Extracto
Antecedentes
Hemos investigado cómo el tamaño corporal y la actividad física influir en el riesgo de la isla CpG methylator fenotipo (CIMP) en el cáncer colorrectal (CCR).
Métodos
en el estudio de cohortes Países Bajos (n = 120.852), se auto-reportados en los factores de riesgo la línea de base en el año 1986. Después de 7,3 años de seguimiento, 603 casos y 4.631 miembros de la sub-cohorte estaban disponibles. estado CIMP de acuerdo con los marcadores Weisenberger se determinó usando PCR específica de metilación en el ADN de parafina tejido tumoral. las tasas de riesgo (HR) y los intervalos de confianza del 95% para CIMP (27,7%) y no CIMP (72,3%) tumores se calcularon de acuerdo con el IMC, índice de masa corporal a los 20 años, el cambio del IMC, pantalones /tamaño de la falda, la altura y la actividad física .
resultados
IMC modelada por cada 5 kg /m
2 aumento se asocia tanto con tumores no-CIMP CIMP y, sin embargo, los CRI se atenuaron cuando se ajusta, además, para pantalón /falda de tamaño . tamaño del pantalón /falda, por 2 aumento de tamaño, se asoció con ambos subtipos de tumores, incluso después del ajuste por índice de masa corporal (CIMP HR: 1,20; IC del 95%: 1,01 a 1,43; no CIMP HR: 1,14; IC del 95%: 1.4 a 1.28 ). Altura por 5 cm se asoció con ambos subtipos de tumores, pero los CRI se atenúa cuando se ajustó por peso corporal. IMC a los 20 años se asoció positivamente con un mayor riesgo de tumores CIMP y la asociación fue significativamente menos pronunciada para los tumores no-CIMP (
P
-heterogeneity = 0,01). La actividad física se asoció inversamente con ambos subtipos, pero no se observó una asociación dosis-respuesta sólo para tumores no CIMP (
P
-trend = 0,02).
Conclusiones
el tamaño del cuerpo, especialmente la adiposidad central, puede aumentar el riesgo de tumores tanto CIMP y los no-CIMP. La grasa corporal a temprana edad puede diferencialmente riesgo de influencia. La actividad física parece disminuir el riesgo de CCR, independientemente de estos subtipos moleculares
Visto:. Hughes LAE, Simons CCJM, van den Brandt PA, Goldbohm RA, de Goeij AF, de Bruine AP, et al. (2011) Tamaño del cuerpo, la actividad física y el riesgo de cáncer colorrectal con o sin CpG Island methylator fenotipo (CIMP). PLoS ONE 6 (4): e18571. doi: 10.1371 /journal.pone.0018571
Editor Syed A. Aziz, Health Canada, Canada |
Recibido: 15 Febrero, 2011; Aceptado: March 4, 2011; Publicado: 5 Abril 2011
Derechos de Autor © 2011 Hughes et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este proyecto fue financiado por el Fondo Mundial de Investigación del cáncer (WCRF), otorgar#2007/54 a Matty P. Weijenberg. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
es bien aceptado que los indicadores de balance de energía influyen en el riesgo de cáncer colorrectal (CCR). Un alto índice de masa corporal (IMC), circunferencia de la cintura, y ha alcanzado la altura de adultos son claros factores de riesgo para CRC, mientras que la actividad física se ha demostrado que protege [1]. Aunque CRC es uno de los cánceres describe mejor en términos de eventos genéticos y epigenéticos implicados [2] - [5], se sabe poco sobre cómo las medidas de antropometría y la actividad física se asocian con diferentes subgrupos moleculares de esta enfermedad. Dilucidar las posibles diferencias en el riesgo entre los subtipos moleculares de CRC puede conducir a una mejor comprensión de CRC, el tratamiento y la prevención. Esto es especialmente importante ya que la prevalencia global de sobrepeso y obesidad sigue aumentando.
Una nota característica de inestabilidad epigenética en el CCR es la isla CpG methylator fenotipo (CIMP), caracterizado por numerosos isla CpG promotor tumoral hypermethylated suppressor- y los genes de reparación del ADN [6] - [9]. Esto a su vez está asociada con el silenciamiento transcripcional de la expresión génica [10]. Pocos estudios han investigado las asociaciones entre los indicadores de balance de energía y el estado de la CIMP, y los que han, sólo se considera el IMC como indicador del tamaño del cuerpo. En un entorno de casos y controles, Slattery
et al.
Informó una asociación entre un IMC alto y CIMP baja, pero no CIMP tumores de colon altos [11], y ninguna asociación entre el IMC y la CIMP estado en tumores rectales [12 ]. La actividad física vigorosa se asoció con dos tumores de colon baja CIMP alto y CIMP, pero no los tumores de recto [11], [12]. Se ha planteado la hipótesis de que la metilación del ADN es una consecuencia de la inflamación [13], [14]. adiposidad central también está asociada con la inflamación crónica [15]. Por lo tanto, teniendo en cuenta el perímetro de cintura como un factor de riesgo para la CIMP, además de índice de masa corporal es importante. Además, la metilación se piensa que es un evento temprano en el CCR [16], por lo que teniendo en cuenta la altura y el IMC a una edad temprana también puede ser informativo ya que estas variables son indicativos de
en el útero Opiniones y exposiciones tempranas de la vida [17] .
Uso del Estudio prospectivo de cohortes sobre Holanda dieta y el cáncer (CEN), se investigó la asociación entre el índice de masa corporal, tamaño de la ropa (como sustituto de la circunferencia de la cintura) y la actividad física y el riesgo de desarrollar un tumor caracterizado por CIMP . Por otra parte, en un intento de dilucidar si el tiempo de exposición es importante para la modulación de este riesgo, que también investigó las asociaciones de acuerdo con el IMC a los 20 años, el cambio del IMC, y la altura alcanzada adultos.
Resultados
las características basales y moleculares se describen en la Tabla 1. Proporcionalmente, los casos CIMP CRC tenían más probabilidades de ser mujer, tiene un tumor en el colon proximal, y ser mayor de casos no CIMP.
las asociaciones entre se muestran las medidas de la antropometría, la actividad física y el riesgo de CCR en función del estado CIMP en la Tabla 2. Después de ajustar por edad y sexo, índice de masa corporal modelada por cada 5 kg /m
2 aumento fue estadísticamente significativamente asociada con tumores CIMP (HR: 1,29; IC del 95%: 1,01 a 1,66), y una relación estadísticamente significativa dosis-respuesta se observó en el modelado de los cuartiles de IMC (
P
-trend = 0,02). Sin embargo, cuando los modelos se ajustaron mutuamente para el tamaño del pantalón /falda, estas asociaciones se atenuaron considerablemente. IMC también fue positiva, aunque no estadísticamente significativa, asociado con tumores no CIMP. Estos también se atenuaron cuando se ajustan entre sí para el tamaño del pantalón /falda. Los CRI para la CIMP tumores y los no-CIMP no difirieron significativamente entre sí (
P
-heterogeneity = 0,78). IMC a los 20 años modelada por cada 5 kg /m
2 aumento se asoció con un mayor riesgo de ambos subtipos, pero los CR no alcanzó significación estadística. Cuando el IMC a los 20 años fue modelado en cuartiles, se observó una tendencia estadísticamente significativa para los tumores CIMP (
P
= 0,03). Esta tendencia se convirtió en el límite significativo cuando el modelo se ajusta según el tamaño del pantalón /falda (
P
-trend = 0,07). La prueba de heterogeneidad entre los subtipos de tumores fue estadísticamente significativa con respecto al índice de masa corporal a los 20 años, incluso después del ajuste para el tamaño del pantalón /falda (
P
-heterogeneity = 0,01). No estadísticamente significativas se observaron observaciones con respecto al cambio del IMC
Tamaño falda /pantalones, modelada por 2 aumento de tamaño de la unidad, se asoció tanto con CIMP (HR:. CI 1,20, 95%: 1,05 a 1,37 ) y los tumores no-CIMP (HR: 1,14 IC del 95%: 1.5 a 1.24) después del ajuste multivariado, y estas asociaciones se mantuvo incluso cuando los modelos se ajustaron mutuamente para el IMC. Cuando el tamaño del pantalón /falda fue considerado en cuartiles aproximados, la prueba de la tendencia fue significativa para CIMP (p = 0,02) y el límite significativos para los no-CIMP (
P = 0,06)
tumores, aunque éstos se atenuaron cuando los modelos fueron ajustados entre sí para el IMC. Asociaciones observadas CIMP tumores y los no-CIMP no fueron estadísticamente significativamente diferentes entre sí (
P
-heterogeneity = 0,61).
Altura, modelada por 5 cm de aumento se asoció tanto con CIMP ( HR: 1,16 IC del 95%: 1,01 a 1,33) y no CIMP (HR: 1,10 IC del 95%: 1,00 a 1,21) tumores después del ajuste multivariado. Se observó una tendencia estadísticamente significativa en el límite de riesgo de tumores no-CIMP cuando la altura se consideró en cuartiles (la más alta en comparación con el cuartil más bajo HR: 1,45 IC del 95%: 1.3 a 2.6;
P
= 0,06) (p- heterogeneidad = 0,98). Estas asociaciones se atenuaron cuando el modelo se ajustó mutuamente para el peso corporal.
Con la baja actividad física como categoría de referencia, no hubo una asociación inversa dosis-respuesta entre la actividad física y los tumores CIMP, aunque el CRI de física intermedia la actividad fue estadísticamente significativa (HR: CI 0,50, 95%: 0,30 a 0,82) (Tabla 3). Se observó una asociación inversa de una manera dosis-respuesta para tumores no CIMP (actividad física intermedia HR: 0,80; IC del 95%: 0,61 a 1,04; alta actividad física HR: 0,69; IC del 95%: 0,47 a 0,96;
P
-trend = 0,02), sin embargo, las asociaciones con CIMP tumores y los no-CIMP no difirieron significativamente entre sí (
P
-heterogeneity = 0,33).
Asociaciones para un índice de metilación tumor en relación con los factores de riesgo antropométricas y la actividad física se muestran en la Tabla 4. no hubo un patrón claro con respecto al grado de metilación, sin embargo, cuando modelada por 2 unidad aumentar tamaño, el tamaño de pantalones /falda se asoció de una manera dosis-respuesta con tumores que exhiben el más alto nivel de metilación (4-7 genes metilados de RH: 1,29; IC del 95%: 1,06 a 1,58;
P
-trend = 0,08)
Discusión
Estos datos sugieren que la grasa corporal y la altura adulta pueden aumentar el riesgo de CCR, pero no se asocian diferencialmente con CIMP tumores y los no-CIMP. Por el contrario, el IMC a los 20 años puede ser un fuerte factor de riesgo para los tumores CIMP +. la actividad física de base parece disminuir el riesgo de CCR, independientemente de la condición n CIMP.
Una de las principales de este estudio es que hemos investigado las asociaciones en un entorno de cohorte prospectivo. La Serie de Campeonato tiene determinación casi completa del cáncer colorrectal y muy poca pérdida durante el seguimiento. Aunque el número de total de CRC después de 7,3 años de seguimiento en la Serie de Campeonato fue sustancial, el número de casos con el fenotipo CIMP era pequeña. Con un poder limitado para detectar las asociaciones, es posible que algunos hallazgos surgieron por casualidad. Otra posible limitación de este estudio es que las variables antropométricas fueron obtenidos por auto-informe. Sin embargo, hay muchos ejemplos en la literatura que demuestran que este método es un instrumento válido y fiable para evaluar el peso corporal y la altura de los estudios de cohortes [18] - [21].
A nuestro entender, las asociaciones entre los indicadores de balance de energía y el estado de CIMP tumores colorrectales se han reportado solamente por Slattery
et al.
en un ajuste de casos y controles [11], [12]. Además del diseño del estudio, existen diferencias entre nuestros estudios que deben tenerse en cuenta al comparar los resultados.
La Serie de Campeonato utiliza el panel Weisenberger de los genes para definir CIMP (
CACNA1G, IGF-2, Neurog1, RUNX3
y
SOCS1
), mientras que el estudio de Slattery
et al.
, se utiliza el panel Classic (
MINT1, MINT2, MINT31, p16 y hMLH1
) , así como diferentes puntos de corte para definir CIMP en los tumores [22], [23]. La definición "correcta" de CIMP sigue siendo un tema muy debatido, como es el panel de genes ideal y el método adecuado para la detección de metilación [12], [24]. Aunque el panel Weisenberger ha sido validado, diferentes marcadores de metilación pueden ser más o menos informativo con respecto al estudio de diferentes exposiciones. La prevalencia de la CIMP en la población Serie de Campeonato es mayor que en el estudio de Slattery
et al
. (27% vs. 11%) [12]. Sin embargo, una diferencia en los diseños de cebadores y condiciones de PCR puede cambiar sustancialmente la sensibilidad y la especificidad de un marcador particular para la detección de CIMP en CRC [25]. Por lo tanto, es probable que las diferencias en la prevalencia no se deben a los diferentes métodos de por sí, sino más bien una diferencia en la elección de los cebadores. Los análisis de MSP que se han llevado a cabo en la Serie de Campeonato tienen una señal de detección de alto, y posteriormente, se ha observado una mayor prevalencia de CIMP. En el presente estudio, hemos tratado de aclarar nuestras observaciones mediante la construcción de un índice de metilación con diferentes puntos de corte que incluyeron siete genes metilados comúnmente en el CCR.
En el presente estudio hemos considerado tumores de colon y recto entre sí para aumentar el poder estadístico. Un análisis de sensibilidad reveló que este no sesgo nuestros resultados (datos no presentados). Además, se sugiere que idea de combinar los sub-localizaciones de tumores puede ser aceptable cuando se estudian los puntos finales moleculares, ya que esto puede ayudar a explicar las diferencias en la etiología de acuerdo con la sub-localización.
Hemos observado que el IMC se asoció tanto con tumor tumores CIMP y no CIMP; Sin embargo, después del ajuste de tamaño de la ropa, estas asociaciones desaparecieron. Esto está en contraste con los datos de cohorte de casos que sugieren que el IMC se asocia únicamente con los tumores de colon negativo CIMP y no con los tumores de recto [11], [12]. En nuestro estudio, el tamaño del pantalón /falda parece ser un predictor fuerte e independiente de ambos subtipos de tumores, incluso después del ajuste para el IMC. Esto es lógico, ya que la circunferencia de cintura, un indicador de adiposidad central, es un predictor más fuerte de la CRC que el IMC [1], [26]. Cuando consideramos las asociaciones de acuerdo con un índice de metilación, no se observó una asociación clara con respecto al índice de masa corporal y el grado de metilación del promotor, sin embargo, no nos observamos que el tamaño del pantalón /falda se asoció con el más alto nivel de metilación. Que observamos asociaciones entre el tamaño del pantalón /falda y tanto CIMP y los tumores no-CIMP sugiere que la adiposidad central puede influir en el riesgo de CCR a través tanto de una metilación y una vía no-metilación.
A pesar de que muy pocos estudios han examinado las asociaciones entre el IMC y la CIMP, varios han tenido en cuenta criterios de valoración en la misma vía que CIMP. El cáncer colorrectal tiene subgrupos moleculares distintas, que evolucionan a través de diferentes vías [16]. La ruta a un adenocarcinoma de sierra parece tomar una de dos rutas principales: la vía serrada tradicional o la vía serrada sésiles [27]. La vía serrada sésiles se caracteriza por un alto grado de CIMP,
BRAF V600E
mutaciones, y en última instancia se desarrolla en la inestabilidad de microsatélites (MSI) [27]. MSI puede servir como un marcador para CIMP u otros eventos moleculares en el CCR [28], por lo tanto, puede ser informativo para examinar las conclusiones de este estudio en el marco de esa investigación. Dos estudios de casos y controles han informado de que el IMC aparece asociado a tumores de microsatélites estables (MSS), y menos con tumores MSI [29], [30]. Ninguno de estos estudios asociaciones según la circunferencia de la cintura. En un análisis conjunto de la Serie de Campeonato reciente y los datos del Estudio de Cohorte de Colaboración Melbourne, observamos asociaciones similares, aunque la prueba de heterogeneidad entre los subtipos de tumores no fue estadísticamente significativa (Hughes
et al.
, Presentado).
Hay pruebas que sugieren que las exposiciones tempranas de la vida influyen en los mecanismos epigenéticos asociados con el riesgo de la enfermedad de adultos [31], [32]. Por lo tanto, también hemos investigado las asociaciones entre el IMC a los 20 años, el cambio del IMC, la altura y el estado CIMP. La altura es un marcador de una experiencia fetal y la infancia agregada, y se puede considerar una medida aproximada de importantes exposiciones nutricionales, que afectan a varios ejes hormonales y metabólicos [17]. En la Serie de Campeonato, hemos observado que la infancia y la restricción de energía de los adolescentes se asocia con una disminución del riesgo de CCR en el futuro [33], [34], que es apoyado por otros estudios basados en la población [35] - [37]. También informó recientemente de que la exposición a la restricción de energía severa durante la infancia y la adolescencia se asocia con un bajo riesgo de desarrollar un tumor CIMP [32]. Por otra parte, los datos combinados sugieren que los individuos más altos se encuentran en mayor riesgo de desarrollar un tumor MSI (Hughes
et al
. Presentado). De acuerdo con el presente estudio, la altura no es diferencialmente asociada con el riesgo de tumores, sin embargo, sí observamos una heterogeneidad significativa con respecto al índice de masa corporal a la edad de 20 y tumorales subtipos. Tomados en conjunto, nuestros resultados sugieren que el tamaño corporal puede influir en el estado de forma diferencial CIMP durante diferentes períodos de la vida, afectando potencialmente a más riesgo de CCR. La asociación entre el IMC a los tumores CIMP los 20 años y era más fuerte que con los tumores no CIMP, que está en consonancia con los resultados anteriores para la restricción severa de energía durante la infancia y la adolescencia. Aunque nuestro método de arranque es bastante conservadora, no se observó una asociación clara con respecto al índice de masa corporal a los 20 años y el índice de metilación y, por tanto, no podemos descartar que la asociación diferencial con el estado CIMP es un hallazgo casual. La hipótesis de que el tiempo de exposición puede influir en los mecanismos epigenéticos requiere más investigación.
Eso no se observó ninguna asociación clara entre el cambio del IMC y el riesgo de tumores fue sorprendente. Esto puede indicar que los cambios metabólicos en grasa pueden ser más importantes para la modulación de riesgo en el tiempo, en lugar de BMI. Por otra parte, teniendo en cuenta los hombres y mujeres juntos pueden haber atenuado estas observaciones. Campbell
et al.
Informar de que el aumento de peso adulto se asoció con CRC en los hombres, pero no en las mujeres, y sólo con respecto a los individuos que obtuvieron más de 21 kg desde el 20 [29] edad. Por último, considerando sólo dos puntos de tiempo no puede ser indicativo de un cambio verdadero índice de masa corporal.
Nuestros hallazgos con respecto a la actividad física apoyan los de Slattery
et al.
[11], y sugieren que la alta los niveles de ejercicio diario se asocian con un menor riesgo de tumores tanto CIMP y los no-CIMP. Las observaciones con respecto a nuestro índice de metilación sugieren que la actividad física puede ser más protectora de los tumores con el aumento de la metilación, pero se requiere más investigación antes de sacar conclusiones se pueden sacar.
La evidencia preliminar sugiere que los marcadores moleculares se pueden utilizar para clasificar cánceres colorrectales en subtipos distintos, que tienen implicaciones tanto para la etiología y la prevención [28]. tumores Menos surgen de la vía serrada sésiles en comparación con la vía de adenoma tradicional [27], [38]. A medida que el sobrepeso y la obesidad son factores de riesgo tales fuertes para CRC, existe la posibilidad de que estas condiciones pueden diferencialmente riesgo de influencia a través de las vías y mecanismos moleculares distintos de lo que hemos investigado aquí. Se necesita más investigación para clarificar la asociación entre los indicadores de balance de energía y mecanismos epigenéticos que conducen a la CRC; preferiblemente en un entorno de cohorte prospectivo, con muchos de los casos [39]. Además, como el campo de la epidemiología molecular patológica [40] sigue evolucionando, la estandarización de los métodos y definiciones de los criterios de valoración moleculares deben ser abordados. Esto será especialmente importante a medida que más oportunidades para la puesta en común de los datos surgen.
En conclusión, nuestros resultados sugieren que las medidas de antropometría que reflejan un gran tamaño corporal aumentan el riesgo tanto de CIMP y los tumores no-CIMP, y que la grasa corporal a temprana edad puede diferencialmente riesgo de influencia. La actividad física parece disminuir el riesgo de CCR, independientemente de estos subtipos moleculares. Nuestras observaciones reiteran la importancia de un peso corporal saludable con respecto a la prevención general CRC.
Materiales y Métodos
Las poblaciones de estudio y diseño em
La serie de campeonato es un estudio de cohorte prospectivo que se inició en 1986 para investigar la asociación entre la dieta y el desarrollo del cáncer. Incluye 58,279 hombres y 62,573 mujeres entre las edades de 55-69 años al inicio del estudio que completaron un cuestionario de frecuencia de alimentos autoadministrado la participación de 150 productos alimenticios, así como preguntas sobre los hábitos alimenticios, estilo de vida, la salud y la demografía. registros municipales de todo los Países Bajos se utilizaron para constituir un marco de muestreo eficiente. La Serie de Campeonato utiliza un caso - cohorte enfoque para el procesamiento y análisis de datos; sujetos caso se derivaron de toda la cohorte, y el número de años-persona en situación de riesgo para toda la cohorte se estimó a partir de una sub cohorte de 5.000 hombres y mujeres que se tomaron muestras al azar de la cohorte completa al inicio del estudio. Todos los miembros de la sub cohortes que informaron de cáncer prevalentes (excluyendo el cáncer de piel) al inicio del estudio fueron excluidos del análisis, dejando 4654. Otros detalles de la Serie de Campeonato de diseño se han descrito [41] - [43].
Los casos incidentes fueron CRC identificado por registro de vinculación anual a nueve registros de cáncer regionales y una base de datos nacional de la patología (PALGA) [44]. La integridad de cáncer de seguimiento es casi 100% [45]. Parafina embebido material tumoral de pacientes con CRC fue recuperada, como se describe anteriormente [46]. En total, 734 pacientes incidentes CRC se identificaron a partir de un período de seguimiento de 7,3 años después de la línea de base, con exclusión de los 2 primeros años de seguimiento, de los cuales se disponía de un informe PALGA de la lesión, así como suficiente ADN [46].
el protocolo de estudio fue aprobado por los Comités de Ética Médica del hospital Universitario de Maastricht y TNO Nutrition. Al entrar en servicio, los participantes fueron informados por escrito de los detalles del estudio y sus objetivos. De acuerdo con la normativa en ese momento, se obtuvo el consentimiento informado por escrito cuando los participantes devolvieron el cuestionario de referencia completado. Se recogió el material tumoral después de la aprobación de los comités de ética de la Universidad de Maastricht, el Registro Nacional del Cáncer, y PALGA.
Comprobación de factores de riesgo
Las variables antropométricas.
Altura ( cm), peso corporal (kg), y el peso corporal a la edad de 20 (kg) fueron auto-reportados en el cuestionario de referencia. A partir de estas variables, índice de masa corporal y el IMC a los 20 años, y el cambio del IMC se calculó posteriormente. Al inicio del estudio, también se pidió a los individuos para informar de su parte inferior del cuerpo (pantalón o falda) tamaño de la ropa de su marca de ropa (tamaños holandés). tamaño del pantalón /falda ha demostrado ser una medida representativa adecuada para la circunferencia de la cintura hora de predecir el riesgo de cáncer en la Serie de Campeonato, y los detalles de cómo el tamaño de la ropa se corresponde con las medidas de cintura en hombres y mujeres en esta población holandesa se ha publicado [47]. Índice de masa corporal, índice de masa corporal a los 20 años, la falda /pantalones tamaño, y la altura se clasificaron en cuartiles aproximados específicos del sexo. Al igual que en la Serie de Campeonato análisis anteriores, el cambio del IMC se clasificó como: & lt; 0 kg /m
2, 0-4 kg /m
2, 4-8 kg /m
2, y & gt; 8 kg /m
2 [48].
la actividad física.
con respecto a la actividad física y el riesgo de CCR en la población Serie de Campeonato, la actividad física en el trabajo parece ser más importante para los hombres y de recreo la actividad física para las mujeres para la predicción del riesgo (Simons
et al.
, presentado). Por lo tanto, hemos utilizado estas dos variables para crear categorías específicas del sexo de ', bajo' 'intermedia' y 'alta' la actividad física.
Actividad física
Ocupacional se deriva de los datos de los participantes historia ocupacional. Utilizando la información sobre el tipo de trabajo y la duración, el gasto de energía y sentado vez que se calculó para el trabajo retenido más largo y el último. El gasto de energía se basa en un sistema de clasificación desarrollado por Hettinger
et al
[49] y distingue entre el trabajo de baja, moderada y alta actividad que corresponde a un gasto energético de. & lt; 8, 8-12 y & gt ; 12 kJ /min. Los hombres se clasificaron en la categoría de "bajo" si su actividad física en el trabajo era & lt; 8 kJ /minuto, "intermedio" si caen en la categoría de 8-12 kJ /minuto, y alto si su actividad física ocupacional era & gt; 12 kJ /minuto.
actividad física no ocupacional de línea de base se calculó en base a dos preguntas. La primera pregunta (abierta) fue '¿Cuántos minutos pasa usted en promedio por día caminando o en bicicleta a su trabajo, para ir de compras o para sacar a su perro? "El tiempo pasado reportado por día se clasificó en ≤10, & gt; 10-30, & gt; 30-60 y & gt; 60 minutos por día. La segunda pregunta era "¿Cómo muchas horas de su tiempo de ocio no se gastan en promedio por semana en 1) paseos en bicicleta, caminando, 2) jardinería /haciendo pequeños trabajos y 3) los deportes, la gimnasia? 'Contestador posibilidades nunca fueron, & lt; 1 hora por semana, 1-2 horas por semana y & gt; 2 horas por semana. El tiempo dedicado a estas actividades y los minutos empleados por día en el pie o en bicicleta al trabajo, ir de compras o para llevar a cabo el perro se sumaron para obtener una medida global de la actividad física no ocupacional línea de base, con categorías y lt; 30, & gt ; 30-60, & gt; 60-90 y & gt; 90 minutos por día. Baja actividad física se define como & lt; 30 minutos /día, intermedia, tal como 30-90 minutos /día, y alto como & gt; 90 minutos /día
Promotor análisis de metilación
CIMP en el tumor. el tejido de los casos de CCR fue definida por el promotor CpG isla hipermetilación de al menos 3 de los 5 marcadores de metilación (
CACNA1G, IGF-2, Neurog1, RUNX3
y
SOCS1
), según lo propuesto por Weisenberger
et al.
[9] se determinaron mediante la modificación con bisulfito de 500 ng de ADN genómico utilizando un kit disponible comercialmente (Zymo Research), y la metilación posterior PCR específica (MSP) [50], [51]. Se optó por utilizar MSP como método porque es eficaz, específico y no requiere un equipo específico. Se ha demostrado que los resultados de MSP están en conformidad con otras tecnologías, tales como MethyLight [52]. Además, el estado de metilación de otros dos genes,
APC
y
MLH1
, se determinaron y las añadimos a los marcadores CIMP para crear un índice de metilación de siete genes.
Para facilitar el análisis MSP en el ADN recuperado de, tejido incluido en parafina fijado con formalina, el ADN se amplificó primero con flanqueando cebadores de PCR que amplifican el ADN con bisulfito modificado pero no amplifican preferentemente ADN metilado o no metilado. El fragmento resultante se utilizó como molde para la reacción MSP. Todas las PCR se llevaron a cabo con controles de alelos metilados (ADN de linfocitos normales), alelos metilados [trató ADN de linfocitos normales
in vitro
con
Sss
metiltransferasa (New England Biolabs, Ipswich, MA )] y un control sin ADN. Diez microlitros de cada reacción MSP se cargó directamente sobre desnaturalizante 6% en geles de poliacrilamida teñidos con bromuro de etidio y se visualizaron bajo iluminación UV. Los análisis MSP tuvieron éxito el 81%, 79%, 79%, 90%, 83%, 93% y 93% de los 734 casos de
CACNA1G, IGF-2, Neurog1, RUNX3, SOCS1
,
MLH1
, y
APC
respectivamente.
Los análisis estadísticos
Los datos fueron analizados con Stata (versión 10, Statacorp, College Station, TX, EE.UU.). Se utilizó el análisis de riesgos proporcionales de Cox utilizando el enfoque de cohorte de casos para obtener los coeficientes de riesgo (HR) y los intervalos de confianza del 95% (IC) para la asociación entre las medidas de la antropometría y la actividad física y el CRC se caracterizan por el estado CIMP. Para mejorar el poder estadístico, se consideró que los hombres y mujeres juntos. Las pruebas para la modificación del efecto por el sexo no fueron estadísticamente significativas. La asunción de riesgos proporcionales fue probada usando los residuos de Schoenfeld escala y la inspección visual de las curvas de peligro. Para dar cuenta de la variación adicional introducida mediante el muestreo de la subcohort de toda la cohorte, los errores estándar se estimaron utilizando la opción robusta. La significación estadística se puso a prueba en el nivel 0,05
.
Para todas las variables antropométricas de que se trate, se consideraron tres modelos. La primera se ajustó sólo por edad y sexo. La segunda se ajustó adicionalmente para las variables identificadas como asociadas con ambos CRC y el balance energético de la literatura anterior. Estos antecedentes incluidos familiares de CCR (sí /no), el consumo de tabaco (no fumador, ex fumador, fumador actual), el estatus socioeconómico (nivel de educación: la escuela primaria, secundaria, bachillerato, escuela profesional superior o universidad ), la ingesta total de energía (kcal /día), el consumo de alcohol (0, 0,1-4, 5-14, 15-29, ≥30 g /día), la actividad física (baja, media, alta como se ha descrito anteriormente), y el consumo de carnes rojas, frutas, verduras y granos (g /día). Por último, los modelos se ajustaron por las demás variables antropométricas. Los modelos que incluyen el IMC y el índice de masa corporal a los 20 años se ajustaron mutuamente para el tamaño de la falda /pantalón, el cambio del IMC se ajustó para el IMC a los 20 años, el tamaño del pantalón /falda se ajustó para el IMC, y la altura se ajustó al peso corporal.
nos inspira la actividad física ajustada por edad y sexo, y, además, ajustado por pantalones /tamaño de la falda, antecedentes familiares de CCR (sí /no), el tabaquismo (nunca fumador, ex fumador, fumador actual), el estatus socioeconómico (nivel de educación: la escuela primaria, secundaria, bachillerato, escuela profesional superior o universitaria), la ingesta total de energía (kcal /día), el consumo de alcohol (0, 0,1-4, 5-14, 15-29, ≥30 g /día ), tamaño de la ropa, y el consumo de carnes rojas, frutas, verduras y fibra (g /día).
Para evaluar cómo las medidas de antropometría y la actividad física se asociaron con el grado de metilación del promotor en los tumores de CRC , se utilizó el índice de metilación mencionado para clasificar los casos en uno de tres grupos: '0-1 genes metilados', '2-3 genes metilados ", o" genes metilados 4-7'. De los 734 casos, 556 tenían información suficiente para clasificar en una de las tres categorías. Los modelos que incluyen variables antropométricas se ajustaron por edad, sexo y ajustadas por las demás variables antropométricas como se ha descrito anteriormente, y el modelo para la actividad física se ajustaron por edad y sexo.
Las pruebas de heterogeneidad se realizaron para evaluar las diferencias entre subtipos de tumores (por ejemplo,
CIMP vs.
no CIMP) utilizando el procedimiento de riesgos competitivos en STATA. Sin embargo, la SE para la diferencia de las tasas de registro de peligros de este procedimiento se da por la independencia de ambos coeficientes de riesgo estimado, lo que sobrestimar que SE y por lo tanto sobreestimar los valores de
P Opiniones sobre sus diferencias. Por lo tanto, estos
Los valores P
y se calcularon los intervalos de confianza asociados sobre la base de un método de arranque que fue desarrollado para el diseño de cohorte de casos, tal como se describe anteriormente [53]. Cada análisis de arranque se basó en 1000 repeticiones.
Reconocimientos
Estamos en deuda con los participantes de este estudio y las gracias a los registros de cáncer (IKA, IKL, IKMN, IKN, IKO, ikr, IKST , IKW, IKZ, y VIKC) y los Países Bajos a nivel nacional Registro de Patología (PALGA). También se agradece a S van de Crommert y J Nelissen por su ayuda con la entrada de datos y gestión de datos; Un Volovics y A Kester para el asesoramiento estadístico; L Schouten, de Zwart C, H Moll, W van Dijk, M Jansen, y A Pisters de asistencia; y H Van Montfort, T van Moergastel, L van den Bosch, y R Schmeitz para la programación; K Wouters, S Hulsmans, y A Spiertz para la asistencia de laboratorio.