Extracto
Antecedentes
quimioterapia de inducción es una opción terapéutica común para los pacientes con la cabeza-locorregional avanzado y cáncer de cuello (CCC), pero no queda claro qué pacientes se beneficiarán. En este estudio, se realizaron búsquedas de biomarcadores que predicen la respuesta de los pacientes con HNC-locorregional avanzada para la quimioterapia de inducción mediante la evaluación del patrón de expresión de las proteínas de reparación del ADN.
Métodos
La expresión de un panel de ADN -Reparación proteínas en las muestras incluidas en parafina fijadas con formalina de una cohorte de 37 pacientes con CCC sometidos a quimioterapia de inducción basada en platino antes de la quimiorradiación definitiva se analizaron mediante inmunohistoquímica cuantitativa.
resultados
Hemos encontrado que XPF (una pareja de unión ERCC1) y fosfo-MAPKAP quinasa 2 (pMK2) son nuevos biomarcadores para pacientes HNSCC sometidos a quimioterapia de inducción basada en platino. baja expresión XPF en pacientes HNSCC se asocia con una mejor respuesta a la inducción quimiorradioterapia, mientras que la expresión de alto XPF se correlaciona con una respuesta peor (p = 0,02). Además, se encontró una baja expresión pMK2 que se correlaciona significativamente con la supervivencia global después de la inducción, más quimiorradioterapia (p = 0,01), lo que sugiere que pMK2 puede estar relacionada con la quimiorradioterapia.
Conclusiones
Se identificaron y XPF pMK2 como nuevos biomarcadores de reparación del ADN de pacientes con CCC-locorregional avanzada sometidos a quimioterapia de inducción basada en platino antes de la quimiorradiación definitiva. Nuestro estudio proporciona información detallada para el uso de biomarcadores de reparación del ADN en las estrategias de diagnóstico personalizados. Además de validación en una cohorte más amplia se indica
Visto:. Seiwert TY, Wang X, J Heitmann, Villegas-Bergazzi V, Sprott K, Finn S, et al. (2014) Reparación del ADN Biomarcadores XPF y fosfo-MAPKAP quinasa 2 se correlacionan con el resultado clínico en cáncer de cabeza y cuello. PLoS ONE 9 (7): e102112. doi: 10.1371 /journal.pone.0102112
Editor: Apar Kishor Ganti, Universidad de Nebraska Medical Center, Estados Unidos de América
Recibido: 13 Marzo, 2014; Aceptado: June 14, 2014; Publicado: 14 Julio 2014
Derechos de Autor © 2014 Seiwert et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por un buque profesor premio ASCO traslacional (EEV), el Grant Achatz y Nick Kokonas /Alinea la cabeza y el Fondo de Investigación del cáncer de cuello (EV, TYS), y un vuelo Asistir Premio científico clínico del Instituto de Investigación médica de Young (FAMRI, YCSA) ( TYS). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:. X Wang, V-Villegas Bergazzi, y DT Tejedor eran empleados de On-Q -ity. K Sprott, S Finn, E O'Regan, DA Farrow Asesorábamos on-Q-dad. Los autores confirman que esto no altera la adhesión a todas las políticas de PLoS ONE sobre los datos y compartir materiales, como se detalla en la guía para los autores.
Introducción
Carcinoma de cabeza y cuello de células escamosas (HNSCC) es la sexta neoplasia maligna más común en todo el mundo y es responsable de 45.000 casos nuevos en los EE.UU. cada año [1], [2]. A efectos prácticos, el cáncer de cabeza y cuello se divide en tres etapas clínicas: temprano, locorregional-avanzado y metastásico o recurrente. Los enfoques de tratamiento pueden variar en función del estadio de la enfermedad. La gran mayoría de los pacientes (~ 60%) que presentan enfermedad avanzada-locorregional requiere terapia multimodal agresiva. Las tasas de supervivencia a largo plazo reportados oscila entre el 50-70% [3], [4]. Inducción o quimioterapia neoadyuvante se utiliza cada vez antes de la terapia definitiva local (es decir, la cirugía /quimioterapia /radioterapia) y aprobado por la FDA para esta indicación. La quimioterapia de inducción se asocia con tasas altas de respuesta, el alivio sintomático, y una reducción en las fallas de metástasis distantes. Por otra parte, varios grupos, entre ellos el nuestro han reportado una asociación clara entre la respuesta a la quimioterapia de inducción y la mejora de la supervivencia global [5] - [7]. A pesar de un alto grado de actividad, un reciente estudio de fase III no logró mostrar beneficio de la adición de la quimioterapia de inducción a la quimiorradioterapia en una población no seleccionada de pacientes [8]. El análisis de subgrupos indicaron beneficios potenciales en ciertas poblaciones de alto riesgo, pero en ausencia de una validación de biomarcadores adecuados de hipótesis será difícil y costoso.
Un meta-análisis también confirmó una pequeña ventaja en la supervivencia con quimioterapia de inducción a pesar de la heterogeneidad de las terapias incluidos [9]. Desafortunadamente, no existe actualmente ningún método validado para predecir qué pacientes se beneficiarán de esta terapia y aún no está claro cómo seleccionar pacientes para este potencialmente beneficioso, así como terapia potencialmente tóxico. Los biomarcadores podrían ayudar a mejorar la selección de pacientes en el futuro.
proteínas de reparación del ADN desempeñan un papel esencial en el mantenimiento de la estabilidad del genoma y han sido implicados en la tumorigénesis. Los pacientes con síndromes de inestabilidad cromosómica, como la anemia de Fanconi (FA), la ataxia telangiectasia (AT), síndrome o Werner muestran síndrome de defectos de Bloom en la reparación del ADN y un mayor riesgo asociado y el mal pronóstico de cáncer, incluyendo el de cabeza y cuello [10] - [17 ]. Las células cancerosas exhiben inestabilidad genómica y suelen ser defectuoso en uno de los seis principales vías de reparación del ADN a saber: base de reparación por escisión (BER), reparación por escisión de nucleótidos (NER), desajuste de reparación (MMR), la recombinación homóloga (HR), endjoining no homóloga (NHEJ) y la síntesis de ADN translesion (TLS). La quimioterapia y la mayoría de los agentes quimioterapéuticos daño en el ADN y la falta de reparación adecuada induce la muerte de las células tumorales.
Por lo tanto, es crucial para identificar biomarcadores de reparación del ADN que pueden predecir qué pacientes se benefician de la quimioterapia de inducción en la cabeza-locorregional avanzado y cáncer de cuello .
en informes anteriores sugieren que ERCC1 es un biomarcador potencial para la terapia basada en platino [18] - [20]. La proteína ERCC1 se une a XPF para formar un heterodímero, que es una estructura de ADN endonucleasa específica que estabiliza entre sí
in vivo
y es responsable de la "incisión 5 durante la reparación por escisión de nucleótidos [21]. Los niveles de ERCC1 se reducen significativamente en células deficientes en XPF y viceversa [22]. Este biomarcador no ha sido adoptado para HNSCC, en parte, debido a la controversia en torno a la especificidad del anticuerpo empleado [23], [24]. Otros estudios han encontrado, que la resistencia a la quimioterapia basada en platino se correlaciona con los niveles de mRNA de la proteína o de ERCC1 y XPF [21], [25], [26].
En este estudio, se determinó un panel de la reparación del ADN proteínas en cinco principales vías de reparación del ADN mediante inmunohistoquímica (IHC) y una plataforma de patología digital para evaluar si el patrón de expresión de las proteínas de reparación del ADN en la fase de biopsia puede predecir la respuesta tumoral en pacientes con CECC-locorregional avanzada sometidos a quimioterapia de inducción antes de la quimiorradiación definitiva. Nuestro estudio muestra que XPF es altamente variable entre los cánceres de cabeza y cuello con una amplia gama dinámica: Los bajos niveles de expresión de XPF se correlacionan con una mejor respuesta a la inducción quimiorradioterapia, mientras que altos niveles de expresión XPF están asociados con una respuesta peor. Además, pMK2, una quinasa que se ha informado que son críticos para la regulación post-transcripcional de la expresión génica como parte de la respuesta al daño de ADN [27], se asocia significativamente con la supervivencia global después de la terapia de inducción más quimiorradiación. Nuestros resultados indican que el análisis de los cambios en las vías de reparación del ADN puede ser clínicamente útil en HNC.
Materiales y Métodos
cohortes de pacientes
Las muestras de biopsia (fijado en formol, parafina muestras tumorales embebidos) de 37 pacientes con estadio IV CECC-locorregional avanzado tratados en la Universidad de Chicago fueron evaluados a partir de secciones enteras. Las biopsias de pacientes HNSCC se habían obtenido a partir de una escisión primaria o la biopsia antes de la terapia. escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los donantes o los familiares para el uso de estas muestras en la investigación aprobada bajo el protocolo Universidad de Chicago IRB 8980 y 15410A. Todos los pacientes habían sido tratados con quimioterapia de inducción que consta de dos ciclos de paclitaxel y carboplatino para un total de ocho semanas. Posteriormente, se realizó un balance intermedio, seguido de paclitaxel, 5-fluorouracilo, hidroxiurea y los regímenes basados en radioterapia (FHX) quimiorradioterapia y finalmente se evaluaron para la respuesta [28], [29]. Se analizaron las muestras de los pacientes con respecto a su estado de VPH mediante la tinción de p16 (Santa Cruz JC-8).
Evaluación Tratamiento
Evaluación de la respuesta se llevó a cabo en el intervalo entre la quimioterapia de inducción y quimiorradioterapia consecutivo se evaluó la tomografía computarizada y /o examen clínico efectuado por un especialista en otorrinolaringología y mejor respuesta. Los criterios de respuesta fueron definidos como respuesta completa (CR) [14], la respuesta progresiva (PR) y enfermedad estable (SD) sobre la base de criterios RECIST [6], [30].
Las líneas celulares
Los fibroblastos GM08437 virus de simio 40 transformadas (XPF - /-, Instituto Coriell) se cultivaron las células y las células HeLa en medio de Eagle modificado de Dulbecco suplementado con suero de ternera fetal inactivado por calor al 10% (FCS) en un incubador humidificado con CO2 al 5% a 37 ° C.
la inmunohistoquímica (IHC)
enteros las secciones de las muestras se tiñeron por IHC usando anticuerpos contra XPF (SPM228) /ERCC1 (8F1) (AbCam), FANCD2 (Santa Cruz ), PAR, γH2AX (Millipore), MLH1 (AbSerotec) y fosfo-MAPKAP Kinase2 (pMK2) (Cell Signaling Technology). Las secciones de tejido se desparafinaron /rehidrataron utilizando técnicas estándar. recuperación del epítopo inducida por calor se realizó y los tejidos se tiñeron con anticuerpos durante la noche a 4 ° C. Los anticuerpos primarios fueron omitidos en los controles negativos. Hematoxilina se utilizó como contratinción nuclear. Se establecieron doble rangos de dilución de anticuerpos, y las condiciones de recuperación de antígeno se establecieron de tal manera que el anticuerpo era en exceso y discrimina entre los tejidos de cáncer de control y entre los niveles bajo y alto de expresión. Renaissance TSATM (tiramida amplificación de señal) Sistema Biotina (Perkin Elmer) se utilizó para la detección de XPF y FANCD2. Sistema de detección sensible estupendo TM IHC (BioGenex) se utilizó para la detección de PAR, PARP1, MLH1, pMK2, γH2AX y ERCC1.
IHC que alcanzaron el
Los tejidos teñidos IHC en las diapositivas fueron escaneados en una plataforma de patología digital (Aperio). Calidad de patrón de tinción fue revisada patología. Se determinó la intensidad de la tinción nuclear, y /o la localización del marcador en ambos compartimientos nucleares y citoplásmicos. Tres regiones tumorales de interés en toda una sección fueron seleccionados por los patólogos a fin de minimizar los efectos de la variación de tinción IHC. diapositivas escaneadas fueron evaluados por los patólogos y análisis de imágenes digital basado en la máquina (Aperio). El porcentaje (0-100%) de las células tumorales con tinción positiva Cantidad (Q) y la intensidad (I) para cada marcador fue evaluado de forma independiente por dos patólogos entrenados (VVB, SF), que fueron cegados a partir de la historia clínica. Una puntuación nuclear se informó para XPF, ERCC1, FANCD2, MLH1, PARP1, PAR y γH2AX. Los compartimentos nucleares y citoplásmicos fueron anotados por separado para pMK2. La tinción cantidad (Q) se puntuó de 0 a 4: ninguna tinción nuclear = 0; 1-9% de las células con tinción nuclear = 1; 10 a 39% = 2; 40 a 69% = 3; y 70 a 100% = 4. intensidad de la tinción (I) se clasificó de 0 a 3, con 0 = negativo, 1+ = débil, 2+ = intermedio, 3+ = fuerte. Los resultados finales se obtienen multiplicando las puntuaciones de la cantidad y la intensidad de la tinción (IXQ) [31]. análisis de imágenes basados en la máquina se establecieron sobre la base de las macros modificadas del algoritmo nuclear Aperio IHC para anotar la intensidad /cantidad de núcleos tumorales positivas. salidas de marcador en 0, 1+, 2+, 3+ y contenedores se combinaron en un algoritmo de ponderación para crear una puntuación de intensidad relativa (H-score) a partir de 0-300 [32].
inmunotransferencia
inmunotransferencia para XPF, ERCC1, y β-actina se realizó utilizando la metodología estándar como se describe anteriormente [33] - [37]. Los anticuerpos utilizados para inmunotransferencia eran anti-XPF (SPM228, AbCam), anti-ERCC1 (8F1, AbCam /Santa Cruz), y anti-β-actina (H-170, Santa Cruz). Nueve de cabeza y cuello líneas celulares de cáncer (SCC58, SCC61, SCC35, SCC28, SQ20B, SCC9, HN5, SCC68, SCC25), amablemente proporcionados por el Dr. Ralph Weichselbaum y el Dr. Mark Lingen, se utilizaron.
Estadística análisis
puntuación de biomarcadores se correlacionó con los datos clínicos para evaluar la correlación con los resultados. Un conjunto de valores de los marcadores de umbral óptimo se determinó mediante análisis univariado para cada marcador que produjo la mayor discriminación para separar la respuesta completa (RC), respuesta parcial (RP), grupos Enfermedad estable (SD) para la quimioterapia de inducción y la supervivencia global. El análisis multivariante no era viable debido a la cantidad de la muestra. Univariado de Cox modelos de riesgos proporcionales se construyeron para cada uno de los marcadores (modelos de marcadores individuales) para examinar sus posibles poderes de predicción. También se realizó un análisis discriminante y la partición para separar al máximo las muestras de conjunto de datos en grupos.
producción estadística para p-valor (valor predictivo positivo), aparente Error Rate (AER), las características del receptor operador (ROC) y el área bajo La curva (AUC). ROC es una representación gráfica de la sensibilidad frente a (1-especificidad) para un sistema clasificador binario como su discriminación de verdaderos positivos, en este caso, es 1-especificidad (fracción de CR /PR llamado SD /PD) versus sensibilidad ( fracción de SD /PD llama SD /PD). AUC es una medida de lo bien que dos clases de datos independiente con un programa de ensayos. Sensibilidad, especificidad predictivo positivo de alimentación, predictivo negativo de energía, el riesgo relativo (RR) y la odds ratio se calcularon en los modelos alternativos.
Para evaluar la asociación de las puntuaciones de biomarcadores para la supervivencia del paciente en general, los umbrales para cada biomarcador se determinaron, que separa los pacientes en dos grupos. Estos umbrales se seleccionaron mediante la elección del valor de biomarcadores que generó la curva de supervivencia p-valor mínimo cuando los pacientes con puntuaciones por encima del umbral se compararon a los pacientes por debajo del umbral. Los umbrales que crearon un grupo mínimo de menos del 10% de todas las muestras no se consideran fiables y excluidos del análisis.
Las curvas de supervivencia para los grupos de bajo y alto riesgo se compararon mediante modelos de Kaplan-Meier y la informó p-valor. Además, se informó de la ARE, AUC, curva ROC, la sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo, valor predictivo negativo, y el riesgo relativo.
Resultados
Variaciones significativas de proteínas de reparación del ADN expresión en múltiples vías de reparación del ADN en el cáncer de cabeza y cuello
vías de reparación del ADN son importantes para la respuesta celular a la quimioterapia y la radiación. Ocho seleccionados proteínas de reparación del ADN en las cinco principales vías de reparación del ADN fueron evaluados por IHC en una cohorte de 37 pacientes; un ejemplo de tinción IHC para cada biomarcador se muestra en la Figura 1A. puntuaciones de los patólogos y evaluación basada en la máquina de IHC intensidad de la tinción en las zonas tumorales anotados se utilizaron para evaluar las diferencias de expresión de proteínas entre muestras de pacientes. La expresión de proteínas de reparación del ADN varía entre las muestras de tumor, como se muestra gráficamente en la distribución de los pacientes para los marcadores (Figura 1B). Localización subcelular de pMK2 varía entre nuclear solamente, o nuclear + citoplásmica de localización en función de la tumor paciente. Varios marcadores biológicos tales como proteínas y FANCD2 γH2AX tienen un patrón definido en el núcleo indicativo de la activación de la /FA recombinación homóloga (HR) o de respuesta al daño del ADN (DDR) y la vía (Figura 1) en estos tumores HNSCC. Biomarcadores en diferentes vías de reparación del ADN, tales como XPF (NER), MLH1 (MMR), PAR (BER), FANCD2 (FA /AR), pMK2 y γH2AX (DDR) se encontró que tenían diferencias en la intensidad de la tinción nuclear o citoplasmática y distribución entre parabasal (pb) y no parabasal (no-pb) capa células para ciertas muestras, lo que sugiere una expresión variable de estos marcadores biológicos de reparación del ADN (Figura 1C). Un ejemplo que se muestra aquí es el patrón de tinción nuclear NER biomarcador XPF en dos cánceres representativos por IHC. intensidad baja o negativa de XPF tinción nuclear indica que vía NER está apagado, y la alta intensidad de la tinción XPF indica que está en vía NER (Figura 2). Para probar las correlaciones entre las puntuaciones patólogo, el análisis de la máquina guiada e imagen, se compararon IHC manchada XPF, las cuales fueron analizadas por dos patólogos, que fueron cegados a las muestras tumorales, y el algoritmo basado en sistemas informáticos en este estudio (Figura 2) con el valor de R2 de 0,79.
A. Las secciones enteras FFPE de muestras de pacientes 37 HNSCC se tiñeron por IHC usando los anticuerpos contra los biomarcadores de reparación del ADN (XPF, ERCC1, FANCD2, MLH1, pMK2, PAR, PARP1) de acuerdo con el protocolo descrito en
Materiales y Métodos
. El tejido teñido en la diapositiva fue escaneada en una plataforma patología digital (Aperio) y las imágenes se ve digitalmente, aumento de 10X. Como se ha señalado, la localización subcelular de pMK2 está en ya sea Nuclear (N), o nucleares (N) + citoplásmico (C), los patrones de tinción de pMK2 en estos tejidos de cáncer se muestra como se indica, de ampliación 20X. focos nucleares en las células del cáncer del cuello, se mostró de γH2AX y FANCD2 en el panel inferior como se ha indicado, la ampliación de 40X. se muestran B. Ejemplos de diversa expresión de biomarcadores en muestras de tejido de cáncer de cabeza y cuello teñidas con XPF, FANCD2, MLH1. Distribución de los pacientes de las puntuaciones XPF, FANCD2, MLH1 se representan. C. Las diferencias en la intensidad y distribución de XPF (NER), MLH1 (MMR), PAR (BER), FANCD2 (FA /AR), pMK2 y γH2AX (DDR) en parabasales (pb) y nonparabasal tinción (no pb) se demostró que las células de la capa de las muestras de un paciente CECC representativa tal como se indica.
se hacen comparaciones entre las estrategias de puntuación alternativos para inmunohistoquímica con el XPF para cada paciente con cáncer de cabeza y cuello. Se determinó la máquina de anotar asistida para XPF basado en el porcentaje de núcleos con 1+ (débil), 2+ (Mediano), 3+ puntuaciones patólogo (alta) de intensidad fueron la intensidad (I). los gráficos de correlación se muestran como se calculan para similitud con un valor R de 0,79.
XPF expresión altamente variable en el cáncer de cabeza y cuello
En nuestro estudio, se determinó la especificidad de la XPF (SPM228) y anticuerpos ERCC1 (8F1) por IHC utilizando fijadas con formalina, los bloques incluidos en parafina de HeLa (control positivo) y XPF sedimentos celulares deficientes. Se evaluaron Otros anticuerpos XPF y ERCC1 (datos no presentados /propietario). SPM228 fue elegido debido a alto grado de especificidad, y 8F1 elegido ya que es el anticuerpo ERCC1 más ampliamente utilizado. Nuestro resultado mostró que la tinción nuclear específica por un anticuerpo monoclonal contra XPF (SPM228) se detectó en células HeLa pero no en células deficientes en XPF, en contraste, se encontró tinción nuclear por el anticuerpo ERCC1 8F1 tanto en las células deficientes HeLa y XPF, lo que indica que este anticuerpo es SPM228 XPF específico y adecuado para la detección de XPF por IHC, y ERCC1 8F1 reconoce proteínas nucleares no específicos adicionales y no es capaz de detectar específicamente ERCC1 en las muestras (Figura 3A).
a. FFPE bloques de HeLa y GM08437 (celular deficiente XPF) gránulos se utilizaron como controles negativos y positivos, XPF (SPM228) y ERCC1 (8F1) anticuerpos se aplicaron a las secciones mediante inmunohistoquímica de acuerdo con el método de IHC para el tumor, y los patrones de tinción nuclear de XPF y ERCC1 se muestra. líneas celulares de cáncer de cabeza y cuello B. Nueve fueron analizados por inmunotransferencia para la expresión de XPF. proteínas de degradación XPF y XPF se detectaron mediante un anticuerpo monoclonal anti-XPF (SPM228) con líneas de células 5 y 6 muestran una baja expresión. ß-actina (Santa Cruz) se utilizó como control de carga de proteínas. Se enumeran los nombres de las líneas celulares
Se evaluó la expresión XPF tanto, p16 (+) y p16. (-) y muestras No se detectó una diferencia significativa (178 frente a 165, NS).
a continuación, se mide el nivel de expresión XPF en lisados de nueve líneas celulares CECC por inmunoblot. Dos bandas de XPF a 110 kD y 75 kD se encontraron consistentemente, con la banda 75 kD reconocer XPF longitud completa y la otra banda que representa un producto de escisión de XPF (XPF descomposición) (Figura 3B). También se encontró que los niveles de expresión de XPF varían dramáticamente entre las nueve líneas celulares CECC (Figura 3B). Un amplio rango dinámico de expresión XPF en la cohorte en nuestro estudio también se muestra en un gráfico la distribución de pacientes (Figura 1B). En conjunto, nuestros resultados demuestran que los niveles de expresión XPF detectados por el anticuerpo SPM228 varían significativamente en líneas de la cabeza y de células del cuello y las muestras de pacientes, y que la SPM228 anticuerpo monoclonal se puede utilizar para detectar específicamente la expresión XPF por Western blot y IHC.
XPF se asocia con la respuesta a la quimioterapia de inducción de cáncer de cabeza y cuello pacientes
Ocho biomarcadores de reparación del ADN teñidas en 37 muestras de pacientes por IHC se analizaron por su capacidad para predecir la respuesta a la quimioterapia de inducción. De los 37 pacientes con CCC tratados con quimioterapia de inducción en el estudio, la respuesta completa (CR) [14] se observó en 11 pacientes (29,7%), 19 pacientes (51,4%) obtuvieron una respuesta parcial (RP), y siete pacientes (18,9 %) tenían una enfermedad estable (SD). Se encontró que los niveles bajos de expresión XPF en pacientes con CCC se asociaron significativamente con una mejor respuesta a la quimioterapia de inducción (p = 0,02) (Figura 4). Por otra parte, todos los siete pacientes que tenían SD tenían altos niveles de expresión XPF (Figura 3, Tabla 1). Por el contrario, ERCC1 detectado por el anticuerpo utilizado comúnmente (clon 8F1) en nuestro conjunto de cohorte no se correlacionó con la respuesta, y otros marcadores tales como PARP1, PAR, MLH1, pMK2, γH2AX, FANCD2, también falló para correlacionar (Tabla 1). Nuestros resultados sugieren que XPF es el biomarcador NER preferido para predecir la respuesta a la quimioterapia de inducción en pacientes HNSCC.
El gráfico muestra que el análisis univariado de las puntuaciones XPF biomarcadores relativos a la discriminación entre los subgrupos del Servicio de respuesta. La medida de resultado primaria fue la respuesta a la quimioterapia de inducción.
pMK2 se correlaciona con la supervivencia global a la quimiorradioterapia
A continuación, evaluaron la asociación de los marcadores biológicos de reparación del ADN a la supervivencia global de este cohorte de pacientes. pMK2 no se correlacionó con la respuesta a la quimioterapia de inducción (Tabla 1), pero se correlaciona fuertemente con la supervivencia global: expresión baja pMK2 se asoció con una mejor supervivencia global (p = 0,01) (Figura 5); pMK2 un subgrupo diferenciado con una mejor supervivencia potencialmente relacionadas con quimiorradioterapia, lo que sugiere que pMK2 puede estar relacionada con la quimiorradioterapia. En contraste, se encontró XPF no se correlaciona con la supervivencia global (p = 0,08). Durante varios otros marcadores en la reparación del ADN, tales como PARP1, PAR, MLH1, γH2AX, ERCC1, FANCD2, el mismo análisis no alcanzó significación estadística (Tabla 2). Se necesitan más estudios de pMK2.
La supervivencia global estimada por la mejor respuesta a la quimioterapia de inducción usando curvas de supervivencia de Kaplan-Meier en base a la intensidad de la tinción nuclear y la cuantificación de pMK2 Los puntajes de los patólogos como NQ (Nuclear Cantidad).
Discusión
La quimioterapia induce daños en el ADN en las células tumorales. Por lo tanto la capacidad de reparar tales daños utilizando vías específicas de reparación del ADN es probable predictivo de sensibilidad a los fármacos /resistencia, y el resultado del tratamiento. De este modo, los biomarcadores de diagnóstico de reparación del ADN tienen el potencial de cambiar significativamente las estrategias de diagnóstico y afectar la toma de decisiones terapéuticas y plan de tratamiento para los pacientes con cáncer de cabeza y cuello. En nuestro estudio, se evaluaron ocho marcadores biológicos de reparación del ADN en cinco diferentes vías de reparación del ADN mediante técnicas de inmunohistoquímica en la cabeza-locorregional avanzado y cáncer de cuello. No se observaron variaciones significativas en múltiples vías de reparación del ADN en los tumores HNSCC que sugieren que las decisiones clínicas pueden estar influidos por un perfil de biomarcador de reparación del ADN (Figuras 1, 2). Entre todos los biomarcadores de reparación del ADN que hemos analizado, XPF fue la única y mejor marcador para predecir la respuesta a la quimioterapia de inducción mediante análisis univariante; los bajos niveles de expresión de XPF en pacientes con cáncer de cabeza y cuello se asociaron con una mejor respuesta a la quimioterapia de inducción. Los altos niveles de expresión XPF en pacientes de cabeza y cuello correlacionados con peor respuesta a la quimioterapia basada en platino coherente con los informes anteriores [38]. Por el contrario ERCC1 (8F1), detectada por el anticuerpo (clon 8F1) de uso común, en nuestro conjunto de la cohorte no se correlacionó con la respuesta, que puede referirse a su especificidad más pobre (Figuras 3 y 4, Tabla 1). ERCC1 (8F1) el rendimiento no era adecuado en nuestro estudio y que postula que la especificidad disminuida puede ser compensada por mayores tamaños de muestra como se ha visto en otros estudios [18] - [20]. Además, es posible que el ERCC1 8F1 mide algo diferente de ERCC1, que se correlaciona con la supervivencia.
Mientras que la respuesta del paciente a la quimioterapia de inducción es un predictor potencial de buen resultado general según lo informado por varios grupos [4], [5 ], [39] - [41], la supervivencia global sigue siendo clínicamente más significativo. pMK2 se encontró que se correlaciona significativamente (p = 0,01) con la supervivencia global. Desde pMK2 no parece referirse a la inducción de respuesta puede ser un marcador potencial de éxito del tratamiento de la quimiorradioterapia concomitante (Figura 5, Tabla 2), en consonancia con los datos preclínicos [42].
Dada la heterogeneidad de la cabeza y el cuello cáncer, y la red intrincadamente conectada de seis de las principales vías de reparación del ADN, no es razonable anticipar que las pruebas de diagnóstico significativa puede depender de un solo marcador, específica. A medida que nuestro estudio sugiere, marcadores para la inducción y quimiorradioterapia son probablemente diferentes. Por otra parte, la remuneración de la reparación del ADN en ausencia de una vía de reparación por otra vía sugiere la posibilidad de que varios marcadores pueden ser necesarias para evaluar la capacidad de respuesta óptima. Dicha firma de respuesta de reparación del ADN tendrá que ser evaluado por nuestro grupo, utilizando una cohorte más amplia y puede permitir una mejor evaluación de HNC heterogeneidad y complejidad de las redes de reparación del ADN.
En conclusión, nuestro estudio proporciona un método establecido para medir marcadores biológicos de reparación del ADN y otros biomarcadores mediante inmunohistoquímica cuantitativa para identificar y evaluar los cambios funcionales en la reparación del ADN y la señalización de daño vías como una herramienta valiosa para el diagnóstico personalizados. Nuestros resultados indican la utilidad de XPF como un biomarcador para predecir qué pacientes se benefician de los tratamientos con quimioterapia de inducción. Específicamente XPF demostró ser superior a la prueba ERCC1 (8F1). XPF también puede tener valor para predecir el éxito del tratamiento global, lo que potencialmente se refiere a su función para la predicción de la respuesta de inducción [25]. Por otra parte, nuestros resultados sugieren que pMK2 es un marcador potencial para la quimiorradioterapia, ya que no se correlacionó con la respuesta de inducción, pero se correlaciona fuertemente con la supervivencia global. Una validación adicional de estos marcadores en una cohorte más grande de pacientes con cáncer de cabeza y cuello avanzado es un imperativo y nuestras observaciones son en gran parte la hipótesis de formación en este punto, pero son consistentes con otra literatura [38]. En última instancia, múltiples marcadores pueden ser necesarias para evaluar de forma óptima las muestras de tumor, y proporcionar la máxima información a los médicos tratantes.
Reconocimientos
asistente de vuelo Instituto de Investigación Médica (FAMRI) YCSA (TYS), la Investigación del Cáncer Fundación YIA (TYS), ASCO traslación de profesor premio (EEV). Nos gustaría agradecer al Dr. Brian E. Ward por su continuo apoyo.