Extracto
El cáncer de esófago sigue siendo la sexta causa principal de cáncer asociado a la muerte y el cáncer más común en todo el mundo octava. Los factores genéticos, tales como polimorfismos de nucleótido único (SNP), pueden contribuir a la carcinogénesis del cáncer de esófago. A continuación, se realizó un estudio de casos y controles basado en el hospital para evaluar la susceptibilidad genética de los SNP funcionales en el desarrollo de cáncer de esófago. Un total de 629 casos de esófago carcinoma de células escamosas (CECA) y 686 controles fueron incluidos en este estudio. El
OPG
rs3102735 T & gt; C, rs2073618 G & gt; C,
RANK
rs1805034 T & gt; C,
RANKL
rs9533156 T & gt; C y rs2277438 A & gt; G se determinaron mediante ligación método de la reacción de detección. Nuestros hallazgos sugieren que
RANK
rs1805034 T & gt; C se asocia con la susceptibilidad de la CECA, que es más evidente en (≥63) de los pacientes de sexo masculino y mayores. Nuestro estudio proporciona la primera evidencia de que los polimorfismos funcionales
RANK
rs1805034 T & gt; C puede ser un indicador de la susceptibilidad individual a la CECA. Sin embargo, se necesitan estudios más grandes entre las diferentes poblaciones étnicas para verificar nuestra conclusión
Visto:. Yin J, Wang L, W Tang, Wang X, Lv L, Shao A, et al. (2014)
RANK
rs1805034 T & gt; C polimorfismo está asociado con la susceptibilidad de cáncer de esófago en una población china. PLoS ONE 9 (7): e101705. doi: 10.1371 /journal.pone.0101705
Editor: Xin-Yuan Guan, la Universidad de Hong Kong, China
Recibido: Enero 15, 2014; Aceptado: June 11, 2014; Publicado: 14 Julio 2014
Derechos de Autor © 2014 Yin et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio fue apoyado en parte por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81370001, 81101889, 81000028, 81300037), Jiangsu Fundación de Ciencias Naturales Provincia (BK2010333, BK2011481), El "333" Programa de Capacitación elitista de Jiangsu (BRA2013135). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
a pesar de los últimos avances médicos considerables, cáncer de esófago sigue siendo una enfermedad refractaria con alta morbilidad y mortalidad. En esencia, el cáncer de esófago es el 6
ª causa principal de la mortalidad relacionada con el cáncer y el 8
º cáncer más común en todo el mundo [1]. Hay más de 450.000 pacientes con diagnóstico de cáncer de esófago en todo el mundo y la incidencia sigue en aumento rápidamente. Mientras tanto, la tasa de supervivencia global a 5 años oscila entre el sorprendente 15~25% [2]. En China, más sorprendentemente, el cáncer esofágico ocupa el 5
º cáncer diagnosticado más común y 4
ª causa principal de la mortalidad relacionada con el cáncer [3]. carcinoma de células escamosas de esófago (CECA) es el tipo histológico predominante de cáncer de esófago [1]. Aunque la estrategia terapéutica multidisciplinar se ha recomendado, el pronóstico sigue siendo pobre. El consumo de tabaco [4], [5], el consumo de alcohol [4], [6], el estado socioeconómico bajo, la mala higiene oral y las deficiencias nutricionales [2], [7] - [9] han sido identificados como factores de riesgo para el cáncer de esófago . Sin embargo, sólo un subconjunto de individuos expuestos a estos factores de riesgo, finalmente, el desarrollo de cáncer de esófago, lo que indica un papel fundamental de los factores genéticos, tales como polimorfismos de nucleótido único (SNP), en la carcinogénesis de esófago.
Recientemente, la osteoprotegerina ( OPG), su unión a proteínas del receptor activador de NF-kappa B (RANK) y el ligando de RANK (RANKL) han sido implicados con la patogénesis del cáncer de mama [10]. OPG fue inicialmente identificado a partir de un intestino de rata fetal cDNA biblioteca [11], que es único para el que sólo existe como una molécula secretada en contraste con los otros miembros de la superficie celular unidas a la membrana del factor de necrosis tumoral receptor (TNF-R) de la familia. RANKL es la proteína de unión de OPG (ligando también llamado OPG, OPGL) [12], [13], mientras que RANK constituye el receptor de la superficie celular que las respuestas a OPGL. En numerosos modelos de roedores de tumor, la señal de RANKL se incrementa a través de diversos mecanismos de [14]. OPG neutraliza RANKL, lo que conduce a una interacción RANKL-RANK reducida [12]. RANKL expresión se verificó en varios tipos de tumores y las células inflamatorias asociadas con tumor [15] - [17]. La elevación en RANKL del estroma se ha detectado en los sitios locales de metástasis ósea o el mieloma múltiple [18], [19], haciendo que la actividad de los osteoclastos mejorada y la destrucción ósea. En modelos experimentales, los inhibidores de RANKL reducen osteolisis inducida por tumor en diversos tipos de cáncer [14], la reducción de la destrucción ósea, la progresión del tumor esquelético, así como la carga del tumor [17], [20], [21]. Además, la vía RANKL-RANK puede contribuir a la tumorigénesis y metástasis primaria con independencia de sus efectos sobre la osteólisis relacionada con el tumor. Regulado por factores que incluyen la prolactina y la progesterona, RANKL podría conducir la respuesta mitogénica principal de epitelio mamario y la expansión de células madre mamarias través de la activación de RANK [22] - [24], por lo tanto, que puede inducir cáncer mamario, ofreciendo un objetivo más transformación susceptible piscina. RANKL puede regular la formación de tumores mamarios espontáneos y metástasis impulsado por el potente oncogén
Neu gratis (
ErbB2
). bloqueo RANKL atenúa eficazmente la formación de tumores de mama y metástasis pulmonar en el modelo de ratón transgénico MMTV-Neu [25], [26]. Curiosamente, OPG puede servir como un regulador positivo de la formación de microvasos y puede promover la neovascularización [27] que es importante para la progresión del tumor. la sobreexpresión de OPG por las células de cáncer de mama aumenta el crecimiento del tumor ortotópico y óseo [28]. A la luz de todos estos hallazgos, vía de señalización de RANKL /RANK /OPG ha surgido como una prometedora diana terapéutica del cáncer. Denosumab, un anticuerpo monoclonal contra RANKL, ha sido aprobado para el tratamiento de la osteoporosis posmenopáusica y metástasis óseas en el cáncer de mama [29].
Las variaciones genéticas en los genes que codifican RANK, RANKL y OPG se encontraron a afectar a la artritis reumatoide [30], la enfermedad de Paget del hueso [31], osteoporótica de cadera fractura [32]. Más importante aún, en la población caucásica, una asociación significativa de los SNP rs3102735 (
OPG
) con la susceptibilidad a desarrollar cáncer de mama se ha informado [10]. La importancia funcional de RANK /RANKL /OPG vía y estudio piloto en el cáncer de mama señalización nos han llevado a investigar la asociación entre el cáncer de esófago y SNPs en los genes de
RANK
,
Opiniones y RANKL
OPG
. En un estudio de casos y controles basado en el hospital, se realizó un análisis de genotipificación de los cinco miARN SNPs en 629 casos y 686 controles CECA en una población china.
Métodos
Declaración de Ética
Este estudio de casos y controles de base hospitalaria fue aprobado por el Consejo de la Universidad de Jiangsu (Zhenjiang, china) Revisión. Todos los sujetos dieron su consentimiento informado por escrito para ser incluidos en el estudio. Hemos cumplido con la Declaración de la Asociación Médica Mundial de Helsinki respecto a la conducta ética de la investigación con sujetos y /o animales humanos.
Las poblaciones de estudio
Un total de 1.315 participantes que consisten en 629 pacientes con cáncer de esófago y 686 no oncológico controles emparejados por la frecuencia de los casos con respecto a la edad (± 5 años) y sexo se inscribieron en este estudio (Tabla 1). Todos los pacientes y controles fueron reclutados consecutivamente desde el Hospital Popular Afiliado de la Universidad de Jiangsu y el Hospital Afiliado de la Universidad de Jiangsu (Zhenjiang, China) entre octubre de 2008 y diciembre de 2010. Todos los casos de cáncer de esófago fueron diagnosticados histológicamente la CECA. Los pacientes que tenían antecedentes de cáncer /metástasis de cáncer o habían recibido quimioterapia /radioterapia fueron excluidos de este estudio.
Cada sujeto fue interrogado personalmente por entrevistadores experimentados que utilizan un cuestionario para obtener información sobre los datos demográficos (por ejemplo, edad, sexo) y los factores de riesgo relacionados (incluyendo el consumo de tabaco y el consumo de alcohol). Después de la entrevista, se recogieron muestras de 2 ml de sangre venosa de cada sujeto. "Los fumadores" subgrupo incluyen los individuos que fumaban un cigarrillo al día durante & gt; a 1 año. Los sujetos que consumieron ≥ 3 bebidas alcohólicas a la semana durante & gt;. 6 meses se subdividen en "bebedores de alcohol" categoría
extracción de ADN genómico, SNP selección y Genotipado
ADN genómico se aisló de sangre periférica usando QIAamp DNA Mini Kit Blood (Qiagen, Berlin, Alemania) como se informó anteriormente [33]. La muestra de ADN se amplificaron por PCR de acuerdo con el protocolo del fabricante. Las muestras fueron genotipo utilizando el método de reacción de detección de ligadura (LDR) [34] (apoyo técnico de la Biowing Biotecnología Aplicada ™, Shanghai, China). Los análisis se repitieron en 160 muestras aleatorias (12,17%), con una alta calidad de ADN para control de calidad.
Análisis estadísticos
Las variaciones de las características demográficas, variables seleccionadas, y genotipos de la
OPG
rs3102735 T & gt; C, rs2073618 G & gt; C,
RANK
rs1805034 T & gt; C,
RANKL
rs9533156 T & gt; C y rs2277438 A & gt; G variantes entre los casos y los controles fueron evaluados utilizando la
χ
2 test. Las asociaciones entre los cinco SNPs y riesgo de CECA se evaluó mediante el cálculo de las RUP y se analiza su IC del 95% utilizando regresión logística para las RUP crudo y ajustado RUP al ajustar por edad, sexo, tabaquismo y el estado de consumo de alcohol. El equilibrio de Hardy-Weinberg (HWE) se puso a prueba por una bondad del ajuste
χ
2 prueba para comparar las frecuencias genotípicas observadas a los esperados entre los sujetos de control. Todos los análisis estadísticos se realizaron con SAS 9.1.3 (SAS Institute, Cary, NC).
Resultados
Características de la población estudiada
Características de los casos y los controles incluidos en el estudio se resumen en la Tabla 1. los casos y los controles se adaptan adecuadamente a la edad y el sexo según la evaluación de los
χ
2 pruebas. En particular, existe una diferencia significativa tanto en el consumo de tabaco y alcohol potable estado entre los pacientes CECA y los controles (
p Hotel & lt; 0,001)
La información primaria para los cinco genotipo SNPs se muestra en la tabla. 2. En todas las muestras de 1315, la tasa de éxito del genotipado fue 95,13%, 96,35%, 96,43%, 96,43% y 96,81% para
OPG
rs3102735 C & gt; T,
OPG
rs2073618 G & gt; C,
RANK
rs1805034 T & gt; C,
RANKL
rs9533156 T & gt; C y
RANKL
rs2277438 A & gt; G, respectivamente. Las tasas de concordancia de análisis repetidos alcanzó el 100%. En cuanto a la menor frecuencia de alelos (MAF), no hubo diferencia significativa entre los controles y la base de datos de los sujetos chinos para los cinco SNPs. Las frecuencias genotípicas observadas para
OPG
rs3102735 C & gt; T,
OPG
rs2073618 G & gt; C,
RANK
rs1805034 T & gt; C,
RANKL
rs9533156 T & gt ; C y
RANKL
rs2277438 a & gt;. G polimorfismos en los controles fueron en HWE (
p
= 0,191, 0,371, 0,531, 0,488 y 0,700, respectivamente) (Tabla 2)
Asociaciones entre los
OPG
rs3102735 C & gt; T,
OPG
rs2073618 G & gt; C,
RANK
rs1805034 T & gt; C,
RANKL
rs9533156 T & gt; C,
RANKL
rs2277438 a & gt; G polimorfismos y el riesgo de CECA
la Tabla 3 resume la distribución de los genotipos de los cinco polimorfismos SNP en casos y controles. En el único locus análisis, las frecuencias genotípicas de
RANK
rs1805034 T & gt; C fueron 45,9% (TT), el 42,9% (TC) y el 11,2% (CC) en el caso de los pacientes y el 50,5% (TT), 41,8% (TC) y 7,7% (CC) en los sujetos control. En el modelo recesivo, cuando el
RANK
rs1805034 TT genotipos /TC se utilizaron como grupo de referencia, el genotipo CC homocigoto se asoció con un aumento significativo del riesgo para la CECA (CC vs TT /TC: OR ajustada = CI 1,52, 95% = 01/03 a 02/24,
p = 0,036
). Cuando el
RANK
rs1805034 genotipo TT homocigótico se utilizó como grupo de referencia, el genotipo CT no se asoció con el riesgo de CECA (TC vs TT: OR ajustada = 1,16 IC 95% = 01.03 a 02.24,
p = 0,231
), pero el genotipo CC se asoció con el riesgo de CESS (CC vs TT: OR ajustada = 1,62; IC del 95% = 1,08 a 2,44,
p = 0,019
). En el modelo dominante, el
RANK
variante rs1805034 CC se asoció con el riesgo de CECA, en comparación con el genotipo TT (OR ajustada = 1,62; IC del 95% = 1,08 a 2,44,
p
. = 0,019) guía empresas
No se encontró asociación se detectó entre los
OPG
rs3102735 C & gt; T,
OPG
rs2073618 G & gt; C,
RANKL
rs9533156 T & gt; C,
RANKL
rs2277438 A & gt;. polimorfismos G y el riesgo de CESS (Tabla 3)
análisis Estratificación de
RANK
rs1805034 T & gt; genotipo C y riesgo de CECA
para evaluar los efectos de
RANK
rs1805034 T & gt; C genotipo sobre el riesgo de la CECA según diversa edad, sexo, tabaquismo y consumo de alcohol; hemos realizado los análisis de estratificación (Tabla 4). Un aumento significativo del riesgo de CECA asociado con el
RANK
rs1805034 T & gt; C polimorfismo fue evidente entre los pacientes masculinos (CC vs TT: OR ajustada = 1,89, IC del 95% = 1.16 a 3.8,
p
= 0,011) (TC /CC vs TT, OR ajustada = 1,38; IC del 95% = 1,05 a 1,81,
p = 0,022
) (CC vs TT /TC, OR ajustada = 1,68, 95 CI = 1,05-2,69%,
p = 0,031
). Del mismo modo, en pacientes ancianos (≥63 años),
RANK
rs1805034 T & gt; C polimorfismo también se asoció con un aumento significativo del riesgo de CECA (CC vs TT, OR ajustada = 1,84; IC del 95% = 1,02 -3,31,
p = 0,041
) (Tabla 4).
Discusión
En este estudio de casos y controles basado en el hospital de la CECA, se investigó la asociación de
OPG
rs3102735 C & gt; T,
OPG
rs2073618 G & gt; C,
RANK
rs1805034 T & gt; C,
RANKL
rs9533156 T & gt; C y
RANKL
rs2277438 a & gt; G polimorfismos con riesgo de CECA en una población china. Nuestros análisis logística multivariable demostraron que
RANK
rs1805034 T & gt; C genotipo tiene un mayor riesgo de CECA. asociación significativa con un mayor riesgo de CECA se observó entre los pacientes masculinos y pacientes ancianos (≥63 años). Para nuestro conocimiento, este es el primer estudio que demuestra una asociación significativa entre el
RANK
rs1805034 T & gt; C genotipo con la susceptibilidad de la CECA
OPG se derivó inicialmente de una etiqueta de secuencia expresada de una. biblioteca de cDNA fetal intestino de rata que codifica un polipéptido 401 aminoácidos [11]. Posteriormente, un papel fisiológico de OPG en el mantenimiento de la masa ósea normal se subrayó en varios estudios [11], [35], [36]. El hallazgo más tarde en la línea celular mielomonocítica murino 32D condujo a la identificación de la proteína de unión de OPG o OPGL, que tiene una secuencia idéntica como RANKL y fue implicado más con el desarrollo de los osteoclastos [12]. La secuenciación directa de una biblioteca de ADNc de células dendríticas mieloides RANK derivada de la médula ósea humana identificada como un nuevo homólogo de TNFR [13]. Posteriormente, RANKL se identificó de la línea celular de timoma murino EL40.5 [13], así como en las células T [37]. RANKL existe como un homotrímero e induce la agrupación de receptores después de incidir RANK en la superficie celular, en consecuencia, hace que la agrupación de receptores. eventos de activación dentro de la célula se inician a través de factores asociado a TNFR siguientes suficiente agrupación RANK. Las variantes genéticas en el locus de OPG previamente han sido implicados con fracturas por osteoporosis [38], el recambio óseo [39], la densidad mineral ósea [40], la osteonecrosis [41], neuroartropatía diabética [42], así como la espondilitis anquilosante [43]. Las alteraciones en el
RANK
locus y /o genes relacionados funcionalmente, como
RANKL
, también se ha informado de estar asociado con la artritis reumatoide [30], la calcificación aórtica [44], mineral ósea densidad [39] y la enfermedad de Paget de los huesos [31]. Recientemente, la evidencia emergente ha indicado una asociación entre el
OPG
/
RANK
/
RANKL
polimorfismos de genes con la carcinogénesis. Varios estudios demostraron loci adicional que se asocia con el cáncer de mama incluyendo la región cromosómica 8q24 para
OPG
de genes [45], [46]. rs3102735 SNP de la
OPG
gen ha sido informado de que se asociado con la susceptibilidad de cáncer de mama en la población caucásica [10]. Del mismo modo, una variante genética cerca del extremo 5 'de
RANK
(rs7226991) se asoció con un riesgo de cáncer de mama [47]. El mecanismo subyacente a la asociación permanece en la oscuridad hasta el momento. Sin embargo, gran mayoría de la asociación en el cromosoma 8q24 se encuentra aproximadamente a 128 Mb y se relaciona con diversas entidades tumorales, además de cáncer de mama, incluyendo el de próstata [48] y el cáncer de colon [49].
Entre las diferentes cohortes étnicos , las frecuencias de polimorfismos genéticos varían drásticamente. Nuestro estudio demostró que la frecuencia de
RANK
rs1805034 C fue 0.286 entre 686 sujetos de control en la población china, que es menor que la de Europea (0.438) y afroamericanos (0.478), pero similar a la población japonesa ( 0,311). Sin embargo, curiosamente, otro estudio informó la frecuencia de
RANK
rs1805034 C fue de 0,476 en la población de Han del norte de China, que se diferencia nuestro hallazgo en la cohorte del este de China, lo que sugiere el impacto étnica también podría ser interferido con los factores ambientales regionales (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp_ref.cgi? rs = 1.805.034). Uso de la alimentación y tamaño de la muestra de cálculo (PS, la versión 3.0.43 de 2009, http://biostat.mc.vanderbilt.edu/twiki/bin/view/Main/PowerSampleSize), teniendo en cuenta
RANK
rs1805034 T & gt; C alelos mutantes, el poder de nuestro análisis (α = 0,05) fue de 0,946 en 629 CECA casos y 686 controles con OR ajustada 1,52. En el subgrupo masculino, el poder de nuestro análisis fue de 0.995 casos entre 434 y 438 sujetos de control, con el OR ajustado 1,89. En la cohorte para personas mayores (≥63), el poder del análisis (α = 0,05) fue de 0.962 a 314 casos y 312 controles con OR ajustada 1,84. El presente estudio ha puesto de manifiesto la asociación con un mayor riesgo de CECA entre los pacientes masculinos y pacientes ancianos (≥63 años de edad), que estaba en consonancia con el informe anterior. En un estudio retrospectivo que incluyó a 74,854 pacientes CECA desde el norte de China, la prevalencia entre los varones fue mayor que entre las mujeres, similar a nuestros hallazgos. Por otra parte, este estudio demostró que a pesar de la prevalencia se redujo de manera significativa, la edad de aparición de la mediana de la CECA pospone [50], la verificación de nuestra idea de que la población de mayor edad tiene mayor riesgo.
En conclusión, nuestro estudio proporciona con el evidencia de que el polimorfismo funcional de
RANK
rs1805034 T & gt; C está asociado con la susceptibilidad de la CECA. Reconocemos que hay varias limitaciones en este estudio que necesitan ser abordados. En primer lugar, los sujetos del estudio fueron reclutados de varios centros médicos locales trabajan en una misma zona, que pueden no representar completamente la población china en general, sobre todo cuando existen diversos factores ambientales regionales. En segundo lugar, la información detallada con respecto a la metástasis del cáncer y la supervivencia no se proporcionaron como el estudio de seguimiento está todavía en curso, lo que dificulta aún más el análisis del impacto de estos polimorfismos SNP en la progresión de la CECA y el pronóstico. Por último, como las complejidades epidemiológicos de cáncer de esófago son muy amplias, lo que hace la detección y prevención limitados en el mejor. La asociación entre los factores de nutrición, la exposición a toxinas fúngicas o N-nitroso-compuesto en los alimentos y el riesgo de CECA no se estudia. Otros estudios entre diferentes regiones o poblaciones étnicas con diversas condiciones de nutrición, y complementado con análisis funcionales, están garantizados para verificar nuestros hallazgos.
Reconocimientos
Deseamos agradecer al Dr. Chen Yiqun (Shanghai Biowing Biotecnología Aplicada Company, http://www.biowing.com.cn) para soporte técnico.