado que reducirse en el cáncer de mama, cáncer de endometrio y cáncer de ovario [15] - [17]. la regulación positiva MTA3 impide EMT reprimiendo directamente
Caracol
expresión, los niveles de proteína E-cadherina con ello regular positivamente en el cáncer de mama [13]. MTA3 también reprime la transcripción y secreción Wnt4, la inhibición de genes Wnt-diana en células epiteliales mamarias [18]. Un estudio reciente encontró que MTA3 facilita la progresión G2 /M en la proliferación de células de la granulosa de ratón [19]. Por otra parte, MTA3 se informó como un marcador pronóstico independiente y desfavorable en el carcinoma no endometriod uterina [20]. Estos estudios han sugerido diferentes roles de MTA3 en diferentes tipos de cánceres humanos. Sin embargo, la expresión de la proteína de MTA3 en el cáncer de pulmón primario y su relación con los factores clínico-patológicos no se ha examinado. Por lo tanto, las funciones biológicas de MTA3 en células de cáncer de pulmón aún no están claros. Con el fin de hacer frente a las preguntas anteriores, se analizó la expresión de proteínas en MTA3 de células no pequeñas de cáncer de pulmón tejidos mediante inmunohistoquímica. Además, se analizó la asociación de MTA3 con la proliferación celular en varias líneas celulares de cáncer de pulmón.
Materiales y Métodos
Pacientes y muestras
Este estudio se llevó a cabo con la aprobación de la junta de revisión institucional local de la Universidad médica de china. escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los pacientes y todas las investigaciones clínicas se llevaron a cabo de acuerdo con los principios expresados en la Declaración de Helsinki. 108 casos de CPNM muestras se obtuvieron del Primer Hospital Afiliado de la Universidad Médica de China durante el período de 2005 a 2008. El diagnóstico histológico y el grado de diferenciación tumoral se define a través de la evaluación de hematoxilina y eosina secciones de tejidos teñidos, de acuerdo con las directrices de clasificación de la Organización Mundial de la Salud. Las 108 muestras fueron reevaluados con respecto a sus subtipos histológicos, estado de diferenciación, y las fases del tumor. Para las muestras de NSCLC, carcinoma de células escamosas y adenocarcinoma fueron identificados en 44 y 64 de los 108 casos, respectivamente. No se observaron metástasis en los ganglios linfáticos en 43 pacientes. Se utilizó el sistema de estadificación TNM-p de la Unión Internacional Contra el Cáncer (7ª edición) para clasificar las muestras en las etapas I (n = 47), II (n = 36), III (n = 25).
líneas celulares
A549 y células H157 líneas se obtuvieron de la American Type Culture Collection (Manassas, VA, EE.UU.). Las células se cultivaron en medio RPMI 1640 (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.) que contenía suero de ternera fetal al 10% (Invitrogen), 100 UI /ml de penicilina (Sigma, St. Louis, MO, EE.UU.), y 100 mg /ml de estreptomicina ( Sigma). Las células se cultivaron en placas de cultivo de tejido estériles y se pasaron cada 2 días utilizando 0,25% de tripsina (Invitrogen).
Inmunohistoquímica
muestras de tumores extirpados quirúrgicamente se fijaron con 10% de formalina neutral, incluidos en parafina y se prepararon 4 micras de grosor. La inmunotinción se realizó mediante el método del complejo avidina-biotina-peroxidasa (Ultra Sensitive TM, Maixin, Fuzhou, China). Las secciones se desparafinaron en xileno, se rehidrataron en alcohol graduado serie y se hirvió en tampón de citrato 0,01 M (pH 6,0) durante 2 minutos en un autoclave. actividad de la peroxidasa endógena fue bloqueada con peróxido de hidrógeno (0,3%), que fue seguido por la incubación con suero de cabra normal para reducir la unión no específica. Las secciones de tejido se incubaron con un anticuerpo policlonal de conejo MTA3 (1:150 dilución) (Proteintech, Chicago, IL, EE.UU.). inmunoglobulina de ratón se utilizó como control negativo. La tinción con todos los anticuerpos primarios se realizó a temperatura ambiente durante 2 h. biotina de cabra IgG en suero anti-ratón, o IgG de cabra biotinilado anti-suero de conejo (listo para usar) (Maixin, Fuzhou, China) se utilizaron como anticuerpos secundarios. Después del lavado, las secciones se incubaron con peroxidasa de rábano picante conjugada con estreptavidina-biotina, seguido de tetrahidrocloruro de 3,3'-diaminobencidina para desarrollar la reacción de la peroxidasa. Contratinción de las secciones se realizó con hematoxilina, y luego la deshidratación de etanol se llevó a cabo antes del montaje.
Dos investigadores independientes examinaron todas las diapositivas tumorales al azar. Cinco miradas fueron examinados para cada diapositiva y 100 células observadas por visión a 400 × magnificación. La inmunotinción de MTA3 se puntuó en una escala semi-cuantitativa mediante la evaluación en áreas representativas del tumor con una intensidad y celular porcentaje más alto de la inmunotinción de las células de control. tinción nuclear de las células tumorales se consideró inmunotinción positiva. La intensidad de la tinción nuclear MTA3 también se puntuó como 0 (sin tinción), 1 (débil), o 2 (marcado). anota Porcentaje fueron asignados como 1 (1-25% positivo), 2 (26 a 50%), 3 (51-75%), y 4 (76 a 100%). Las puntuaciones de cada muestra de tumor se multiplicaron para dar una puntuación final de 0 a 8 y la expresión total de MTA3 se determinó como negativa o baja expresión (-) con una puntuación & lt; 4 o sobreexpresión (+) con una puntuación ≥4 .
cuantitativa en tiempo real PCR (método SYBR Green)
cuantitativo en tiempo real PCR se realizó utilizando SYBR Green PCR master mix (Applied Biosystems) en un volumen total de 20 l en 7900HT Fast Sistema en tiempo real PCR (Applied Biosystems) como sigue: 95 ° C durante 30 s, 40 ciclos de 95 ° C durante 5 s, y 60 ° C durante 30 s. Una etapa de disociación se realizó para generar una curva de fusión para confirmar la especificidad de la amplificación. β-actina se utilizó como gen de referencia. Los niveles relativos de expresión de genes han estado representados gen? Ct = Ct referencia -Ct, y el pliegue del cambio de la expresión génica se calculó por la 2
-ΔΔCt método. Los experimentos se repitieron por triplicado. Las secuencias de los cebadores utilizados fueron: MTA3 adelante, 5'-CCCACCCAGTCAGAAGAAGA-3 ', MTA3 inversa, 5'-TTGGACTCCCAGTGTTTCG-3'; β-actina adelante, 5'-ATAGCACAGCCTGGATAGCAACGTAC-3 ', β-actina inversa, 5'-CACCTTCTACAATGAGCTGCGTGTG-3'; Caracol adelante, 5'-CCTCAAGATGCACATCCGAAGCCA-3 ', Caracol inversa, 5'-AGGAGAAGGGCTTCTCGCCAGTGT-3'; Slug adelante, 5'-AGATGCATATTCGGACCCAC-3 ', Slug inversa, 5'-CCTCATGTTTGTGCAGGAGA-3'.
Análisis Western Blot
Las proteínas totales de las líneas celulares se extrajeron en tampón de lisis (Thermo Fisher científica, Rockford, IL) y se cuantifica usando el método de Bradford. Cincuenta microgramos de proteína se separaron mediante SDS-PAGE (12%). Después de la transferencia, los de fluoruro de polivinilideno (PVDF) membranas (Millipore, Billerica, MA, EE.UU.) se incubaron durante la noche a 4 ° C con los siguientes anticuerpos: MTA3 (1:1000; Proteintech, Chicago, IL, EE.UU.), beta-actina ( 1:500; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), ciclina A (1:1000), ciclina B (1:1000), ciclina D1 (1:1000), CDK2 (1:1000), CDK4 (1:1000 ), CDK6 (1:1000), y p-Rb (1:2000) (Cell Signaling Technology, Boston, MA, EE.UU.). Después de la incubación con peroxidasa de acoplamiento de IgG anti-ratón y anti-IgG de conejo (Santa Cruz Biotechnology) a 37 ° C durante 2 h, las proteínas unidas se visualizaron utilizando ECL (Thermo Fisher Scientific) y detectado usando Bioimagen Sistemas (UVP Inc., Upland , CA, EE.UU.). Los niveles de proteína relativos se calcularon sobre la base de β-actina como control de carga.
Tratamiento interferente pequeño ARN
Los siRNAs a MTA3 (siRNAa, 5'-CAGUGUAGAUUAUGUGCAATT-3 'y siRNAb, 5 siRNAs control negativo (5'-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3 ')' -AGAUAAGCAUGCUAAAGAATT-3 ') y se adquirieron de Genepharma (Genepharma, Shanghai, china). Para las transfecciones, las células se sembraron en una placa de 24 pocillos 24 h antes del experimento. Las células fueron transfectadas con siRNAs utilizando DharmaFECT 1 (0,20 l /pocillo; ThermoFisher Scientific) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Los niveles de ARNm y proteínas se evaluaron 48 h después de la transfección.
Ensayo de proliferación celular y la formación de colonias de ensayo
El ensayo de proliferación celular se realizó utilizando Cell Counting Kit-8 solución (Dojindo, Gaithersburg, MD ) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Brevemente, las células se sembraron a una concentración de 5 × 10
3 células /100 l /pocillo en placas de 96 pocillos de cultivo y se trata con 10 l Kit-8 solución /pocillo de Recuento celular durante la última 4 h de cultivo. La densidad óptica del pocillo se midió a 450 nm utilizando un lector de microplacas. Para el ensayo de formación de colonias, se sembraron células en tres placas de cultivo celular de 6 cm (1.000 por plato para A549 y líneas de células H157) y se incubaron durante 12 días. Las placas se lavaron con PBS y se tiñeron con Giemsa. Se contaron las colonias con más de 50 células.
Análisis del ciclo celular
Las células (500.000) fueron sembradas en 6 cm de placas de cultivo de tejidos. Doce horas más tarde, las células fueron transfectadas con las cantidades indicadas de siRNAs. Las células se sincronizan después de la privación de suero durante 20 h y hora puntos tomados a las 24 h después de la incubación en medio con suero al 10% para determinar los efectos sobre el ciclo celular. Se recogieron las células, se fijaron en paraformaldehído al 1%, se lavaron con solución salina tamponada con fosfato (PBS) y se tiñeron con 5 mg /ml de yoduro de propidio en PBS suplementado con RNasa A (Roche, Indianapolis, IN) durante 30 min a temperatura ambiente. Los datos fueron recolectados a través de flujo BD Calibur citómetro.
Análisis estadístico
SPSS versión 16.0 para Windows fue utilizado para todos los análisis. Se utilizó la prueba de Chi-cuadrado para examinar las posibles correlaciones entre la expresión MTA3 y los factores clínico-patológicos. El método de Kaplan-Meier se utilizó para estimar la probabilidad de supervivencia de los pacientes, y las diferencias en la supervivencia de los subgrupos de pacientes se compararon mediante la prueba de log-rank de Mantel. Se utilizó la prueba t de Student para comparar otros datos. El valor p se basa en el análisis estadístico de dos caras, y p & lt; 0,05 se consideró estadísticamente significativa
Resultados
1.. La sobreexpresión de la proteína MTA3 de células no pequeñas de cáncer de pulmón tejidos
Se analizó la expresión de la proteína de MTA3 en 108 muestras de NSCLC y sus correspondientes tejidos normales mediante técnicas de inmunohistoquímica. expresión de la proteína MTA3 se observó en los compartimentos nucleares de las células tumorales, mientras que el epitelio bronquial normal mostró tinción negativa o baja (Figura 1A-F). Se investigó la relación entre la expresión MTA3 total y los parámetros clínicos. Como se muestra en la Tabla 1, no se encontró diferencia estadística entre la sobreexpresión MTA3 y las características de envejecimiento (p = 0,1404), el sexo (p = 0,8683), el estado del tumor (p = 0,1556), la diferenciación (p = 0,1985) y el tipo de tumor (p = 0,0604). Sin embargo, los pacientes con una expresión de alto MTA3 mostraron un aumento de metástasis ganglionares (p = 0,0009) y tenían un estado avanzado de NSCLC (p & lt; 0,0001). Además, se analizó la relación entre la expresión de la proteína MTA3 y el pronóstico de pacientes con cáncer de pulmón y encontramos que la sobreexpresión MTA3 correlacionado con una reducción en la supervivencia global (p & lt; 0,05) (Figura 2A). sobreexpresión MTA3 correlaciona con el pobre supervivencia de los pacientes en estadio I (p & lt; 0,05), pero no de los pacientes con estadio II-III NSCLC (p = 0,17) (Figura 2 B, C)
A.. tinción negativa en el epitelio bronquial normal en el tejido pulmonar no cancerosa. B. Control negativo utilizando inmunoglobulina de conejo. C. tinción MTA3 débil en el adenocarcinoma de pulmón. D. tinción débil MTA3 en un caso de carcinoma de células escamosas. E. tinción MTA3 positiva en un caso de adenocarcinoma de pulmón. F. tinción positiva MTA3 en un caso de carcinoma de células escamosas.
A. La tasa de supervivencia global fue significativamente menor en los pacientes con la expresión MTA3 positivo que en los pacientes sin. B. La tasa de supervivencia en pacientes con CPCNP en estadio I. C. La tasa de supervivencia en pacientes con estadio II-III NSCLC.
2. MTA3 agotamiento inhibe la proliferación de líneas celulares de cáncer de pulmón
La expresión de MTA3 se analizó a través de Western Blot y PCR en tiempo real en un panel de líneas celulares de cáncer de pulmón (Figura 3 A, B). Se encontró que el nivel de expresión MTA3 en H157 y células A549 fue más alta que otra célula lines.To explorar la función biológica de MTA3 en células de cáncer de pulmón, se emplearon siRNA a desmontables
MTA3
expresión tanto en H157 y A549 líneas celulares. Dos siRNAs MTA3 (ayb), dirigidos a diferentes
MTA3
secuencias, fueron evaluados. El siRNAa fue más eficaz en la reducción de
MTA3
expresión; por tanto, lo usamos para estudios posteriores (Figura 3 C, D). Para confirmar la capacidad de regular a la baja siRNAa MTA3 (y por lo tanto sus funciones de represión transcripcional) que también examinó la expresión de la MTA3 los genes diana
Caracol
y
Slug
. Como era de esperar, el tratamiento con MTA3 siRNAa regula positivamente la expresión de ARNm de
Caracol gratis (Figura 3E). CCK-8 ensayo mostró que el agotamiento MTA3 reduce proliferaion celular en ambas líneas celulares. análisis de formación de colonias mostró que el agotamiento de MTA3 en células H157 y A549 condujo a una reducción significativa en el número y tamaño de focos (control A549 vs MTA3si: 275 ± 7 vs 81 ± 10; control de H157 vs MTA3si: 476 ± 10 vs 276 ± 32), lo que sugiere que MTA3 modula la proliferación de células de cáncer de pulmón (Figura 4)
.
niveles a y B. expresión de MTA3 se analizaron por Western blot y PCR en tiempo real en un panel de líneas celulares de cáncer de pulmón. El análisis de transferencia Western de C. dos eficiencias MTA3 siRNA en células de cáncer. D. en tiempo real el análisis de PCR de dos eficiencias MTA3 siRNA en células de cáncer. E. MTA3 tratamiento siRNA aumentó la expresión de ARNm de caracol.
A. CCK-8 ensayo se realizó después del tratamiento MTA3 siRNA. Se observó una reducción de la absorbancia (p & lt; 0,05 en el día 5 para ambos A549 y H157). B. Evaluación de los potenciales de clonogénicas de las células de cáncer de MTA3-agotado. Se contaron los números de colonias. El número de colonias formadas por las células tratadas con ARNsi MTA3 era mucho menor que la de las células de control (p & lt; 0,05). Columnas, significan; bares, Dakota del Sur. * P & lt;. 0,05
3. El agotamiento de MTA3 downregulated ciclina A y ciclina D1 Expresión en células de cáncer de pulmón
ciclo celular se realizaron análisis en células A549 y H157 con o sin caída MTA3, y se encontró que el porcentaje de células en la fase G1 se incrementó en las células con caída MTA3, mientras que el porcentaje de células en la fase S disminución en estas células en comparación con células de control (control de A549 vs MTA3si: fase G1: 62,59% ± 0,9 vs 79,71% ± 1,5; fase S: 31,27% ± 0,52 vs 15,21% ± 0,88; H157 de control vs MTA3si: la fase G1: 53.83% ± 1,4 frente a 64,61 ± 1,8%; la fase S: 32.64% ± 0,8% vs 18,59 ± 0,48). Estos resultados indican que el agotamiento de MTA3 induce la detención del ciclo celular en la transición G1 /S límite. No hubo ningún cambio significativo en la proporción de células en fase G2 (Figura 5). Para investigar la detención del ciclo celular subyacente mecanismo, se examinaron los niveles de las proteínas relacionadas con el ciclo usando células recolectadas en el mismo punto de tiempo como células utilizadas en el análisis del ciclo celular. Hemos probado los efectos de la caída MTA3 en los niveles de ciclina A, ciclina D1, ciclina B, CDK2, CDK4, CDK6 y p-Rb. análisis de transferencia Western reveló que la caída de MTA3 disminuye los niveles de proteína de la ciclina A, ciclina D1 y de expresión p-Rb (Figura 6). En conjunto, estos resultados sugieren que la inhibición de la expresión MTA3 induce la detención del ciclo celular en la transición G1-S, suprimir el crecimiento de células de cáncer de pulmón.
El porcentaje de la fase G1 se incrementó en las células con caída MTA3 (H157 y A549, P & lt ; 0,05), mientras que los porcentajes de la fase S (H157 y A549, p & lt;. 0.05) se redujo en estas células en comparación con células de control
análisis de transferencia de Western de una serie de factores relacionados con el ciclo celular mostró los niveles de proteína de la ciclina a, D1 y p-Rb se redujeron después de silenciar MTA3 en H157 y células A549, mientras que no hubo ningún cambio significativo de la ciclina B, CDK2, CDK4 y CDK6 expresión.
Discusión
la regulación a la baja de MTA3 se informó en el cáncer de mama, cáncer de endometrio y cáncer de ovario [15] - [17], mientras que la regulación al alza de la expresión MTA3 se ha implicado en el cáncer coriónica humana [21]. sobreexpresión MTA3 sirve como marcador pronóstico para juzgar la supervivencia de pacientes con cáncer no endometriod uterinas [20]. Sin embargo, el patrón de expresión de MTA3, así como su correlación con factores clínicos y patológicos aún no se han definido en el cáncer de pulmón humano. En este estudio, hemos demostrado que la expresión de proteínas MTA3 en los tejidos de pulmón humano es mayor que los correspondientes tejidos pulmonares normales. Hubo una estrecha correlación entre la etapa MTA3 regulación al alza pTNM y la metástasis ganglionar. Es importante destacar que hemos sido capaces de demostrar que MTA3 se correlaciona con la escasa supervivencia de pacientes con cáncer de pulmón. Esto estaba de acuerdo con los datos anteriores que se ha sugerido que MTA3 juega un papel importante en la progresión del cáncer de pulmón. Para validar el papel potencial de MTA3 en el desarrollo del cáncer de pulmón, nos registramos por primera vez su nivel de expresión en varias líneas celulares y utilizamos células A549 y H157 (con niveles relativamente altos MTA3) para estudios posteriores. Empleamos siRNA desmontables expresión MTA3 en estas dos líneas celulares. Hemos encontrado una capacidad de formación de capacidad de proliferación y alteración de la colonia en ambas líneas celulares después de la caída MTA3. Por lo tanto, nuestro estudio sugiere que
MTA3
funciona como un oncogén en el desarrollo del cáncer de pulmón.
Un estudio informó que rencent t el agotamiento de MTA3 endógena en las células de la granulosa de ratón primaria disminuye significativamente la ciclina B1 y ciclina expresión B2, ralentiza la proliferación celular y increaseds el porcentaje de células en G2 /M, lo que podría ser revertido por la co-expresión de MTA3 exógeno [19]. La mayoría de los factores de proliferación influyen en el crecimiento celular al afectar la progresión del ciclo celular. Por lo tanto se empleó análisis del ciclo celular y encontramos un aumento de células MTA3 deficientes en la fase G1 y una disminución en la fase S en comparación con las células control. La inhibición de la transición G1 a S en la progresión del ciclo celular podría explicar los mecanismos detrás de los efectos sobre la proliferación celular MTA3 cáncer de pulmón.
Para encontrar los mecanismos potenciales de MTA3 en la regulación del ciclo celular, se analizó el efecto de la caída MTA3 en un número de moléculas por células relacionadas con el ciclo. Se verificó la expresión de ciclinas (A, B, y D1), CDK2, CDK4, CDK6 y p-Rb. Se encontró que los niveles de ciclina A, D1 y p-Rb disminuyeron después de caída MTA3. Ciclina D1 interactúa con Cdk4 /6 para formar un complejo que fosforila Rb y regula la proliferación celular mediante el control de la progresión a través del punto de restricción dentro de la fase G1 del ciclo celular [22]. Ciclina D1 se sobreexpresa en una variedad de cánceres y se asocia con la proliferación de células del cáncer [23] - [25]. Ciclina A es necesaria para que la célula progresar a través de la fase S [26]. Ciclina B es una ciclina mitótica y su acumulación sólo se encuentra en la transición G2-M [27]. Por lo tanto, nuestros resultados que muestra disminución de los niveles de ciclina A, D1, y p-Rb se correlaciona con los niveles disminuidos de células en la S y la fase G2 y el aumento de los niveles de células en la fase G1 después de caída MTA3, lo que sugiere MTA3 juega un papel importante en el control del ciclo celular de las células de cáncer de pulmón.
en conclusión, el presente estudio showes que MTA3 se sobreexpresa en NSCLC y se correlaciona con su etapa avanzada y de mal pronóstico. Nuestro estudio también demuestra que la sobreexpresión de MTA3 podría promover la proliferación celular a través de la regulación del ciclo celular.
Reconocimientos
Los autores desean agradecer al Dr. Li Qingchang por su excelente asistencia técnica.