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, un inhibidor farmacológico de CDK2, con éxito la reproducción inhibido del TARGA prueba de VIH de tipo salvaje y mutantes en -1 TO- PBMCs y monocitos, células que revelan que la acción CDK2 se precise en relación con el VIH reproducción -1. Recientemente hemos demostrado que siRNA dirigido contra-CDK2 inhibe inducida por Tat del VIH-1transcription y el VIH-1 de replicación viral. Por lo tanto nuestra investigación presente, así como nuestros informes anteriores señalan CDK2 como un importante regulador del VIH-1 transcription.Until fue considerado últimamente CDK2 EDAD /ciclina que se necesiten para la progresión del ciclo celular y que CDK2 regula el cambio G1ANDS mediante la fosforilación de Rb facetas secuestradoras , incluyendo E2F. Bay 11-7821
conclusiones recientes cuestionó esta función de CDK2. CDK2 ratones bump de salida eran viables, aconsejando que CDK2 es prescindible para el éxito y la expansión de todos los tipos de células. Del mismo modo, la inhibición de la actividad de CDK2 través expresión de p27 Kip1, CDK2 dominante negativo, los oligonucleótidos antisentido o ARNip no tuvo un impacto en la expansión de muchas líneas celulares de cáncer. En consecuencia, al no ser esenciales para la viabilidad celular, CDK2 podría presentar un objetivo probable para el anti-HIV-1 therapeutics.Previous intenta detectar la fosforilación de tatuaje en vivo no eran eficaces. Es posible que el bajo nivel de expresión de Tat o rápidamente desfosforilación dentro de las células o durante la preparación de la prueba no puede permitir que el simple reconocimiento de la fosforilación de Tat. Por ejemplo, mientras que en los informes anteriores Ben Berkhout y sus colegas sólo se pueden descubrir Tat expresión en células COS-7, aunque no en las células HeLa. Hemos encontrado que la expresión de tatuaje Bandera de etiquetado autorizado mayores niveles de expresión del tatuaje específicamente con el envío de virus mediada por una deno.
El tratamiento con ácido okadaico, que comprueba las fosfatasas del PPP-hogar, incluyendo PP1 y PP2A, mejoró significativamente la fosforilación Tat, lo que indica que los tatuajes puedan ser desfosforilado dinámicamente a través de una APP-forma celular phosphatase.When que limita PP1 por más de expresión de la página web del inhibidor clave atómica de PP1 no se identificaron cambios en la fosforilación Tat. Por lo tanto PP2A en el lugar de PP1 es una fosfatasa solicitante para dephosphorylate tatuaje. El examen reveló que la inhibición de CDK2 expresión de siRNA bloqueado considerablemente la fosforilación del tatuaje y la organización del tatuaje evitó con CDK2. Asimismo, no podemos descartar la posibilidad de que la inhibición de CDK2 minimiza la actividad de otra quinasa que a su vez podría estar implicada en la fosforilación Tat, aunque estos hallazgos declaran que CDK2 específicamente puede phosphorylateTat. CDK2-siRNA dirigido algo disminuyó organización de CDK2 para Tat, probablemente reduciendo al mínimo la cantidad de CDK2 ofrecido para comunicarse con Tat.We encontró que Tat es fosforilados en residuos de serina en vivo. Nos propusimos antes de que el 16S QPK19 y K41 × L43 secuencias de tatuaje interactúan con CDK2 y ciclina respectivamente, lo que S16 es fosforilada por CDK2.
En la presente revisión, se descubrió que igualmente S16 y S46of tatuaje son probables sitios de fosforilación. Es probablemente incluso a medida que llegó a sugerir, que la rutina K41 × L43 participa en la unión a CDK2 en lugar de a la ciclina E, como S46 está al lado de la rutina K41 × L43 de tatuaje. Curiosamente, recombinante CDK2PERcyclin ELECTRÓNICO simplemente fosforilada de longitud completa del tatuaje 1-72 pero no los 15 péptidos de aminoácidos de Tat, 9EPWKHPGSQPKTACN23 o 37CFTTKGLGISYGRKK51, que sólo contienen los sitios de fosforilación, que podrían sugerir un requisito de la serie adicional de Tat debido a su interacción con CDK2AND ciclina E.Another explicación es que la longitud completa del tatuaje hace una conformación favorable para la fosforilación por CDK2. Vx661
El patrón de fosforilación de CDK2 0P1K23 es 16SQP19 y 46SYGR49 compensados sólo parcialmente con la serie. Cuando Pro1 está sustituido con Alain un sustrato de péptido sintético corto, motivos de fosforilación cambiaron con determinantes óptimas sub generalmente están contenidos por sustratos físicos para cada CDK2- ciclina An y CDK2 -cyclin E, a pesar de que la eficiencia catalítica de CDK2-ciclina A es molestado 2000- doblez. Tales sustratos fosforilación sub óptima es mejorado por un tema de unión de ciclina que compensa por lo general mal catálisis.