Extracto
Antecedentes
GATA 2 (GATA2) es un factor de transcripción que tiene un papel esencial en las neoplasias malignas hematológicas y la progresión de diversos tumores sólidos. Nuestros estudios previos sugirieron que la expresión de alto GATA2 está asociada con la recurrencia del cáncer colorrectal (CRC). Sin embargo, aún se desconoce la influencia de GATA2 polimorfismos de nucleótido único (SNPs) en la supervivencia de CRC.
Métodos
Estamos genotipo SNP rs2335052 GATA2 utilizando secuenciación de Sanger después de la amplificación por PCR, y se determinó la expresión de GATA2 inmunohistoquímica en una cohorte de 180 pacientes con CCR. El análisis de supervivencia de Kaplan-Meier y regresión de riesgos proporcionales de Cox se utilizaron para analizar la asociación entre los genotipos GATA2 rs2335052 y el resultado clínico de CCR.
Resultados
Se encontró que no hubo correlación significativa entre los genotipos rs2335052 y la expresión de GATA2. Sin embargo, el análisis de supervivencia de Kaplan-Meier sugirió que los portadores de la A-alelo de rs2335052 SNP se asociaron significativamente con un mayor riesgo de recurrencia y la reducción de la supervivencia libre de enfermedad (SLE), en comparación con aquellos que llevan la variante de genotipo GG en rs2335052 (
P = 0,021
). Por otra parte, la regresión de Cox univariante y multivariante análisis revelaron que rs2335052 SNP GATA2 fue un factor de riesgo independiente para la DFS de CRC pacientes.
Conclusión
Nuestros resultados demuestran que rs2335052 SNP GATA2 es un predictor independiente de pronóstico de los pacientes con CCR. Esto planteó la posibilidad de que rs2335052 SNP pueden servir como un indicador potencial para predecir la recurrencia de CRC después de la colectomía curativa
Visto:. Liu X, B Jiang, Wang A, Di J, Wang Z, Chen L, et al . rs2335052 (2015) GATA2 polimorfismo predice la supervivencia de pacientes con cáncer colorrectal. PLoS ONE 10 (8): e0136020. doi: 10.1371 /journal.pone.0136020
Editor: Gonzalo Carrasco-Avino, Escuela de Medicina de Icahn en el Monte Sinaí, Estados Unidos |
Recibido: 10 Octubre, 2014; Aceptado: July 30, 2015; Publicado: 19 Agosto 2015
Derechos de Autor © 2015 Liu et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están dentro del apoyo de sus archivos de información en papel y
Financiación:. Este estudio fue apoyado por las becas de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Nº 81272766, Nº 81450028, Nº 81470129, 81402346 y No. ), el Programa Nacional de alta Tecnología de Investigación y Desarrollo de China (Programa 863, No.2014AA020603), características clínicas y de investigación Aplicación de capital (Beijing Ciencia Municipal & amp; Tecnología de la Comisión Nº Z121107001012130), Beijing Administración Municipal de Hospitales Medicina clínica de Desarrollo Soporte de financiación especial (Nº XM201309), la Universidad de Pekín (PKU) 985 de financiación especial para la Investigación colaborativa con PKU Hospitales (para Xiangqian Su y Fan Bai), Siembra de donaciones para Medicina y Ciencias de la vida de la Universidad de Pekín (2014-MB-04), Fundación de Ciencias Naturales Pekín (No. 7132054), de Beijing Nova Programa (Beijing Municipal de Ciencia & amp; Tecnología de la Comisión Nº Z111102054511075, 2011060), Programa de talentos excelentes en Pekín (núm 2013D003034000009), el Programa Académico Excelente ultramar-Returnee (Ministerio de Recursos Humanos y Seguridad Social, Jiabao a Di), y la Fundación de Ciencias de la Universidad de Pekín hospital Cancer & amp; Instituto (Nº 2014-14)
Conflicto de intereses:. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
El cáncer colorrectal (CCR) es el tercero más. cáncer frecuente en el mundo y la segunda causa más común de muerte relacionada con el cáncer en los países occidentales [1,2]. Los datos de la Organización Mundial de la Salud (OMS) muestra que la incidencia de CCR está aumentando rápidamente en muchos países asiáticos, incluyendo China [3]. A pesar de las mejoras en el diagnóstico, la cirugía, la quimioterapia y la terapia dirigida, la tasa de supervivencia relativa a 5 años para los pacientes con CCR sigue siendo pobre [4]. En la actualidad, el sistema de estadificación TNM mantenida por el Comité Conjunto sobre el Cáncer (AJCC) es la pauta más ampliamente utilizado para la puesta en escena y la supervivencia de predicción [5]. Sin embargo, los resultados clínicos de los pacientes con CCR pueden variar considerablemente incluso dentro de la misma etapa del tumor, en particular de los pacientes con enfermedad en estadio II [6, 7]. Por lo tanto, los nuevos marcadores pronósticos moleculares que podrían pacientes precisamente estratificar en diferentes categorías de riesgo están claramente justificadas.
GATA2 proteína de unión 2 (GATA2) es un factor de transcripción con dedo de zinc, que desempeña un papel crucial en la regulación de la transcripción de los genes implicados en la proliferación, el desarrollo, y la diferenciación de las células hematopoyéticas [8-11]. Hay una creciente evidencia de que la expresión alterada GATA2 y constitutiva mutación heterocigota GATA2 están asociados con neoplasias malignas hematológicas, así como el desarrollo y la progresión de diversos tumores sólidos [12-20]. En neoplasias mieloides esporádicos y familiares, la expresión de alto GATA2 y mutaciones adquirida o heredada del gen GATA2 se han comunicado [12-15]. Para los tumores sólidos, altos niveles de expresión GATA2 están asociados con un mal pronóstico y recurrencia de la enfermedad en la próstata y CRC [16-18]. Además, la expresión de alto GATA2 en los carcinomas de mama humanos no cultivados promueve la proliferación de células de cáncer de mama mediante la inhibición de la transcripción de PTEN [19]. Sin embargo, Li et al informaron de que la expresión GATA2 se redujo en los tejidos de carcinoma hepatocelular, y la expresión de GATA2 correlacionado con mal pronóstico de carcinoma hepatocelular [20] reduce. Estos hallazgos sugieren que GATA2 puede servir como un nuevo predictor para el pronóstico de los diferentes tipos de cáncer.
gen GATA2 se encuentra en el cromosoma 3q21. Muchos polimorfismos de nucleótido único (SNP) se han identificado en el gen GATA2 humano, incluyendo rs2335052, rs3803, rs2713604, y así sucesivamente [20-24]. Estas variantes genéticas pueden contribuir a la expresión y función de GATA2 alterada y, en consecuencia, pueden tener una gran influencia en los resultados clínicos de la CRC. Sin embargo, la importancia clínica de GATA2 SNPs en CRC no se ha investigado todavía.
En este estudio se analizaron los SNP rs2335052 y la expresión de GATA2 en una cohorte CRC chino, y se investigó el papel de la GATA2 SNP rs2335052 como un predictor del resultado clínico de pacientes con CRC. Nuestros resultados mostraron que, aunque no se observó una correlación significativa entre los genotipos rs2335052 y la expresión de GATA2, los portadores del alelo A-SNP rs2335052 del mostraban un aumento significativo del riesgo de recurrencia y la reducción de la supervivencia libre de enfermedad (DFS). Por lo tanto, los SNP rs2335052 GATA2 pueden servir como una novela indicador para el pronóstico de los pacientes con CCR.
Materiales y Métodos
Ética Declaración
El estudio fue aprobado y supervisado por el comité de ética de investigación de la Universidad de Pekín hospital Cancer & amp; Instituto. Beijing, China. Consentimiento informado por escrito se obtuvieron de todos los pacientes antes de la cirugía para la investigación en general el uso de sus datos clínicos y muestras.
Los pacientes
Este estudio retrospectivo incluyó a 180 pacientes que fueron sido sometidos a colectomía en el Departamento de Mínima Invasión la cirugía gastrointestinal, e histológicamente diagnosticados con CRC en el Departamento de Patología de la Universidad de Pekín hospital Cancer & amp; Instituto a partir de abril de 2009 a diciembre de 2011. Todos los tumores se clasificaron por dos patólogos experimentados de acuerdo con el Comité Americano Conjunto sobre el Cáncer (AJCC) directrices de clasificación. Se excluyeron los pacientes tratados con radioterapia preoperatoria o adyuvante de la quimioterapia. También se excluyeron los dieciséis pacientes con metástasis o murieron de complicaciones patológicamente confirmado. parafina fijado con formalina muestras incorporado (FFPE) de tejido de pacientes estaban disponibles para el estudio. DFS se calculó como el tiempo desde el diagnóstico de cáncer a cualquiera de recaída o muerte del último seguimiento.
GATA2 SNP rs2335052 análisis
ADN genómico fue extraído de muestras de tumores incluidas en parafina utilizando el kit de ADN FFPE (OMEGA, US) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los genotipos rs2335052 GATA2 se determinaron mediante secuenciación de Sanger después de la amplificación con la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). El exón 3 de la GATA2 se amplificó usando los siguientes cebadores: adelante 5'-CCACCCTGATCCTCTCTCTCTTT y revertir 5'-TCACAGCTCCCCACCACAA. PCR se llevó a cabo en un volumen de 30μl, que comprende ADN genómico 10-30ng, dNTP 0,2 mM, 1 x tampón de PCR, 10 mM de cada uno de los cebadores, y 0,75 unidad de ADN polimerasa (Promega GoTaq Cor, WI, EE.UU.). Bajo las condiciones de amplificación siguientes: 2 min a 95 ° C, seguido por 35 ciclos de 95 ° C durante 30 s, 60 ° C durante 30 s, 72 ° C durante 45 s. Los productos de PCR se visualizaron en un gel de agarosa al 2% y después se sometieron a secuenciación directa. Todos los fragmentos fueron secuenciados utilizando el ABI 3730XL Avant Genetic Analyzer (Applied Biosystems Inc., CA, EE.UU.). Por último, los resultados de la secuenciación se analizaron con el software Chromas bajo la condición de señal /ruido & gt; 98%
inmunohistoquímica GATA2 (IHC)
Se realizó un análisis IHC para GATA2 utilizando un anticuerpo policlonal de conejo primaria contra GATA2. (1: 100, Santa Cruz sc-9008), seguido de incubación con un anticuerpo secundario del kit EnVision (Dako Cytomation). La señal de visualización se desarrolló con diaminobenzidina (Sigma). Las secciones fueron contrastadas con hematoxilina. La intensidad de la tinción se obtuvo de la siguiente manera [18, 25]: -, sin tinción o & lt; 10% de células positivas; +, 10 a 20% de células débilmente a moderadamente positivos; ++, 10 a 20% de células intensamente positivos o 20-50% de células débilmente positivas; y +++, 20-50% de células positivas con moderada a fuerte reactividad o & gt; 50% de células positivas. Los resultados reportados por los dos patólogos eran muy consistentes, y todos los desacuerdos se resolvieron por consenso después de la revisión conjunta. La puntuación para la tinción GATA2 fueron descritos como "bajo" o "alto", donde "alta" incluye "++" y "+++" tinción.
El análisis estadístico
La asociación entre rs2335052 SNP GATA2 y las características clínico-patológicas se analizaron con la prueba de Chi-cuadrado. La supervivencia se determinó a través de los métodos de Kaplan-Meier y se compararon con la prueba de log-rank. la supervivencia univariante y multivariante análisis se realizaron utilizando el modelo de regresión de riesgos proporcionales de Cox. Quince pacientes perdidos durante el seguimiento fueron excluidos en la curva de Kaplan-Meier, análisis univariados y multivariados. Los análisis estadísticos se realizaron con el paquete estadístico SPSS 13.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL, EE.UU.).
valor de P Red de menos de 0,05 fue considerado estadísticamente significativo.
Resultados
Características de los pacientes y genotipado
Un total de 180 muestras de pacientes con CRC eran analizado. La mediana del tiempo de seguimiento en la cohorte fue de 69,0 meses. Los portadores del GG rs2335052, GA, y genotipos AA fueron 64 (35,6%), 81 (45,0%), y 35 (19,4%), respectivamente (Fig 1). Los detalles de las características clínicas y genotipos GATA2 rs2335052 se muestran en la Tabla 1. rs2335052 GATA2 SNP se asoció significativamente con la supervivencia libre de enfermedad (DFS) de CRC (
P = 0,033
). Sin embargo, no se observaron asociaciones significativas entre los genotipos rs2335052 y otras características clinicopatológicas (todo el
P-valores
& gt; 0,05)
Asociación de GATA2 genotipos rs2335052 con DFS
Las curvas de Kaplan-Meier para la DFS se muestran gráficamente de acuerdo con un aditivo, dominante, recesivo y el modelo de herencia (figura 2). Los resultados revelaron que rs2335052 SNP se asoció significativamente con DFS bajo el modelo dominante de herencia (
P = 0,021
), lo que sugiere que los portadores del alelo A-SNP rs2335052 de (GA, AA) había un aumento significativo riesgo de recurrencia y la reducción de la SSE (figura 2B). La tasa de SSE a 5 años de los pacientes con portadores de los genotipos GA rs2335052 y AA fue 69,0%, pero para los pacientes con portadora de la rs2335052 genotipo GG, la tasa fue de 92,0%. Sin embargo, una diferencia significativa en la SSE no se observó entre los genotipos GATA2 rs2335052 bajo el aditivo o modelo recesivo (
P = 0,056
,
P = 0,834
, respectivamente, la figura 2A y 2C).
Las curvas de Kaplan-Meier se muestran para un aditivo (a), dominante (B), y el modelo recesivo (C) de la herencia. Se utilizó la prueba de log-rank para calcular
P
valores.
Además, se realizó un análisis estratificado por el estadio TNM (I /II y III /IV), a determinar la importancia pronóstica de genotipos GATA2 rs2335052 en diferentes etapas del tumor. Albergar GA rs2335052 o AA confirmaron un impacto adverso en la SSE de fase I /II pacientes (
P = 0,005
, la figura 3A). Sin embargo, los genotipos rs2335052 GATA2 no se correlacionaron con el pronóstico de los pacientes con estadio III /IV enfermedades (
P = 0,749
, la figura 3B).
Las curvas de Kaplan-Meier indicó DFS para el subgrupo de pacientes con estadio I /II (A) y un estadio III /IV (B) CRC. Se utilizó la prueba de log-rank para calcular
P
valores.
El valor pronóstico de los genotipos GATA2 rs2335052 en la SSE se evaluó mediante regresión de Cox univariante y multivariante análisis utilizando un modelo dominante de herencia. Como se muestra en la Tabla 2, en tanto univariado y análisis multivariado, los pacientes con la A-alelo de rs2335052 SNP (GA, AA) tenía un período más corto de DFS, lo que sugiere un mayor riesgo de recurrencia (HR, 2.530; IC del 95%, 1.111 -5,761;
P = 0,027
y HR, 2,825; IC del 95%, 1,095-7,290;
P = 0,032
, para el análisis univariante y multivariante, respectivamente), en comparación con los pacientes con el SNP rs2335052 genotipo GG. Los resultados sugieren que los SNP rs2335052 GATA2 fue un factor pronóstico independiente de recurrencia de la enfermedad. El riesgo relativo de recurrencia en los pacientes con rs2335052 genotipos GA y AA era 2.825 veces mayor que la de los pacientes con el genotipo GG rs2335052, de acuerdo con el análisis multivariante. supervivencia de los resultados desfavorables también se asoció significativamente con los pacientes de sexo masculino, en estadio III /IV CRC y pobre o moderada diferenciación tumoral, basado en el análisis univariante (Tabla 2).
Asociación entre genotipos GATA2 rs2335052 y expresión GATA2
La expresión de GATA2 fue examinado en 164 de 180 tejidos de CRC (Fig 4). Se detectó la expresión de alto GATA2 en 93 de 164 (56,7%) los tejidos de CRC, en comparación con 7 de cada 97 (7,2%) en los tejidos no cancerosos adyacentes emparejados (
P Hotel & lt; 0,0001). Curva de Kaplan-Meier para la DFS mostró que los pacientes con tumores que exhiben una expresión de alto GATA2 tenían peor pronóstico, lo que sugiere DFS más cortos y principios de recurrencia de la enfermedad (
P = 0,044
, la figura 5A). Sin embargo, no se observó una asociación significativa entre la expresión GATA2 y rs2335052 SNP (
P = 0,523
, Tabla 1).
imagen Representante indicó una fuerte tinción en el tejido GATA2 CRC, y tinción negativa en GATA2 emparejado el tejido no canceroso. La ampliación es de 100 ×.
(A) Curva de supervivencia de Kaplan-Meier mostró DFS para los pacientes con tumores GATA2-alta frente a los pacientes con tumores de bajo GATA2. Kaplan-Meier de supervivencia para los pacientes mostraron DFS estratificados por GG GATA2 rs2335052 (B) y GG AA + (C) genotipos. Se utilizó la prueba de log-rank para calcular
P
valores.
Desde el genotipo SNP rs2335052 GG mostró una influencia protectora significativa en la SSE en el modelo de herencia dominante (Figura 2B), para su posterior análisis, los pacientes se dividieron en dos grupos según sus genotipos rs2335052 (GG subgrupo, GA y AA subgrupo). En el subgrupo GG rs2335052, altos niveles de expresión GATA2 mostraron asociación significativa con borderline DFS más cortos, en comparación con baja expresión GATA2 (
P
= 0,073, Figura 5B). Sin embargo, no hubo una asociación significativa entre los niveles de expresión GATA2 y DFS en el subgrupo de pacientes portadores de los genotipos rs2335052 GA y AA (
P = 0,208
, figura 5C).
en este estudio, se investigó la asociación entre los SNP rs2335052 GATA2 y el pronóstico de los pacientes con CCR en una cohorte chino. Nuestros datos revelaron que aunque no hubo correlación significativa entre los genotipos rs2335052 y la expresión de GATA2, los rs2335052 genotipos GA y AA se asociaron significativamente con el pronóstico desfavorable y un mayor riesgo de recurrencia en pacientes con CCR, en comparación con los portadores del genotipo GG. Por otra parte, el análisis de regresión de Cox univariante y multivariante demostró que el SNP rs2335052 en GATA2 fue un predictor independiente de mal DFS en pacientes con CCR.
Varios estudios previos han demostrado la influencia de los niveles de expresión GATA2 en el resultado clínico en pacientes con pediátrica leucemia mieloide aguda (AML), colorrectal, de próstata, cáncer de mama, y carcinoma hepatocelular [14, 16-20]. Excepto carcinoma hepatocelular [20], altos niveles de expresión GATA2 indican la recurrencia del tumor, metástasis, o pobre supervivencia [14, 16-19]. Además del nivel de proteína de GATA2, la diversidad genética del locus GATA2 también influye en la tumorigénesis. Se han reportado mutaciones adquiridas y hereditarias en GATA2 estar correlacionado con neoplasias mieloides, incluyendo AML, y la leucemia mieloide crónica (LMC) [13-15]. El reordenamiento del potenciador GATA2 a causas EVI1 reducidos y expresión monoallelic de GATA2, así como la activación de EVI1 en esporádicos familiares AML /MDS y MonoMac /Emberger symdromes [26]. Sin embargo, el papel de los genotipos GATA2 en el pronóstico del cáncer sigue siendo en gran parte inexplorado en los tumores sólidos. Dado que los SNP se localizan en las secuencias codificadoras y reguladoras de GATA2, pueden contribuir a la regulación de la expresión y función GATA2, por lo que investigaron los genotipos SNP GATA2.
De acuerdo con la base de datos NCBI SNP, hay varios SNPs situados en el locus GATA2. Hemos secuenciado primero todo el exón de GATA2 en 23 tejidos de CRC, a fin de identificar SNPs de interés potencial. Nuestros resultados mostraron que rs2335052 SNP podría ser detectada en el tercer exón del gen GATA2 entre los 23 tejidos de CRC, aunque otras variantes genéticas estaban ausentes, probablemente debido al tamaño limitado de la muestra (S1 Tabla). A continuación, se determinó la rs2335052 SNP GATA2 y la expresión de GATA2 en una cohorte CRC que consta de 180 pacientes, y se investigó la influencia de los SNP rs2335052 en la supervivencia del paciente. Los resultados indicaron que rs2335052 GATA2 GA y los genotipos AA se asociaron significativamente con la reducción de DFS y recurrencia en pacientes con CCR. Además, el análisis de una cohorte de replicación de 61 pacientes con CRC también sugirió que rs2335052 SNP GATA2 fue un predictor independiente de mal DFS en pacientes con CCR (S2 y S3 Tablas, S1 figura)
.
Varios estudios han demostrado que ser un factor de transcripción, GATA2 actúa como un regulador clave en muchas vías de señalización. En el cáncer de KRAS mutado no microcítico de pulmón no microcítico (CPNM), GATA2 está implicado en la regulación de la proteasoma, IL-1-señalización, y las vías de señalización Rho-. Como resultado, GATA2 es indispensable para la supervivencia de las células de NSCLC con mutaciones RAS-vía [27, 28]. En el cáncer de próstata, GATA2 juega un papel crucial en la mediación de la expresión del receptor de andrógenos (AR), así como en el reclutamiento AR específica de sitio facilitar AR expresión del gen diana [29]. En el cáncer de mama, GATA2 promueve la proliferación celular y estimula la fosforilación de AKT por la inhibición de PTEN transcripción [19]. Estos plantean la posibilidad de regular las vías GATA2-implicado para el cáncer de estrategias terapéuticas [27, 28]. Del mismo modo, los SNP que están asociados con la función GATA2 y los resultados clínicos pueden servir como predictores sean fácilmente detectables durante el tratamiento relacionado GATA2-en el futuro.
Por otra parte, como un factor de transcripción, pequeñas alteraciones genéticas en GATA2 pueden contribuir a la regulación genes de aguas abajo. Los rs2335052 variante se encuentran dentro de la región de codificación de GATA2, dando lugar a una sustitución de alanina a treonina en el codón 164 (A164T) en el tercer exón. El cambio de este aminoácido no se encuentra en las regiones de los dedos de zinc, que desempeñan papeles importantes en GATA2 unión a ADN. Para comprender los mecanismos subyacentes implicados en el valor pronóstico de rs2335052 GATA2 SNP en DFS, que predijo la función de GATA2 con sustituto de aminoácido (GATA2-A164T) por polimorfismo Fenotipificación v2 (PolyPhen-2), tamiza y softwares PMUT, que son disponible a través de los sitios web, y se determina la capacidad de transactivación de GATA2-A164T por los ensayos de reportero de luciferasa. Aunque los resultados de software-predicho mostraron que A164T no predice el potencial impacto patológica sobre la función de GATA2 (S2 Fig), los resultados de los ensayos de reportero de luciferasa sugirieron que GATA2-A164T reduce la capacidad de transactivación en comparación con el tipo salvaje GATA2 (GATA2wt) en el conocido promotor LYL1 GATA2 sensible a [30]. Además, se observó una disminución de expresión GATA2-A164T en líneas celulares de CRC (S1 Archivo, S4 Tabla, S3 figura). Estos datos plantean la posibilidad de que GATA2-A164T afecta a la expresión o función de los genes aguas abajo que están asociados con la supervivencia de pacientes con CRC. Aunque, en este estudio, no se encontró una asociación significativa entre el genotipo GATA2 rs2335052 y la expresión de genes en la cohorte de pacientes, la expresión disminuida y reducción de la capacidad de transactivación del A164T GATA2, en comparación con GATA2 tipo salvaje, indican que la expresión GATA2 reducida puede contribuir a la disminución de las enfermedades la supervivencia exento (DFS). Inconsistantly, en este estudio y nuestro estudio anterior, disminución de la expresión GATA2 se asoció con una mejor supervivencia en pacientes con CCR.
Del mismo modo, muchos estudios informaron que aunque el genotipo variante puede regular el nivel de expresión de ese gen, la asociación entre los polimorfismos y la supervivencia pueden ser incompatibles con la asociación entre la expresión génica y la supervivencia [31-34]. Por ejemplo, los pacientes con genotipo natural AA en rs35628 Abcc1 tenían ya DFS que los pacientes portadores del alelo G. Los tumores de los portadores del genotipo AA expresaron ABCC1 significativamente más altos que los que tienen el alelo G. Estos datos plantean la posibilidad de que la alta expresión de ABCC1 puede contribuir a la supervivencia prolongada. Por el contrario, altos niveles de expresión de ABCC1 indica un mal pronóstico para el carcinoma de mama [31, 32]. Además, los pacientes con el genotipo VV en rs1053090 NPAS2 confieren un aumento significativo del riesgo de muerte, en comparación con aquellos con el genotipo WW y WV. Los pacientes portadores del genotipo VV también mostraron un nivel de expresión significativamente mayor de NPAS2. Sin embargo, el alto nivel de expresión NPAS2 se correlacionó significativamente con mejores DFS [33, 34]. Por lo tanto, pueden existir otras consecuencias moleculares de la variación genética de rs2335052 SNP.
Los pacientes de CRC en el mismo estadio TNM puede mostrar considerablemente diferentes resultados clínicos, sobre todo en la etapa II de la enfermedad [6, 7]. El uso de la terapia adyuvante para los pacientes en estadio II CRC sigue siendo controvertida [35-38]. Por lo tanto, con el fin de determinar si rs2335052 SNP en GATA2 podrían utilizarse para identificar a los pacientes con un alto riesgo de recurrencia de modo que puedan recibir más quimioterapia, se evaluó el papel de rs2335052 SNP en DFS y la recurrencia. En la cohorte actual, entre los pacientes con estadio I /II de enfermedades, rs2335052 genotipos GA y AA sugieren los pobres resultados clínicos y la recurrencia, en comparación con el genotipo GG. Nuestros resultados proporcionan rs2335052 SNP GATA2 como un factor pronóstico independiente de las fases del tumor, y plantean la posibilidad de identificar a los pacientes con mayor riesgo de recurrencia y debe ser tratado con quimioterapia adyuvante.
Sin embargo, existen posibles limitaciones de este estudio . La cohorte en nuestro estudio es de un tamaño moderado de la muestra. Por lo tanto, se necesitan estudios adicionales con poblaciones independientes más grandes para validar aún más la asociación de los SNP rs2335052 GATA2 con el resultado clínico de los pacientes con CCR.
Conclusiones
En conclusión, nuestro estudio demostraron que rs2335052 SNP en GATA2 se relacionó con una SSE y la recurrencia de los pacientes con CCR. Los resultados de nuestro estudio sugieren que SNP rs2335052 es un indicador independiente para predecir el pronóstico del CCR en la población china. Se necesitan más estudios para validar estos hallazgos y aclarar el mecanismo subyacente.
Apoyo a la Información
S1 Fig. El análisis de Kaplan-Meier de la DFS de acuerdo con rs2335052 GATA2 SNP en otra cohorte incluyendo 61 pacientes con CCR.
curvas de Kaplan-Meier se muestran para un aditivo (A), dominante (B), y el modelo recesivo (C) de la herencia. Se utilizó la prueba de log-rank para calcular
P
valores
doi:. 10.1371 /journal.pone.0136020.s001 gratis (TIF)
S2 Fig. Resultados del análisis de software para alanina a treonina sustitución (A164T) de rs2335052 SNP GATA2.
A164T no predijo potencial impacto patológica en la función o estructura de GATA2, mediante el uso de PolyPhen-2 (A), SIFT (B), y PMUT (C), que están disponibles a través de los sitios web
doi:. 10.1371 /journal.pone.0136020.s002 gratis (TIF)
S3 Fig. GATA2-A164T reduce la capacidad de transactivación del promotor LYL1.
(A) Análisis de transferencia Western de la expresión FLAG-GATA2 exógeno en células RKO transfectadas con el plásmido que codifica GATA2wt o GATA2-A164T. ensayo (B) reportero de luciferasa demostró que GATA2-A164T reduce la capacidad de transactivación del promotor LYL1 GATA2 sensible conocido, en comparación con GATA2wt. Los datos representan la media ± desviación estándar de tres experimentos independientes por triplicado de cada muestra. En todas las comparaciones, se utilizó la prueba t de Student
doi:. 10.1371 /journal.pone.0136020.s003 gratis (TIF)
S1 Archivo. Materiales y Métodos
doi: 10.1371. /Journal.pone.0136020.s004 gratis (DOC)
Tabla S1. Todos los polimorfismos analizados en los 23 tejidos CRC
doi:. 10.1371 /journal.pone.0136020.s005 gratis (DOCX)
S2 tabla. características clinicopatológicas con respecto a determinados genotipos de SNP incluidos rs2335052 GATA2 en otra cohorte incluyendo 61 pacientes con CRC
doi: 10.1371. /journal.pone.0136020.s006 gratis (DOCX)
S3 de tabla. Análisis univariados y multivariados de los genotipos rs2335052 GATA2 en 61 pacientes con CRC con respecto a la SSE
doi:. 10.1371 /journal.pone.0136020.s007 gratis (DOCX)
S4 Tabla. Primer secuencias para la construcción del plásmido
doi: 10.1371. /journal.pone.0136020.s008 gratis (DOCX)
Reconocimientos
Agradecemos al Dr. Bin Dong y el Dr. Li Zhongwu para el diagnóstico histopatológico.