Extracto
Antecedentes
El receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) gen juega un papel clave en la supervivencia tumoral, la invasión, la angiogénesis y la diseminación metastásica. Estudios recientes mostraron que el cáncer gástrico (GC) se asoció con polimorfismos del gen EGFR y las influencias ambientales, tales como factores de estilo de vida. En este estudio, siete SNPs conocidos en los exones de EGFR fueron investigados en una población china de alto riesgo en la provincia de Jiangsu para probar si las variantes genéticas de los exones de EGFR y estilo de vida se asocian con un mayor riesgo de CG.
Metodología /Principales hallazgos
Un estudio de casos y controles de base hospitalaria se realizó en la provincia de Jiangsu. Los resultados mostraron que fumar, beber y preferencia por los alimentos salados se asociaron significativamente con el riesgo de GC. Las diferencias de estilo de vida entre hombres y mujeres podrían ser como la razón de las tasas de incidencia más altas en los hombres que los de las hembras. Siete SNPs exón se genotipo rs2227983, rs2072454, rs17337023, rs1050171, rs1140475, rs2293347 y rs28384375. Se observó que los rs2072454 variante de t alelo y genotipo TT se asociaron significativamente con un mayor riesgo de GC. Curiosamente, nuestro resultado sugiere el haplotipo ACAGCA podría estar asociado con un menor riesgo de GC. Sin embargo, ninguna asociación significativa fue examinado entre los otros seis SNPs y el riesgo de GC, tanto en la población total y la población en edad de coincidencia incluso con las diferencias de género.
Conclusiones
El fumar, beber y preferencia por los alimentos salados se asociaron significativamente con el riesgo de GC en la provincia de Jiangsu, con las diferencias de género. Aunque sólo un SNP (rs2072454) se asoció significativamente con un mayor riesgo de GC, combinado el exón seis SNPs EGFR juntos puede ser útil para predecir el riesgo de GC
Visto:. Zhang J, Zhan Z, Wu J , Zhang C, Yang Y, Tong S, et al. (2013) La asociación entre polimorfismos en genes EGFR exones, estilos de vida y el riesgo de cáncer gástrico con las diferencias de género en sujetos chinos Han. PLoS ONE 8 (3): e59254. doi: 10.1371 /journal.pone.0059254
Editor: Eithne Costello, El Reino Unido Liverpool Centro de Investigación del Cáncer, Reino Unido
Recibido: 19 de septiembre de 2012; Aceptado: 13 Febrero 2013; Publicado: 29 Marzo 2013
Derechos de Autor © 2013 Zhang et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio fue apoyado por prioridad Programa Académico de Desarrollo de instituciones de educación superior de Jiangsu (TPPA), Jiangsu Natural Science Foundation (BK2008461), la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (30973715 y 81001502), Fondo de Investigación del Programa de Doctorado de Educación Superior de China (20103237110011) , jóvenes profesores en la Universidad de Nanjing de Medicina tradicional china. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
a pesar de que tanto la incidencia y mortalidad del cáncer gástrico (CG) han disminuido en los últimos años, GC fue el cuarto cáncer más común en el mundo en 2008, con aproximadamente 989.600 nuevos casos. Los hombres generalmente desarrollan GC dos veces más frecuentemente que las mujeres y un 72% de los nuevos casos se producen en los países en desarrollo. En general, las tasas más altas se encuentran en Asia, particularmente en los países del Este de Asia como Corea, Japón y China [1].
De hecho, casi el 40% de todos los casos de CG se producen en China, y hay una notable variación geográfica en las tasas de GC a través de china [2]. Más de dos tercios de los pacientes con diagnóstico de GC en China tienen la enfermedad no resecable y una supervivencia media de seis a nueve meses. Por otra parte, en pacientes con tumores resecables, las tasas de recurrencia local ya distancia son altos, y la tasa de supervivencia a 5 años es inferior al 30% [3]. Sun
et al.
[4] evaluó el impacto de GC en la población china por el análisis epidemiológico de la distribución de la mortalidad 1990-1992, los resultados mostraron que GC fue la principal causa de muerte por cáncer en China .
ahora es generalmente aceptado que la patogénesis de GC implica una interacción multifactorial entre los factores ambientales y la susceptibilidad genética. Los estudios epidemiológicos han identificado la edad, las diferencias de género y una serie de factores ambientales que pueden contribuir al desarrollo de GC, incluyendo una dieta salada, el consumo de tabaco, consumo de alcohol y
Helicobacter pylori
infección [5] - [8] . Otros estudios han identificado factores del huésped y las alteraciones genéticas que también juegan un papel importante en el desarrollo y progresión de la GC a través de interacciones gen-ambiente [9], [10].
El receptor del factor de crecimiento epidérmico gen (EGFR) se encuentra en el brazo corto del cromosoma humano 7 y produce una glicoproteína con un peso molecular de 170 kDa que tiene una alta afinidad por sus ligandos, incluyendo el factor de crecimiento epidérmico (EGF) y el factor de crecimiento transformante alfa (TGF-α). EGFR participa en varios mecanismos tumorigénicos esenciales, como la supervivencia tumoral, la invasión, la angiogénesis y la diseminación metastásica. la expresión de EGFR se ha observado en numerosos tumores humanos, y varios estudios demostrado que la sobreexpresión de EGFR se correlaciona con un mal resultado [11]. En GC, la sobreexpresión de EGFR se correlaciona con el estadio tumoral avanzado y un pobre resultado clínico [12]. Sin embargo, los papeles que la sobreexpresión de EGFR y alteraciones genéticas juegan en la carcinogénesis gástrica siguen sin estar claros. Por otra parte, sólo se han encontrado unos pocos polimorfismos de nucleótido único (SNP) para asociarse con el desarrollo y el resultado GC [11], [13].
En este estudio, la hipótesis de que las exposiciones ambientales y las diferencias de género actúan como modificadores del efecto sobre un fondo de la variación genética en los exones del EGFR, que pueden afectar la función EGFR, configurando así la susceptibilidad GC. Para probar esta hipótesis, se realizó un estudio basado en el hospital en el que se genotipo 387 casos de CG y 392 controles sin cáncer en una población china de alto riesgo para los siete SNPs conocidos en los exones del EGFR, a saber, rs2227983 A & gt; G, rs2072454 C & gt; T, rs17337023 A & gt; T, rs1050171 G & gt; A, rs1140475 C & gt; T, rs2293347 G & gt; A, y rs28384375 T & gt;. C
Materiales y Métodos
El reclutamiento de casos y control de los participantes
En un principio, los casos 401GC y 420 controles fueron identificados; Se excluyeron 3 casos de cáncer de la falta de cuestionarios, así como 11 tumores que no sean adenocarcinoma; 18 controles fueron excluidos por los biomarcadores relacionados con el cáncer de suero inmoderado y 10 controles fueron excluidos por la desviación geográfica. En general, una población total de 387 casos y 392 controles estaban disponibles para el estudio actual sobre la base del poder prospectivo análisis, es una lástima que los controles eran unos 10 años más jóvenes que los casos, por lo tanto, una población en edad de coincidencia con 294 casos y 294 controles se extrajo de la población total para el cotejo de edad coincidente. Todos los sujetos fueron no relacionadas genéticamente étnicos chinos Han. Los pacientes con GC primaria fueron reclutados en el Departamento de Gastroenterología Quirúrgica en el Hospital Provenza Jiangsu de Medicina Tradicional China (MTC) entre enero de 2008 y julio de 2010 en la ciudad de Nanjing, provincia de Jiangsu. Los controles sanos libres de cáncer fueron reclutados consecutivamente desde el Hospital de Jiangsu de la medicina tradicional china, y eran los visitantes del hospital para un chequeo anual durante el mismo período. Para ser incluidos en el estudio, los pacientes (a) hombres o mujeres mayores de 20 años pero menores de 80 años de edad, (b) tenían que ser de etnia han china (libre informado-), (c) procedían de tres regiones de Jiangsu provincia y tuvo que ser un residente de la zona durante al menos 5 años, (d) tenía que tener GC primaria de nueva histopatología diagnosticado, (e) tuvo que carecen de tumores malignos previos en otros órganos, y (f) no había recibido terapia antitumoral antes del reclutamiento , incluyendo la quimioterapia y la radioterapia. entrevistadores entrenados utilizaron un cuestionario pre-prueba para recopilar datos epidemiológicos de los participantes, es decir, los factores demográficos como la edad y el sexo, y los factores de riesgo conocidos para GC (tales como el consumo de tabaco, consumo de alcohol, y una historia familiar de cáncer del tracto digestivo) . Los individuos que fumaban una o más veces al día durante más de un año se definieron como los fumadores, y los que consumen tres o más bebidas alcohólicas a la semana durante más de 6 meses, se considera que los bebedores crónicos [14], [15]. Después de firmar el consentimiento informado, cada sujeto donó 3-5 ml de sangre periférica para ser utilizados para la extracción de ADN genómico. El protocolo de investigación fue aprobado por la junta de revisión institucional de Jiangsu Hospital de Provence de la medicina tradicional china.
Genómica de aislamiento de ADN a partir de células de sangre periférica
Un kit de extracción de ADN de sangre comercial (AxyPrep-96 kit, Axygen, CA, EE.UU.) se utilizó para extraer el ADN genómico de las muestras de sangre. Los ADN purificados se almacenaron a -20 ° C hasta que se utilizaron para las pruebas de genotipo. La calidad del ADN se evaluó por electroforesis en gel de agarosa.
Genotipado
cadena de la polimerasa reacción de detección de reacción de ligación (PCR-LDR) métodos se utilizaron para la determinación del genotipo [16]. Los cebadores fueron sintetizados por Shanghai Sangon biotecnología y Servicios (No.698, Xiangmin Rd, distrito de Songjiang, Shanghai, China) Ingeniería. Cada conjunto de sondas de detección de reacción de ligasa compone una sonda común y dos sondas que discriminan para los dos tipos (Tabla S1)
.
El objetivo las secuencias de ADN se amplificaron utilizando un método de PCR multiplex. PCR para cada sujeto se llevaron a cabo en un volumen final de 20 l que contenía 1 x tampón de PCR, 3,0 mmol /l MgCl
2, /l desoxinucleótido trifosfatos 2,0 mmol, 1 cebadores mu l, 0,2 l QIAGEN HotStarTaq Polimerasa (QIAGEN, China ), 4 l de 1 × Q-solución, y 10-20 ng de ADN genómico. El ciclo térmico se realizó durante cinco SNPs (rs2227983, rs17337023, rs1140475, rs2293347 y rs2072454) en el sistema de PCR Gene Amp 9600 (PerkinElmer) con una desnaturalización inicial de 15 min a 95 ° C, seguido de 35 ciclos de desnaturalización a 94 ° C durante 30 s, hibridación a 59 ° C durante 1 min, y extensión a 72 ° C durante 1 min, seguido de una extensión final a 72 ° C durante 7 min. El protocolo para la amplificación rs28384375 consistió en una desnaturalización inicial de 15 min a 95 ° C, seguido de 35 ciclos de desnaturalización a 94 ° C durante 30 s, hibridación a 56 ° C durante 1 min, y extensión a 72 ° C durante 1 min , seguido por una extensión final a 72 ° C durante 7 min. El protocolo para rs1050171 consistió en una desnaturalización inicial de 15 min a 95 ° C, seguido de 35 ciclos de desnaturalización a 94 ° C durante 30 s, hibridación a 53 ° C durante 1 min, y extensión a 72 ° C durante 1 min, seguido de una extensión final a 72 ° C durante 7 min.
La reacción de ligación para cada sujeto se llevó a cabo en un volumen final de 10 l que contenía 1 × tampón de ligasa de ADN Taq NEB, 12,5 pmol de cada mezcla de sonda , 0,05 l de ADN ligasa Taq [NEB Biotecnología (Beijing)], y 1 l de multi-producto de PCR. Las secuencias de la sonda se muestran en la Tabla S2. En total, se realizaron 35 ciclos que consisten de 95 ° C durante 2 min, 94 ° C durante 30 s, y 60 ° C durante 2 min. Los productos fluorescentes de las reacciones de detección de ligasa se diferencian por un secuenciador ABI 377 (Figura S1). Para confirmar la exactitud del método de PCR genotipo-LDR, se realizó la secuenciación de ADN directa de los productos de PCR seleccionados al azar. La proporción de las muestras de secuenciación fue de aproximadamente 5%. Los resultados de genotipado por PCR-LDR mostraron totalmente de acuerdo con los resultados directos de secuenciación de ADN.
Análisis estadísticos
Todos los análisis estadísticos se realizaron utilizando el software SPSS versión 16.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, ESTADOS UNIDOS). Para comparar las frecuencias genotípicas observadas en el grupo de control con las frecuencias esperadas, el equilibrio de Hardy-Weinberg (HWE) se puso a prueba por un χ
2-prueba de bondad de ajuste. Los casos y controles se compararon en términos de características demográficas, factores de estilo de vida y las frecuencias de los alelos de cada SNP utilizando el
χ
2
-test. Para cada polimorfismo, la odds ratio (OR) y los intervalos de confianza del 95% (IC) se calcularon a partir de modelos de regresión logística condicional para estimar el efecto principal de cada polimorfismo con GC, mientras que ajustar por factores continuos edad, sexo y estilo de vida. Análisis de regresión logística utilizando el alelo principal que se emplea una referencia para estimar ajustado RUP, IC del 95%, y
P
valores. Sin embargo, se encontró que la variable sexo y la edad no se ajustaba a la asunción de proporcionalidad. Por lo tanto, la estratificación de género y edad de coincidencia se utilizaron para medir las RUP y IC del 95%. Para las variables de estilo de vida que mostraron relaciones significativas con la GC en los análisis controlaron los factores a juego única, se evaluó aún más su independencia en el análisis ajustado por factores de confusión potenciales adicionales (por ejemplo, fumar, beber, comida salada, la hora de comer y comer el desayuno) en la edad de coincidencia población. Y FASE software paquete de la versión 2.0 se utilizó para inferir las frecuencias de haplotipos basados en los genotipos observados EGFR. Todos los
P
valores fueron de dos caras y un
P
valor. & Lt; 0,05 fue considerado estadísticamente significativo
Resultados
Características de los sujetos del estudio
Las características de estos sujetos de estudio fueron consistentes con lo descrito anteriormente [17], [18]. En este trabajo, la población total con 387 casos y 392 controles y una población en edad de coincidencia con 294 casos y 294 controles se incluyeron en los análisis actuales. El género, la edad, y la distribución geográfica de la región de los sujetos del estudio se muestran en la Tabla 1.
Para examinar las diferencias en la incidencia de GC entre machos y hembras, las distribuciones de las variables de selección de estilo de vida se analizaron con las diferencias de género. Los resultados mostraron que seis factores de estilo de vida (es decir, la ingesta regular de comidas, la preferencia por los alimentos salados, la hora de comer, el tabaquismo, el consumo de estatus, y comer el desayuno) se correlacionó significativamente con el riesgo de GC, y sus efectos pueden ser modificados por el género y la años. Cuatro factores de estilo de vida, es decir, la preferencia por los alimentos salados, hora de comer, el tabaquismo y la condición de potable, fueron significativamente diferentes entre hombres y mujeres (
P Hotel & lt; 0,05) (Tabla 2). Se observó que los porcentajes de los hombres que llevan los hábitos alimentarios poco saludables, como la preferencia por los alimentos salados, hora de comer pocas palabras, fumar y beber, fueron significativamente más altos que los de las hembras (
P Hotel & lt; 0,05), lo que podría ser como la razón de las tasas de incidencia más altas en los hombres que los de las hembras. En la población total, tomando regularmente comidas y comer el desayuno disminuye el riesgo de CG mujer, mientras que la bebida podría aumentar el riesgo de CG masculino (Tabla 3). Además, tanto la preferencia por los alimentos salados y el tabaquismo aumenta el riesgo de CG macho y hembra (
P Hotel & lt; 0,05). Resultados similares se encontraron después de la edad de coincidencia de que la ingesta regular de comidas disminuyeron el riesgo de GC y la preferencia por los alimentos salados y el tabaquismo aumenta el riesgo de varón y hembra GC (
P Hotel & lt; 0,05, Tabla 4). Sin embargo, hay dos excepciones, que estaba bebiendo un aumento del riesgo de CG macho (
P Hotel & lt; 0,05), pero no GC hembra (
P Hotel & gt; 0,05) tal vez debido a la limitada femenina población, mientras que todos los días desayunar disminuye el riesgo de GC hembra (
P Hotel & lt; 0,05), pero no GC macho (
P Hotel & gt; 0,05). (Tabla 4)
Distribución de Genotipado y el riesgo de GC
En el presente estudio, se detectó sólo el alelo T del rs28384375 de sentido erróneo locus. En cuanto a los restantes seis SNPs, las frecuencias genotípicas observadas en los controles fueron en HWE. Puesto que ninguna significación estadística se perdió, solamente los resultados estadísticos ajustados se muestran en las tablas. En la población total, se demostró la asociación entre la distribución de los alelos del gen EGFR, genotipos y el riesgo de GC en la Tabla 5. Sólo se observó una ligera diferencia en términos de la distribución alélica de rs2072454 (
χ
2
= 3,844,
P = 0,050
), y el análisis de regresión logística revelaron que la variante de este alelo puede estar asociada con el riesgo de CG (OR ajustada = 1,23; IC del 95% = 1,00-1,50). Sin embargo, no se observaron diferencias significativas entre los casos y controles en cuanto a la distribución de alelos con las diferencias de género. El polimorfismo rs2293347 se asoció con casos de CG masculinos porque el 73,0% de los casos de CG lleva un alelo G en comparación con el 29,5% de los controles de salud (OR ajustada = 6,45; IC del 95% = 4,89 a 8,51,
P Hotel & lt; 0,001 ), pero no hay genotipos se asociaron significativamente con el riesgo de GC. En la población femenina contrario el genotipo GA podría disminuir el riesgo de GC hembra debido a 34,5% de los casos de GC que llevan un genotipo GA en comparación con el 38,9% de los controles de salud, pero no hubo diferencias significativas entre la distribución de alelos y genotipo frecuencias (
P Hotel & gt; 0,05). Además, se examinaron las diferencias significativas en los otros cuatro SNPs (
P Hotel & gt; 0,05), es decir, rs2227983, rs17337023, rs1050171 y rs1140475 entre casos y controles, incluso con diferencias de género
en la población en edad de coincidencia, se demostró la asociación entre la distribución de los alelos del gen EGFR, haplotipos y el riesgo de GC en la Tabla 6. se observó una diferencia significativa en cuanto a la distribución alélica (
χ
2
= 4,795,
P = 0,029
) y la distribución de los genotipos (
χ
2
= 6,668,
P = 0,036
) de rs2072454, que no sea los resultados en la Tabla 5. Además, análisis de regresión logística revelaron que la variante rs2072454 del alelo T podría aumentar el riesgo de CG (OR ajustada = 0,77; IC del 95% = 0,61-0,97;
P Hotel & lt; 0,05 ). De acuerdo con la distribución de los genotipos, también se observó una diferencia significativa en la población masculina (
χ
2
= 7,914,
P = 0,019
) en lugar de población femenina (
χ
2
= 0,452,
P = 0,798
). Sin embargo, no hubo diferencias significativas entre los casos y controles, incluso con diferencias de género para los SNPs restantes, a saber, rs2227983, rs17337023, rs1140475, rs1050171 y rs2293347 (
P Hotel & gt; 0,05).
Para excluir la influencia del medio ambiente, se investigó la asociación entre los tres SNP relacionados con GC-potenciales y el riesgo de CG en la población en edad de coincidencia de llevar el estilo de vida de salud (Tabla 7). Una clara diferencia fue examinado en términos de la distribución de los genotipos de rs2072454 (
χ
2
= 6,036,
P = 0,049
). Especialmente, análisis de regresión logística reveló que el genotipo TT aumentó significativamente el riesgo de CG en la población con comer desayuno diario (OR ajustada = 1,92; IC del 95% = 1,07 a 3,44,
P Hotel & lt; 0,05).
los exones no sólo codifican la secuencia de aminoácidos de la proteína, sino que también contienen secuencias que influyen en la traducción o degradación de ARNm [19]. El loci se combinaron y se sometió a análisis de haplotipo inferencia utilizando el programa de FASE 2.0. Había cuatro posibles haplotipos en la población total y tres posibles haplotipos en la población en edad de coincidencia, con una frecuencia de & gt; 4% (Tabla 8, Tabla 9). En comparación con el haplotipo GTTGCG, análisis de regresión logística puso de manifiesto que el haplotipo ACAGCG se asoció con un riesgo significativamente menor de GC (OR CI = 0,67, 95% = 0,49 a 0,92,
P
& lt; 0,05 ajustado por edad, los factores de género y estilo de vida) en la población total (Tabla 8) en lugar de la población en edad de coincidencia (OR = 0,83, IC del 95% = 0,58 a 1,19,
P Hotel & gt; 0,05 ajustado por edad, sexo y estilo de vida factores) (Tabla 9). Los otros haplotipos se asociaron con un riesgo significativamente reducido de GC (OR ajustada = 0,69; IC del 95% = 0,52 a 0,90 para la población total; OR ajustada = 0,74, 95% CI = 0,56-0,99 para la población en edad de coincidencia). En comparación con el haplotipo ACAGCG, el ACAACG podría disminuir el riesgo de CG (OR = 0,61; IC del 95% = 0,40 a 0,94 ajustado por edad, sexo y estilo de vida) en la población total, pero el
P
valor hizo no alcanzó significación estadística mediante la corrección de Bonferroni (Tabla 8).
Discusión
a pesar de que se observa un gran número de nuevos casos de CG en todo el mundo en las últimas décadas, la mecanismos exactos que subyacen a la carcinogénesis gástrica aún no se entienden completamente. Al igual que en investigaciones anteriores [20], [21], nuestros resultados mostraron que los hombres en general, han estado desarrollando GC dos veces más frecuentemente que las mujeres en China. Se sugirió por Michael
et al.
Que gran parte de la variación global en la incidencia de cáncer se ha atribuido a las influencias ambientales, incluyendo las preferencias alimentarias y factores de estilo de vida poco saludables [22]. En el presente estudio, por lo tanto, estábamos interesados en probar si algunos factores de estilo de vida poco saludables podrían aumentar el riesgo de GC con las diferencias de género en China. Seis factores de estilo de vida, incluyendo la ingesta regular de comidas, la preferencia por los alimentos salados, el tiempo de comer, fumar estado, la condición de potable, y comer el desayuno, se identificaron a ser influenciado el riesgo de GC con las diferencias de género, lo cual era consistente con los estudios previos en este de China [20], [23], [24]. Especialmente, la preferencia por los alimentos salados, beber y fumar fueron los factores de riesgo más fuertes y consistentes para GC.
resienten investigaciones sugieren que un alto consumo de sal (sodio) podría aumentar el riesgo de GC [21], [ ,,,0],24] - [26]. También se evidencia por nuestra observación de que los pacientes con cáncer gástrico en la provincia de Jiangsu fueron preferencia por los alimentos salados, tales como carne salada, conservas vegetales y jugo de verduras en vinagre, que pudieran estar contaminados por compuestos N-nitrosos. Sin embargo, los compuestos N-nitroso fueron los más frecuentemente propuesta relacionada con el aumento del riesgo de cánceres gastrointestinales superiores-[27]. Beber y fumar, otros dos factores de riesgo dominantes para GC en el mundo [28], fueron también examinados en este estudio. Se encontró una asociación significativa entre el consumo y el riesgo de CG en la provincia de Jiangsu. Fue evidencia por un estudio de laboratorio que fumar podría aumentar la apoptosis en la mucosa gástrica de rata por un aumento en la actividad de XO [29], y el alcohol también podría ejercer influencia sobre la secreción de ácido, el vaciado gástrico, y ciertas enfermedades relacionadas con el ácido, tal como gastritis acompañado con el daño de la mucosa gástrica, y la siguiente reacción inflamatoria a su vez, promover la proliferación celular y la diferenciación gástrico [30]. En el proceso, los compuestos N-nitrosos y micotoxinas de algunos alimentos salados pueden inducir mutaciones de genes [31], [32], por lo tanto preferencia por los alimentos salados pueden ser el riesgo original de GC. Y las pruebas apuntan a una asociación con vías de señalización implicadas en los procesos de desarrollo [33]. moléculas clave de estas vías fueron los receptores de tirosina quinasas, que se encontraron para ser activado o sobreexpresa en una variedad de tumores de forma aberrante y por lo tanto representan dianas prometedoras para la intervención terapéutica [13].
EGFR fue una de las moléculas clave , y muchas líneas de evidencia sugieren que la GC altamente invasiva se asocia con la activación aberrante o sobreactivación de EGFR debido a la amplificación de genes o alteraciones estructurales [13]. Muy recientemente, un estudio de casos y controles de 61 casos y 20 controles en la provincia de Henan, que se encuentra en China medio, mostró que el EGFR rs28384375 C /T polimorfismo puede favorecer la aparición y el desarrollo de GC [34]. Por otra parte, otro estudio de casos y controles de 138 casos y 170 controles en la provincia de Jiangxi, situada en el sureste de China, reveló que el EGFR rs763317 G /A polimorfismo puede asociar con un mayor riesgo de CG [35].
EGFR es un factor de crecimiento de la tirosina quinasa del receptor y pertenece a la superfamilia de receptores tirosina quinasa, cuyos miembros se caracterizan por un dominio extracelular (donde los ligandos de unión al ligando se lleva a cabo), un dominio transmembrana lipófilo corta, y un dominio intracelular que alberga la tirosina quinasa actividad [36]. EGFR puede ser activado por ligandos de unión, tales como EGF y TGF-α, y desempeña papeles fundamentales en el desarrollo, la proliferación y la diferenciación. La activación de EGFR puede contribuir a la transformación de los fenotipos celulares y proporcionar las células tumorales con el crecimiento y supervivencia sustanciales ventajas [37]. Muchos tumores humanos presentan una sobreexpresión de EGFR, que se correlaciona con una etapa avanzada del tumor o una mala evolución clínica, tales como el cáncer no microcítico de pulmón de células [38], el cáncer colorrectal [39], el cáncer de mama [40], cáncer de cabeza y cuello [ ,,,0],41], cáncer de vejiga [42], y GC [43].
en la actualidad existe un creciente interés en las mutaciones de EGFR en SNP, dado que podrían afectar a la eficacia del tratamiento con EGFR inhibidor de tirosina quinasa (TKI) en varios tipos de cáncer [44], el cáncer colorrectal [39], el cáncer no microcítico de pulmón de células [45], GC [46] - [49]. Es bien sabido que los exones no sólo codifican la secuencia de aminoácidos de la proteína, sino que también contienen secuencias que influyen en la traducción o degradación de ARNm [19]. Por lo tanto, EGFR SNPs exón podría influir en la expresión del gen EGFR y /o actividad de la proteína y por lo tanto alterar la afinidad del EGFR para no sólo sus ligandos, sino también para agentes anticancerosos que se dirigen a esta proteína. De hecho, Puyo
et al.
Encontró que las mutaciones en los exones 18-21 de EGFR mejorar la actividad de TKIs, mientras que la deleción de los exones 2-7 se asocia con glioblastoma oncogénesis [49]. Por otra parte, dos estudios clínicos mostraron que los SNPs en los exones de EGFR 18, 19, 21 y 25 afectan a la eficacia clínica de gefitinib y pueden ser potenciales biomarcadores para la predicción de la evolución clínica de los pacientes gefitinib tratada con cáncer no microcítico de pulmón avanzado de células (NSCLC) [50], [51].
en el presente estudio, los seis SNPs en exones EGFR fueron ligeramente asociado con el riesgo de CG tanto en la población total y la población en edad de coincidencia incluso con el género diferencias. Se observó que los SNP rs2072454 se asoció significativamente con el riesgo de GC. Especialmente, la variante rs2072454 alelo T y el genotipo TT se asociaron con un aumento del riesgo de GC. Sin embargo, los SNP rs2227983, rs17337023, rs1050171 y rs1140475 no se relacionaban con el riesgo de CG. Con respecto a la rs28384375 missense locus, sólo se detectó el alelo T en los casos y controles. Muchos informes sugirieron que varios EGFR SNPs, incluyendo rs2227983 (también designado como Arg521Lys o R497K) [39], [52], [53], rs1050171 (también designado como Q787Q) [54], [55] y rs2293347 (C2982T) [ ,,,0],56], eran más propensos a afectar el comportamiento biológico de los tumores (como el crecimiento tumoral, la invasión, metástasis y la progresión) que de definir la susceptibilidad al desarrollo del cáncer. Desde EGFR, un mediador clave de la angiogénesis, se puede regular sus genes diana tales como VEGF, que pueden afectar directamente el comportamiento biológico del tumor. Estos resultados también explicaría por qué EGFR SNPs puede servir como determinantes clave de la respuesta a la quimioterapia basada en TKI de EGFR [11]. Por lo tanto, estas mutaciones genéticas pueden conferir la complejidad y la vergüenza para el tratamiento de GC y la supervivencia [57].
Cuando Puyo
et al
. [49] analizaron la asociación entre polimorfismos funcionales EGFR específica y la actividad del fármaco contra el cáncer en 60 líneas celulares de tumores humanos establecidos por el Instituto Nacional del Cáncer, la frecuencia de la rs28384375 SNP no sinónimos (también designado como Val592Ala) fue de 0,5, mientras que la frecuencia de heterocigotos de la -216G & gt; T SNP (también designado como rs287129) fue de 0,346. Las líneas celulares que eran heterocigotos y homocigotos para la variante de la -216 G & gt; T SNP mostraron significativamente mayor expresión del gen EGFR que las líneas de tipo salvaje homocigotos. Además, en comparación con líneas de células sin un alelo variante, las líneas de células con al menos una variante alelo T en el -216 G & gt; T SNP eran más sensibles a erlotinib y menos sensible a la geldanamicina, la topoisomerasa I e inhibidores de II, y los agentes alquilantes. Curiosamente, nuestros resultados mostraron que el haplotipo GTTGCG fue más prevalente en casos de CG que en los controles sin cáncer, y que los haplotipos ACAGCG se asociaron con un riesgo significativamente menor de GC (OR ajustada = 0,67; IC del 95% = 0,49 a 0,92 por ACAGCG, OR ajustada = 0,69; IC del 95% = 0,52 a 0,90 para los demás) en la población total (Tabla 8). Sin embargo, en la población en edad de coincidencia, no hay asociación significativa fue examinado entre ACAGCA haplotipo y riesgo de CG (OR ajustada = 0,83; IC del 95% = 0,58 a 1,19) (Tabla 9). Por lo tanto, los alelos T de rs2072454 y rs17337023, especialmente el primero, podrían estar asociados con el riesgo de GC. Por lo tanto, el análisis combinado de los seis SNPs, especialmente los alelos T de rs2072454 y rs17337023, puede ser útil para predecir el riesgo de CG
Varias limitaciones en el presente estudio es necesario abordar:. 1) su tamaño de la muestra puede no haber sido lo suficientemente grande como para detectar SNPs con baja frecuencia de la variante, como rs28384375; 2) Se seleccionaron los polimorfismos que fueron investigados en este estudio sobre la base de sus efectos sobre la función EGFR y no pueden dar una visión completa de la variabilidad genética en los exones del EGFR; No se recogió 3) información detallada sobre los casos de CG, incluyendo la supervivencia del paciente, si los tumores eran del tipo intestinal o difuso, si había metástasis, y lo que el efecto de la terapia de drogas era.
En conclusión, la Este estudio sugiere que las diferencias de estilo de vida entre hombres y mujeres podrían ser como la razón de las tasas de incidencia más altas en los hombres que los de las hembras. Aunque sólo un SNP (rs2072454) se asoció significativamente con un mayor riesgo de GC, combinado analizar el otro exón seis SNPs EGFR juntos puede ser útil para predecir el riesgo de GC. Se necesitan más estudios para establecer estos resultados y para hacer frente a los mecanismos subyacentes.
Apoyo a la Información
Figura S1.
Los productos fluorescentes de LDR se diferenciaron por ABI secuenciador 377 de los siete SNPs en exones EGFR. En total, más del 90% de los productos se diferenciaron con éxito por secuenciador ABI 377.
doi: 10.1371 /journal.pone.0059254.s001 gratis (TIF)
Tabla S1. Empresas El secuencias de cebadores de PCR para los siete loci en el gen EGFR. Los cebadores fueron diseñados por el software Primer Premier 6 y sintetizados por Shanghai Sangon tecnología biológica y servicios de ingeniería
doi:. 10.1371 /journal.pone.0059254.s002 gratis (DOC) sobre Table S2.
secuencias de sonda de los siete SNPs en el gen EGFR. Los cebadores fueron sintetizados por Shanghai Sangon tecnología biológica y servicios de ingeniería
doi:. 10.1371 /journal.pone.0059254.s003 gratis (DOC)
Reconocimientos
Reconocemos Maestro Jingye Wang y Haixia Xu por la asistencia con el aislamiento de ADN.