Extracto
Antecedentes
La inflamación crónica juega un papel causal en la iniciación del tumor gástrico. La identificación de biomarcadores predictivos de la inflamación gástrica a la tumorigénesis nos ayudará a distinguir el cáncer gástrico de la gastritis atrófica y establecer el diagnóstico de cáncer gástrico en etapa temprana. Fosfolipasa C épsilon 1 (PLCε1) Se informa a desempeñar un papel vital en la inflamación y la tumorigénesis. Este estudio tuvo como objetivo investigar la importancia clínica de PLCε1 en la iniciación y progresión del cáncer gástrico.
Metodología /Principales conclusiones
En primer lugar, la expresión del ARNm y la proteína de PLCε1 se analizaron mediante transcripción inversa -PCR y Western Blot en la línea de células epiteliales de la mucosa gástrica líneas celulares de cáncer gástrico GES-1 y AGS normales, SGC7901, y MGC803. Los resultados mostraron tanto los niveles de proteína de PLCε1 ARNm y fueron hasta reguladas en células de cáncer gástrico en comparación con las células epiteliales de la mucosa gástrica normales. En segundo lugar, este resultado fue confirmado por detección inmunohistoquímica en una micromatriz de tejido que incluye 74 pares de cáncer gástrico y los tejidos normales adyacentes. En tercer lugar, un análisis inmunohistoquímico independencia de 799 muestras de tejido gastritis crónica atrófica demostraron que la expresión en los tejidos PLCε1 gastritis atrófica se redujeron regulado ya que la expresión PLCε1 fue negativo en 524 (65,6%) gastritis atrófica. Además, se utilizaron tejidos clínicos emparejados de gastritis atrófica grave y pacientes con cáncer gástrico para confirmar adicionalmente los resultados anteriores mediante el análisis de ARNm y los niveles de proteína de expresión PLCε1 en muestras clínicas.
Conclusiones /Significados
nuestros resultados sugieren que la proteína PLCε1 puede ser un biomarcador potencial para distinguir el cáncer gástrico de lesión inflamación, y podría tener un gran potencial en aplicaciones tales como el diagnóstico y pre-alerta de cáncer gástrico en etapa temprana
Visto:. Chen J , Wang W, Zhang T, Ji J, Qian Q, Lu L, et al. (2012) Expresión diferencial de la fosfolipasa C Epsilon 1 se asocia con gastritis atrófica crónica y cáncer gástrico. PLoS ONE 7 (10): e47563. doi: 10.1371 /journal.pone.0047563
Editor: Javier S. Castresana, Universidad de Navarra, España |
Recibido: 22 Junio, 2012; Aceptado: 18 Septiembre 2012; Publicado: 15 Octubre 2012
Copyright: © Chen et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por el Programa Nacional de Investigación básica clave de China (973 proyectos) (2010CB933900), New Century Excelente Talento del Ministerio de Educación de China (NCET-08 a 0350), enfermedades infecciosas especiales Proyecto clave de China (2009ZX10004-311), Nacional Fundación de Ciencias naturales de China (31170961 y 31100717), Fondo Tecnológico (12ZR1415800) Shanghai Ciencia y la Innovación y el Fondo de la Universidad de Shanghai Jiao Tong Para Postgraduados (Z-340-007). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer gástrico es el cuarto tumores comunes en el mundo. La incidencia del cáncer gástrico es cada vez mayor debido a los recientes cambios en los hábitos de vida y las dietas en China [1]. Como para el cáncer gástrico, las tasas de supervivencia dependen del diagnóstico precoz de la enfermedad. Por lo general, cuanto antes se detecte y se le diagnosticó un cáncer, más exitoso será el tratamiento. Por lo tanto, es muy importante para mejorar las tasas de diagnóstico precoz y el tratamiento precoz de cáncer gástrico. Hemos tratado de establecer un sistema de preaviso cáncer gástrico precoz basado en el análisis de microarrays de expresión génica desde el año 2005 [2]. Mientras tanto, también esperábamos encontrar las células de cáncer gástrico precoz
in vivo fotos: por técnicas de imagen multi-modo objetivo [3] - [7]. Sin embargo, carece de biomarcadores para el cáncer gástrico sigue siendo el principal obstáculo para el diagnóstico precoz.
Hoy en día, es bien aceptado que
Helicobacter pylori gratis (
H pylori.
) Juega un papel causal en el desencadenamiento de la inflamación crónica (gastritis) que conduce a la malignidad, y ha sido clasificado como un carcinógeno humano definido por la Agencia Internacional de Investigación sobre el cáncer (IARC) [8] - [10]. Por otra parte, sobre la base de las diferencias histológicas entre gastritis crónica y el cáncer gástrico, cáncer gástrico en estadio temprano a menudo se detecta por endoscopia. Por lo tanto, la investigación de los cambios moleculares y biológicas, incluyendo la amplificación de genes y las activaciones, que se producen a partir de gastritis crónica a cáncer gástrico, puede proporcionar algunas nuevos conocimientos sobre la patología de esta enfermedad y nuevos marcadores de pronóstico. Sin embargo, hasta la fecha, hay pocos informes sobre biomarcadores abordar especiales que pueden distinguir la inflamación gástrica de la tumorigénesis gástrico.
La fosfolipasa C-fosfoinositida específica (PLC) representa una gran familia que cataliza la hidrólisis de fosfatidilinositol 4, 5-bifosfato en dos segundos mensajeros vitales, diacilglicerol e inositol 1,4,5-trifosfato, que incluyen seis familias de isoformas de PLC de mamíferos (β, γ, δ, ε, zeta y η) [11] - [13]. Entre ellos, PLCε es un miembro recientemente identificado de la familia PLC [12]. Es un efector aguas abajo de la tecla de la familia Ras GTPasas pequeñas: Ras, Rap1, y Rap2 [12], [14], [15]
Recientemente, tanto las obras informaron que PLCε1 jugó un papel crucial en la tumorigénesis y. inflamación. PLCε1 expresión se ha encontrado que se correlaciona con el cáncer de vejiga humana, y la caída de PLCε1
in vitro
y
in vivo
inhibió el crecimiento del tumor de vejiga [16], [17]. Además, se ha informado de que PLCε1 se sobre-expresa en cáncer de piel [18]. En PLCε
- /- ratones, que exhiben resistencia marcada a la formación de tumores y para el 12-O-tetradecanoilforbol-13-acetato (TPA) inflamación de la piel Inducir [18], [19]. Estudios posteriores demostraron que PLCε jugó un papel crucial en la tumorigénesis intestinal espontánea con el aumento de la angiogénesis y la inflamación mediante el uso de la poliposis adenomatosa coli (APC)
Min /+ modelo de ratón [20].
Por otra parte, se requiere PLCε en la activación de la producción de citoquinas en células de la piel no inmunes en una variedad de reacciones inflamatorias, y esta importante función de PLCε se confirmó aún más en los ratones transgénicos que sobreexpresan PLCε [21], [22]. Por otro lado, PLCε se requiere para el factor de necrosis tumoral ligando 2 expresión (TNFa) de quimiocina inducida (motivo C-C) (CCL2) en los queratinocitos humanos y coopera con el factor nuclear kappa B (NF-kB) vía [23]. Tal función de PLCε en la inflamación es único entre las isozimas de PLC [13].
Recientemente, dos polimorfismo de nucleótido único (SNP) rs2274223 y rs11187870 en PLCε1 loci han sido identificados como novela locus de susceptibilidad para el cáncer gástrico en chino población mediante el análisis de genes de asociación de todo el genoma (GWAS) [24] - [26]. Estos resultados confirman la asociación entre PLCε1 y el riesgo de cáncer gástrico.
En este estudio, se analizó el patrón de expresión de PLCε1 en los tejidos gástricos humanos normales como la gastritis atrófica y los tejidos tumorales, e hicieron una hipótesis sobre la papel de PLCε1 en la inflamación crónica y la tumorigénesis del cáncer gástrico. En comparación con los tejidos normales, se encontró que la proteína PLCε1 fue altamente expresado en tejidos de cáncer gástrico, mientras que se redujo reguladas en los tejidos gástricos atróficas. Nuestros resultados sugieren fuertemente que PLCε1 puede ser un biomarcador potencialmente prometedor para distinguir el cáncer gástrico de la gastritis atrófica y podría ser un potencial biomarcador para el diagnóstico de cáncer gástrico en etapa temprana.
Materiales y Métodos
Declaraciones de ética
el estudio fue aprobado por el Comité de Ética de Sun Yat-sen Centro de cáncer de la Universidad y el Comité de Ética de la primer hospital Afiliado de la Universidad Shanghai Jiao Tong, y el consentimiento informado por escrito se obtuvo de cada tema.
Las líneas celulares
Los GES-1 gástricos inmortales SV40-transformado de células epiteliales se conservaron en nuestro instituto y se mantienen según lo recomendado [27]. Tres AGS líneas celulares de cáncer gástrico, SGC7901 y MGC803 se obtuvieron de la Academia China de Ciencias Banco de Células de Type Culture Collection y se mantienen en nuestro laboratorio. Todas las líneas celulares se cultivaron en Medio Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM) suplementado con 10% de suero de ternera fetal (FCS) (Sigma Chemical, St. Louis, MO), 100 unidades /ml de penicilina y 0,1 mg /ml de estreptomicina. Las células se mantuvieron a 37 ° C en una cámara húmeda con 5% de CO
2.
La extracción de RNA y transcripción reversa-PCR
El ARN total de células y tejidos muestras fue extraído por medio el reactivo Trizol (Invitrogen) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El ARN extraído se trató previamente con ADNasa libre de ARNasa, y 2 g de ARN de cada muestra se utilizó para la síntesis de ADNc cebada con hexámeros aleatorios. Para la amplificación de PLCε1 cDNA, una amplificación inicial usando los cebadores PLCε1-específicas que se hizo con una etapa de desnaturalización a 95 ° C durante 10 min seguido de 30 ciclos de desnaturalización a 95 ° C durante 60 s, hibridación del cebador PCR mediada a 55 ° C durante 30 s y extensión del cebador a 72 ° C durante 30 s. Al término de las etapas de ciclado, una extensión final a 72 ° C durante 5 min se llevó a cabo antes de que la reacción se detuvo y se almacenó a 4 ° C. Los datos de expresión se normalizaron a la media geométrica de la limpieza de genes de gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) para controlar la variabilidad en los niveles de expresión. Transcripción inversa-PCR fue diseñado usando la versión 3.0 del software Primer Express (Applied Biosystems). Las secuencias de los cebadores sentido y antisentido fueron como sigue: 5'-GCAAGAAGTGGCCTTCTCAG-3 '(F) y 5'-GAACTTGAAGGGAGGGCATT -3' (R) para PLCε1, 5'-GCTCCTCCTGAGCGCAAG-3 '(F) y 5' CATCTGCTGGAAGGTGGACA -. 3 '(R) para GAPDH
Western Blotting
Las células se recogieron en tampón de muestreo [/L Tris-HCl 62,5 mmol (pH 6,8), 2% SDS, 10% de glicerol , y 5% de 2-h-mercaptoetanol]. Todos los tejidos frescos se basaban en polvo en nitrógeno líquido y luego se lisaron con el tampón de muestreo. La concentración de proteína se determinó por el ensayo de Bradford (Bio-Rad Laboratories). Igual cantidad de proteínas se aplicaron a 9% en geles de poliacrilamida SDS (SDS-PAGE), separados por electroforesis, y se transfirieron a membranas de fluoruro de polivinilideno (Amersham Pharmacia Biotech). La membrana se incubó con anticuerpo anti-conejo PLCε1 (1:250; Sigma). expresión PLCε1 se detectó con IgG de rábano picante conjugado con peroxidasa de cabra anti-conejo (1:2,000; Amersham Pharmacia Biotech) y un kit de quimioluminiscencia (Amersham Pharmacia Biotech) según las instrucciones del fabricante. β-actina se detectó con un anticuerpo de conejo anti-β-actina (1:1,000 dilución; Sigma) se utilizó como control de carga
Los pacientes, muestras de tejido y tejido Microarray
Los pacientes con atrófica. gastritis y el cáncer fueron seleccionados de pacientes que estaban programados para la endoscopia gastrointestinal superior para el cribado de rutina para el cáncer gástrico en el primer hospital Afiliado de la Universidad de Shanghai Jiao Tong y Sun Yat-sen Centro de cáncer de la Universidad de enero de 2003 a diciembre de 2009. se excluyeron los pacientes que tenían recibida agentes anti-ulcerosos o antibióticos para hasta dos meses antes del examen y los que tenían antecedentes de cáncer gástrico, úlcera gástrica o duodenal, o cirugía gástrica. . Hematoxilina y eosina (H & amp; E) tinción de tejidos del paciente se hizo para determinar las características histopatológicas
El grado de atrofia se clasifica en tres niveles de gravedad, de acuerdo con la aparición de pliegues de la mucosa y la vasculatura, de la siguiente manera: leves (vasos transparentes finas de sangre y coloración amarillenta limitada a la parte inferior del cuerpo, con gruesos pliegues de la mucosa), moderada (vasos sanguíneos claramente transparente y decoloración amarillo-grisáceo hasta el centro y parte superior del cuerpo, con pliegues de la mucosa adelgazadas y estrechadas), y grave (claramente transparentes grandes vasos sanguíneos y la decoloración graygreenish hasta la parte superior del cuerpo, con la desaparición de pliegues de la mucosa de la insuflación de aire). El uso de estos criterios se justifica por los informes anteriores sobre la coherencia entre la endoscopia y hallazgos histológicos para la gastritis atrófica [28], [29]. Cuando se confirmó la endoscopia y los hallazgos histológicos, 799 pacientes gastritis atrófica, incluyendo 281 leve, moderada y 265 253 grave, respectivamente, fueron incluidos en nuestro estudio. Los 799 pacientes se incluyeron 439 varones y 320 mujeres, con una edad media de 35,6 años (rango, 18-55 años).
Cada muestra de tumor se le asignó un grado histológico basado en la Organización Mundial de la Salud (OMS) criterios de clasificación. Todos los pacientes con cáncer gástrico se realizaron utilizando la 7ª edición del tumor-nódulo-metástasis sistema de clasificación de la Unión Internacional Contra el Cáncer (UICC) (TNM). Los pacientes con cáncer fueron incluidos en nuestro estudio cuando su diagnóstico fue confirmado histológicamente. Los tejidos normales fueron elegibles si su diagnóstico endoscópico fue normal. Después de cribado de H & amp; portaobjetos teñidos-E de tejido tumoral óptima y el tejido normal adyacente al tumor con una distancia de 10 cm del tumor, se construyó TMA se desliza con 74 parejas de tejidos tumorales y adyacente a los tejidos tumorales (colaborar con Shanghai Biochip , Shanghai, china) .Las 74 pacientes con cáncer gástrico (rango de edad = 40-84 años, con una edad media = 63,77 años; 23 mujeres y 35 varones) incluyó 36 casos iniciales (fase pTNM I = 11, etapa pTNM II = 25) y 36 casos avanzados (etapa III pTNM = 32, pTNM estadio IV = 6). Entre éstos, 6 (0,81%) fueron clasificados como adenocarcinoma bien diferenciado, 40 (54,1%) como moderadamente diferenciado, y 25 (33,8%) como adenocarcinoma pobremente diferenciado.
La inmunohistoquímica
El análisis inmunohistoquímico se utilizó para determinar el patrón de expresión de la proteína PLCε1 en 74 tejidos de cáncer gástrico humano emparejados y 799 muestras de gastritis atrófica. En breve, las muestras incluidas en parafina se cortaron en secciones de 4 micras, y al horno a 60 ° C durante 2 h seguido de desparafinación con xileno y rehidratada. Las secciones se sumergieron en tampón de recuperación antigénica EDTA y calentados para la recuperación antigénica, después de lo cual se trataron con peróxido de hidrógeno al 3% en metanol para apagar la actividad de la peroxidasa endógena, seguido de incubación con 1% de albúmina de suero bovino para bloquear la unión no específica. Las secciones fueron incubadas con conejo anti-PLCε1 (1:50, Sigma) durante la noche a 4 ° C. suero de cabra normal se utilizó como control negativo. Después del lavado, las secciones de tejido se trataron con biotinilado anti-anticuerpo secundario de conejo (Zymed), seguido de una incubación adicional con complejo de estreptavidina-peroxidasa de rábano (Zymed). Las secciones de tejido se sumergieron en 3, 3'-diaminobencidina y de contraste con un 10% de hematoxilina de Mayer, deshidratadas y montadas.
La puntuación de inmunohistoquímica PLCε1
inmunorreactividad
PLCε1 fue evaluada de forma independiente por 3 patólogos ( WW, QQ y LL) que fueron cegados a los resultados del paciente. El porcentaje de células teñidas positivamente y la intensidad de tinción de las células se determinó por cada observador, y se calculó la media de 3 puntuaciones. Se seleccionaron al azar 10 campos de gran aumento (magnificación, × 400; 100 células por campo de gran aumento) y contamos 1000 células. Cuando la media de porcentaje de células PLCε1-positivas está cerca de 0% o 100%, la desviación estándar (SD) está cerca de 0; y, cuando la media es de aproximadamente 50%, el SD es de aproximadamente 5%. Por lo tanto, la SD no aumenta con la media. En este estudio, la expresión PLCε1 se calificó como sigue: tejido con tinción citoplásmica positiva en la ≤25% de las células se calificó negativo, y el tejido con tinción citoplásmica positiva en & gt; 25% de las células se calificó positiva [30]
Análisis estadístico
Todos los análisis estadísticos se realizaron utilizando el paquete estadístico SPSS 17.0. El método de ensayo de Wilcoxon se utilizó para analizar los tejidos emparejados tumores gástricos en el microarray de tejido. La prueba y prueba exacta de Fisher utilizan para analizar los cáncer gástrico y gastritis atrófica grave, y también se realizaron para determinar la importancia de la relación entre la expresión PLCε1 y características clínico. Cada experimento se realizó de forma independiente al menos dos veces con resultados similares.
p
. & Lt; 0,05 en todos los casos se consideró estadísticamente significativa
Resultados
Expresión de PLCε1 hasta reguladas en líneas celulares de cáncer gástrico
En primer lugar, se detectó la expresión de ARNm y proteína de PLCε1 en diferentes líneas de células gástricas (Figura 1). Reverse análisis PCR de transcripción y análisis de transferencia Western se llevaron a cabo en estas muestras derivadas de células mucosas GES-1 normales gástricas y tres líneas celulares de cáncer gástrico AGS, SGC7901 y MGC803. Se encontró que todas las líneas celulares de cáncer gástrico revelaron una mayor expresión PLCε1 que en los controles normales de células gástricas, tanto a nivel de ARNm y proteínas.
A, la expresión de mRNA en PLCε1 línea celular normal gástrica líneas celulares de cáncer GES-1 y SGC7901 , MGC803 y AGS por PCR con transcripción inversa. B, expresión de la proteína PLCε1 gástricos líneas celulares normales GES-1 y líneas celulares de cáncer SGC7901, MGC803 y AGS por Western Blot.
PLCε1 está regulada en el cáncer gástrico lesiones, pero las reguladas en atrófica las lesiones gastritis
a continuación, se investigó el papel de PLCε1 en los tejidos tumorales y normales tanto en un microarray de tejido de cáncer gástrico. Como se muestra en la Figura 2, se observó que tanto tumor y los tejidos normales demostraron la expresión positiva de PLCε1. Sin embargo, como se muestra en la Tabla 1, el tejido de análisis de datos de microarrays había demostrado que el porcentaje de expresión PLCε1 positiva en los tejidos tumorales es significativamente más alta que en los tejidos normales adyacentes mediante análisis de la prueba de Wilcoxon (73,0% frente a 20,3%,
p
. & lt; 0,01)
imágenes representativas de análisis inmunohistoquímico de 74 cáncer gástrico archivados y 799 casos de gastritis atrófica. A, visión general de los microarrays de tejidos mediante inmunotinción de anticuerpo PLCε1. biopsias en caja se muestran en detalle en (B y C). B y C se corresponden tumor y los tejidos normales adyacentes de un mismo paciente. El paciente es pTNM fase III con adenocarcinoma pobremente diferenciado. Tanto tumoral (B) y las células normales adyacentes (C) son positivos para PLCε1. observaciones inmunohistoquímica Representante (D) /histológico (G) las observaciones en un tejido gastritis atrófica, inmunohistoquímica Representante (E) /histológico (H) las observaciones en un tejido normal gástrico, inmunohistoquímica Representante (F) /histológico (I) en un tejido de cáncer gástrico . (Aumento original, × 2 para B y C, × 200 para D, E, F, G, H e I).
Para determinar la expresión PLCε1 en el entorno de la inflamación, hemos ampliado PLCε1 El análisis inmunohistoquímico utilizando otro conjunto independiente de las secciones de tejido incluidas en parafina de 799 muestras de tejido gastritis atrófica. Los resultados de inmunohistoquímica demostraron que la expresión PLCε1 fue positiva en 275 (37,0%) gastritis atrófica incluyendo 106 (37,7%) leve gastritis atrófica, 98 (26,0%) gastritis atrófica moderada y 71 (28,1%) en atrófica grave, respectivamente. Además, la expresión PLCε1 se correlacionó con el grado de atrofia (
p
= 0,036) (ver Tabla 2). Por lo tanto, en comparación con los tejidos tumorales y normales, muestras gastritis atrófica habían disminuido expresión PLCε1 (
p Hotel & lt; 0,001) (ver Tabla 2) guía empresas
A continuación, confirmó estos microarrays de tejidos inmunohistoquímica. resultados por transcripción inversa-PCR y análisis de transferencia de Western de tres emparejada de cáncer gástrico y los tejidos normales adyacentes y tres emparejada de la gastritis atrófica grave y los tejidos normales adyacentes, que fueron tomadas del mismo paciente. En comparación con los tejidos normales adyacentes, tres examinaron los tumores gástricos que se muestran sobre regulación de la expresión PLCε1 tanto en los niveles de proteína y ARNm, pero todos los tejidos severos gastritis atrófica tuvieron una menor expresión de PLCε1 (ver Figura.3). De acuerdo con los resultados del análisis de microarrays de tejidos inmunohistoquímica, el análisis también mostró emparejado PLCε1 estaba sobreexpresado en el tumor, pero las reguladas en la gastritis atrófica grave en comparación con los tejidos normales adyacentes emparejados.
A y C , la expresión de mRNA PLCε1 y proteína en cada uno de los tumores gástricos (T) y los tejidos normales adyacentes gástricos (N) emparejado del mismo paciente por transcripción inversa-PCR y Western blot. B y D, la expresión de PLCε1mRNA y proteína en cada una de la gastritis atrófica grave (S) y los tejidos normales adyacentes gástricos (N) emparejado del mismo paciente por transcripción inversa-PCR y Western Blot.
estas observaciones sugirieron que el estado de expresión PLCε1 era muy diferente en el contexto de la inflamación en comparación con la tumorigénesis. Nuestros resultados sugieren altamente que nuestros resultados altamente sugieren que la proteína PLCε1 podría ser un biomarcador potencial de cáncer gástrico.
Las correlaciones entre PLCε1 y clínico-patológico Características
No hay diferencia estadísticamente significativa de la expresión en PLCε1 datos clinicopatológicos, como la edad, el sexo, el tamaño del tumor, la clasificación, la etapa clínica, entre los pacientes en diferentes etapas de cáncer gástrico en los microarrays de tejidos (se muestra en la Tabla S1).
en particular, como se muestra en la Figura 2, expresión de la proteína en el citoplasma PLCε1 se detectó con frecuencia en todos los tejidos tumorales, tejidos normales, pero con menor frecuencia en los tejidos gastritis atrófica.
sin embargo, como se muestra en la Figura 4, en el microarray de tejido, se observó expresión PLCε1 positiva en las células inflamatorias y linfocitos en 13 (48,1%) adyacentes muestras de tejido normal a partir de metástasis de los ganglios linfáticos (N0) pacientes con cáncer gástrico (que se muestra en la Figura 4A). Por otra parte, en los tejidos graves gastritis atrófica, 6 (2,37%) muestras mostraron expresión PLCε1 positiva en las células inflamatorias o tejidos linfáticos (Figura 4B). Por lo tanto, estos resultados implican que la expresión de PLCε1 puede estar asociada con células inflamatorias invasión durante la tumorigénesis y metástasis tumorales.
inmunohistoquímica Representante (A) las observaciones en un tejido normal gástrico, inmunohistoquímica Representante /histológico (B) (C ) /d) Las observaciones histológicas (en un tejido gastritis atrófica. Las flechas indican las células inmunes teñidas positivamente (Aumento original, × 200).
Discusión
A continuación, en primer lugar, nuestro estudio demostró que PLCε1 fue hasta reguladas en los tejidos tumorales gástricas humanas, pero no se las reguladas en el entorno de la inflamación, en comparación con los tejidos normales. La expresión diferencial de PLCε1 en diferentes tejidos altamente sugirió que la expresión de PLCε1 podría desempeñar un papel clave en la inflamación y la tumorigénesis.
La inflamación es reconocido como un componente esencial del medio ambiente local sostener el desarrollo del tumor, incluyendo la iniciación, promoción , conversión maligna, invasión y metástasis [31]. Una relación causal entre la promoción de tumores gástricos y la inflamación ha contado con el apoyo de las observaciones que la inflamación causada por
Helicobacter pylori
infección puede aumentar el riesgo de desarrollo de tumores [8] - [10]. Recientemente, numerosos informes han demostrado que los niveles de expresión PLCε1 están altamente relacionados con la inflamación y la tumorigénesis [19] - [21], [23]. Sin embargo, el mecanismo molecular subyacente a la importancia biológica de PLCε1 en el desarrollo de cáncer gástrico y la progresión sigue siendo oscuro. Nuestro estudio ha proporcionado pruebas de que PLCε1 regulación podría ser importante en la progresión del cáncer gástrico. En particular, su regulación a la baja en el entorno de la inflamación, altamente sugirió que PLCε1 puede ser un biomarcador importante, y puede ser utilizado para distinguir el estado de cáncer gástrico de la fase atrófica.
Por otra parte, en nuestro trabajo, la proteína puede ser PLCε1 detectado en las células inflamatorias y los tejidos de linfocitos en algunos tejidos normales adyacentes en grado N0 y algunos tejidos gastritis atrófica graves. En los mamíferos, se informa PLCε1 que se expresa en células no inmunes, tales como los queratinocitos epidérmicos, fibroblastos dérmicos, y las células epiteliales, pero no en las células inmunes tales como linfocitos, granulocitos, macrófagos y células dendríticas [21], [32], [33]. . Nuestros resultados sugieren que la función de la proteína PLCε1 en el cáncer gástrico puede estar relacionado con su expresión en el sistema inmunológico
De acuerdo con estos resultados disponibles, hemos propuesto un posible mecanismo de la proteína PLCε1 funcionando en la tumorigénesis del cáncer gástrico: PLCε1 proteína como un efector de Ras y Rap pequeñas GTPasas [12], [14], [15] es al principio expresado en tejidos normales de la mucosa gástrica. En el curso de la progresión de la lesión gástrica atrófica, la expresión de proteínas PLCε1 se reduce para evitar la infiltración inflamación temprana, de acuerdo con PLCε
- /- ratones expuestos marcados resistencia a la inflamación de la piel TPA-inducir [18], [19]. Al aumentar el tiempo y el grado de inflamación de la lesión gástrica atrófica, la proteína se expresa PLCε1 gradualmente en las células inmunes porque PLCε se requiere en una variedad de reacciones inflamatorias [21], [22], que puede, finalmente, inducir la formación de cáncer gástrico. Al mismo tiempo, la proteína PLCε1 se hace mayor expresión en células de cáncer gástrico debido PLCε sobreexpresión puede promover la tumorigénesis intestinal en Apc
Min /+ ratones [20].
En resumen, sobre regulación de la expresión en PLCε1 gástrica cáncer, pero la baja regulación en la gastritis atrófica se observó por nuestro estudio. El papel de importancia en el cáncer gástrico PLCε1 se refuerza aún más con nuestro hallazgo de su correlación inversa con la gastritis crónica atrófica. Estos resultados no sólo sugieren que PLCε1 se puede utilizar como un indicador de pronóstico para distinguir el cáncer gástrico de gastritis atrófica, sino también justificar estudios adicionales para establecer una posible relación entre la función biológica de PLCε1 y la patogénesis del cáncer gástrico. Nuestros estudios también muestran que PLCε1 puede tener un papel importante en la tumorigénesis del cáncer gástrico, especialmente en las primeras etapas, y podría representar un nuevo marcador para el diagnóstico de cáncer gástrico en etapa temprana.
Apoyo a la Información sobre Table S1. Francia El PLCε1 relación entre expresión y clínico-patológicas características
doi:. 10.1371 /journal.pone.0047563.s001 gratis (DOC)